龟板抑制破骨分化改善骨质疏松性骨折

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作者 张鹏 陈弘林 +10 位作者 伍子贤 余思瑶 招文华 尚奇 何嘉辉 陈桂锋 余富勇 梁德 江晓兵 任辉 余翔 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期17-22,共6页

目的基于网络药理学和实验验证探讨龟板(plastrum testudinis,PT)治疗骨质疏松性骨折(osteoporotic fracture,OF)的潜在机制。方法借助BATMAN数据库得到PT成分及其对应靶标,检索GeneCards、OMIM数据库获得OF相关靶点,在STRING数据库输... 目的基于网络药理学和实验验证探讨龟板(plastrum testudinis,PT)治疗骨质疏松性骨折(osteoporotic fracture,OF)的潜在机制。方法借助BATMAN数据库得到PT成分及其对应靶标,检索GeneCards、OMIM数据库获得OF相关靶点,在STRING数据库输入交集靶点得到蛋白互作(protein-protein interaction,PPI)信息,借助Cytoscape3.7.2软件进行PPI网络及“龟板-活性成分-靶标-骨质疏松性骨折”网络的构建,使用Cytoscape3.7.2软件、R软件进行GO功能富集分析及KEGG通路富集分析。此外,为了验证网络药理学研究结果的可靠性,还进行体内实验验证龟板改善OF的作用,并通过体外实验探究了龟板干预下的人外周血单核细胞(human peripheral blood monocytes,HPBMs)表型。结果获得龟板6个活性成分,342个作用靶标,其中与OF相关靶标34个,GO功能富集分析共有802个结果(P<0.05),KEGG富集分析有67个结果,其中相关信号通路有22条(P<0.05),主要涉及TNF、MAPK、Estrogen、NF-κB等信号通路。值得一提的是,体内实验证实龟板可有效治疗OF模型大鼠的骨缺损;体外实验发现龟板能抑制RANKL诱导的HPBMs破骨分化。结论龟板可能通过多种化合物、靶点和通路调节炎症反应、激素代谢及细胞周期来治疗OF,其中抑制破骨分化可能是龟板抗骨质疏松性骨折的重要机制。 展开更多

关键词 骨质疏松性骨折 龟板 网络药理学 实验验证 破骨分化

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由“阳有余而阴不足”探讨自噬调节糖皮质激素介导的破骨分化

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作者 刘宇 沈耿杨 +3 位作者 陈弘林 尚奇 任辉 江晓兵 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期708-711,共4页

目前,糖皮质激素(glucocorticoids,GC)在临床上被广泛应用于抑制炎症反应与免疫系统,然而GC的长期大量应用会引起破骨细胞过度活跃,导致骨质疏松症以及相关骨折,被称为糖皮质激素性骨质疏松症(GIOP)。GIOP属于中医学“骨痿”“骨枯”的... 目前,糖皮质激素(glucocorticoids,GC)在临床上被广泛应用于抑制炎症反应与免疫系统,然而GC的长期大量应用会引起破骨细胞过度活跃,导致骨质疏松症以及相关骨折,被称为糖皮质激素性骨质疏松症(GIOP)。GIOP属于中医学“骨痿”“骨枯”的范畴,“骨痿”的发病病机与机体阴阳失衡密切相关。细胞自噬作为一种自我保护机制,对维持机体内环境平衡、调节“成骨-破骨”形成的骨稳态至关重要。成骨细胞与破骨细胞介导的骨稳态与中医理论中的阴阳自和理论不谋而合。本文基于GIOP发病的病机“阳有余而阴不足”探讨通过“调节自噬-平衡阴阳”来调控骨稳态,为防治GIOP提供新的思路。 展开更多

关键词 阳有余而阴不足 自噬 糖皮质激素性骨质疏松症 破骨分化

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LincRNA-EPS对RANKL和LPS诱导RAW264.7细胞破骨分化影响的实验研究

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作者 张栩 王雅冰 苏俭生 《口腔颌面外科杂志》 CAS 2024年第3期163-169,共7页

目的:探究长链非编码RNA-EPS(long non-coding RNA-EPS,lincRNA-EPS)对核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW264.7细胞破骨分化的影响。方法:... 目的:探究长链非编码RNA-EPS(long non-coding RNA-EPS,lincRNA-EPS)对核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW264.7细胞破骨分化的影响。方法:构建过表达lincRNA-EPS的RAW264.7细胞株和阴性对照株,然后用RANKL诱导法和LPS诱导法(RANKL预刺激后行LPS诱导)同时进行破骨分化诱导,通过抗酒石酸酸性磷酸酶染色(tartrate resistant acid phosphatase staining,TRAP staining)观察产生破骨细胞数量和形态的差异,鬼笔环肽染色评估所产生破骨细胞功能的差异,实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测诱导后破骨相关基因mRNA表达量的差异。结果:成功构建过表达lincRNA-EPS的RAW264.7细胞株和阴性对照株;不论是RANKL法诱导还是LPS法诱导,lincRNA-EPS过表达株和阴性对照株的细胞增殖情况均无显著差异(P>0.05);LPS法诱导下,TRAP染色显示lincRNA-EPS过表达株分化出的破骨细胞数量显著少于阴性对照株(P<0.05),鬼笔环肽染色显示lincRNA-EPS过表达株产生的F-肌动蛋白环体积显著小于阴性对照株,RT-q PCR显示linc RNA-EPS过表达株的破骨相关基因TRAP、CTSK、DC-STAMP、ATP6v0d2 mRNA表达均显著低于阴性对照株(P<0.05);但在RANKL法诱导下,二者各项表达均无显著差异(P>0.05)。结论:lincRNA-EPS的过表达对LPS诱导的破骨分化有明显的抑制作用,而且对诱导出的破骨细胞功能也起到负向调节作用,但lincRNA-EPS过表达对RANKL诱导的破骨分化及产生的破骨细胞的功能无显著影响。 展开更多

关键词 长链非编码RNA 牙周炎 破骨分化 脂多糖

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左、右归丸对去卵巢大鼠骨髓单核/巨噬细胞破骨分化的影响 被引量：2

4

作者 冯秀芝 吴继雷 +2 位作者 药晓雨 贾连群 任艳玲 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2023年第4期72-76,I0014,共6页

目的基于AMPK/mTOR信号通路研究左、右归丸对去卵巢大鼠骨髓单核/巨噬细胞(bone marrow-derived macrophage,BMMs)破骨分化的作用及机制。方法将60只雌性大鼠随机分为6组,分别为空白组(KB)、假手术组(SHAM)、模型组(OVX)、补佳乐组(BJL... 目的基于AMPK/mTOR信号通路研究左、右归丸对去卵巢大鼠骨髓单核/巨噬细胞(bone marrow-derived macrophage,BMMs)破骨分化的作用及机制。方法将60只雌性大鼠随机分为6组,分别为空白组(KB)、假手术组(SHAM)、模型组(OVX)、补佳乐组(BJL)、右归丸组(YGW)和左归丸组(ZGW)。KB组不做处置,SHAM组模拟卵巢切除手术过程,后4组均将双侧卵巢切除。各组分别灌胃蒸馏水(SHAM、OVX)、补佳乐(BJL)、右归丸(YGW)和左归丸(ZGW)。12周后取大鼠股骨和胫骨骨髓,用差时贴壁法获得大鼠BMMs并进行破骨分化诱导。用抗酒石酸酸性磷酸酶活性检测试剂盒检测TRAP活性;qrt-PCR法检测TRAP基因的表达;Western blotting法检测TRAP、RANKL、AMPKɑ、p-AMPKɑ、mTORC1、p-mTORC1蛋白的表达。结果左、右归丸能显著降低去卵巢大鼠BMMs破骨诱导后TRAP活性,降低TRAP基因和蛋白的表达,降低与RANK结合的RANKL蛋白的表达。与KB组比较,OVX组AMPKɑ蛋白磷酸化水平降低,mTORC1蛋白磷酸化水平升高;3个用药组皆能对抗上述改变,其中左归丸优于右归丸。结论左、右归丸均能通过AMPK/mTOR信号通路抑制去卵巢大鼠BMMs的破骨分化。 展开更多

关键词 左归丸 右归丸 骨髓单核/巨噬细胞 破骨分化 AMPK/mTOR信号通路

原文传递

氧化石墨烯修饰的类骨单位钛表面对巨噬细胞破骨分化影响的研究 被引量：1

5

作者 王鸿 吴清霖 +1 位作者 赖颖真 蔡艺煌 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期165-174,共10页

目的本研究通过模拟天然骨单位进行同心圆结构的设计,并修饰氧化石墨烯(GO),探究新的仿生微纳米结构表面对巨噬细胞RAW264.7破骨分化的影响。方法实验分为光滑钛片组(SS)、微沟槽组(CMS)和微沟槽表面修饰GO组(GO-CMS),利用扫描电子显微... 目的本研究通过模拟天然骨单位进行同心圆结构的设计,并修饰氧化石墨烯(GO),探究新的仿生微纳米结构表面对巨噬细胞RAW264.7破骨分化的影响。方法实验分为光滑钛片组(SS)、微沟槽组(CMS)和微沟槽表面修饰GO组(GO-CMS),利用扫描电子显微镜(SEM)、接触角测量仪、原子力显微镜、X射线光电子能谱分析仪和拉曼光谱仪研究材料表面的理化性能,通过细胞活性检测、SEM和激光共聚焦显微镜研究修饰后的材料表面对RAW264.7的细胞生物学行为的影响,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)免疫荧光染色、TRAP定量检测和荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)研究其对巨噬细胞破骨分化的影响。结果巨噬细胞沿着微沟槽排列成同心圆状,修饰GO后,材料表面含氧基团增多,亲水性增加。GO-CMS组诱导形成的破骨细胞体积小,数量少,TRAP表达量最少,TRAP单位酶活性也最低。GO-CMS组虽然促进巨噬细胞的增殖,但破骨分化相关基因的表达低于SS组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论同心圆微沟槽限制了破骨细胞的融合及封闭区的形成,GO修饰类骨单位同心圆微沟槽抑制了巨噬细胞RAW264.7的破骨分化。 展开更多

关键词 类骨单位 同心圆微沟槽 氧化石墨烯 巨噬细胞 破骨分化

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下调骨细胞TGF-β/Smad4信号可抑制小鼠BMSCs成骨及破骨分化 被引量：11

6

作者 代光明 任磊 +6 位作者 陈虹 刘文 陈宇 何小强 刘伟 涂小林 黄伟 《基础医学与临床》 CSCD 2017年第6期786-791,共6页

目的检测骨细胞TGF-β/Smad4信号通路对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨和破骨分化的作用,并初步探讨其相关机制。方法用条件性基因敲减Cre/loxp技术特异性敲减骨细胞Smad4,获得下调骨细胞TGF-β/Smad4信号通路的小鼠;体外分离骨细胞并与... 目的检测骨细胞TGF-β/Smad4信号通路对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨和破骨分化的作用,并初步探讨其相关机制。方法用条件性基因敲减Cre/loxp技术特异性敲减骨细胞Smad4,获得下调骨细胞TGF-β/Smad4信号通路的小鼠;体外分离骨细胞并与野生型小鼠骨髓间充质细胞(BMSCs)共培养;碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红(alizarin red)染色检测早期成骨分化和晚期钙盐沉积,酸性磷酸酶(TRAP)染色检测破骨细胞;real-time PCR检测成骨分化特异标志物Runx2、Osterix(OSX)、ALP、osteocalcin和破骨分化特异标志物RANKL和OPG的mRNA表达水平。Western blot检测成骨分化特异标志物Runx2和osteocalcin和破骨分化特异标志物RANK蛋白表达水平。结果下调骨细胞TGF-β/Smad4信号能够抑制BMSCs成骨转录因子Runx2、Osterix(P<0.01)、成骨分化特异标志物ALP和osteocalcin(P<0.01)以及破骨分化特异标志物RANK(P<0.01)的表达;增加破骨分化抑制物OPG的表达(P<0.05);而RANKL的表达无明显变化;最终下调了RANKL/OPG的比值(P<0.05)。结论终末分化的骨细胞调控骨的代谢,下调其TGF-β/Smad4信号可抑制BMSCs成骨和破骨细胞的分化。 展开更多

关键词 骨细胞 TGF-β/Smad4 BMSCS 成骨分化 破骨分化

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ANGPTL4在调控骨巨细胞瘤细胞增殖、血管生成和破骨分化作用的实验研究 被引量：2

7

作者 张擎柱 冯震 +2 位作者 魏俊强 曹海营 金宇 《临床肿瘤学杂志》 CAS 北大核心 2020年第3期193-198,共6页

目的探讨人血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)基因沉默对骨巨细胞瘤单核基质细胞(GCTSC)增殖、血管生成以及破骨分化的作用。方法体外培养GCTSC细胞系,采用ANGPTL4 shRNA、Scrambled shRNA转染作为ANGPTL4 shRNA组和阴性对照组,另设置无处理... 目的探讨人血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)基因沉默对骨巨细胞瘤单核基质细胞(GCTSC)增殖、血管生成以及破骨分化的作用。方法体外培养GCTSC细胞系,采用ANGPTL4 shRNA、Scrambled shRNA转染作为ANGPTL4 shRNA组和阴性对照组,另设置无处理的空白对照组。采用实时荧光定量PCR(QPCR)和Western blotting法检测ANGPTL4 mRNA和蛋白表达。MTT法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡。将GCTSC细胞分别与人脐静脉内皮细胞(HUVECs)、小鼠骨髓单核细胞(BMM)共培养,观察HUVECs成管能力和BMM破骨分化能力。结果与空白对照组和阴性对照组比较,ANGPTL4 shRNA组ANGPTL4 mRNA(0.174±0.045)和蛋白表达量(0.098±0.020)均明显降低;而ANGPTL4 shRNA组GCTSC细胞增殖活性降低,凋亡率升高(P<0.05)。与HUVECs共培养后,ANGPTL4 shRNA组闭合管数量[(57.35±17.24)%]减少(P<0.05);与BMM共培养后,ANGPTL4 shRNA组TRAP染色阳性的破骨细胞样多核巨细胞数量[(48.36±21.79)%]减少(P<0.05)。结论沉默骨巨细胞瘤GCTSC细胞ANGPTL4基因表达后,细胞增殖活性降低,凋亡率增加,并且对肿瘤血管生成和多核巨细胞破骨分化有一定的抑制作用。 展开更多

关键词 骨巨细胞瘤 梭形单核基质细胞(GCTSC) 人血管生成素样蛋白4(ANGPTL4) 增殖 血管生成 破骨分化

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羟基磷灰石形貌对RAW264.7细胞破骨分化影响研究

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作者 曾慧君 曹标 +5 位作者 刘幸卉 陈荣 史丹丹 术蓉 欧阳钧 廖华 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第2期170-173,共4页

目的分析羟基磷灰石(HAp)不同形貌对小鼠单核RAW264.7细胞破骨分化性能的影响。方法采用水热合成及pH调节的方法获得不同形貌羟基磷灰石微米颗粒,通过扫描电子显微镜(SEM)表征材料形貌。将不同形貌HAp与RAW264.7细胞共培养,通过Live/Dea... 目的分析羟基磷灰石(HAp)不同形貌对小鼠单核RAW264.7细胞破骨分化性能的影响。方法采用水热合成及pH调节的方法获得不同形貌羟基磷灰石微米颗粒,通过扫描电子显微镜(SEM)表征材料形貌。将不同形貌HAp与RAW264.7细胞共培养,通过Live/Dead活性染色检测HAp对细胞活性有无影响;并在RANKL破骨诱导因子的作用下通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、实时荧光定量(qRT-PCR)分析不同形貌HAp对RAW264.7细胞破骨分化的影响。结果 24h Live/Dead活性染色证实微棒与微球HAp均具有良好的生物相容性。qRT-PCR结果表明,两种形貌HAp均抑制RAW264.7细胞的破骨分化,而相对于微球HAp,微棒HAp抑制作用较显著。结论羟基磷灰石形貌的差异能够引起RAW264.7破骨分化性能的差异表达。 展开更多

关键词 羟基磷灰石 形貌 RAW264 7 破骨分化

原文传递

Raptor对髓系细胞破骨分化与骨吸收的抑制作用

9

作者 赖玲林 李素娟 +4 位作者 胡楚璇 陈燕 陈力 何娟 卢慧勤 《国际医药卫生导报》 2021年第23期3614-3617,共4页

目的探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammaliantargetofrapamycin,mTOR)相关调节蛋白(regulatoryassociatedproteinofmTOR,Raptor)对小鼠髓系细胞破骨分化与骨吸收的影响。方法本研究为随机对照试验,于2020年1月至2021年6月,选取健康B6/C5... 目的探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammaliantargetofrapamycin,mTOR)相关调节蛋白(regulatoryassociatedproteinofmTOR,Raptor)对小鼠髓系细胞破骨分化与骨吸收的影响。方法本研究为随机对照试验,于2020年1月至2021年6月,选取健康B6/C57小鼠10只,随机分为敲除组与对照组,每组5只。其中敲除组通过基因敲除构建髓系细胞特异性敲除Raptor小鼠模型。两组小鼠正常饲养后处死通过试剂盒分离髓系细胞,并通过RANKL诱导形成破骨细胞。通过免疫印迹试验(Westernblot)检测破骨分化相关基因转录因子(spi-1 proto-oncogene,PU.1)、组织蛋白酶K(cathepsinK,CTSK)以及Fos蛋白(c-Fos)的蛋白水平;通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测破骨分化相关基因PU.1、CTSK、c-Fos的mRNA水平;通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中骨吸收指标I型胶原C端肽(C-telopeptideoftypeI,CTXI)、I型胶原N端肽(N-telopeptideoftypeI,NTX1)及尿羟脯氨酸(U-Hydroxyproline,U-HYP)评估骨吸收情况。结果Westernblot结果显示,敲除Raptor后小鼠髓系细胞中破骨分化相关基因PU.1、CTSK、c-Fos的蛋白表达量显著降低,RT-PCR结果显示细胞中PU.1、CTSK、c-FosmRNA表达水平的变化与Westernblot结果趋势一致;ELISA结果显示,相比对照组,Raptor敲除小鼠血清CTXI[(185.53±36.69)pg/ml比(124.58±25.77)pg/ml,t=3.040,P=0.016]、NTX1[(2.89±0.37)μg/L比(2.21±0.42)μg/L,t=2.717,P=0.026]及U-HYP[(20.51±2.85)μg/L比(14.49±1.84)μg/L,t=3.968,P=0.004]表达量显著降低。结论敲除Raptor能够抑制小鼠髓系细胞破骨分化与骨吸收,证实TOR相关调节蛋白Raptor在破骨细胞分化与骨吸收中发挥关键作用。 展开更多

关键词 RAPTOR 髓系细胞 破骨分化 骨吸收

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不同代数骨髓源性巨噬细胞增殖及诱导破骨分化的规律研究 被引量：1

10

作者 陈弘林 沈耿杨 +8 位作者 尚奇 秦威城 余富勇 招文华 张志达 张鹏 唐福宇 江晓兵 任辉 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期481-485,492,共6页

目的探讨不同代数骨髓源性巨噬细胞增殖及诱导破骨分化的规律。方法选取8周龄C57BL/6小鼠P0~P4共5代骨髓源性巨噬细胞,随机选择镜下视野计数杂质细胞与衰老细胞;运用CCK8法检测骨髓源性巨噬细胞的增殖能力;诱导巨噬细胞破骨分化,通过抗... 目的探讨不同代数骨髓源性巨噬细胞增殖及诱导破骨分化的规律。方法选取8周龄C57BL/6小鼠P0~P4共5代骨髓源性巨噬细胞,随机选择镜下视野计数杂质细胞与衰老细胞;运用CCK8法检测骨髓源性巨噬细胞的增殖能力;诱导巨噬细胞破骨分化,通过抗酒石酸酸性磷酸酶染色量化破骨细胞数量与破骨细胞面积,比较不同代数之间指标差异。结果P0组、P1组骨髓源性巨噬细胞的杂质较P2组、P3组、P4组更多,且差异有统计学意义;96 h内,P2组骨髓源性巨噬细胞的增殖能力最强,P3组、P4组次之,P0组、P1组最差;诱导破骨分化后,P2组骨髓源性巨噬细胞诱导出破骨细胞数量最多,面积最大,P3组次之,P0组、P1组、P4组诱导出破骨细胞数量少,面积小。结论P2组骨髓源性巨噬细胞的纯度最高,增殖速度最快,破骨分化能力最强。 展开更多

关键词 不同代数 骨髓源性巨噬细胞 增殖 破骨分化 规律

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降钙素基因相关肽对大鼠骨髓单核巨噬细胞破骨分化作用的实验研究 被引量：1

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作者 张文强 段春光 +5 位作者 孟国林 王春梅 唐鹏 王铮 曾艳平 刘建 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期403-408,共6页

目的通过体外实验研究外源性降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)对大鼠骨髓单核巨噬细胞(BMMs)破骨分化能力的影响,为CGRP在抗骨质疏松治疗方面的应用提供理论依据。方法采用差速贴壁的方法分离出SD大鼠髓腔内单... 目的通过体外实验研究外源性降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)对大鼠骨髓单核巨噬细胞(BMMs)破骨分化能力的影响,为CGRP在抗骨质疏松治疗方面的应用提供理论依据。方法采用差速贴壁的方法分离出SD大鼠髓腔内单核巨噬细胞,原代培养并传代,在培养体系中添加含不同浓度CGRP(实验组:10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/L;对照组:无CGRP)的破骨诱导液,对前体细胞进行破骨诱导7天后进行相关实验检测,分别采用抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP染色)观察破骨细胞的生成能力;用RT-PCR方法检测破骨细胞系特征性基因(RANK、TRAP、NFATc1);Western-blot检测破骨特征性TRAP和RANK蛋白的表达;骨磨片甲苯胺蓝染色检测诱导的破骨细胞的骨吸收功能。结果 TRAP染色显示CGRP各浓度组镜下成熟破骨细胞的个数显著低于对照组,有统计学差异(P<0.05)并随CGRP浓度的增高成熟破骨细胞数减少,CGRP组间亦差异明显(P<0.05);RT-PCR检测破骨特征性RANK、TRAP、NFATc1 mRNA和Western-blot测破骨特征性TRAP、RANK蛋白的表达各CGRP组均低于对照组(P<0.05);骨磨片破骨细胞甲苯胺蓝染色后单倍视野下CGRP组破骨陷窝数量也明显少于对照组(P<0.05),且与药物组浓度与陷窝数量呈负相关性。结论 CGRP能够抑制BMMs向破骨方向的分化,为CGRP抗骨质疏松的治疗提供理论支持。 展开更多

关键词 降钙素基因相关肽 单核巨噬细胞 破骨分化

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低强度振动经ITGB2/FAK信号通路促进老年大鼠骨髓单核细胞衰老并抑制其破骨分化 被引量：1

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作者 文继锐 唐敏 +3 位作者 包明月 姚杏红 何学令 李良 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第S01期216-216,共1页

目的探讨低强度振动经ITGB2/FAK信号通路调控老年大鼠骨髓单核细胞衰老并抑制其破骨分化的作用。方法采用老年大鼠(n=6,雌性),原代分离培养股骨骨髓单核细胞,选取P3-P4代细胞用于实验。对老年大鼠骨髓单核细胞加载振动刺激:0.3 g×9... 目的探讨低强度振动经ITGB2/FAK信号通路调控老年大鼠骨髓单核细胞衰老并抑制其破骨分化的作用。方法采用老年大鼠(n=6,雌性),原代分离培养股骨骨髓单核细胞,选取P3-P4代细胞用于实验。对老年大鼠骨髓单核细胞加载振动刺激:0.3 g×90 Hz,30 min/d×5 d。Western blot检测骨髓单核细胞ITGB2/FAK信号通路蛋白ITGB2、FAK、p53。 展开更多

关键词 骨髓单核细胞 老年大鼠 振动刺激 信号通路 FAK 破骨分化 p53

原文传递

体外紫云英苷抑制小鼠BMM细胞向破骨分化 被引量：2

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作者 刘晓亮 朱振安 《医学研究杂志》 2021年第10期106-110,共5页

目的研究紫云英苷对小鼠骨髓源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophage,BMM)向破骨细胞分化的影响。方法从C57BL/6小鼠的股骨与胫骨骨髓腔中提取小鼠BMM细胞,并使用含核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)和梯度浓度的紫云英苷(0、50、... 目的研究紫云英苷对小鼠骨髓源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophage,BMM)向破骨细胞分化的影响。方法从C57BL/6小鼠的股骨与胫骨骨髓腔中提取小鼠BMM细胞,并使用含核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)和梯度浓度的紫云英苷(0、50、100、200μmol/L)的培养基培养5~7天,通过TRAP染色、共聚焦荧光染色与RT-PCR检测BMM细胞向破骨细胞分化的水平。结果培养5~7天后,TRAP染色与F-actin环检测显示紫云英苷显著抑制了RANKL诱导下小鼠BMM细胞向破骨细胞的分化,且抑制效果与紫云英苷浓度相关,差异有统计学意义(P均<0.01),RT-PCR结果显示紫云英苷显著抑制了小鼠BMM细胞中破骨分化相关基因TRAP、CTSK、NFATc1的表达,差异有统计学意义(P均<0.01)。结论紫云英苷能够有效抑制RANKL诱导下小鼠BMM细胞向破骨细胞的分化。 展开更多

关键词 紫云英苷 BMM细胞 破骨分化

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杯苋甾酮抑制破骨分化和促进成骨分化的双向作用治疗骨质疏松症 被引量：8

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作者 纪亲龙 孔祥东 +4 位作者 戚珊红 李超 凡军 沙勇 王少峰 《昆明医科大学学报》 CAS 2018年第5期21-28,共8页

目的研究杯苋甾酮对破骨和成骨分化的影响,探讨其在改善骨质疏松中的作用.方法以CCK8检测杯苋甾酮对小鼠源性单核巨噬细胞(BMMs)及前成骨细胞MC3T3E1的毒性作用;流式检测药物对细胞凋亡的影响.以TRAP染色观察破骨分化;以ALP染色评估成... 目的研究杯苋甾酮对破骨和成骨分化的影响,探讨其在改善骨质疏松中的作用.方法以CCK8检测杯苋甾酮对小鼠源性单核巨噬细胞(BMMs)及前成骨细胞MC3T3E1的毒性作用;流式检测药物对细胞凋亡的影响.以TRAP染色观察破骨分化;以ALP染色评估成骨分化,以Real-Time PCR检测TRAP及ALP的表达.15只小鼠分为假手术组、OVX组、治疗组.治疗组给予杯苋甾酮干预,余2组以生理盐水处理.4周后取胫骨,Micro-CT检测骨质及微观结构变化.结果杯苋甾酮≤10 mg/L时对细胞无毒性(P>0.05),不影响凋亡(P>0.05).其可显著抑制破骨分化(P<0.05),促进成骨分化.杯苋甾酮可抑制TRAP表达(P<0.05),促进ALP表达(P<0.05).杯苋甾酮可改善雌激素缺乏导致的骨质疏松.结论杯苋甾酮通过抑制破骨、促进成骨的双向作用达到改善骨质疏松的作用. 展开更多

关键词 杯苋甾酮 破骨分化 成骨分化 骨质疏松

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miR-214-5p通过靶向调控PTEN的表达对破骨分化和骨质疏松的影响 被引量：3

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作者 吴鹏 姬振伟 +1 位作者 王志学 冯重阳 《武警医学》 CAS 2022年第5期431-436,共6页

目的探讨miR-214-5p通过靶向调控PTEN的表达对破骨分化和骨质疏松的影响。方法选取2019-03至2020-05在空军军医大学唐都医院外科进行脊柱手术的骨质疏松患者20例(骨质疏松组),同时选取非骨质疏松症患者20例为对照组,抽取两组骨髓血。将m... 目的探讨miR-214-5p通过靶向调控PTEN的表达对破骨分化和骨质疏松的影响。方法选取2019-03至2020-05在空军军医大学唐都医院外科进行脊柱手术的骨质疏松患者20例(骨质疏松组),同时选取非骨质疏松症患者20例为对照组,抽取两组骨髓血。将miR-214-5pmimics(miR-214-5pmimics组)、miR-214-5p空质粒(miR-214-5pvector组)、shZFAS1载体(sh PTEN组)、shZFAS1空载体(sh vector组)转染到骨质疏松患者细胞,对照组细胞不进行任何转染处理。采用RT-qPCR检测骨髓单个核细胞中的miR-214-5p和PTEN mRNA及Raw264.7单核巨噬细胞中NFaTc1、MMP9、TRAP、CTSK的mRNA水平;通过TRAP染色检测TRAP染色的阳性率;通过Western blot检测PTEN、NFATc1、AKT和PI3K蛋白水平。结果骨质疏松组miR-214-5p水平的表达明显高于对照组(P<0.001),骨质疏松组PTEN的表达显著低于对照组(P=0.009);miR-214-5pmimics组中TRAP表达阳性率明显高于对照组和miR-214-5p vector组(P<0.001);sh PTEN组中TRAP表达阳性率明显高于对照组和sh vector组(P<0.001);miR-214-5p mimics组中的NFaTc1、MMP9、TRAP和CTSK水平显著高于对照组(P<0.001);sh PTEN组中的NFaTc1、MMP9、TRAP和CTSK水平显著高于对照组(P<0.001);与miR-214-5p mimics组相比,miR-214-5pmimics+PTEN组中TRAP表达阳性率显著降低(P<0.001)。结论骨质疏松症患者的骨髓单个核细胞中miR-214-5p表达上调,miR-214-5p可以调控PTEN表达,过表达miR-214-5p可能通过靶向PTEN促进破骨细胞分化。 展开更多

关键词 miR-214-5p PTEN 破骨分化 骨质疏松

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二甲双胍抑制破骨分化改善糖尿病模型鼠骨量的研究 被引量：1

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作者 田峰 胡铜 +3 位作者 吴昊天 祖力卡尔·阿地力 赵疆 涂来勇 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1186-1191,共6页

目的探讨二甲双胍对骨髓源性巨噬细胞(BMDM)破骨分化的影响,并观察二甲双胍对糖尿病模型鼠骨量的改善作用。方法在体外实验中,通过梯度浓度的二甲双胍干预RANKL诱导的大鼠BMDM破骨分化,并检测破骨分化标志基因Nfatc1、Ctsk、C-fos、Traf... 目的探讨二甲双胍对骨髓源性巨噬细胞(BMDM)破骨分化的影响,并观察二甲双胍对糖尿病模型鼠骨量的改善作用。方法在体外实验中,通过梯度浓度的二甲双胍干预RANKL诱导的大鼠BMDM破骨分化,并检测破骨分化标志基因Nfatc1、Ctsk、C-fos、Traf6及相应标志蛋白的表达;在体内实验中,将24只8周龄大鼠随机分为对照组、糖尿病模型组(模型组)、糖尿病模型组+二甲双胍干预组(治疗组),每组各8只,其中对照组与模型组行生理盐水灌胃,治疗组使用二甲双胍灌胃,治疗时间为3个月,检测大鼠体重、空腹血糖,并检测各组大鼠骨量的变化。结果在体外实验中,二甲双胍显著抑制大鼠BMDM破骨分化,并呈浓度依赖性,显著下调破骨分化标志基因Nfatc1、Ctsk、C-fos、Traf6的表达(P<0.05),显著下调破骨分化标志蛋白C-FOS、NFATC1、TRAF6、CTSK的表达;在体内实验中,模型组相比较于对照组,体重减轻、空腹血糖上升、骨量降低;治疗组相比较于模型组,体重增加、空腹血糖降低、骨量增加。结论二甲双胍能够抑制破骨分化,在增加体重、降低空腹血糖的同时,可以减少骨表面的破骨细胞数量和面积,改善骨量。 展开更多

关键词 二甲双胍 破骨分化 糖尿病 骨量

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低浓度DMSO对RANKL诱导的RAW264.7细胞破骨分化的影响 被引量：1

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作者 张鑫 李金源 +2 位作者 沈晨曦 刘庆辉 毕文娟 《华北理工大学学报（医学版）》 2018年第1期1-6,共6页

(1)目的探讨低浓度二甲基亚枫(DMSO)对RANKL诱导的破骨细胞前体RAW264.7细胞破骨分化的影响。(2)方法将细胞接种在24孔板上,采用0、0.001%、0.005%、0.01%、0.05%、0.1%、0.15%、0.2%等八种低浓度的DMSO作用于RANKL诱导的RAW264.7,细胞... (1)目的探讨低浓度二甲基亚枫(DMSO)对RANKL诱导的破骨细胞前体RAW264.7细胞破骨分化的影响。(2)方法将细胞接种在24孔板上,采用0、0.001%、0.005%、0.01%、0.05%、0.1%、0.15%、0.2%等八种低浓度的DMSO作用于RANKL诱导的RAW264.7,细胞4天后,各培养孔随机采集照片20张,用显微镜每孔随机收集20张照片,使用Image-Pro Plus6.0软件对每张图进行测量,记录每张照片中RAW264.7细胞的细胞总数及总面积。(3)结果较RANKL组相比,DMSO浓度为0.005%和0.01%时,RAW264.7细胞形成破骨细胞的表面积均显著增大,差异有统计学意义(P<0.01),且0.005%和0.01%两组间差异无统计学意义(P>0.05);而DMSO浓度进一步提高为0.1%,0.15%,0.2%时,破骨细胞表面积随浓度升高而减小;DMSO浓度为0.001%,0.05%,0.1%时,破骨细胞表面积与未加DMSO组差异无统计学意义(P>0.05)。(4)结论 DMSO浓度为0.005%和0.01%时促进RAW264.7细胞的破骨分化,而随着DMSO浓度的进一步提高,DMSO对RAW264.7破骨分化的促进作用消失,甚至表现为抑制破骨分化。 展开更多

关键词 DMSO RAW264.7 RANKL 破骨分化

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左归丸下调自噬抑制破骨分化治疗老年性骨质疏松症

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作者 刘宇 陈弘林 +9 位作者 尚奇 陈桂锋 余富勇 刘慧雯 张鹏 陈星达 周泽霖 沈耿杨 任辉 江晓兵 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期5499-5503,共5页

目的:探讨左归丸通过下调自噬抑制小鼠骨髓源性巨噬细胞(BMMs)破骨分化治疗老年性骨质疏松症(SOP)。方法:构建SOP小鼠模型,随机将20只小鼠分为2组,分别是衰老组(SOP组)和左归丸治疗组(左归丸组)。左归丸治疗2个月后,Micro-CT检测骨体积... 目的:探讨左归丸通过下调自噬抑制小鼠骨髓源性巨噬细胞(BMMs)破骨分化治疗老年性骨质疏松症(SOP)。方法:构建SOP小鼠模型,随机将20只小鼠分为2组,分别是衰老组(SOP组)和左归丸治疗组(左归丸组)。左归丸治疗2个月后,Micro-CT检测骨体积分数(BV/TV),TRAP染色检测骨小梁表面破骨细胞(OCs)数量,免疫组化(IHC)检测骨组织中P-BECLIN1的表达情况。提取小鼠BMMs,用不同浓度左归丸干预BMMs的破骨分化过程,TRAP染色观察OCs数量,RT-qPCR检测自噬标志基因Atg5、Atg12、LC3、P62 mRNA表达水平,Western Blot检测细胞中NFATC1、CTSK、LC3、P62和P-BECLIN1的蛋白表达水平。结果:体内实验中,与SOP组比较,左归丸组BV/TV明显增高(P<0.01);TRAP染色提示左归丸组骨小梁表面OCs数量明显少于SOP组(P<0.01);IHC检测发现左归丸组小鼠骨髓腔中P-BECLIN1表达量较SOP组显著下调(P<0.01)。体外实验中,与对照组比较,10、100、1000μg/mL左归丸均可抑制RANKL诱导的BMMs破骨分化(P<0.01),在抑制破骨分化过程中,自噬基因Atg5、Atg12、LC3 mRNA表达显著下降(P<0.05,P<0.01),P62 mRNA表达显著上升(P<0.01)。Western Blot显示左归丸可以下调NFATC1、CTSK、LC3、P-BECLIN1的蛋白表达,上调P62的蛋白表达。结论:左归丸下调自噬,抑制OCs形成,为临床治疗SOP提供新的思路。 展开更多

关键词 左归丸 自噬 破骨分化 老年性骨质疏松症

原文传递

仙茅苷下调ROS/NLRP3途径对大鼠骨髓单核细胞增殖及向破骨细胞分化的影响

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作者 王瑛 胡婷婷 +3 位作者 付燕 于雪莹 范佳慧 满秋红 《中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志》 CSCD 北大核心 2023年第6期568-578,共11页

目的研究仙茅苷(curculigoside,CCG)对骨髓单核细胞体外增殖及分化的抑制作用。方法体外无菌分离大鼠骨髓单核细胞,通过细胞染色、周期分析评估CCG对巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)刺激的细胞增殖... 目的研究仙茅苷(curculigoside,CCG)对骨髓单核细胞体外增殖及分化的抑制作用。方法体外无菌分离大鼠骨髓单核细胞,通过细胞染色、周期分析评估CCG对巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)刺激的细胞增殖及核因子κB受体活化因子配体(receptor-activating factor ligand,RANKL)诱导分化的抑制效果。检测并分析活性氧(reactive oxygen species,ROS)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)途径相关成分的变化明确其作用途径和效果。结果CCG对骨髓单核细胞体外增殖有显著抑制作用,对细胞周期的作用在S期,并能诱导细胞凋亡(P<0.01)。当CCG干预浓度达到10-6 mol/L时,对骨髓单核细胞的体外破骨诱导有显著抑制作用。NLRP3、Cleaved casp-1、ROS、白介素18(interleukin-18,IL-18)、白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)水平随着CCG干预浓度增大而降低(P<0.05)。构建NLRP3过表达质粒,转染骨髓单核细胞可逆转CCG在破骨诱导过程中对Cleaved casp-1的表达和IL-1β和IL-18水平的作用,使其上调(P<0.01)。结论CCG通过下调ROS/NLRP3途径抑制骨髓单核细胞增殖及向破骨细胞分化。 展开更多

关键词 骨质疏松 仙茅苷 骨髓单核细胞 破骨分化 NLRP3

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冬凌草甲素逆转硫代乙酰胺对破骨和成骨细胞分化的机制研究

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作者 金晓丽 许嘉 +5 位作者 陈煊威 陈瑾 黄慧 张婷 任军 许健 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1892-1900,共9页

目的探究冬凌草甲素(ORI)和硫代乙酰胺(TAA)对破骨分化和成骨分化的作用及其机制。方法CCK-8检测TAA和ORI对RAW264.7和骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖活力的影响;TRAP染色和免疫荧光染色检测TAA和ORI对RAW264.7破骨分化的影响;Westernblo... 目的探究冬凌草甲素(ORI)和硫代乙酰胺(TAA)对破骨分化和成骨分化的作用及其机制。方法CCK-8检测TAA和ORI对RAW264.7和骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖活力的影响;TRAP染色和免疫荧光染色检测TAA和ORI对RAW264.7破骨分化的影响;Westernblot检测TAA和ORI对破骨特异性蛋白表达的影响;免疫荧光和流式细胞术检测TAA和ORI对p65核易位和活性氧生成的影响;碱性磷酸酶和茜素红染色检测TAA和ORI对BMSCs成骨分化的影响;Westernblot法检测TAA和ORI对BMSCs成骨和凋亡相关蛋白表达的影响。结果破骨诱导分化实验中,与TAA组相比,TAA+ORI组破骨细胞生成减少(P<0.01),MAPK/NF-κB通路明显被抑制(P<0.01),p65核易位水平显著降低,细胞内活性氧生成减少(P<0.01)。此外,与对照组相比,TAA能够抑制BMSCs ALP活性和钙化结节形成(P<0.01),并且诱导BMSCs凋亡。与TAA组相比,TAA+ORI组BMP-2/RUNX2表达增加,ALP活性增强(P<0.01),钙盐结节形成增加(P<0.01),细胞凋亡水平降低。结论ORI可以调控MAPK/NF-κB预防TAA诱导的破骨分化,并且调控BMP-2/RUNX2缓解TAA抑制的骨形成。 展开更多

关键词 冬凌草甲素 硫代乙酰胺 破骨分化 成骨分化 骨质疏松

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