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副猪嗜血杆菌种特异性基因的筛选与鉴定
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作者 李继昌 崔宁 +6 位作者 刘娇 周泷 张艳禾 谢芳 李刚 牛惠 王春来 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期79-83,共5页
为筛选副猪嗜血杆菌(HPS)种特异性的基因,采用抑制消减杂交(SSH)技术,以HPS DNA为Tester,以猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)DNA为Driver,通过2轮消减杂交和2次PCR扩增,将第2次PCR产物连接pMD19-T载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克... 为筛选副猪嗜血杆菌(HPS)种特异性的基因,采用抑制消减杂交(SSH)技术,以HPS DNA为Tester,以猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)DNA为Driver,通过2轮消减杂交和2次PCR扩增,将第2次PCR产物连接pMD19-T载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆后测序,经Southern Blot验证和BLAST分析,获得6个HPS特异基因片段。研究为建立副猪嗜血杆菌基因鉴别诊断方法及ELISA抗原靶标的鉴定奠定基础。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 抑制消减杂交 种特异性基因 鉴定
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鸡毒支原体不同地区分离株对常用抗菌药物的敏感性试验 被引量:15
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作者 孔意端 林居纯 +3 位作者 陈继荣 陈杖榴 曾振灵 蒋红霞 《动物医学进展》 CSCD 2008年第6期35-38,共4页
从广东、四川和北京等地疑似鸡毒支原体感染鸡中分离并利用种特异性基因(fMG-2)PCR方法鉴定了51株鸡毒支原体,并测定了这些分离株对常用抗菌药物的敏感性。结果表明,三个地区临床分离鸡毒支原体对泰乐菌素仍然保持较好的敏感性,可作为... 从广东、四川和北京等地疑似鸡毒支原体感染鸡中分离并利用种特异性基因(fMG-2)PCR方法鉴定了51株鸡毒支原体,并测定了这些分离株对常用抗菌药物的敏感性。结果表明,三个地区临床分离鸡毒支原体对泰乐菌素仍然保持较好的敏感性,可作为鸡毒支原体感染的首选药物。三个地区的鸡毒支原体对林可霉素和庆大霉素敏感性显著下降,广东、四川两地分离株对强力霉素也有明显耐受性,部分广东分离株对氟喹诺酮类药物敏感性显著下降。 展开更多
关键词 鸡毒支原体 种特异性基因fmG-2 敏感性
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致病性副溶血弧菌三重PCR检测方法的建立和评价 被引量:3
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作者 何再平 王权 +6 位作者 陈永军 刘迎春 韩先干 王少辉 白雪瑞 刘永杰 蒋蔚 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2015年第6期48-55,共8页
根据副溶血弧菌种特异性基因(tox R)、耐热直接溶血素基因(tdh)和相对耐热直接溶血素基因(trh)为靶基因分别设计引物,进行PCR扩增及反应条件的优化,建立了检测含有溶血素毒力基因的致病性副溶血弧菌的多重PCR方法。3对引物能分别特异性... 根据副溶血弧菌种特异性基因(tox R)、耐热直接溶血素基因(tdh)和相对耐热直接溶血素基因(trh)为靶基因分别设计引物,进行PCR扩增及反应条件的优化,建立了检测含有溶血素毒力基因的致病性副溶血弧菌的多重PCR方法。3对引物能分别特异性地扩增出368、269、486 bp的目的片段。副溶血弧菌均能扩增出tox R基因,不含溶血素基因的菌株(tdh-/trh-)仅扩增出1条目的片段,而含不同溶血素基因的致病性副溶血弧菌则分别扩增出2条(tdh+/trh-或tdh-/trh+)和3条(tdh+/trh+)特异性条带。检测其他非副溶血弧菌的供试菌,则不出现任何扩增条带。人工模拟样品检测结果显示对致病性副溶血弧菌的最低检测浓度为103CFU/m L。结果表明该多重PCR检测方法具有较好的特异性和灵敏性,对检测致病性副溶血弧菌有重要意义。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 种特异性基因 溶血素基因 多重PCR 检测
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Use of species-specific PCR for the identification of 10 sea cucumber species 被引量:3
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作者 文菁 曾玲 《Chinese Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2014年第6期1257-1263,共7页
We developed a species-specific PCR method to identify species among dehydrated products of 10 sea cucumber species.Ten reverse species-specific primers designed from the 16 S rRNA gene,in combination with one forward... We developed a species-specific PCR method to identify species among dehydrated products of 10 sea cucumber species.Ten reverse species-specific primers designed from the 16 S rRNA gene,in combination with one forward universal primer,generated PCR fragments of ca.270 bp length for each species.The specificity of the PCR assay was tested with DNA of samples of 21 sea cucumber species.Amplification was observed in specific species only.The species-specific PCR method we developed was successfully applied to authenticate species of commercial products of dehydrated sea cucumber,and was proven to be a useful,rapid,and low-cost technique to identify the origin of the sea cucumber product. 展开更多
关键词 sea cucumber dried product basic local alignment search tool (BLAST) species-specific PCR identification
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五种重要致病性弧菌高通量液相芯片检测方法的建立 被引量:5
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作者 郭容 董晓妹 +4 位作者 别闯南 王权 韩先干 叶建强 蒋蔚 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期805-813,共9页
为建立一种快速、准确同时检测5种致病性弧菌的高通量液相芯片技术,本研究针对霍乱弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌、溶藻弧菌和拟态弧菌的10个目的基因,包括5个种特异性基因和5个毒力基因,分别设计特异性引物和探针,多重PCR扩增后的产物与... 为建立一种快速、准确同时检测5种致病性弧菌的高通量液相芯片技术,本研究针对霍乱弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌、溶藻弧菌和拟态弧菌的10个目的基因,包括5个种特异性基因和5个毒力基因,分别设计特异性引物和探针,多重PCR扩增后的产物与偶联有不同核酸探针的微球混合物进行杂交反应,利用液相芯片检测仪分析结果。结果显示,本方法同时检测这5种致病性弧菌时,检出限最高达到1.8×10^(2)CFU/mL;检测包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、河流弧菌、沙门菌、李斯特杆菌和铜绿杆菌等常见细菌时,均无交叉反应,表明特异性好;检测不同批次的样品时,变异系数均小于8%,表明重复性良好。本研究建立的液相芯片检测方法能够快速同时检测这5种致病性弧菌,具有高通量、灵敏性高、重复性好、可控性强、节省样本和时间等优点,对水产品中多种重要致病性弧菌的检测和流行病学调查提供了技术支持。 展开更多
关键词 弧菌 种特异性基因 毒力基因 液相芯片 多重检测
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食品中化脓链球菌的PCR检测方法的建立 被引量:3
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作者 杨学明 巢强国 +2 位作者 葛宇 熊薇 曲勤凤 《食品工业》 北大核心 2008年第5期71-74,共4页
化脓链球菌是一种常见的食源性致病菌,从19世纪80年代起,化脓链球菌引起的感染在全球范围内呈逐步上升之势并发展成为人类重要致病菌之一。通过已公布的13株化脓链球菌的基因组序列找出具有种特异性的基因序列。运用BLAST(Basic Local A... 化脓链球菌是一种常见的食源性致病菌,从19世纪80年代起,化脓链球菌引起的感染在全球范围内呈逐步上升之势并发展成为人类重要致病菌之一。通过已公布的13株化脓链球菌的基因组序列找出具有种特异性的基因序列。运用BLAST(Basic Local Alignment Search Tool,基本局部比对工具)在GenBank中进行序列对库的比对结果表明:化脓链球菌的某些基因(SmeZ,emm,spyM51755)具有种特异性。以这些基因为目的基因,共设计七对引物。经PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链式反应)检测发现spyM引物对(spyM51755F,spyM51755R)具有很高的特异性。利用该引物对,建立可快速且灵敏地检测食品中化脓链球菌的PCR方法,其灵敏度达到10 cfu/g样品。 展开更多
关键词 化脓链球菌 种特异性基因 食源性致病菌 PCR
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2010年杭州市下城区水产品中副溶血性弧菌的污染调查 被引量:1
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作者 赵雪琴 商晓春 +1 位作者 帅慧群 张睿 《疾病监测》 CAS 2011年第4期310-312,共3页
目的调查杭州市下城区各大农贸市场水产品中副溶血性弧菌(VP)的污染情况。方法 2010年采集下城区各大农贸市场水产品100份,按国标方法进行VP的分离与鉴定;对分离出的VP做血清分型,耐药性检测,并采用PCR法检测其种特异性基因(R72H)和毒... 目的调查杭州市下城区各大农贸市场水产品中副溶血性弧菌(VP)的污染情况。方法 2010年采集下城区各大农贸市场水产品100份,按国标方法进行VP的分离与鉴定;对分离出的VP做血清分型,耐药性检测,并采用PCR法检测其种特异性基因(R72H)和毒力基因(tdh、trh)。结果共分离到24株VP,种特异性基因R72H全为阳性,其中2株毒力基因tdh阳性、trh阴性,其余22株tdh和trh均为阴性。结论虽然本次分离到的VP绝大部分都不携带tdh、trh毒力基因,但VP是历年来本辖区内引起食物中毒的主要病原菌,故仍有必要加强对水产品中VP的监测管理。 展开更多
关键词 水产品 副溶血性弧菌 血清分型 种特异性基因 毒力基因 耐药性
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High-throughput development of genome-wide locus-specific informative SSR markers in wheat 被引量:4
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作者 Lei Li Fayu Sun +4 位作者 Di Wu Fei Zhen Guihua Bai Derong Gao Tao Li 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS CSCD 2017年第6期671-673,共3页
Dear Editor,Although simple sequence repeat(SSR)markers are not new,they are still useful and often used markers in molecular mapping and marker-assisted breeding,particularly in developing countries.However,locus-s... Dear Editor,Although simple sequence repeat(SSR)markers are not new,they are still useful and often used markers in molecular mapping and marker-assisted breeding,particularly in developing countries.However,locus-specific SSR markers could be more useful and informative in wheat breeding and genetic studies.In the present study,221,911 locus-specific SSR markers were designed.Verification of polymorphisms showed that the proportion of polymorphic markers increases with an increase in SSR size. 展开更多
关键词 locus wheat informative breeding polymorphic throughput SSRs Aegilops primer Triticum
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