目的研究小分子干扰RNA(SiRNA)抑制高氧暴露下人肺腺癌A549细胞硫氧还蛋白-2(Trx-2)表达及其与肺细胞代谢和凋亡的关系,探讨高氧肺损伤的发病机制和防治措施。方法体外传代培养A549细胞系,待其生长至接近亚汇合状态时,将体外化学合成Tr...目的研究小分子干扰RNA(SiRNA)抑制高氧暴露下人肺腺癌A549细胞硫氧还蛋白-2(Trx-2)表达及其与肺细胞代谢和凋亡的关系,探讨高氧肺损伤的发病机制和防治措施。方法体外传代培养A549细胞系,待其生长至接近亚汇合状态时,将体外化学合成Trx-2序列特异性的SiRNA通过Lipofectamine2000转染A549细胞。将细胞随机分为无干扰空气组、无干扰高氧组、干扰后空气组、干扰后高氧组4组。高氧组持续暴露于常压高浓度氧(92%O2,5%CO2)中;空气组仍置于5%CO2培养箱中。4组分别于高氧或空气暴露12、24、48 h提取A549细胞总RNA。采用半定量RT-PCR测定Trx-2、三磷酸腺苷合成酶6,8(ATPase 6、8)及细胞色素C(CytC)mRNA的表达;Western-blot检测Trx-2蛋白表达;流式细胞术检测高氧和沉默Trx-2对A549细胞凋亡的影响。结果序列特异性SiRNA可抑制Trx-2表达,SiRNA-1、SiRNA-2、SiRNA-3 3组Trx-2蛋白表达均受到抑制,SiRNA-1组抑制效率最高(79.51%)。与无干扰空气组相比,无干扰高氧组12 h CytC和24 h Trx-2 mRNA的表达增高,48 h CytC mRNA的表达降低(P<0.05)。与干扰后空气组相比,干扰后高氧组24、48 h Trx-2 mRNA的表达减弱,但在12、24 h CytC mRNA表达水平升高(P<0.05)。与无干扰空气组相比,无干扰高氧组12、48 hATPase 6 mRNA的表达增高,24、48 h ATPase 8 mRNA的表达增高(P<0.05)。与干扰后空气组相比,干扰后高氧组24、48 h ATPase 6,8 mRNA的表达减弱(P<0.05)。干扰后高氧组24、48 h A549细胞凋亡百分数明显高于干扰后空气组(P<0.05)。结论高氧暴露和沉默Trx-2导致A549细胞ATPase 6,8表达下调和CytC表达升高,表明能量代谢障碍和细胞凋亡参与高氧肺损伤发病过程,Trx-2对高氧肺损伤线粒体起重要的保护作用。展开更多
目的:观察在大鼠急性坏死性胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis,ANP)时胰腺组织中硫氧还蛋白-2(thioredoxin-2,Trx-2)的表达,探讨褪黑素对胰腺保护作用与Trx-2表达的关系.方法:72只♂SD大鼠随机分为ANP组(A组)、褪黑素干预组(M组)...目的:观察在大鼠急性坏死性胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis,ANP)时胰腺组织中硫氧还蛋白-2(thioredoxin-2,Trx-2)的表达,探讨褪黑素对胰腺保护作用与Trx-2表达的关系.方法:72只♂SD大鼠随机分为ANP组(A组)、褪黑素干预组(M组)、对照组(C组),每组24只.A组、M组腹腔注射6%左旋精氨基酸25 m L/kg体质量3次,诱发ANP;M组在首次注射左旋精氨基酸前0.5 h腹腔注射0.25%褪黑素20 m L/kg体质量,而A组首次注射左旋精氨基酸前0.5 h腹腔注射生理盐水20 m L/kg体质量;C组同法注射等量生理盐水.各组大鼠在末次腹腔注射后6、12、24 h分批处死.光镜下观察胰腺病理改变并进行评分.RTPCR检测胰腺Trx-2 m RNA水平,并检测胰腺组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)和髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)含量.结果:A组各时点胰腺病理评分显著高于C组,而Trx-2 m RNA表达较C组显著降低(均P<0.05),MPO和MDA较C组显著升高(均P<0.05).M组各时点胰腺病理评分较A组降低,Trx-2 m RNA较A组显著升高(P<0.05).MPO和MDA较A组显著降低(均P<0.05).结论:Trx-2在ANP时的表达显著降低;外源性褪黑素可通过促进Trx-2的表达,减轻胰腺组织的损伤.展开更多
文摘目的研究小分子干扰RNA(SiRNA)抑制高氧暴露下人肺腺癌A549细胞硫氧还蛋白-2(Trx-2)表达及其与肺细胞代谢和凋亡的关系,探讨高氧肺损伤的发病机制和防治措施。方法体外传代培养A549细胞系,待其生长至接近亚汇合状态时,将体外化学合成Trx-2序列特异性的SiRNA通过Lipofectamine2000转染A549细胞。将细胞随机分为无干扰空气组、无干扰高氧组、干扰后空气组、干扰后高氧组4组。高氧组持续暴露于常压高浓度氧(92%O2,5%CO2)中;空气组仍置于5%CO2培养箱中。4组分别于高氧或空气暴露12、24、48 h提取A549细胞总RNA。采用半定量RT-PCR测定Trx-2、三磷酸腺苷合成酶6,8(ATPase 6、8)及细胞色素C(CytC)mRNA的表达;Western-blot检测Trx-2蛋白表达;流式细胞术检测高氧和沉默Trx-2对A549细胞凋亡的影响。结果序列特异性SiRNA可抑制Trx-2表达,SiRNA-1、SiRNA-2、SiRNA-3 3组Trx-2蛋白表达均受到抑制,SiRNA-1组抑制效率最高(79.51%)。与无干扰空气组相比,无干扰高氧组12 h CytC和24 h Trx-2 mRNA的表达增高,48 h CytC mRNA的表达降低(P<0.05)。与干扰后空气组相比,干扰后高氧组24、48 h Trx-2 mRNA的表达减弱,但在12、24 h CytC mRNA表达水平升高(P<0.05)。与无干扰空气组相比,无干扰高氧组12、48 hATPase 6 mRNA的表达增高,24、48 h ATPase 8 mRNA的表达增高(P<0.05)。与干扰后空气组相比,干扰后高氧组24、48 h ATPase 6,8 mRNA的表达减弱(P<0.05)。干扰后高氧组24、48 h A549细胞凋亡百分数明显高于干扰后空气组(P<0.05)。结论高氧暴露和沉默Trx-2导致A549细胞ATPase 6,8表达下调和CytC表达升高,表明能量代谢障碍和细胞凋亡参与高氧肺损伤发病过程,Trx-2对高氧肺损伤线粒体起重要的保护作用。
文摘目的:观察在大鼠急性坏死性胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis,ANP)时胰腺组织中硫氧还蛋白-2(thioredoxin-2,Trx-2)的表达,探讨褪黑素对胰腺保护作用与Trx-2表达的关系.方法:72只♂SD大鼠随机分为ANP组(A组)、褪黑素干预组(M组)、对照组(C组),每组24只.A组、M组腹腔注射6%左旋精氨基酸25 m L/kg体质量3次,诱发ANP;M组在首次注射左旋精氨基酸前0.5 h腹腔注射0.25%褪黑素20 m L/kg体质量,而A组首次注射左旋精氨基酸前0.5 h腹腔注射生理盐水20 m L/kg体质量;C组同法注射等量生理盐水.各组大鼠在末次腹腔注射后6、12、24 h分批处死.光镜下观察胰腺病理改变并进行评分.RTPCR检测胰腺Trx-2 m RNA水平,并检测胰腺组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)和髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)含量.结果:A组各时点胰腺病理评分显著高于C组,而Trx-2 m RNA表达较C组显著降低(均P<0.05),MPO和MDA较C组显著升高(均P<0.05).M组各时点胰腺病理评分较A组降低,Trx-2 m RNA较A组显著升高(P<0.05).MPO和MDA较A组显著降低(均P<0.05).结论:Trx-2在ANP时的表达显著降低;外源性褪黑素可通过促进Trx-2的表达,减轻胰腺组织的损伤.
