根皮素对白细胞介素-1β诱导Graves眼病眼眶成纤维细胞中炎症反应和氧化应激的抑制作用及其机制

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作者 靳玮 张黎 +2 位作者 李谦 倪瑶 柴昌 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期233-240,共8页

目的观察根皮素对白细胞介素(IL)-1β诱导的Graves眼病(GO)患者眼眶成纤维细胞(OFs)中炎症反应和氧化应激的抑制作用及其机制。方法收集2019年1月至2020年12月于河南省立眼科医院确诊为非活动期GO并行眼眶减压术的患者6例6眼的眼眶脂肪... 目的观察根皮素对白细胞介素(IL)-1β诱导的Graves眼病(GO)患者眼眶成纤维细胞(OFs)中炎症反应和氧化应激的抑制作用及其机制。方法收集2019年1月至2020年12月于河南省立眼科医院确诊为非活动期GO并行眼眶减压术的患者6例6眼的眼眶脂肪及结缔组织。采用组织块培养法分离原代OFs并传代,细胞免疫荧光法鉴定OFs。将细胞分为对照组、IL-1β诱导组以及不同浓度根皮素处理组。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测25、50、75、100和200μmol/L根皮素处理24和48 h后OFs的活性。采用IL-1β诱导OFs模拟GO体外炎症环境。采用荧光探针H2DCF-DA法检测正常对照组、IL-1β诱导组、50μmol/L根皮素组和100μmol/L根皮素组细胞内活性氧簇(ROS)水平。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测正常对照组、IL-1β诱导组以及25、50、75、100μmol/L根皮素组细胞培养上清液中促炎细胞因子IL-6、IL-8和MCP-1质量浓度。采用Western blot法检测正常对照组、IL-1β诱导组及100μmol/L根皮素组细胞内血红素加氧酶1(HO-1)、核因子NF-E2相关因子Nrf2和MAPK信号通路蛋白P38、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)及其磷酸化蛋白表达。结果原代分离培养的OFs表达vimentin,证明为间充质来源,desimin、S-100、cytokeratin-18表达阴性,鉴定为成纤维细胞。CCK-8结果显示,25、50、75和100μmol/L根皮素组细胞处理后24和48 h吸光度(A)值与对照组比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。50μmol/L根皮素组和100μmol/L根皮素组细胞内ROS水平分别为21.95±1.71和10.01±1.03,明显低于IL-1β诱导组的39.27±4.01,差异均有统计学意义(均P<0.01)。ELISA结果显示,25μmol/L、50μmol/L、75μmol/L和100μmol/L根皮素组细胞培养上清液中IL-6质量浓度分别为(4544.25±572.98)、(1000.25±133.96)、(724.25±98.63)和(519.50±118.02)pg/ml,均显著低于IL-1β诱导组的(7581.75±565.93)pg/ml,差异均有统计学意义(均P<0.01);50μmol/L、75μmol/L和100μmol/L根皮素组细胞培养上清液中IL-8质量浓度分别为(3679.50±676.76)、(2143.75±616.20)和(1174.75±284.18)pg/ml,显著低于IL-1β诱导组的(8411.00±939.67)pg/ml,差异均有统计学意义(均P<0.01);50μmol/L、75μmol/L和100μmol/L根皮素组细胞培养上清液中MCP-1质量浓度分别为(3783.25±610.24)、(1565.75±457.89)和(745.75±227.01)pg/ml,显著低于IL-1β诱导组的(5533.00±602.87)pg/ml,差异均有统计学意义(均P<0.01)。100μmol/L根皮素组HO-1、Nrf2蛋白相对表达量明显高于IL-1β诱导组,p-P38、p-ERK、p-JNK蛋白相对表达量明显低于IL-1β诱导组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论根皮素可降低IL-1β诱导的GO患者OFs细胞内氧化应激水平,抑制促炎细胞因子产生,其作用机制与Nrf2/HO-1的激活及MAPK信号通路的抑制相关。 展开更多

关键词 根皮素 GRAVES眼病 眼眶成纤维细胞 氧化应激 炎症

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肿瘤坏死因子α对甲状腺相关眼病眼眶成纤维细胞的去分化作用及调控机制

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作者 井雅朋 黄晓明 +5 位作者 吴桐 简天明 史双双 赵亮 孙丰源 唐东润 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1076-1083,共8页

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对甲状腺相关眼病(TAO)眼眶成纤维细胞(OF)分化的影响及其机制。方法收集2019年12月至2020年8月在天津医科大学眼科医院诊断为TAO且拟行眼眶减压术的患者6例6眼,术中收集眼眶脂肪结缔组织,组织块培养法... 目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对甲状腺相关眼病(TAO)眼眶成纤维细胞(OF)分化的影响及其机制。方法收集2019年12月至2020年8月在天津医科大学眼科医院诊断为TAO且拟行眼眶减压术的患者6例6眼,术中收集眼眶脂肪结缔组织,组织块培养法分离培养OF并进行波形蛋白免疫荧光鉴定。诱导OF成脂分化并油红O染色鉴定。分别采用含0、0.1、1.0、10.0μg/L TNF-α的完全培养液诱导眼眶成熟脂肪细胞去分化。分别收集原代、分化14 d和去分化20 d细胞,通过实时荧光定量PCR检测过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPARγ)、细胞外调节蛋白激酶1(ERK1)、ERK2及脂肪包被蛋白1(perilipin1)mRNA相对表达量;采用Western blot法检测PPARγ、P-ERK1/2、perilipin1蛋白相对表达量。结果体外成功培养人TAO来源OF,细胞呈梭形或多角形,呈旋涡状紧密排列,波形蛋白免疫荧光染色呈阳性。OF成脂分化诱导后,部分细胞的细胞质中可出现脂滴样结构,油红O染色可见细胞质内被着染的脂滴结构,证实分化后所得到细胞为脂肪细胞。0.1μg/L、1.0μg/L、10.0μg/L TNF-α诱导脂肪细胞发生去分化,且随诱导时间的延长,细胞质中的脂滴体积缩小,含脂滴细胞数量也逐渐减少,并在去分化20 d胞质内脂滴基本消失,细胞变为长梭形,紧密排列,去分化为成纤维样细胞。实时荧光定量PCR检测结果显示,分化14 d组细胞PPARγ、ERK1、ERK2、perilipin1 mRNA相对表达量分别为4.26±0.09、2.01±0.09、3.23±0.10和8.69±0.33,明显高于原代组的1.00±0.09、1.05±0.19、1.00±0.10和1.05±0.07以及去分化20 d组的1.06±0.03、1.15±0.11和6.27±0.09,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Western blot检测结果显示,分化14 d组PPARγ、ERK1/2、perilipin1蛋白表达量分别为1.07±0.03、1.00±0.03和1.13±0.02,明显高于原代组的0.37±0.02、0.29±0.02和0.00±0.00以及去分化20 d组的0.20±0.02、0.38±0.06和0.00±0.00,差异均有统计学意义(均P<0.001)。结论TNF-α对TAO眼眶脂肪细胞有去分化作用,其机制可能与下调ERK1/2-PPARγ-perilipin1信号通路有关。 展开更多

关键词 甲状腺相关眼病 眼眶成纤维细胞 肿瘤坏死因子Α 去分化 过氧化物酶体增生物激活受体Γ

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甲状腺相关眼病眼眶成纤维细胞CD90表达的研究 被引量：8

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作者 唐莉 罗清礼 +3 位作者 夏庆杰 陈清英 刘春玲 唐建 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期879-881,共3页

目的检测培养的不同来源眼眶成纤维细胞(OF)是否存在表达CD90抗原的差异,为研究眼眶成纤维细胞潜在的功能异质性奠定基础。方法培养甲状腺相关眼病(TAO)患者和正常对照眼眶成纤维细胞,流式细胞术检测CD90的表达。结果正常人、TAO患者的... 目的检测培养的不同来源眼眶成纤维细胞(OF)是否存在表达CD90抗原的差异,为研究眼眶成纤维细胞潜在的功能异质性奠定基础。方法培养甲状腺相关眼病(TAO)患者和正常对照眼眶成纤维细胞,流式细胞术检测CD90的表达。结果正常人、TAO患者的眼外肌、眼眶脂肪/结缔组织来源的成纤维细胞均有部分细胞表达CD90。正常人/眼外肌来源OF、TAO患者/眼外肌来源OF、正常人/眼眶脂肪来源OF、TAO患者/眼眶脂肪来源OF的CD90+细胞的比例分别为82.95%±6.49%,80.83%±7.14%,64.55%±4.45%,59.20%±11.19%。眼外肌来源的成纤维细胞中CD90+的细胞比例高于眼眶脂肪/结缔组织来源的成纤维细胞(P<0.05),而正常人与患者之间差异没有统计学意义(P>0.05)。结论正常人和TAO患者OF表达CD90抗原不一致,且与解剖部位有关。 展开更多

关键词 甲状腺相关眼病 眼眶成纤维细胞 CD90

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白介素1α和白介素1受体拮抗剂对培养的Graves’眼眶成纤维细胞增殖作用的影响 被引量：4

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作者 吴中耀 刘桂琴 +3 位作者 杨华胜 郑健樑 张平 林征 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2003年第6期561-564,共4页

目的　探讨白介素 1α(IL 1α)和白介素 1受体拮抗剂 (IL 1ra)对培养的Graves’眼病 (GO)患者眼眶成纤维细胞增殖的影响。方法　以下述方法分别处理培养的GO和正常人眼眶成纤维细胞 :不同浓度的IL 1α刺激成纤维细胞48h ;3 0U/ml的IL 1... 目的　探讨白介素 1α(IL 1α)和白介素 1受体拮抗剂 (IL 1ra)对培养的Graves’眼病 (GO)患者眼眶成纤维细胞增殖的影响。方法　以下述方法分别处理培养的GO和正常人眼眶成纤维细胞 :不同浓度的IL 1α刺激成纤维细胞48h ;3 0U/ml的IL 1α刺激成纤维细胞 2 4～ 72h ;不同浓度的IL 1ra或 /和 3 0U/ml的IL 1α处理成纤维细胞 48h ;75ng/ml的IL 1ra和 3 0U/ml的IL 1α处理成纤维细胞 2 4～ 72h。用MTT法测定成纤维细胞增殖的刺激或抑制率。结果　IL 1α以剂量和时间依赖的方式刺激GO和正常人眼眶成纤维细胞增殖 ,而IL 1ra以剂量和时间依赖的方式抑制IL 1α诱导的GO和正常人眼眶成纤维细胞的增殖活性 ,刺激和抑制作用在GO和正常人眼眶成纤维细胞之间无明显差异。结论　IL 1ra是IL 1α诱导的人眼眶成纤维细胞增殖的强有力的抑制剂 。 展开更多

关键词 IL—1 正常人眼 眼眶成纤维细胞 IL-1 受体拮抗剂 白介素1 刺激 增殖作用 抑制率 抑制剂

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地塞米松对甲状腺相关眼病眼眶成纤维细胞ICAM-1表达的影响 被引量：8

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作者 何为民 罗清礼 曾继红 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期113-115,共3页

目的探讨地塞米松对甲状腺相关眼病(TAO)眼眶成纤维细胞(OF)细胞间粘附分子(ICAM-1)表达的影响。方法取10例TAO患者和5例正常对照的眼眶脂肪组织与眼外肌,体外培养OF,在培养基中分别加入10-6m o l/L地塞米松、300 U/mL干扰素-γ(IFN-γ)... 目的探讨地塞米松对甲状腺相关眼病(TAO)眼眶成纤维细胞(OF)细胞间粘附分子(ICAM-1)表达的影响。方法取10例TAO患者和5例正常对照的眼眶脂肪组织与眼外肌,体外培养OF,在培养基中分别加入10-6m o l/L地塞米松、300 U/mL干扰素-γ(IFN-γ)或10-6m o l/L地塞米松与300 U/mL IFN-γ的混合液,作用72 h,用流式细胞仪检测OF上ICAM-1的表达水平。结果体外培养的OF均表达ICAM-1,TAO患者的表达量高于正常对照者(P<0.05)。IFN-γ促进OF表达ICAM-1,地塞米松不仅抑制OF表达ICAM-1,而且能抑制IFN-γ诱导的ICAM-1表达。结论TAO患者OF表达ICAM-1增强可能是促进眶内炎症发生的原因之一,糖皮质激素发挥治疗作用的可能机制之一是其抑制OF表达ICAM-1以及IFN-γ诱导的ICAM-1表达。 展开更多

关键词 甲状腺相关眼病 眼眶成纤维细胞糖皮质激素 细胞间粘附分子

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SB431542和TGF-β_1对甲状腺相关性眼病患者眼眶成纤维细胞α-SMA及CTGF基因表达的影响 被引量：4

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作者 陆燕 黄媛媛 +2 位作者 蔡季平 程金伟 魏锐利 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2015年第3期210-213,共4页

目的探讨转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）和SB431542（TGF-β1受体酶抑制剂）对甲状腺相关性眼病（thyroid-associated ophthalmopathy,TAO）患者眼眶成纤维细胞α平滑肌激动蛋白（α-smooth muscle actin,... 目的探讨转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）和SB431542（TGF-β1受体酶抑制剂）对甲状腺相关性眼病（thyroid-associated ophthalmopathy,TAO）患者眼眶成纤维细胞α平滑肌激动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）及结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）基因表达的影响,为TAO眼外肌纤维化的治疗寻找潜在的药物治疗靶点。方法实验分为3组。第1组：采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（real-time PCR,RT-PCR）检测不同浓度TGF-β1（0μg·L-1、1μg·L-1、5μg·L-1、10μg·L-1、20μg·L-1）刺激TAO患者眼眶成纤维细胞后α-SMA及CTGF mRNA的表达情况;第2组：采用RT-PCR检测10μg·L-1 TGF-β1在不同的时间点（0 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h）刺激TAO患者眼眶成纤维细胞后α-SMA及CTGF mRNA的表达情况;第3组（分为4小组处理）：眼眶成纤维细胞不加任何干预、使用30μmol·L-1SB431542刺激眼眶成纤维细胞、10μg·L-1 TGF-β1单独刺激眼眶成纤维细胞、30μmol·L-1 SB431542联合10μg·L-1 TGF-β1刺激眼眶成纤维细胞（SB431542预先刺激眼眶成纤维细胞1 h,然后再加入TGF-β1）,采用RT-PCR检测α-SMA及CTGF mRNA的表达。结果TGF-β1在一定的浓度范围内（1~10μg·L-1）以剂量依赖的方式诱导眼眶成纤维细胞表达α-SMA mRNA及CTGF mRNA,随着浓度增加mRNA表达增加,各浓度组（1μg·L-1、5μg·L-1、10μg·L-1、20μg·L-1）与空白对照组（0μg·L-1）相比,差异均有统计学意义（均为P〈0.05）。TGF-β1在一定的时间范围内（0~24 h）以时间依赖的方式诱导眼眶成纤维细胞表达α-SMA mRNA及CTGF mRNA,随着时间延长mRNA表达增加,各时间组（3 h、6 h、12 h、24 h、48 h）与0 h相比,差异均有统计学意义（均为P〈0.05）。10μg·L-1的TGF-β1诱导眼眶成纤维细胞表达α-SMA mRNA在24 h达到峰值,而CTGF mRNA在12 h即可达到峰值。SB431542对眼眶成纤维细胞α-SMA mRNA及CTGF mRNA的表达均有抑制作用。结论一定范围内,TGF-β1以剂量和时间依赖的方式诱导眼眶成纤维细胞α-SMA及CTGF mRNA的表达,SB431542可抑制其表达。 展开更多

关键词 甲状腺相关性眼病 转化生长因子-β1 眼眶成纤维细胞转分化 结缔组织生长因子 SB431542

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TGF-β1诱导CD90^+和CD90^-眼眶成纤维细胞亚群肌成纤维细胞转化的研究 被引量：3

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作者 唐莉 罗清礼 +3 位作者 廖咏川 刘东劲 骆洪梅 唐建 《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期564-567,共4页

目的依据培养的甲状腺相关性眼病患者眼眶成纤维细胞是否表达CD90分为两个亚群,分离这两个细胞亚群,分别进行肌成纤维诱导,研究它们在眼外肌纤维化中所起的不同作用。方法免疫磁分离法分离CD90+和CD90-的眼眶成纤维细胞,TGF-β1诱导CD90... 目的依据培养的甲状腺相关性眼病患者眼眶成纤维细胞是否表达CD90分为两个亚群,分离这两个细胞亚群,分别进行肌成纤维诱导,研究它们在眼外肌纤维化中所起的不同作用。方法免疫磁分离法分离CD90+和CD90-的眼眶成纤维细胞,TGF-β1诱导CD90+和CD90-成纤维细胞亚群转化为肌成纤维细胞(MFB),免疫细胞化学法检测代表MFB标志的平滑肌动蛋白α-SMA的表达情况。结果在TGF-β1的作用下,48 h后部分CD90+细胞开始出现α-SMA弱表达,4 d后大部分细胞呈阳性。CD90-细胞不表达α-SMA。结论CD90+与CD90-眼眶成纤维细胞具有不同的功能,CD90+细胞群具有转化为MFB的潜能,与眼外肌纤维化和细胞外基质积聚有关;CD90-成纤维细胞不能转化为MFB。 展开更多

关键词 甲状腺相关性眼病 眼眶成纤维细胞亚群 肌成纤维细胞 转化生长因子Β1 CD90 α平滑肌动蛋白

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夏枯草、浙贝提取物对体外培养TAO眼眶成纤维细胞的影响 被引量：17

8

作者 李蓓 郑燕林 《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期577-581,共5页

目的探讨夏枯草、浙贝治疗甲状腺相关眼病(TAO)的机制。方法采用体外培养的正常人和TAO患者的眼眶成纤维细胞,将夏枯草、浙贝提取物、刺激药物干扰素-γ和阳性对照药物地塞米松分成不同质量浓度组,以MTT法、磁性均相化学发光免疫分析法... 目的探讨夏枯草、浙贝治疗甲状腺相关眼病(TAO)的机制。方法采用体外培养的正常人和TAO患者的眼眶成纤维细胞,将夏枯草、浙贝提取物、刺激药物干扰素-γ和阳性对照药物地塞米松分成不同质量浓度组,以MTT法、磁性均相化学发光免疫分析法、流式细胞仪检测其对细胞的增生、透明质酸(HA)的分泌以及黏附分子(ICAM-1)表达的影响。结果夏枯草、浙贝提取物具有与地塞米松相似的抑制作用,对于TAO患者HA的分泌,133mg/mL的夏枯草质量浓度组与10μg/mL地塞米松组比较差异无统计学意义(P>0.05),但浙贝各质量浓度组较夏枯草和地塞米松弱(P<0.01);对于ICAM-1的表达,夏枯草组的抑制作用较地塞米松组弱(P<0.01),但较浙贝组强(P<0.01)。结论夏枯草、浙贝对TAO的治疗作用可能是通过抑制眼眶成纤维细胞的增生、在IFN-γ刺激下HA的分泌和ICAM-1的表达而实现的,且夏枯草作用强于浙贝。 展开更多

关键词 眼眶成纤维细胞 夏枯草和浙贝提取物 甲状腺相关眼病

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转化生长因子-β_1对人眼眶成纤维细胞增殖的影响 被引量：2

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作者 高自清 刘庆淮 +1 位作者 谢平 刘肖艺 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期294-296,300,F005,共5页

目的:观察转化生长因子β1(TGF鄄β1)对人眼眶成纤维细胞(orbitalfibroblasts,OFs)增殖的影响,探讨增殖性玻璃体视网膜病变(proliferativevitreoretinopathy,PVR)的发病机制。方法:OFs体外培养,用不同浓度TGF鄄β1(0.1、1.0、5.0、10.0... 目的:观察转化生长因子β1(TGF鄄β1)对人眼眶成纤维细胞(orbitalfibroblasts,OFs)增殖的影响,探讨增殖性玻璃体视网膜病变(proliferativevitreoretinopathy,PVR)的发病机制。方法:OFs体外培养,用不同浓度TGF鄄β1(0.1、1.0、5.0、10.0、100.0μg/L)对细胞进行处理,计算细胞的数量,绘制细胞生长曲线;椎虫蓝染色计算活细胞比例、MTT比色法测定吸光度(A)值;流式细胞仪(FCM)检测细胞周期分布。结果:0.1、1.0、5.0、10.0滋g/L的TGF鄄β1作用后OFs生长曲线上移,活细胞数增加,A值上升,处于增殖期(S+G2)的细胞比例增多。100.0滋g/L的TGF鄄β1对OFs作用相反。结论:TGF鄄β1对人眼眶成纤维细胞增殖有双相调节性,其不同作用的发挥依赖TGF鄄β1的浓度,TGF鄄β1的促成纤维细胞的增殖作用可能诱发PVR。 展开更多

关键词 眼眶成纤维细胞 转化生长因子Β1 细胞增殖 增殖性玻璃体视网膜病变

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IFN-γ、IL-6对眼眶成纤维细胞ICAM-1表达的影响 被引量：1

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作者 何为民 罗清礼 +1 位作者 曾继红 陈清英 《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期119-121,共3页

目的探讨IFN-γ和IL-6对甲状腺相关眼病(TAO)眼眶成纤维细胞ICAM-1表达的影响。方法体外培养TAO患者和正常人眼眶成纤维细胞,在培养基中分别加入不同浓度的IFN-γ和IL-6,用流式细胞仪检测眼眶成纤维细胞ICAM-1的表达水平。结果培养的TA... 目的探讨IFN-γ和IL-6对甲状腺相关眼病(TAO)眼眶成纤维细胞ICAM-1表达的影响。方法体外培养TAO患者和正常人眼眶成纤维细胞,在培养基中分别加入不同浓度的IFN-γ和IL-6,用流式细胞仪检测眼眶成纤维细胞ICAM-1的表达水平。结果培养的TAO患者和正常对照眼眶成纤维细胞均表达ICAM-1,患者的表达量高于正常对照者,具有显著统计学差异(P<0.05)。IFN-γ以剂量依赖方式上调ICAM-1的表达水平,对患者的上调作用更强;IL-6对眼眶成纤维细胞表达ICAM-1没有明显影响。结论IFN-γ通过诱导眼眶成纤维细胞ICAM-1的表达在TAO的病理发生中起重要作用。 展开更多

关键词 甲状腺相关眼病 眼眶成纤维细胞 干扰素 白介素-6 细胞间黏附分子

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透明质酸酶对眼眶成纤维细胞增殖及分泌透明质酸的影响 被引量：1

11

作者 叶青 何为民 康剑书 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期530-532,共3页

目的探讨透明质酸酶对人眼眶成纤维细胞增殖以及分泌透明质酸的影响,为透明质酸酶用于甲状腺相关眼病患者的治疗提供实验依据。方法取健康意外死亡者眼眶脂肪组织行眼眶成纤维细胞培养,用不同浓度透明质酸酶(0μg/mL、5μg/mL、10μg/mL... 目的探讨透明质酸酶对人眼眶成纤维细胞增殖以及分泌透明质酸的影响,为透明质酸酶用于甲状腺相关眼病患者的治疗提供实验依据。方法取健康意外死亡者眼眶脂肪组织行眼眶成纤维细胞培养,用不同浓度透明质酸酶(0μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、500μg/mL)分别处理细胞,在不同时间点(24 h、48 h、72 h)观察细胞形态变化;MTT法检测细胞增殖情况;ELISA法检测透明质酸含量。结果体外成功培养人眼眶成纤维细胞;各浓度透明质酸酶作用眼眶成纤维细胞后细胞形态密度未见明显差别;MTT测得A值在各时间点上的差异无统计学意义(P值均>0.05);各浓度实验组分别与在同一时间点的正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);各浓度透明质酸酶组均较空白对照组透明质酸含量减少,随浓度升高透明质酸含量降低,随时间变化实验组与对照组透明质酸含量差值增加。各浓度组在3个时间点分解透明质酸量与空白对照组差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论通过获取人眼眶脂肪结缔组织进行组织块法成功培养、传代获得纯化眼眶成纤维细胞;实验设定浓度范围的透明质酸酶对眼眶成纤维细胞的增殖无明显影响;眼眶成纤维细胞能分泌透明质酸,不同浓度透明质酸酶均对其有分解作用,且呈剂量和时间依赖性。 展开更多

关键词 甲状腺相关眼病 人眼眶成纤维细胞 细胞培养 透明质酸 透明质酸酶

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~3H-TdR掺入法测定TGFβ_1对人眼眶成纤维细胞增殖的影响 被引量：1

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作者 高自清 岳晓丽 +2 位作者 方丽 李娟 李宁 《临床眼科杂志》 2011年第3期282-284,共3页

目的用3H-TdR掺入法观察转化生长因子β1(TGF-β1)对人眼眶成纤维细胞增殖的影响,探讨增生性玻璃体视网膜病变(PVR)的可能发病机制。方法人眼眶成纤维细胞体外培养,用不同浓度TGF-β1(0.1、1.0、5.0、10.0、100.0μg/L)对细胞进行处理,3... 目的用3H-TdR掺入法观察转化生长因子β1(TGF-β1)对人眼眶成纤维细胞增殖的影响,探讨增生性玻璃体视网膜病变(PVR)的可能发病机制。方法人眼眶成纤维细胞体外培养,用不同浓度TGF-β1(0.1、1.0、5.0、10.0、100.0μg/L)对细胞进行处理,3H-TdR掺入法测定细胞放射性强度。结果 0.1、1.0、5.0、10.0浓度的TGF-β1作用后活细胞数增加,细胞3H-TdR摄入量增加。100.0浓度的TGF-β1对人眼眶成纤维细胞作用相反。结论 TGF-β1对人眼眶成纤维细胞增殖有双相调节性,其不同作用的发挥依赖TGF-β1的浓度,TGF-β1的促成纤维细胞的增殖作用是PVR的诱发因素。 展开更多

关键词 眼眶成纤维细胞 转化生长因子Β1 细胞增殖 增生性玻璃体视网膜病变

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全反式维甲酸对甲状腺相关眼病眼眶成纤维细胞增殖和凋亡的影响 被引量：1

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作者 彭细峰 许雪亮 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第21期55-59,共5页

目的观察全反式维甲酸对体外培养的眼眶成纤维细胞增殖的影响以及促胞凋亡的作用。方法体外培养甲状腺相关眼病患者眼眶成纤维细胞;将不同浓度的ATRA(0、10-9mmol/L、10-8mmol/L、10-7mmol/L、10-6mmol/L和10-5mmol/L)作用于成纤维细胞... 目的观察全反式维甲酸对体外培养的眼眶成纤维细胞增殖的影响以及促胞凋亡的作用。方法体外培养甲状腺相关眼病患者眼眶成纤维细胞;将不同浓度的ATRA(0、10-9mmol/L、10-8mmol/L、10-7mmol/L、10-6mmol/L和10-5mmol/L)作用于成纤维细胞细胞分别达24、48和72 h后,用噻唑蓝(MTT)比色法观察ATRA对细胞增殖的影响,采用流式细胞仪检测ATRA处理48 h后细胞周期的改变及细胞凋亡率;检测ATRA处理48 h后细胞内bcl-2蛋白的表达水平。结果 MTT法显示ATRA能降低成纤维细胞的A值(P<0.05),细胞生长抑制率随作用时间和药物浓度的增加而增加。流式细胞仪检测细胞周期阻滞在G1期;凋亡率随着浓度的增加而上升;bcl-2蛋白的表达水平较正常对照组细胞明显下调。结论 ATRA能够抑制成纤维细胞的增殖,抑制作用呈时间和剂量依赖性;ATRA通过将细胞阻滞在G1期而起到抑制作用;ATRA可以诱导成纤维细胞凋亡,诱导细胞凋亡作用与下调细胞内bcl-2蛋白的表达有关。 展开更多

关键词 甲状腺相关眼病 眼眶成纤维细胞 全反式维甲酸 细胞凋亡1

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TGF-β1体外对人眼眶成纤维细胞3H-Pro掺入的影响

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作者 高自清 方丽 +3 位作者 周琦 李娟 岳晓丽 李宁 《国际眼科杂志》 CAS 2010年第12期2271-2272,共2页

目的:观察转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对人眼眶成纤维细胞(orbital fibroblast,OF)3H-Pro掺入的影响。方法:体外培养人OF,用0.1,1.0,5.0,10.0,100.0μg/LTGF-β1对细胞进行处理,用3H-Pro掺入法测定细胞放... 目的:观察转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对人眼眶成纤维细胞(orbital fibroblast,OF)3H-Pro掺入的影响。方法:体外培养人OF,用0.1,1.0,5.0,10.0,100.0μg/LTGF-β1对细胞进行处理,用3H-Pro掺入法测定细胞放射性强度来判断细胞胶原合成。结果:用0.1,1.0,5.0,10.0μg/L TGF-β1作用后OF3H-Pro掺入量增加。100.0μg/L TGF-β1对OF作用相反。结论:TGF-β对人OF合成胶原有双相调节性。 展开更多

关键词 眼眶成纤维细胞 转化生长因子Β1 胶原合成 增生性玻璃体视网膜病变

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IL-1ra对IL-1α诱导的眼眶成纤维细胞合成糖胺多糖的抑制作用

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作者 刘桂琴 吴中耀 +4 位作者 杨华胜 郑健樑 颜建华 卢汉平 林征 《眼视光学杂志》 CAS 2003年第4期224-227,共4页

目的 :明确白介素 1受体拮抗剂 (IL 1ra)是否对白介素 1α(IL 1α)诱导的眼眶成纤维细胞合成糖胺多糖 (gly cosaminoglycans,GAG)有抑制作用 ,探讨IL 1ra在Graves’眼病(GO)治疗及预防中的临床应用前景。方法 :以下述方法分别处理培养... 目的 :明确白介素 1受体拮抗剂 (IL 1ra)是否对白介素 1α(IL 1α)诱导的眼眶成纤维细胞合成糖胺多糖 (gly cosaminoglycans,GAG)有抑制作用 ,探讨IL 1ra在Graves’眼病(GO)治疗及预防中的临床应用前景。方法 :以下述方法分别处理培养的GO患者和正常人眼眶成纤维细胞 :IL 1α 30U/ml或 /和不同浓度的IL 1ra孵育 4 8h ;用IL 1α 30U/ml处理后 ,再加入IL 1ra 75ng/ml共孵育不同时间 (2 4h、4 8h、72h)。用 [3 H]葡萄糖胺掺入法测定 [3 H]GAG的产量。结果IL 1α 30U/ml明显刺激GO患者和正常人成纤维细胞合成GAG ,增加率达 4 6 .6 %～ 12 7.9% (平均 10 3.5 % ,P <0 .0 0 1)。与IL 1α 30U/ml克分子浓度比为 2 5∶1、4 0∶1和 10 0∶1的IL 1ra ,分别抑制IL 1α诱导的GO患者和正常人成纤维细胞合成GAG达 (30 .93± 11.4 6 ) %、(5 9.34± 9.3) %和 (83.15± 8.5 6 ) % (P <0 .0 0 5 )。在 2 4h、4 8h、72h时 ,IL 1ra分别抑制IL 1α诱导的眼眶成纤维细胞合成GAG(2 4 .18± 6 .3) %、(6 0 .4 8± 12 .83) %和 (73.0 4± 7.14 ) % (前两组相比 ,P <0 .0 0 1;后两组相比 ,P =0 .15 9)。结论 :IL 1ra能够剂量和时间依赖性地抑制IL 1α诱导的眼眶成纤维细胞合成GAG ,IL 1ra可望用于GO的治疗和预防。 展开更多

关键词 IL-1RA IL-1Α 眼眶成纤维细胞 糖胺多糖 抑制作用 白介素1受体拮抗剂 白介素1Α Graves’眼病

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富氢水对体外培养甲状腺相关眼病患者眼眶成纤维细胞氧化应激的影响 被引量：3

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作者 陈欣欣 蔡季平 +4 位作者 程金伟 周晓晴 沈亚 李坚 魏锐利 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期547-551,共5页

目的探讨富氢水对甲状腺相关眼病(TAO)的抗氧化应激作用。方法取TAO患者眼眶脂肪结缔组织的眼眶成纤维细胞进行体外培养,用不同浓度的过氧化氢(H_2O_2)处理细胞18 h后,用CCK-8法检测细胞增殖能力以确定合适的H_2O_2浓度。将细胞为4组:... 目的探讨富氢水对甲状腺相关眼病(TAO)的抗氧化应激作用。方法取TAO患者眼眶脂肪结缔组织的眼眶成纤维细胞进行体外培养,用不同浓度的过氧化氢(H_2O_2)处理细胞18 h后,用CCK-8法检测细胞增殖能力以确定合适的H_2O_2浓度。将细胞为4组:空白组(正常培养)、H_2O_2组(H_2O_2处理18 h)、富氢水+H_2O_2组(富氢水处理72 h的同时用H_2O_2处理18 h)、地塞米松+H_2O_2组(1μmol/L地塞米松处理72 h的同时用H_2O_2处理18 h)。用流式细胞术检测各组细胞活性氧(ROS)荧光强度,用ELISA检测细胞培养液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量。结果 TAO患者眼眶成纤维细胞体外培养成功。H_2O_2浓度越高对TAO患者眼眶成纤维细胞增殖能力的抑制效果越明显,本实验最终选取的H_2O_2浓度为100μmol/L。培养TAO患者眼眶成纤维细胞72 h后,空白组、H_2O_2组、富氢水+H_2O_2组、地塞米松+H_2O_2组细胞培养液中MDA、SOD、GSH-Px的含量和细胞ROS荧光强度分别为(1.63±0.29)、(5.06±0.24)、(3.94±0.29)、(2.34±0.24)nmol/m L,(10.51±0.32)、(2.41±0.23)、(5.58±0.29)、(7.98±0.15)U/m L,(107.79±1.06)、(21.07±0.92)、(49.19±6.75)、(76.33±4.70)U/m L和18 275.82±521.05、92 524.81±2 097.01、54 460.87±572.64、35 961.37±540.61,统计分析发现富氢水和地塞米松均可抑制H_2O_2处理后眼眶成纤维细胞的氧化应激(P均<0.01),且地塞米松的抑制效果较富氢水更明显(P均<0.01)。结论氢分子可能通过抗氧化应激对TAO发挥治疗作用。 展开更多

关键词 甲状腺相关眼病 眼眶成纤维细胞 富氢水 氧化性应激 地塞米松

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贝母素甲对体外培养甲状腺相关眼病患者眼眶成纤维细胞增殖的影响 被引量：19

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作者 李蓓 郑燕林 刘文舟 《国际眼科杂志》 CAS 2010年第2期235-237,共3页

目的:观察贝母素甲(PM)对体外培养甲状腺相关眼病患者眼眶成纤维细胞(orbital fibroblast,OF)增殖的影响。方法:采用体外培养的正常人和甲状腺相关眼病患者的OF,将PM和阳性对照药物地塞米松(Dex)分成不同浓度组,以MTT法检测其对细胞增... 目的:观察贝母素甲(PM)对体外培养甲状腺相关眼病患者眼眶成纤维细胞(orbital fibroblast,OF)增殖的影响。方法:采用体外培养的正常人和甲状腺相关眼病患者的OF,将PM和阳性对照药物地塞米松(Dex)分成不同浓度组,以MTT法检测其对细胞增殖的影响。结果:对体外培养甲状腺相关眼病患者OF的增殖,PM具有与Dex相似的抑制作用,二者均有明显的剂量依赖性。但PM对甲状腺相关眼病患者OF增殖的抑制作用明显优于正常人(P<0.05),而Dex则无此选择性。结论:浙贝抑制了甲状腺相关眼病患者OF的增殖。 展开更多

关键词 浙贝提取物 甲状腺相关眼病 眼眶成纤维细胞 增殖

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肥大细胞对眼眶成纤维细胞生长的影响 被引量：4

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作者 鲁桂兰 吴中耀 +4 位作者 李永平 颜建华 程浩 郑健墚 张文忻 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2004年第3期294-296,300,共4页

目的:探讨肥大细胞对眼眶成纤维细胞生长的影响。方法:将分离纯化的小鼠骨髓源性肥大细胞(BMMC)与眼眶成纤维细胞(OFb)共育,共育分为两组:两种细胞接触共育组和非接触共育组,眼眶成纤维细胞单独培养为对照组;应用光镜、电镜及细胞生长... 目的:探讨肥大细胞对眼眶成纤维细胞生长的影响。方法:将分离纯化的小鼠骨髓源性肥大细胞(BMMC)与眼眶成纤维细胞(OFb)共育,共育分为两组:两种细胞接触共育组和非接触共育组,眼眶成纤维细胞单独培养为对照组;应用光镜、电镜及细胞生长计数等方法研究肥大细胞对眼眶成纤维细胞生长的影响。结果:与BMMC接触共育的OFb增殖活跃,呈复层生长,单位面积内细胞计数明显增加;接触共育组中OFb的增殖数分别与非接触共育组和对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);而非接触共育组的OFb增殖数和对照组比较,差异没有统计学意义(P>0.05);电镜见接触共育组OFb中粗面内质网(RER)增生扩张,BMMC与OFb紧密接触,部分BMMC有脱颗粒现象。结论:肥大细胞对眼眶成纤维细胞的生存和增殖有显著的促进作用,并使其功能活跃,这种作用主要是通过两种细胞间的紧密接触而实现的。 展开更多

关键词 骨髓源性肥大细胞 眼眶成纤维细胞 共育 增殖

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植物凝集素诱导甲状腺相关眼病患者外周单核细胞与眼眶成纤维细胞共培养体系分泌IL-6、IL-17A的研究 被引量：2

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作者 潘媛 许雪亮 +2 位作者 谭佳 许蓓 张灵丽 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期692-698,共7页

背景 甲状腺相关眼病（TAO）的致病机制尚未明确,目前认为其是一种自身免疫性疾病,研究证实白细胞介素-17A（IL-17A）在多种自身免疫性疾病的发生和发展中起着重要作用,但其是否参与TAO的发病过程目前尚不明确. 目的 探讨培养外周血单... 背景 甲状腺相关眼病（TAO）的致病机制尚未明确,目前认为其是一种自身免疫性疾病,研究证实白细胞介素-17A（IL-17A）在多种自身免疫性疾病的发生和发展中起着重要作用,但其是否参与TAO的发病过程目前尚不明确. 目的 探讨培养外周血单个核细胞（PBMCs）与眼眶成纤维细胞（OFs）共培养体系中分泌的IL-17A是否参与TAO的发病过程及其可能的作用机制. 方法 采集2014年4-12月在中南大学湘雅医院确诊的12例TAO患者的外周血及眼眶结缔组织作为TAO组,并采集同期因先天性眼球萎缩行义眼台植入术的8例患者外周血及眼眶结缔组织作为对照组,采用密度梯度离心法提取所有受试者血中PBMCs,采用组织块培养法培养OFs.采用流式细胞仪检测PBMCs中T淋巴细胞纯度,分别用Giemsa染色法和免疫组织化学法鉴定培养的OFs.以1∶20的比例将OFs与PMBCs在U型96孔板中共培养以建立共培养体系,分别在各组共培养体系中加入0、1.0、2.5、5.0、10.0 μg/ml植物凝集素（PHA）刺激72 h,用ELISA法检测共培养体系上清液中IL-6、IL-17A质量浓度以及共培养体系细胞膜中总IL-17A受体（IL-17RA）的质量浓度.比较不同质量浓度PHA作用后各组共培养体系上清液中IL-6、IL-17A、IL-17RA质量浓度的差异. 结果 TAO组和对照组PBMCs中T淋巴细胞的纯度分别为（81.10±0.21）％和（80.05 ±0.38）％,组间差异无统计学意义（t=0.923,P＞0.05）.体外培养的OFs对Vimentin呈阳性反应,Giemsa染色阳性,证实为成纤维细胞.1.0 μg/ml PHA作用后共培养体系中PBMCs和OFs增生能力最强,PHA质量浓度＞1.0μg/ml时,PBMCs出现凋亡,OFs增生明显减弱,相同质量浓度PHA作用下,TAO组的PBMCs和OFs增生均较对照组快.不同质量浓度PHA作用下TAO组与对照组共培养体系IL-6、IL-17A和IL-17RA质量浓度总体比较,差异均有统计学意义（IL-6：F分组=12.561,P=0.000;F质量浓度=23.356,P=0.001.IL-17A：F分组=12.037,P=0.000;F质量浓度=19.206,P=0.000.IL-17RA：F分组=16.216,P=0.000;F质量浓度=4.627,P=0.018）.1.0μg/ml PHA作用后各组共培养体系上清液中IL-6、IL-17A和IL-17RA质量浓度均达峰值,随着PHA质量浓度的增加,IL-6、IL-17A和IL-17RA质量浓度均逐渐下降,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;相同质量浓度PHA作用下TAO组共培养体系上清液中IL-6、IL-17A、IL-17RA质量浓度明显高于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）. 结论 1.0 μg/ml PHA刺激可增强共培养体系中PBMCs和OFs的增生及免疫炎性因子的分泌,IL-17A能够放大细胞免疫反应和炎症反应,从而参与TAO的发病过程. 展开更多

关键词 细胞培养 甲状腺相关眼病 外周血单个核细胞 眼眶成纤维细胞 T淋巴细胞 白细胞介素-6 白细胞介素-17A 人

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可溶性CD40L促进甲状腺相关性眼病患者眼眶成纤维细胞增殖和透明质酸合成酶表达 被引量：3

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作者 曾程程 魏锐利 +1 位作者 牟旆 王秋红 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1138-1142,共5页

目的 探讨可溶性CD40L（sCD40L）对甲状腺相关性眼病（TAO）患者眼眶成纤维细胞（OFs）增殖和3种透明质酸合成酶（HAS）mRNA表达水平的影响,初步探讨sCD40L在TAO发病中的作用。方法 取5例TAO患者和3例正常对照标本原代培养OFs,采用MTS... 目的 探讨可溶性CD40L（sCD40L）对甲状腺相关性眼病（TAO）患者眼眶成纤维细胞（OFs）增殖和3种透明质酸合成酶（HAS）mRNA表达水平的影响,初步探讨sCD40L在TAO发病中的作用。方法 取5例TAO患者和3例正常对照标本原代培养OFs,采用MTS比色法检测终质量浓度6.25、12.5、25、50、100、200ng/mL的sCD40L作用48h后对不同来源OFs增殖的影响;实时荧光定量PCR技术检测终质量浓度12.5、25、50、100ng/mL及作用3、6、12、24h后的sCD40L对不同来源OFs的3种HAS基因（HAS1~3）表达水平的影响。结果 25ng/mL及以上浓度的sCD40L作用48h后对TAO患者OFs有促增殖作用（P〈0.05）;而50ng/mL及以上浓度的sCD40L作用48h后才能对正常对照OFs有促增殖作用（P〈0.05）,且作用较弱。TAO患者OFs中HAS3mRNA的合成在sCD40L的刺激下增加,并且呈现出浓度和时间依赖的趋势。结论 sCD40L能够促进TAO患者OFs的生长以及HAS3基因的表达,提示sCD40L在TAO的病理过程中起一定作用。 展开更多

关键词 可溶性CD40配体 GRAVES眼病 眼眶成纤维细胞 透明质酸合成酶

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