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硫酸软骨素裂解酶ABCⅡ的高效融合表达及其酶学性质研究
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作者 李晔 周朝 袁其朋 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2023年第5期88-97,共10页
目的:本研究旨在实现硫酸软骨素裂解酶ABCⅡ(chondroitinase ABCⅡ,ChSase ABCⅡ)的高效可溶性表达并研究其酶学性质,为ChSase ABCⅡ在药品和保健食品生产中的应用奠定基础。方法:在优化ChSase ABCⅡ基因原始序列的基础上,构建重组质粒p... 目的:本研究旨在实现硫酸软骨素裂解酶ABCⅡ(chondroitinase ABCⅡ,ChSase ABCⅡ)的高效可溶性表达并研究其酶学性质,为ChSase ABCⅡ在药品和保健食品生产中的应用奠定基础。方法:在优化ChSase ABCⅡ基因原始序列的基础上,构建重组质粒pET-28a-His-ChSase ABCⅡ并优化其表达条件;利用亲和层析得到带有多聚组氨酸标签(polyhistidine-tag,His-tag)的ChSase ABCⅡ融合蛋白后,研究了His-ChSase ABCⅡ的部分酶学性质。结果:构建的His-ChSase ABCⅡ融合蛋白表达系统能在大肠杆菌中实现可溶性表达;在表达宿主为E.coli BL21(DE3)和诱导剂(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)浓度为125μmol/L的优化条件下,发酵液酶活力可达到7206.83±184.27 IU/L;纯化后的His-ChSase ABCⅡ酶比活力为22.02±0.39 IU/mg蛋白,最适pH和温度分别为7.5和40℃,其在30~40℃条件下较为稳定,且半衰期在2 h以上。His-ChSase ABCⅡ能特异性有效分解硫酸软骨素,其K_(m)值为10.4±0.8μmol/L,Kcat值为9.4±0.2 s^(-1)。结论:本论文通过基因优化和融合表达等策略实现了His-ChSase ABCⅡ的高效表达和纯化。此外,His-ChSase ABCⅡ的酶学性质可基本满足其在医药和营养产品工业生产中的应用需求。 展开更多
关键词 硫酸软骨素裂解酶ABCⅡ 低分子量硫酸软骨素(LMWCSs) 学性质 融合表达 多聚组氨酸标签
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硫酸软骨素裂解酶ABC产生菌的筛选及发酵工艺研究 被引量:5
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作者 陶科 王忠彦 +4 位作者 国锦琳 胡承 邓林 刘世贵 代其林 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期138-141,共4页
从成都井研生猪屠宰厂等地采集的样品中平板分离粗筛到 4 8株硫酸软骨素裂解酶 ABC产生菌 ,进一步复筛出一株高产、稳定的硫酸软骨素裂解酶 ABC产生菌株 GT38,初步鉴定为彭氏变形菌 (P.pen-neri)。通过单因素实验和正交分析研究了摇瓶... 从成都井研生猪屠宰厂等地采集的样品中平板分离粗筛到 4 8株硫酸软骨素裂解酶 ABC产生菌 ,进一步复筛出一株高产、稳定的硫酸软骨素裂解酶 ABC产生菌株 GT38,初步鉴定为彭氏变形菌 (P.pen-neri)。通过单因素实验和正交分析研究了摇瓶最适产酶条件和 2 L 实验室小罐发酵工艺 ,该菌的最适发酵工艺为培养基大豆蛋白胨 2 .5 % ,蔗糖 1.5 % ,Na Cl0 .4 % ,硅油 0 .0 5 % ,p H7.5 ,接种量 5 % ,通气量 1∶ 1~1∶ 1.2 (v/ v) ,搅拌转速为 6 0 0 r/ min,30℃发酵 10 h,酶活力单位高达 32 2 U/ L。 展开更多
关键词 硫酸软骨素裂解酶ABC 彭氏变形菌 筛选 条件 发酵罐
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微生物硫酸软骨素裂解酶的研究进展 被引量:11
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作者 蔡苏兰 阎浩林 何汉洲 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 2004年第1期76-80,共5页
目的综述硫酸软骨素裂解酶的种类、分离纯化方法及药理学作用的研究进展。方法在检索国内外相关文献的基础上 ,对硫酸软骨素裂解酶的种类、分离纯化方法及药理学作用进行整理和归纳。结果硫酸软骨素裂解酶具有 4种类型 ;硫酸软骨素裂解... 目的综述硫酸软骨素裂解酶的种类、分离纯化方法及药理学作用的研究进展。方法在检索国内外相关文献的基础上 ,对硫酸软骨素裂解酶的种类、分离纯化方法及药理学作用进行整理和归纳。结果硫酸软骨素裂解酶具有 4种类型 ;硫酸软骨素裂解酶可作为工具酶及药用酶用于基础理论及药学领域的研究中。结论作为工具酶和药用酶 ,硫酸软骨素裂解酶在科研及医药领域拥有广阔的发展前景。 展开更多
关键词 硫酸软骨素裂解酶 低分子量硫酸软骨素 胞内 胞外
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硫酸软骨素裂解酶ABC产生菌的筛选及酶学性质的初步研究 被引量:3
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作者 陶科 王忠彦 +4 位作者 胡承 田宇 国锦琳 邓林 刘世贵 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期1168-1171,共4页
从成都市井研县生猪屠宰厂等地采集的样品中筛选出一株高产、稳定的硫酸软骨素裂解酶ABC产生菌株GT38,初步鉴定为彭氏变形杆菌(P.penneri).其酶活力单位高达112U/L.酶学性质经初步研究表明:该酶的最适反应pH值为7.0,最适反应温度为30℃,... 从成都市井研县生猪屠宰厂等地采集的样品中筛选出一株高产、稳定的硫酸软骨素裂解酶ABC产生菌株GT38,初步鉴定为彭氏变形杆菌(P.penneri).其酶活力单位高达112U/L.酶学性质经初步研究表明:该酶的最适反应pH值为7.0,最适反应温度为30℃,在pH值6~8之间较稳定,温度在30℃~45℃较稳定,金属离子对酶活力影响不大. 展开更多
关键词 硫酸软骨素裂解酶ABC 彭氏变形杆菌 筛选 学性质
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硫酸软骨素裂解酶发酵培养基的获得及发酵条件的优化 被引量:3
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作者 蔡苏兰 阎浩林 雷健 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期226-230,共5页
目的考察发酵培养基中碳源、氮源及无机盐等因素及各种发酵条件对温和气单孢菌YH311产硫酸软骨素裂解酶的影响,获得硫酸软骨素裂解酶最佳发酵培养基和发酵条件。方法采用单因素实验法、均匀设计法及正交设计法。结果获得的最优培养基配... 目的考察发酵培养基中碳源、氮源及无机盐等因素及各种发酵条件对温和气单孢菌YH311产硫酸软骨素裂解酶的影响,获得硫酸软骨素裂解酶最佳发酵培养基和发酵条件。方法采用单因素实验法、均匀设计法及正交设计法。结果获得的最优培养基配方(g·L-1)为:葡萄糖2 5 ,牛肉膏5 0 0 ,硫酸软骨素10 0 ,尿素0 5 ,MgSO4·7H2 O 9 0 ( pH 7 0 ) ;最适产酶条件为:2 % ( φ)种子液,2 8℃,2 0 0r·min-1,振荡通气培养2 4h。在优化条件下,硫酸软骨素裂解酶的产率可达110 0 0U·L-1。结论通过对发酵培养基及发酵条件的优化可将硫酸软骨素裂解酶的产量提高5倍。 展开更多
关键词 温和气单孢菌 硫酸软骨素裂解酶 发酵培养基 发酵条件 工艺优化
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温和气单孢菌YH311硫酸软骨素裂解酶的分离纯化与固定化 被引量:2
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作者 蔡苏兰 阎浩林 何汉洲 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期584-589,共6页
通过硫酸铵沉淀、QAE SephadexA5 0柱层析及SephadexG 1 5 0凝胶过滤等纯化步骤 ,对源自温和气单孢菌YH31 1的ChSase进行了分离纯化。结果表明 ,ChSase经上述纯化步骤后被纯化了 5 5倍 ,其最终纯度可达 95 %以上 ,比活为 31 86u mg。经... 通过硫酸铵沉淀、QAE SephadexA5 0柱层析及SephadexG 1 5 0凝胶过滤等纯化步骤 ,对源自温和气单孢菌YH31 1的ChSase进行了分离纯化。结果表明 ,ChSase经上述纯化步骤后被纯化了 5 5倍 ,其最终纯度可达 95 %以上 ,比活为 31 86u mg。经SDS PAGE及IFE测定可知该酶的分子量约为 80kD ,等电点为 4 3~ 4 8。将纯化后的ChSase用海藻酸钠或纤维素固定化后 ,ChSase的热稳定性及贮存稳定性均可得到大幅度的提高 :固定化酶用 80℃水浴处理 1 2 0min或于 4℃冰箱放置 30d后仍可保留 5 0 %以上的相对活力 ;但固定化酶的收率较低 ,仅为 1 8 5 6 %和1 8 86 %。 展开更多
关键词 硫酸软骨素裂解酶 分离纯化 固定化 海藻酸钠 纤维素
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硫酸软骨素裂解酶产生菌的筛选及特性研究
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作者 葛雯 《现代食品》 2020年第6期157-159,162,共4页
分离硫酸软骨素裂解酶产生菌及克隆其编码基因是研究其酶学性质及最终实现低分子量硫酸软骨素高质高效生产的重要研究基础。本文利用透明圈法从白鲢鱼鱼腹中分离筛选出产硫酸软骨素裂解酶的S6菌株,经16srRNA序列分析,初步鉴定为气单胞菌... 分离硫酸软骨素裂解酶产生菌及克隆其编码基因是研究其酶学性质及最终实现低分子量硫酸软骨素高质高效生产的重要研究基础。本文利用透明圈法从白鲢鱼鱼腹中分离筛选出产硫酸软骨素裂解酶的S6菌株,经16srRNA序列分析,初步鉴定为气单胞菌,同时研究了该菌株的生长曲线和对抗生素的耐药性,为后续针对S_6菌株次级代谢产物的研究奠定基础。 展开更多
关键词 硫酸软骨素裂解酶 气单胞菌S_6 抗生素 抗药性分析 生长曲线
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大孔树脂D380固定化硫酸软骨素裂解酶 被引量:2
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作者 牛海滨 蔡苏兰 +1 位作者 阎浩林 刘婷婷 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第2期203-206,210,共5页
目的以大孔树脂D380为载体,戊二醛为交联剂,进行硫酸软骨素裂解酶(ChSase)的固定化,并考察固定化酶的酶学性质。方法分别考察加酶量、吸附温度、吸附时间、吸附pH值、戊二醛交联浓度、交联时间及交联温度对ChSase固定化效果的影响,并分... 目的以大孔树脂D380为载体,戊二醛为交联剂,进行硫酸软骨素裂解酶(ChSase)的固定化,并考察固定化酶的酶学性质。方法分别考察加酶量、吸附温度、吸附时间、吸附pH值、戊二醛交联浓度、交联时间及交联温度对ChSase固定化效果的影响,并分析该固定化酶的最适反应温度、最适反应pH值、米氏常数(Km)及其操作稳定性。结果ChSase的最佳固定化条件为:加酶量150U/g树脂,吸附温度15℃,吸附时间6h,吸附pH值7.0,戊二醛交联浓度0.01%,交联时间3h,交联温度4℃。以此条件制备的固定化酶,其酶结合效率可达79.1%。该固定化ChSase的最适反应温度为45℃;最适反应pH值为7.0;Km达1.46×10-1g/L,较游离酶高;具有较好的操作稳定性。结论以大孔树脂D380为载体固定化ChSase是可行的,所得固定化酶有较高的使用效率和稳定性,适合于工业化生产。 展开更多
关键词 大孔树脂D380 硫酸软骨素裂解酶 固定化
原文传递
探讨硫酸软骨素酶在兔耳增生性瘢痕模型中的作用 被引量:4
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作者 刘莺 郝立君 +2 位作者 庞建华 王辉 王巍 《中国美容整形外科杂志》 CAS 2006年第5期336-339,共4页
目的应用兔耳模型探讨硫酸软骨素裂解酶在增生性瘢痕中的作用。方法将健康的日本大耳白兔12只,随机分成胶原酶治疗组(A组)、硫酸软骨素裂解酶与胶原酶混合治疗组(B组)、硫酸软骨素裂解酶治疗组(C组)、对照组(D组)。采用复合染色法观察... 目的应用兔耳模型探讨硫酸软骨素裂解酶在增生性瘢痕中的作用。方法将健康的日本大耳白兔12只,随机分成胶原酶治疗组(A组)、硫酸软骨素裂解酶与胶原酶混合治疗组(B组)、硫酸软骨素裂解酶治疗组(C组)、对照组(D组)。采用复合染色法观察组织形态学变化,并进行图像定量分析,羟脯氨酸含量测定。结果各治疗组酸性黏多糖染色变浅,数量减少,胶原纤维被破坏,排列稀疏。A、B、C、D组的羟脯氨酸含量,随着时间的变化其含量不一致(P<0.05),A、C组与B组比较在第28天差异有显著意义(P<0.05),B组与A组比较在第35天差异有显著意义(P<0.05),在用药两周后B组羟脯氨酸含量始终低于其他各组。结论硫酸软骨素裂解酶水解了硫酸软骨素,在去除了胶原纤维周围的酸性黏多糖后,促进了胶原的降解,提示可能为瘢痕的治疗提供新的途径。 展开更多
关键词 增生性瘢痕 硫酸软骨素裂解酶 胶原
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柱状黄杆菌常规PCR检测体系的建立 被引量:4
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作者 黄冠军 饶朝龙 +2 位作者 刘衍鹏 刘天强 肖丹 《水产科学》 CAS 北大核心 2011年第11期689-692,共4页
根据NCBI公布的柱状黄杆菌硫酸软骨素裂解酶的基因序列,设计并选取一对能够快速而准确地检测柱状黄杆菌的PCR引物,建立PCR快速检测体系,同时测试该体系的特异性和灵敏度,并对患病的鱼组织进行检测。研究结果表明,使用设计的引物能够扩... 根据NCBI公布的柱状黄杆菌硫酸软骨素裂解酶的基因序列,设计并选取一对能够快速而准确地检测柱状黄杆菌的PCR引物,建立PCR快速检测体系,同时测试该体系的特异性和灵敏度,并对患病的鱼组织进行检测。研究结果表明,使用设计的引物能够扩增出与预计大小相符合的138bp的特异性片段,具有较好的检测特异性,对靶标DNA的检测灵敏度为pg级,对柱状黄杆菌的检测灵敏度为25cfu/20μl。样品的检测结果与实际发病情况一致,表明本研究成功建立了柱状黄杆菌常规PCR检测体系,该体系可以用于柱状黄杆菌的诊断和样品的检测。 展开更多
关键词 柱状黄杆菌 硫酸软骨素裂解酶 聚合链式反应 诊断
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