神经介素B(neuromedin B,NMB)及受体(NMB receptor,NMBR)通过NF-κB信号通路参与抑制甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)H1N1亚型(IAV/H1N1)的感染。但关于NMB和NMBR对NF-κB信号通路相关泛素蛋白酶的调控如何,尚未见报道。为探究NMB...神经介素B(neuromedin B,NMB)及受体(NMB receptor,NMBR)通过NF-κB信号通路参与抑制甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)H1N1亚型(IAV/H1N1)的感染。但关于NMB和NMBR对NF-κB信号通路相关泛素蛋白酶的调控如何,尚未见报道。为探究NMB和NMBR调控IAV诱导的NF-κB信号通路相关的泛素蛋白酶表达的影响,本研究基于IAV/H9N2感染sh-NMBR细胞与NMB刺激的A549细胞,采用RT-PCR、qRT-PCR及Western blot(WB)分析NMB和NMBR对H9N2感染引起的NF-κB信号通路相关的E3泛素连接酶Mind bomb-2(MIB2)和Ring Finger Protein 8(RNF8)及去泛素蛋白酶Cylindromatosis(CYLD)的表达变化。结果显示:H9N2感染sh-NMBR细胞中,RNF8和CYLD表达增加,MIB2表达和P65磷酸化水平降低;NMB激活A549细胞中NMBR的表达后,诱导细胞中RNF8和CYLD的表达水平下降,MIB2表达和P65磷酸化水平增加。结果表明:NMB和NMBR通过调控IAV/H9N2感染诱导的泛素蛋白酶的表达和P65活性,从而影响IAV/H9N2感染激活的NF-κB信号通路的功能,该结果为深入研究NMB和NMBR抑制甲型流感病毒感染的作用机制提供了理论基础。展开更多
目的构建小鼠神经介素B(neuromedin B,NMB)及其受体(neuromedin B receptor,NMBR)基因慢病毒过表达质粒,并于RAW264.7细胞中表达,以期为小鼠NMB和NMBR基因过表达对RAW264.7细胞增殖及凋亡影响的深入研究奠定基础。方法经RT-PCR法扩增获...目的构建小鼠神经介素B(neuromedin B,NMB)及其受体(neuromedin B receptor,NMBR)基因慢病毒过表达质粒,并于RAW264.7细胞中表达,以期为小鼠NMB和NMBR基因过表达对RAW264.7细胞增殖及凋亡影响的深入研究奠定基础。方法经RT-PCR法扩增获得小鼠NMB和NMBR基因的编码序列(coding sequence,CDS),插入载体pCD513B-1,构建重组质粒pCD513B-1-NMB和pCD513B-1-NMBR;于HEK-293T细胞包装获得小鼠NMB和NMBR基因过表达慢病毒,通过倍比稀释法检测病毒效价。用慢病毒感染RAW264.7细胞48 h后,qPCR法检测小鼠NMB和NMBR基因mRNA的表达情况,以未感染细胞为对照。结果经双酶切鉴定证明重组质粒构建正确。小鼠NMB和NMBR基因过表达慢病毒滴度分别为6×10~6和8×10~6TU/mL。2种慢病毒转染RAW264.7细胞中小鼠NMB和NMBR基因mRNA表达量显著高于对照组(t分别为24.158和14.958,P均<0.01)。结论成功构建了小鼠NMB和NMBR基因过表达质粒,能够显著提高RAW264.7细胞NMB和NMBR基因的表达量。展开更多
文摘神经介素B(neuromedin B,NMB)及受体(NMB receptor,NMBR)通过NF-κB信号通路参与抑制甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)H1N1亚型(IAV/H1N1)的感染。但关于NMB和NMBR对NF-κB信号通路相关泛素蛋白酶的调控如何,尚未见报道。为探究NMB和NMBR调控IAV诱导的NF-κB信号通路相关的泛素蛋白酶表达的影响,本研究基于IAV/H9N2感染sh-NMBR细胞与NMB刺激的A549细胞,采用RT-PCR、qRT-PCR及Western blot(WB)分析NMB和NMBR对H9N2感染引起的NF-κB信号通路相关的E3泛素连接酶Mind bomb-2(MIB2)和Ring Finger Protein 8(RNF8)及去泛素蛋白酶Cylindromatosis(CYLD)的表达变化。结果显示:H9N2感染sh-NMBR细胞中,RNF8和CYLD表达增加,MIB2表达和P65磷酸化水平降低;NMB激活A549细胞中NMBR的表达后,诱导细胞中RNF8和CYLD的表达水平下降,MIB2表达和P65磷酸化水平增加。结果表明:NMB和NMBR通过调控IAV/H9N2感染诱导的泛素蛋白酶的表达和P65活性,从而影响IAV/H9N2感染激活的NF-κB信号通路的功能,该结果为深入研究NMB和NMBR抑制甲型流感病毒感染的作用机制提供了理论基础。
