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牡蛎疱疹病毒结构蛋白真核表达系统构建及多聚化特性
1
作者 曹书华 魏茂乐 +4 位作者 李永仁 黄博闻 辛鲁生 白昌明 王崇明 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期63-72,共10页
牡蛎疱疹病毒(OsHV-1)在全球范围内导致牡蛎、扇贝与蚶类的大规模死亡,成为双壳贝类养殖产业的重要威胁。为了解OsHV-1的结构与致病机制。本研究利用人胚胎肾细胞(HEK293t),构建OsHV-1主要核衣壳蛋白(ORF104和ORF33)的真核表达系统,并对... 牡蛎疱疹病毒(OsHV-1)在全球范围内导致牡蛎、扇贝与蚶类的大规模死亡,成为双壳贝类养殖产业的重要威胁。为了解OsHV-1的结构与致病机制。本研究利用人胚胎肾细胞(HEK293t),构建OsHV-1主要核衣壳蛋白(ORF104和ORF33)的真核表达系统,并对ORF104和ORF33潜在相互作用进行分析。实验首先通过特异性PCR扩增技术得到orf 104和orf 33的基因序列,根据其编码蛋白的理化性质、跨膜区与三维结构等生物信息学分析结果,选择pCDNA3.1(+)构建两种基因的重组表达质粒。重组质粒经大肠杆菌扩增、提取后,利用转染试剂Lipo8000™将pCDNA3.1(+)-orf 104与pCDNA3.1(+)-orf 33分别单独或共转染至HEK293t。然后,将转染后的细胞培养18 h后裂解收集蛋白。最后利用蛋白免疫印迹(Western blot,WB)与负染电镜检测两种目的蛋白的表达情况。结果显示,实验成功构建了OsHV-1衣壳蛋白ORF104和ORF33的重组表达质粒载体,通过真核细胞表达得到大小约为135与35 ku的目的蛋白。研究表明,表达质粒可在真核表达系统中实现蛋白单独转染与共转染,共转染蛋白间可能存在相互作用的趋势并形成多聚体,其中,ORF33自身即可形成分子质量不同的多聚体。本研究首次利用真核表达系统开展OsHV-1关键结构蛋白的表达,为进一步开展该病毒结构蛋白功能与互作,以及病毒入侵机制研究奠定基础。 展开更多
关键词 牡蛎疱疹病毒 核衣壳蛋白 真核表达系统 蛋白多聚化
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柯萨奇病毒B组3型中国分离株VP1基因真核表达系统的克隆 被引量：3
2
作者 田野 钟照华 +9 位作者 赵铁强 黄建林 安毅 唐伟 沈景霞 钟学宽 孟繁超 黄永麟 鲁凤民 叶鸿瑁 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 1999年第3期169-172,共4页
目的探讨构建柯萨奇病毒Ｂ组３型（ＣＶＢ３）基因疫苗的可行性。方法应用逆转录ＰＣＲ技术扩增ＣＶＢ３中国分离株ＶＰ１基因，通过ＴＡ克隆法构建ｐＣＲ２．１－ＣＶＢ３ＶＰ１，将ＣＶＢ３ＶＰ１亚克隆至真核表达载体ｐＣＥＰ４，构... 目的探讨构建柯萨奇病毒Ｂ组３型（ＣＶＢ３）基因疫苗的可行性。方法应用逆转录ＰＣＲ技术扩增ＣＶＢ３中国分离株ＶＰ１基因，通过ＴＡ克隆法构建ｐＣＲ２．１－ＣＶＢ３ＶＰ１，将ＣＶＢ３ＶＰ１亚克隆至真核表达载体ｐＣＥＰ４，构建真核表达系统ｐＣＥＰ４－ＣＶＢ３ＶＰ１，并进行酶切和测序鉴定。结果发现ＣＶＢ３的中国分离株与Ｎａｎｃｙ株的ＶＰ１基因基本一致，均编码２９３个氨基酸，其中有５９处核苷酸存在变异，但仅改变了１０处氨基酸编码，证实克隆的片段为ＣＶＢ３ＶＰ１基因，表达载体为ｐＣＥＰ４。结论实验成功地构建了ＣＶＢ３中国分离株的真核表达系统ｐＣＥＰ４－ＣＶＢ３ＶＰ１。 展开更多
关键词 VP1基因 真核表达系统 柯萨奇B病毒 克隆
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慢病毒介导的H7N9禽流感病毒血凝素基因快速真核表达系统的建立 被引量：1
3
作者 张黎 彭海燕 +6 位作者 周明浩 余慧燕 曾晓燕 祁贤 崔仑标 焦永军 史智扬 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期630-634,共5页
目的利用慢病毒载体构建新型H7N9禽流感病毒血凝素(HA)基因的快速真核表达体系,在人胚肾细胞(HEK293T)中表达并进行功能鉴定。方法提取H7N9禽流感病毒基因组RNA,采用反转录PCR技术扩增HA读码框全长基因,将HA基因连接pMD18-T载体构建pMD1... 目的利用慢病毒载体构建新型H7N9禽流感病毒血凝素(HA)基因的快速真核表达体系,在人胚肾细胞(HEK293T)中表达并进行功能鉴定。方法提取H7N9禽流感病毒基因组RNA,采用反转录PCR技术扩增HA读码框全长基因,将HA基因连接pMD18-T载体构建pMD18-T-HA重组载体。设计含Kozak序列的引物从pMD18-T-HA质粒中扩增出平末端HA基因,采用Topo克隆构建表达载体pLenti-HA-V5。将表达载体转染HEK293T细胞,通过间接免疫荧光法(IFA)和Western blot法鉴定HA蛋白的表达,通过血凝实验鉴定重组蛋白的生物学活性。结果经反转录PCR获得1 683 bp的HA全长基因,完成真核表达载体的构建并表达出相对分子质量(Mr)为70 000的重组蛋白。IFA和Western blot法结果显示该蛋白与阳性血清具有良好的免疫反应,同时血凝实验证实其具有血凝活性。结论成功利用慢病毒载体建立了HA蛋白的快速真核表达系统,为研制H7N9病毒亚单位疫苗、中和表位研究、假病毒包装奠定基础。 展开更多
关键词 H7N9禽流感病毒 血凝素基因 慢病毒载体 真核表达系统
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真核表达系统的研究进展 被引量：14
4
作者 高云 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2002年第4期292-294,298,共4页
真核表达系统具有翻译后的加工修饰体系 ,表达的外源蛋白更接近于天然蛋白质。基因工程中常用的真核表达系统有 :酵母表达系统、昆虫细胞表达系统及哺乳动物细胞表达系统。甲醇酵母主要利用醇氧化酶的基因启动子在甲醇诱导下表达外源蛋... 真核表达系统具有翻译后的加工修饰体系 ,表达的外源蛋白更接近于天然蛋白质。基因工程中常用的真核表达系统有 :酵母表达系统、昆虫细胞表达系统及哺乳动物细胞表达系统。甲醇酵母主要利用醇氧化酶的基因启动子在甲醇诱导下表达外源蛋白 ,而三磷酸甘油脱氢酶启动不需甲醇诱导 ,可缩短到达峰值表达的时间。杆状病毒是昆虫细胞表达系统中最常用的表达载体 ,利用转座原理构建重组杆状病毒是一种有效的构建重组体的方法 ;杆状病毒 S2 系统是最近构建的一种不裂解宿主细胞的新型昆虫细胞表达系统。哺乳动物细胞表达系统中 ,腺病毒是常用的表达载体 ,通过细菌内同源重组和Cre/loxp系统构建重组体 ,可提高重组效率 ;利用杆状病毒将外源基因导入哺乳动物细胞 ,不会引起病毒基因的表达 ;四环素诱导表达系统是目前应用最广泛的哺乳动物细胞诱导表达系统 ,该系统具有严密、高效。 展开更多
关键词 真核表达系统 酵母 昆虫细胞 哺乳动物细胞
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口蹄疫病毒2B基因的生物信息学分析及其siRNA真核表达系统的建立 被引量：1
5
作者 崔丽瑾 王兴龙 +4 位作者 段小宇 刘铠 党源 郎需龙 李晓艳 《畜牧与兽医》 北大核心 2010年第5期51-54,共4页
应用RT-PCR方法扩增口蹄疫WLF株2B基因,将其克隆到pMD18-T载体中,测序后进行序列保守性分析和RNA二级结构分析,筛选适合作为siRNA的靶序列。根据siRNA表达载体要求,合成shRNA表达模板,连接到含有U6启动子的真核表达载体中,建立了靶向口... 应用RT-PCR方法扩增口蹄疫WLF株2B基因,将其克隆到pMD18-T载体中,测序后进行序列保守性分析和RNA二级结构分析,筛选适合作为siRNA的靶序列。根据siRNA表达载体要求,合成shRNA表达模板,连接到含有U6启动子的真核表达载体中,建立了靶向口蹄疫2B基因的真核表达系统,为进一步研究靶向2B基因的RNA干扰对口蹄疫病毒的抑制作用奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 2B基因 序列分析 SIRNA 真核表达系统
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葡萄球菌肠毒素A基因真核表达系统的构建及其目的重组蛋白的鉴定(英文)
6
作者 孙爱华 邵浙新 +2 位作者 阮萍 毛亚飞 严杰 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第4期303-306,310,共5页
目的　克隆金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因、构建其真核表达系统及目的重组蛋白的表达情况。方法　采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌ATCC135 6 5菌株中扩增全长SEA ,目的扩增片段T -A克隆后测序。经核酸内切酶酶切重组质粒 pUCm -T -SEA... 目的　克隆金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因、构建其真核表达系统及目的重组蛋白的表达情况。方法　采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌ATCC135 6 5菌株中扩增全长SEA ,目的扩增片段T -A克隆后测序。经核酸内切酶酶切重组质粒 pUCm -T -SEA获得的 pUCm -T -SEA基因片段与真核表达载体 pPIC9K连接。采用电融合法将重组真核载体pPIC9K -SEA转化入P pastorisGS115株 ,构建成真核表达系统 pPIC9K -SEA -P pastorisGS115。采用含G4 18抑制剂的YPD琼脂平板和PCR筛选并鉴定 pPIC9K -SEA -P pastorisGS115。 0 5 % (V∶V)甲醇诱导下 ,采用SDS -PAGE检查BMMY液体培养基上清中重组SEA(rSEA)的表达情况。结果　可从S aureusATCC135 6 5株DNA中扩增获得SEA目的片段。与报道的SEA基因序列 (GenBankNo :AP0 0 4 82 8andL2 2 5 6 6 )比较 ,所克隆的SEA基因核苷酸及氨基酸序列的相似性分别高达 98 84 %～ 10 0 %和 10 0 %。在甲醇的诱导下 ,pPIC9K -SEA -P pastorisGS115能表达在SDS -PAGE图谱位于预期位置的rSEA。结论　我们成功地构建了能表达SEA的真核表达系统 ,为进一步分析SEA分子中毒性相关活性位点、定位突变获得减毒或无毒的突变体奠定了基础。 展开更多
关键词 葡萄球菌肠毒素A 基因 真核表达系统 构建 重组蛋白 鉴定
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mCLCA3增强型绿色荧光蛋白真核表达系统的构建及功能分析
7
作者 吴庆田 侯霞 +4 位作者 任继秋 崔刚 李丽秋 杨景云 马淑霞 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2008年第3期236-238,共3页
目的建立mCLCA3真核细胞表达模型,并对其氯离子通道功能进行分析,为分析其分子本质提供新的理论依据。方法采用RT-PCR、脂质体转染法构建mCLCA3增强绿色荧光型真核细胞表达模型,通过免疫荧光对mCLCA3真核表达情况进行分析,利用FluoStar ... 目的建立mCLCA3真核细胞表达模型,并对其氯离子通道功能进行分析,为分析其分子本质提供新的理论依据。方法采用RT-PCR、脂质体转染法构建mCLCA3增强绿色荧光型真核细胞表达模型,通过免疫荧光对mCLCA3真核表达情况进行分析,利用FluoStar Optima荧光仪对mCLCA3的氯离子通道功能进行测定分析。结果构建真核表达模型能够稳定高表达mCLCA3及增强型绿色荧光蛋白,适用于离子通道功能分析。结论成功构建了mCLCA3增强绿色荧光型真核细胞表达模型,并通过功能分析证明mCLCA3可能不是氯离子通道。 展开更多
关键词 mCLCA3氯离子通道 真核表达系统 增强型绿色荧光蛋白
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葡萄球菌肠毒素B基因真核表达系统的构建及目的蛋白的鉴定
8
作者 孙爱华 毛亚飞 严杰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2004年第6期341-343,379,共4页
目的　克隆葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因 ,构建其真核表达系统并表达目的蛋白。方法　采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌FRIS6B株中扩增全长SEB ,目的片段T A克隆后测序。重组质粒pUCm T SEB经酶切获得的pUCm T SEB基因片段与真核表达载体pPI... 目的　克隆葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因 ,构建其真核表达系统并表达目的蛋白。方法　采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌FRIS6B株中扩增全长SEB ,目的片段T A克隆后测序。重组质粒pUCm T SEB经酶切获得的pUCm T SEB基因片段与真核表达载体pPIC9K连接。将重组真核载体pPIC9K SEB转化入P .pastorisGS115株 ,经PCR筛选并鉴定pPIC9K SEB P .pastorisGS115。在 0 5 % (v v)甲醇诱导下 ,采用SDS PAGE检测重组SEB(rSEB)的表达 ,并对rSEB的N端氨基酸序列和诱导人脐静脉内皮EVC 30 4细胞分泌IL 1α和TNFα的作用进行了检测。结果　所克隆的SEB基因核苷酸及氨基酸序列的同源性分别高达 98 84 %～ 10 0 %和 10 0 %。表达的SEB在SDS PAGE图谱的位置与预期相符。rSEB氨基末端氨基酸序列与预期完全相符。rSEB与SEB商品有相似的促人脐静脉内皮细胞EVC 30 4分泌IL 1α和TNFα的活性。结论　已成功地构建了SEB的真核表达系统 ,为进一步分析SEB分子中毒性相关活性位点、定位突变获得减毒或无毒的突变体奠定了基础。 展开更多
关键词 葡萄球菌肠毒素B 基因 真核表达系统 蛋白 突变体
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真核表达系统的研究进展
9
作者 经络 陈勇 《浙江省医学科学院学报》 2003年第3期41-44,共4页
关键词 真核表达系统 研究进展 生命科学 人类基因组计划 基因工程
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1型糖尿病自身抗原胰岛素瘤相关蛋白2真核表达系统的构建和鉴定 被引量：1
10
作者 刘煜 朱虎 +5 位作者 曾丽玲 陈家伟 杨金奎 钟耀华 王若宁 陈小章 《中华糖尿病杂志（1006-6187）》 CSCD 北大核心 2005年第3期230-233,共4页
目的构建能高效表达自身抗原胰岛素瘤相关蛋白2(IA2)的真核表达载体作为预防发生1型糖尿病(T1DM)的基因疫苗。方法利用基因工程技术构建重组pEGFP/IA2真核表达系统,并且转染、筛选稳定高表达IA2的RIN5F胰岛细胞株,用免疫印迹法并在荧光... 目的构建能高效表达自身抗原胰岛素瘤相关蛋白2(IA2)的真核表达载体作为预防发生1型糖尿病(T1DM)的基因疫苗。方法利用基因工程技术构建重组pEGFP/IA2真核表达系统,并且转染、筛选稳定高表达IA2的RIN5F胰岛细胞株,用免疫印迹法并在荧光显微镜下鉴定其表达,利用共培养体系检测IA2刺激淋巴细胞增殖率。结果双酶切结果表明成功构建了重组pEGFP/IA2真核表达系统,免疫印迹法证实可在RIN5F细胞内高表达IA2。并且该表达的IA2可显著促进NOD小鼠淋巴细胞增殖反应(P<0.05)。结论成功构建的IA2真核表达系统对于T1DM基因疫苗预防策略和对于IA2生理功能的研究都具有重要的意义。 展开更多
关键词 1型糖尿病 自身抗原 胰岛素瘤相关蛋白2 真核表达系统 IA-2 疫莳
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具有重要应用价值的真核表达系统 被引量：5
11
作者 陈峰 朱祯 《生物工程进展》 CSCD 1998年第1期31-31,共1页
基于Ｔ７ＲＮＡ聚合酶与Ｔ７强启动子（１０）间的特异识别而建立起来的偶联表达系统在大肠杆菌中已取得了令人满意的结果。最近，该系统在酵母、昆虫、哺乳动物细胞和植物细胞中陆续实现了高效表达。Ｔ７ＲＮＡ聚合酶－１０启动子... 基于Ｔ７ＲＮＡ聚合酶与Ｔ７强启动子（１０）间的特异识别而建立起来的偶联表达系统在大肠杆菌中已取得了令人满意的结果。最近，该系统在酵母、昆虫、哺乳动物细胞和植物细胞中陆续实现了高效表达。Ｔ７ＲＮＡ聚合酶－１０启动子偶联表达系统的相对独立性和高效性，不仅预示着该系统可以在真核基因工程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 真核表达系统 T7RNA 聚合酶 基因工程
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口蹄疫病毒2B基因的生物信息学分析及其SiRNA真核表达系统的建立
12
《中国畜牧兽医文摘》 2011年第1期127-127,共1页
应用RT—PCR方法扩增口蹄疫WLF株2B基因，将其克隆到MD18-T载体中，测序后进行序列保守性分析和RNA二级结构分析，筛选适合作为siRNA的靶序列。根据siRNA表达载体要求，合成shRNA表达模板，连接到含有U6启动子的真核表达载体中，建立了... 应用RT—PCR方法扩增口蹄疫WLF株2B基因，将其克隆到MD18-T载体中，测序后进行序列保守性分析和RNA二级结构分析，筛选适合作为siRNA的靶序列。根据siRNA表达载体要求，合成shRNA表达模板，连接到含有U6启动子的真核表达载体中，建立了靶向口蹄疫2B基因的真核表达系统，为进一步研究靶向2B基因的RNA干扰对口蹄疫病毒的抑制作用奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 真核表达系统 SIRNA 2B基因 生物信息 真核表达载体 SIRNA 学分
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HCV准种的结构蛋白在真核表达系统中的表达 被引量：1
13
作者 陈嵩 王宇明 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期821-821,共1页
关键词 HCV准种 结构蛋白 真核表达系统 基因克隆 基因表达 丙型肝炎病毒
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β-NGF在真核细胞蛋白表达系统中的表达及活性鉴定
14
作者 李贤慧 王桂云 +1 位作者 王育强 郭新民 《牡丹江医学院学报》 2002年第1期7-10,共4页
目的 :得到较高表达 ,且表达产物具有良好生物学活性的神经生长因子。方法 :将神经胶质源 β -NGF基因克隆于DNA转移载体pBacPAK8中 ,获得重组DNA转移载体pBacPAK -NGF ,与线性化Bm -BacPAK6修饰病毒基因组DNA共转染Bm -N细胞 ,经过体... 目的 :得到较高表达 ,且表达产物具有良好生物学活性的神经生长因子。方法 :将神经胶质源 β -NGF基因克隆于DNA转移载体pBacPAK8中 ,获得重组DNA转移载体pBacPAK -NGF ,与线性化Bm -BacPAK6修饰病毒基因组DNA共转染Bm -N细胞 ,经过体内重组 ,筛选到重组病毒。用重组病毒感染家蚕幼虫 ,经SDS-PAGE检测及利用PC12细胞进行NGF生物活力测定。结果 :感染重组病毒BmNPV -NGF5d的家蚕血淋巴有一条与天然NGF单体分子易相近的蛋白组分 ,且有类似于小鼠 2 .5gNGF的活性。结论 :神经生长因子在家蚕幼虫中得到较高表达 。 展开更多
关键词 真核表达系统 神经生长因子 生物活性 β-NGF基因 神经胶质源 基因表达 基因活性 中枢神经系统疾病
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鸡B-F2基因真核表达系统的建立与鉴定
15
作者 金园园 陈芳芳 余为一 《畜牧与兽医》 北大核心 2012年第9期1-3,共3页
鸡B-F2基因编码的主要组织相容性复合体(MHC)I类分子α链在递呈内源性抗原中起重要作用。本研究应用RT-PCR方法从鸡外周血单核细胞中扩增了B-F2基因片段,其大小为1 068 bp。进一步将其定向插入真核表达载体,构建重组质粒pEGFP-N1-B-F2... 鸡B-F2基因编码的主要组织相容性复合体(MHC)I类分子α链在递呈内源性抗原中起重要作用。本研究应用RT-PCR方法从鸡外周血单核细胞中扩增了B-F2基因片段,其大小为1 068 bp。进一步将其定向插入真核表达载体,构建重组质粒pEGFP-N1-B-F2。经脂质体法转染COS7,所表达的α链定位于在细胞的浆膜,同时转染P815细胞,经G418的筛选(0.6 mg/mL)得到稳定表达细胞株。该细胞株经培养10代次后,仍在RT-PCR中能获得相应DNA片段。上述结果表明,B-F2基因在动物真核表达系统得到表达,建立的P815(B-F2)细胞株为进一步研究MHC I类分子α链在免疫应答中作用奠定了基础。 展开更多
关键词 B-F2 鸡 主要组织相容性复合体(MHC) 真核表达系统
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真核化的原核表达系统增强HBV preS2/S基因免疫的效果 被引量：1
16
作者 袁志刚 张进平 +3 位作者 王缨 储以微 徐薇 熊思东 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期6-10,15,共6页
目的研究真核化的原核表达系统——pCMV-T7pol/pT7IRES-HBs双质粒共表达体系与常规真核表达质粒相比在真核细胞中的表达差异;基因免疫小鼠诱生特异性体液免疫应答的能力及二者所诱生的抗体亚型的差异。方法运用分子生物学方法构建真核... 目的研究真核化的原核表达系统——pCMV-T7pol/pT7IRES-HBs双质粒共表达体系与常规真核表达质粒相比在真核细胞中的表达差异;基因免疫小鼠诱生特异性体液免疫应答的能力及二者所诱生的抗体亚型的差异。方法运用分子生物学方法构建真核化的原核表达系统,将构建的质粒进行基因免疫,应用DOT-EIA和ELISA等检测其所产生的抗体水平。结果①真核化的原核表达系统在真核细胞中的表达能力明显强于常规真核表达质粒。②真核化的原核表达系统基因免疫小鼠不仅可诱生特异性体液免疫应答,且具有明显增强效应(P<0·05)。③真核化的原核表达系统与常规真核表达质粒相比不仅可诱生同等程度的Th1型免疫应答,而且能够诱生更强的Th2型免疫应答(P<0·01)。结论真核化的原核表达系统——pCMV-T7pol/pT7IRES-HBs双质粒能诱导较强的体液免疫应答。 展开更多
关键词 真核化的原核表达系统 基因免疫 HBV
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毕赤酵母表达系统 被引量：20
17
作者 韩雪清 刘湘涛 尹双辉 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2003年第4期35-40,共6页
选择合适的表达系统是蛋白质体外成功表达的关键。毕赤酵母表达系统是一种新的、极具潜力的真核表达系统,其在蛋白质表达方面具有其它系统不可比拟的优点,正在得到越来越广泛的应用。较详细地综迷了毕赤酵母表达系统的特点、组成及影响... 选择合适的表达系统是蛋白质体外成功表达的关键。毕赤酵母表达系统是一种新的、极具潜力的真核表达系统,其在蛋白质表达方面具有其它系统不可比拟的优点,正在得到越来越广泛的应用。较详细地综迷了毕赤酵母表达系统的特点、组成及影响其表达的因素等。 展开更多
关键词 毕赤酵母 表达系统 真核表达系统 基因组表达
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巴斯德毕赤酵母表达系统研究进展 被引量：10
18
作者 王黎明 王琦 梅汝鸿 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2004年第2期42-45,共4页
巴斯德毕赤酵母外源基因表达系统是近年来发展的一种优秀的真核表达系统 ,与传统的大肠杆菌和酿酒酵母表达体系相比 ,其具有的诸多优势使之研究价值及应用价值不断体现。综述了其在生物学特性、表达载体、基因整合、外源蛋白的分泌、诱... 巴斯德毕赤酵母外源基因表达系统是近年来发展的一种优秀的真核表达系统 ,与传统的大肠杆菌和酿酒酵母表达体系相比 ,其具有的诸多优势使之研究价值及应用价值不断体现。综述了其在生物学特性、表达载体、基因整合、外源蛋白的分泌、诱导表达及发酵等方面的基础研究及新近研究进展。 展开更多
关键词 巴斯德毕赤酵母 基因表达系统 外源蛋白 生物学特性 表达载体 基因整合 真核表达系统
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外源基因表达系统的研究进展 被引量：36
19
作者 郭广君 吕素芳 王荣富 《科学技术与工程》 2006年第5期582-587,592,共7页
最近20多年来,随着重组DNA技术的迅速发展,对于克隆基因表达问题的研究也日渐深入,并积累了相当丰富的知识。外源基因的表达系统包括原核表达系统和真核表达系统,它们各有优缺点,在选择时应衡量使用。
关键词 原核表达系统 真核表达系统 大肠杆菌表达系统 酵母表达系统 昆虫细胞表达系统 哺乳动物细 胞表达系统
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人源抗TROP2全分子抗体IgG的真核表达及对胰腺癌细胞增殖的抑制作用 被引量：2
20
作者 王欢 刘琼琼 +8 位作者 唐小军 徐鑫 褚楚 熊四平 郑峰 童华 朱进 冯振卿 林红 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期863-869,882,共8页
目的:以人源抗TROP2抗体Fab基因为模板,构建人源抗TROP2全分子抗体IgG真核表达系统,观察人源抗TROP2全分子抗体IgG对胰腺癌细胞增殖的抑制作用。方法:分别扩增抗TROP2抗体的重链和轻链基因,构建人源抗TROP2全分子抗体IgG的重组表达载体p... 目的:以人源抗TROP2抗体Fab基因为模板,构建人源抗TROP2全分子抗体IgG真核表达系统,观察人源抗TROP2全分子抗体IgG对胰腺癌细胞增殖的抑制作用。方法:分别扩增抗TROP2抗体的重链和轻链基因,构建人源抗TROP2全分子抗体IgG的重组表达载体pWS-anti-TROP2,转染CHO dhfr-细胞,加MTX筛选抗体表达量高的单克隆株,Protein G亲和柱纯化,获得人源抗TROP2全分子抗体IgG。SDS-PAGE、Western blot、ELISA、免疫荧光和流式细胞术等方法鉴定人源抗TROP2全分子抗体IgG并分析其免疫学活性。MTT法分析人源抗TROP2全分子抗体IgG对胰腺癌细胞BxPC-3的增殖抑制作用。结果:成功构建了人源抗TROP2全分子抗体IgG的真核表达系统,表达并纯化人源抗TROP2全分子抗体IgG。经鉴定,抗体的轻链与重链大小与预期一致,可与TROP2蛋白特异性结合,效价可达1∶6 400。MTT检测结果表明,人源抗TROP2全分子抗体IgG对胰腺癌BxPC3细胞的增殖有明显的抑制作用,且呈时效、量效依赖关系。结论:本研究成功构建了人源抗TROP2全分子抗体IgG的真核表达系统,并证明此抗体可特异性识别胰腺癌细胞表面的TROP2蛋白,且对胰腺癌细胞的增殖有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 TROP2 真核表达系统 CHO dhfr-细胞 胰腺癌
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