取粉碎均匀的石斛样品1 g置于50 m L聚四氟乙烯离心管中,加入0.1 mol·L^(-1)盐酸溶液5 m L,涡旋振荡2 min,充分浸润,加入15 m L乙醇,涡旋振荡1 min,超声30 min,冷却至室温,加入6 g无水硫酸镁和1.5 g无水乙酸钠,振摇3 min,冰浴冷却5...取粉碎均匀的石斛样品1 g置于50 m L聚四氟乙烯离心管中,加入0.1 mol·L^(-1)盐酸溶液5 m L,涡旋振荡2 min,充分浸润,加入15 m L乙醇,涡旋振荡1 min,超声30 min,冷却至室温,加入6 g无水硫酸镁和1.5 g无水乙酸钠,振摇3 min,冰浴冷却5 min,以转速8000 r·min^(-1)离心5 min,取上清液1 m L用乙醇定容至25 m L,采用高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定石斛碱和毛兰素的含量。以Kinetex F5色谱柱为固定相,以不同体积比的乙醇-0.1%(体积分数)甲酸溶液混合液为流动相进行梯度洗脱,质谱分析采用电喷雾离子(ESI)源,正离子(ESI+)扫描模式,多反应监测(MRM)模式。结果表明,石斛碱和毛兰素的质量浓度在一定范围内与对应的峰面积呈线性关系,检出限(3S/N)分别为0.02,0.003 mg·kg^(-1);按照标准加入法进行回收试验,回收率为93.6%~97.1%,测定值的相对标准偏差(n=6)均小于3.0%;方法用于测定不同栽培方式、不同年限、不同部位金钗石斛中石斛碱、毛兰素的含量,均存在差异。展开更多
文摘取粉碎均匀的石斛样品1 g置于50 m L聚四氟乙烯离心管中,加入0.1 mol·L^(-1)盐酸溶液5 m L,涡旋振荡2 min,充分浸润,加入15 m L乙醇,涡旋振荡1 min,超声30 min,冷却至室温,加入6 g无水硫酸镁和1.5 g无水乙酸钠,振摇3 min,冰浴冷却5 min,以转速8000 r·min^(-1)离心5 min,取上清液1 m L用乙醇定容至25 m L,采用高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定石斛碱和毛兰素的含量。以Kinetex F5色谱柱为固定相,以不同体积比的乙醇-0.1%(体积分数)甲酸溶液混合液为流动相进行梯度洗脱,质谱分析采用电喷雾离子(ESI)源,正离子(ESI+)扫描模式,多反应监测(MRM)模式。结果表明,石斛碱和毛兰素的质量浓度在一定范围内与对应的峰面积呈线性关系,检出限(3S/N)分别为0.02,0.003 mg·kg^(-1);按照标准加入法进行回收试验,回收率为93.6%~97.1%,测定值的相对标准偏差(n=6)均小于3.0%;方法用于测定不同栽培方式、不同年限、不同部位金钗石斛中石斛碱、毛兰素的含量,均存在差异。
文摘目的探讨石斛碱保护大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用及对Bax/Cyt-C/caspase3凋亡信号通路的影响。方法将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、复方丹参组(300 mg/kg,阳性对照)及石斛碱高、中、低剂量组(40、20、10 mg/kg),每组10只,每天灌胃给药1次,连续14 d。末次给药后24 h,采用左冠状动脉前降支结扎和再通法复制大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。建模成功后记录大鼠平均动脉压(MAP)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左室收缩压(LVSP)、左室内压最大上升和下降速率(LV dP/d t max/dP/d t min)。采用生化法检测大鼠血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平,TTC法检测大鼠心肌梗死面积,HE染色观察大鼠心肌组织病理形态学变化,RT-PCR和Western blot法检测大鼠心肌组织Bax、Bcl-2、Cyt-C、caspase3 mRNA和蛋白表达。结果与模型组比较,石斛碱高剂量组大鼠MAP、LVSP、LV dP/d t max及LV dP/d t min升高(P<0.01),LVEDP下降(P<0.01);血清LDH、CK、CK-MB水平降低(P<0.01);心肌梗死面积减少(P<0.01);心肌纤维排列较为有序,细胞间偶见炎性细胞分布,部分细胞结构缺损,仍有断裂或萎缩现象;心肌组织Bax、Cyt-C、caspase3 mRNA和蛋白表达降低(P<0.01),Bcl-2 mRNA和蛋白表达升高(P<0.01)。结论石斛碱对心肌缺血再灌注损伤大鼠心脏具有保护作用,其作用机制与抑制Bax/Cyt-C/caspase3凋亡信号通路有关。
