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重叠延伸PCR法构建小鼠Sumf1基因的定点突变真核表达载体 被引量：8
1
作者 帅勇 胡兴旺 +3 位作者 易朵 王成 赵晓蒙 周畅 《生命科学研究》 CAS CSCD 2009年第5期430-436,共7页
前期通过染色质免疫沉淀技术（chromatin immunoprecipitation assay，CHIP）筛选出了转录因子activator protein．2 alpha（AP-2α）的靶基因Sumf1．采用重叠延伸PCR定点诱变技术，对AP．2α在Sumf1内含子片段上的两个结合位点的碱基... 前期通过染色质免疫沉淀技术（chromatin immunoprecipitation assay，CHIP）筛选出了转录因子activator protein．2 alpha（AP-2α）的靶基因Sumf1．采用重叠延伸PCR定点诱变技术，对AP．2α在Sumf1内含子片段上的两个结合位点的碱基进行定点突变，并构建定点突变表达载体．DNA测序表明，Sumf1内含子片段103—111bp，411～419bp两处的碱基已分别由GCCGTCAGG突变为GAAGTCCTG，由GCCTCTAGG突变为GGATCTCTG，成功实现定点诱变，为进一步研究AP-2α对基因Sumf1的表达调控奠定了基础． 展开更多
关键词 转录因子AP-2α 硫酸酯酶修饰因子sumf1 重叠延伸PCR 定点诱变
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pEGFP-C3/SUMF2重组真核表达载体的构建及在人支气管上皮细胞中的表达 被引量：3
2
作者 杨春 张婉莹 +1 位作者 梁红艳 姜晓峰 《中华临床免疫和变态反应杂志》 2012年第3期168-172,共5页
目的构建与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)融合的人硫酸酯酶修饰因子2(SUMF2)真核表达载体。方法用RT-PCR技术从人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBEC)获得SUMF2的cDNA模板,PCR方法... 目的构建与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)融合的人硫酸酯酶修饰因子2(SUMF2)真核表达载体。方法用RT-PCR技术从人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBEC)获得SUMF2的cDNA模板,PCR方法扩增人SUMF2基因。用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切扩增人SUMF2基因及质粒pEGFP-C3;将2种酶切产物按常规方法连接、转化大肠杆菌Top10;挑取菌落培养,提取质粒,酶切鉴定,测序;将测序正确的重组载体用脂质体法转染HBEC,荧光倒置显微镜观察。提取转染细胞的总蛋白进行Western blot检测。结果扩增出1条约857bp的片段,与预期的SUMF2大小相符。酶切结果显示重组质粒pEGFP-C3/SUMF2被切成2条片段,其中1条为pEGFP-C3载体,另1条为目的片段。经测序鉴定,序列与GenBank(NM_015411.2)中的序列高度同源。荧光倒置显微镜观察显示,人SUMF2基因主要在内质网表达。Western blot结果显示在相对分子质量为37×103处有一蛋白条带,与预期大小相符。结论成功构建重组表达载体pEGFP-C3/SUMF2,为进一步研究SUMF2对IL-13的作用奠定了实验基础。 展开更多
关键词 硫酸酯酶修饰因子2 真核表达载体 人支气管上皮细胞
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pPET-SUMF2各亚型的原核质粒构建及蛋白表达 被引量：1
3
作者 张录 梁红艳 +1 位作者 张婉莹 姜晓峰 《中国科技论文》 北大核心 2014年第9期1036-1038,共3页
构建人硫酸酯酶修饰因子2(SUMF2)基因各亚型的融合表达载体并在大肠杆菌中诱导表达pPET-SUMF2各亚型的融合蛋白。用EcoRI和XhoI双酶切人SUMF2各种亚型基因及质粒pPET-30a;将2种酶切产物按常规方法连接、转化至大肠杆菌DH5α。挑取菌落培... 构建人硫酸酯酶修饰因子2(SUMF2)基因各亚型的融合表达载体并在大肠杆菌中诱导表达pPET-SUMF2各亚型的融合蛋白。用EcoRI和XhoI双酶切人SUMF2各种亚型基因及质粒pPET-30a;将2种酶切产物按常规方法连接、转化至大肠杆菌DH5α。挑取菌落培养,提取质粒进行验证。将构建成功的pPET-SUMF2各亚型重组表达质粒转化至BL21(DE3)中,经IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳分析以及Western blot检测SUMF2各亚型的融合蛋白表达。成功构建了pPET-SUMF2各亚型的重组表达质粒,并成功诱导SUMF2各亚型融合蛋白的表达,Western blot结果显示在预期位置有特异蛋白条带表达,并在BL21(DE3)内表达了SUMF2各亚型的融合蛋白,为进一步研究SUMF2的功能以及SUMF2与哮喘发病的关系奠定了基础。 展开更多
关键词 硫酸酯酶修饰因子2 原核表达载体 融合蛋白
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SUMF在哮喘发病机制中作用的研究进展 被引量：2
4
作者 唐学武 王文革 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2019年第6期1103-1106,共4页
支气管哮喘(简称哮喘)是一种以气道炎症、气道高反应性和气道重塑为特征的慢性呼吸系统疾病,近十余年来其发病率呈现持续上升趋势。随着对哮喘发病机制研究的不断深入,发现白细胞介素13(IL-13)在哮喘的发病机制中起到中轴的作用。有研... 支气管哮喘(简称哮喘)是一种以气道炎症、气道高反应性和气道重塑为特征的慢性呼吸系统疾病,近十余年来其发病率呈现持续上升趋势。随着对哮喘发病机制研究的不断深入,发现白细胞介素13(IL-13)在哮喘的发病机制中起到中轴的作用。有研究表明,硫酸酯酶修饰因子(SUMF)不仅可以与IL-13相结合,且可以抑制IL-13的分泌,推测SUMF在哮喘的发病机制中起到重要作用,这可能为哮喘的防治提供新的线索。作者就SUMF在哮喘发病机制中作用的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 硫酸酯酶修饰因子(sumf) 白细胞介素-13 支气管哮喘 文献综述
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SUMF2基因过表达慢病毒载体的构建及鉴定
5
作者 那春鑫 薛丽 +1 位作者 梁红艳 姜晓峰 《医学研究杂志》 2015年第11期43-46,共4页
目的构建硫酸酯酶修饰因子2(SUMF2)基因过表达慢病毒载体,以便进一步研究SUMF2功能。方法针对人SUMF2 DNA序列设计带酶切位点的引物,PCR法获得目的基因片段;用AgeⅠ和NheⅠ酶双酶切SUMF2基因片段及PLJM1-EGFP载体。用T4连接酶对两种酶... 目的构建硫酸酯酶修饰因子2(SUMF2)基因过表达慢病毒载体,以便进一步研究SUMF2功能。方法针对人SUMF2 DNA序列设计带酶切位点的引物,PCR法获得目的基因片段;用AgeⅠ和NheⅠ酶双酶切SUMF2基因片段及PLJM1-EGFP载体。用T4连接酶对两种酶切产物进行连接、PCR鉴定、测序。将阳性克隆质粒与包装质粒及包膜蛋白质粒共转染293T细胞,并荧光显微镜观察EGFP的表达。结果 PCR和测序证实成功构建了SUMF2的慢病毒表达载体,病毒效价为1×108TU/ml。结论成功构建SUMF2-PLJM1-EGFP慢病毒载体,并在293T细胞中得到表达。 展开更多
关键词 硫酸酯酶修饰因子2 慢病毒 过表达 载体构建
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小菜蛾饲料品系转食寄主植物的适合度及其硫苷代谢相关基因表达
6
作者 董玉红 陈玮 +5 位作者 郑玲 荆晓东 周立 张玲玲 李晓桐 何玮毅 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2018年第1期54-60,共7页
硫代葡萄糖苷硫酸酯酶(GSS)及其修饰因子(SUMF1)是小菜蛾代谢十字花科植物化学防御物质硫苷的关键因子,但其在人工饲料品系小菜蛾适应寄主植物方面的功能研究中鲜有报道。本研究检测了硫苷代谢相关基因GSS和SUMF1在2种人工饲料品系小菜... 硫代葡萄糖苷硫酸酯酶(GSS)及其修饰因子(SUMF1)是小菜蛾代谢十字花科植物化学防御物质硫苷的关键因子,但其在人工饲料品系小菜蛾适应寄主植物方面的功能研究中鲜有报道。本研究检测了硫苷代谢相关基因GSS和SUMF1在2种人工饲料品系小菜蛾(AD和G88)不同发育阶段的表达模式,发现GSS基因在2种饲料品系间的表达模式较为相似,GSS1和GSS2均在3龄和4龄幼虫中大量表达;SUMF1基因的表达模式则差别较大,未呈现明显规律性。AD和G88品系小菜蛾从初孵幼虫起被转移至萝卜子叶上饲养,与取食人工饲料相比幼虫存活率下降、发育历期延长、蛹重降低;幼虫中肠的GSS1和GSS2表达水平显著下降,AD品系的SUMF1a基因在幼虫中肠的表达亦显著下降。本研究通过探究饲料品系小菜蛾转食寄主植物后适合度与GSS和SUMF1基因表达水平的关系,揭示了硫苷代谢相关基因的表达水平很可能受到植物因子调控,并与人工饲料品系小菜蛾对寄主植物的适应性密切相关。 展开更多
关键词 小菜蛾 硫代葡萄糖苷硫酸酯酶 硫酸酯酶修饰因子 人工饲料品系 转寄主
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SUMF2对炎症的影响
7
作者 刘胜楠 刘洋 +5 位作者 吴传安 罗裕旋 高菊逸 梁红艳 刘家仁 姜晓峰 《现代生物医学进展》 CAS 2019年第23期4586-4588,4581,共4页
炎症是机体的一种适应性反应,失调时将会对自身机体造成损伤。研究表明许多疾病的发生发展均与炎症的失调有关。硫酸酯酶作为人体不可或缺的蛋白质家族与炎症之间有着密切关联。发热是炎症最主要的表现形式,硫酸酯酶修饰因子2(sulfatase... 炎症是机体的一种适应性反应,失调时将会对自身机体造成损伤。研究表明许多疾病的发生发展均与炎症的失调有关。硫酸酯酶作为人体不可或缺的蛋白质家族与炎症之间有着密切关联。发热是炎症最主要的表现形式,硫酸酯酶修饰因子2(sulfatase-modifying factor 2,SUMF2)参与硫酸酯酶的激活且与发热密切相关。脂多糖刺激人体后,SUMF2的表达明显降低。SUMF2已被证实与白细胞介素-13(Interleukin-13,IL-13)之间存在相互作用,且能在体外水平抑制IL-13的分泌,IL-13可以通过抑制炎性因子的产生发挥抗炎作用。本文将就硫酸酯酶、SUMF2及其对炎症之间的影响进行综述。 展开更多
关键词 硫酸酯酶修饰因子2 硫酸酯酶 炎症
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