试验旨在利用实时定量RT—PCR技术建立肉鸡组织钙结合蛋白（CaBP）基因相对表达量的测定方法．为进一步研究肉鸡钙吸收和利用的分子生物学机理以及骨骼的发育奠定技术基础。根据GenBank中鸡的CaBP基因序列，设计合成引物，进行SYBR Gre...试验旨在利用实时定量RT—PCR技术建立肉鸡组织钙结合蛋白（CaBP）基因相对表达量的测定方法．为进一步研究肉鸡钙吸收和利用的分子生物学机理以及骨骼的发育奠定技术基础。根据GenBank中鸡的CaBP基因序列，设计合成引物，进行SYBR Green Ⅰ实时定量RT—PCR。以管家基因B—Actin为内参基因，对组织Total RNA进行均一化处理，利用循环阈值（Ct值）的变化计算CaBP基因的相对表达量。结果表明，肉鸡十二指肠及胫骨组织CaBP基因相对表达量分别在2^7.78～2^-4.60和2^-2.46～2^-17.20范围。表明利用实时定量RT—PCR技术对肉鸡组织CaBP基因相对表达水平进行检测是可行的。展开更多
目的建立SYBR Green I荧光染料实时定量RT-PCR方法,测定猴免疫缺陷病毒(SIV)RNA拷贝数。方法巢式RT-PCR扩增SIV病毒RNAgag基因上1360-1837之间的长度为477 bp的片段,将该片段克隆到pGEMT载体上,构建pGEM-SIVgag477质粒。该质粒经限制性...目的建立SYBR Green I荧光染料实时定量RT-PCR方法,测定猴免疫缺陷病毒(SIV)RNA拷贝数。方法巢式RT-PCR扩增SIV病毒RNAgag基因上1360-1837之间的长度为477 bp的片段,将该片段克隆到pGEMT载体上,构建pGEM-SIVgag477质粒。该质粒经限制性内切酶NotⅠ酶切后,进行体外转录,转录出的RNA产物(RS)纯化后10倍系列稀释,作出标准曲线,作为SIV病毒RNA荧光定量检测的外标准品。结果应用Qiagen公司QuantiTect SYBR GREEN RT-PCR Kit,该标准品可精确定量到100 copies/μL。结论制备的RS外标准品纯度高,SYBR Green I荧光染料实时定量RT-PCR法特异性、敏感性高,稳定性好,可用于定量测定猴免疫缺陷病毒(SIV)RNA拷贝数。展开更多
为建立一种检测鸡γ干扰素的实时荧光定量RT-PCR方法,采用RT-PCR方法从ConA诱导活化的鸡脾淋巴细胞的总RNA中扩增得到鸡γ干扰素（ChIFN-γ）和鸡的28 S rRNA（Ch28 S）基因,将其分别克隆至体外转录载体后经体外转录获得了ChIFN-γ和Ch2...为建立一种检测鸡γ干扰素的实时荧光定量RT-PCR方法,采用RT-PCR方法从ConA诱导活化的鸡脾淋巴细胞的总RNA中扩增得到鸡γ干扰素（ChIFN-γ）和鸡的28 S rRNA（Ch28 S）基因,将其分别克隆至体外转录载体后经体外转录获得了ChIFN-γ和Ch28 S的RNA,采用各自的特异性引物及Taqman探针,以Ch28 S RNA作为内参进行一步法实时荧光定量RT-PCR,检测ChIFN-γ.结果表明：ChIFN-γ和内参Ch28 S的Ct值与标准品稀释梯度在1×102～1×107拷贝/μL范围分别呈良好的线性关系,γ2均大于0.99.此方法用于检测ChIFN-γ,具有简便、高效、敏感、特异的特点.展开更多
文摘试验旨在利用实时定量RT—PCR技术建立肉鸡组织钙结合蛋白（CaBP）基因相对表达量的测定方法．为进一步研究肉鸡钙吸收和利用的分子生物学机理以及骨骼的发育奠定技术基础。根据GenBank中鸡的CaBP基因序列，设计合成引物，进行SYBR Green Ⅰ实时定量RT—PCR。以管家基因B—Actin为内参基因，对组织Total RNA进行均一化处理，利用循环阈值（Ct值）的变化计算CaBP基因的相对表达量。结果表明，肉鸡十二指肠及胫骨组织CaBP基因相对表达量分别在2^7.78～2^-4.60和2^-2.46～2^-17.20范围。表明利用实时定量RT—PCR技术对肉鸡组织CaBP基因相对表达水平进行检测是可行的。
文摘目的建立SYBR Green I荧光染料实时定量RT-PCR方法,测定猴免疫缺陷病毒(SIV)RNA拷贝数。方法巢式RT-PCR扩增SIV病毒RNAgag基因上1360-1837之间的长度为477 bp的片段,将该片段克隆到pGEMT载体上,构建pGEM-SIVgag477质粒。该质粒经限制性内切酶NotⅠ酶切后,进行体外转录,转录出的RNA产物(RS)纯化后10倍系列稀释,作出标准曲线,作为SIV病毒RNA荧光定量检测的外标准品。结果应用Qiagen公司QuantiTect SYBR GREEN RT-PCR Kit,该标准品可精确定量到100 copies/μL。结论制备的RS外标准品纯度高,SYBR Green I荧光染料实时定量RT-PCR法特异性、敏感性高,稳定性好,可用于定量测定猴免疫缺陷病毒(SIV)RNA拷贝数。
文摘为建立一种检测鸡γ干扰素的实时荧光定量RT-PCR方法,采用RT-PCR方法从ConA诱导活化的鸡脾淋巴细胞的总RNA中扩增得到鸡γ干扰素（ChIFN-γ）和鸡的28 S rRNA（Ch28 S）基因,将其分别克隆至体外转录载体后经体外转录获得了ChIFN-γ和Ch28 S的RNA,采用各自的特异性引物及Taqman探针,以Ch28 S RNA作为内参进行一步法实时荧光定量RT-PCR,检测ChIFN-γ.结果表明：ChIFN-γ和内参Ch28 S的Ct值与标准品稀释梯度在1×102～1×107拷贝/μL范围分别呈良好的线性关系,γ2均大于0.99.此方法用于检测ChIFN-γ,具有简便、高效、敏感、特异的特点.
