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新基因hSSB1逆转录病毒载体的构建、鉴定和稳定株的筛选 被引量:1
1
作者 张如华 徐双兵 +1 位作者 武远众 康铁邦 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期73-76,85,共5页
hSSB1(Human Single-strand DNA-binding protein)是参与细胞DNA损伤应答的一个重要信号分子。根据GenBank提供的hSSB1基因序列扩增其cDNA序列,插入到pBABE逆转录病毒载体中,连接后的质粒转化后经过双酶切,PCR扩增及测序来鉴定pBABE-hS... hSSB1(Human Single-strand DNA-binding protein)是参与细胞DNA损伤应答的一个重要信号分子。根据GenBank提供的hSSB1基因序列扩增其cDNA序列,插入到pBABE逆转录病毒载体中,连接后的质粒转化后经过双酶切,PCR扩增及测序来鉴定pBABE-hSSB1阳性克隆。将阳性表达的pBABE-hSSB1和包装质粒转染到HEK293T细胞中,产生病毒液。将包装好的病毒感染细胞并用嘌呤霉素(puromycin)筛选稳定表达hSSB1的细胞株。重组pBABE-hSSB1质粒经双酶切,PCR扩增鉴定及DNA测序分析等方法证实克隆成功。Western blotting检测发现转染重组质粒pBABE-hSSB1的细胞株中hSSB1蛋白的表达水平高于对照组。该研究成功构建了针对hSSB1基因的逆转录病毒载体(pBABE-hSSB1),并得到了稳定高表达hSSB1的细胞株,为深入研究其功能奠定了基础。 展开更多
关键词 hSSB1 病毒载体 稳定株
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表达HIV-1复合多表位基因的p815细胞稳定株的建立和评价
2
作者 张宁 李英辉 +4 位作者 赵亚 刘忠湘 毛张翔 黄豫晓 薛采芳 《科学技术与工程》 2009年第2期253-256,共4页
建立稳定表达HIV-1p24MEG复合多表位基因的p815细胞克隆。设计引物,以HIV-1标准株全长cDNA序列为模板,PCR扩增获得p24基因片段;合成改造后的多个表位基因MEG并且与p24片段相连接,克隆入pcDNA3.1(+)。在阳离子聚合物作用下重组真核质粒... 建立稳定表达HIV-1p24MEG复合多表位基因的p815细胞克隆。设计引物,以HIV-1标准株全长cDNA序列为模板,PCR扩增获得p24基因片段;合成改造后的多个表位基因MEG并且与p24片段相连接,克隆入pcDNA3.1(+)。在阳离子聚合物作用下重组真核质粒转染的p815(H-2d)细胞,以G418压力筛选,RT-PCR检测mRNA表达,间接免疫荧光检测蛋白表达。通过PCR获得了HIV-1p24片段,获得了与多表位基因连接后的p24MEG融合基因,成功构建了p24MEG基因的重组真核表达载体pcDNA3.1(+)/p24MEG。转染p815细胞后,RT-PCR检测到融合蛋白mRNA表达,间接免疫荧光显示p815细胞内有融合蛋白的表达。结论:建立了稳定表达HIV-1p24MEG融合蛋白的p815细胞克隆,为评价多表位抗原p24MEG在BALB/c小鼠体内诱导的细胞免疫应答奠定基础。 展开更多
关键词 HIV-1 复合多表位基因 稳定株
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人类P100蛋白表达抑制稳定株的建立及其对HeLa细胞周期的影响 被引量:1
3
作者 何津岩 葛林 +5 位作者 邵洁 赵钢 东莉洁 方建飞 姚智 杨洁 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第3期240-243,共4页
目的构建针对人类P100(hP100)基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)质粒,转染后筛选P100表达抑制的稳定细胞株并鉴定其表达情况;同时检测其对细胞周期的影响。方法设计针对hP100基因的siRNA序列,构建pGenesil-shRNA-hP100质粒(... 目的构建针对人类P100(hP100)基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)质粒,转染后筛选P100表达抑制的稳定细胞株并鉴定其表达情况;同时检测其对细胞周期的影响。方法设计针对hP100基因的siRNA序列,构建pGenesil-shRNA-hP100质粒(smallhairpinRNA,shRNA,小发夹RNA),经测序鉴定后转染入宫颈癌细胞HeLa;经G418筛选出稳定株;Western印迹检测稳定株之抑制率。流式细胞术检测hP100蛋白表达抑制对细胞周期的影响。结果成功构建了针对hP100的siRNA质粒,并用之筛选出hP100蛋白表达抑制的稳定株,瞬时转染及稳定株hP100表达明显降低。流式细胞术显示抑制hP100蛋白表达使G1期细胞比例增加,S期和G2/M期细胞比例降低。结论RNAi(RNA interference,RNA干扰)可持续稳定地抑制人类P100蛋白的表达,人类P100蛋白表达抑制对细胞周期有调节作用。 展开更多
关键词 人类P100蛋白 RNA干扰 稳定株 细胞周期
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p100蛋白表达抑制的HepG2肝癌细胞稳定株的建立 被引量:1
4
作者 田潇 尹洁 +6 位作者 丁建民 史雪彬 何津岩 张毅 高星杰 经翔 杨洁 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第2期93-97,共5页
目的建立p100表达抑制的HepG2肝癌细胞稳定株,并初步探讨p100在HepG2肝癌细胞中的功能。方法用脂质体将含有真核细胞筛选标记Neo和GFP的p100 shRNA表达质粒转染入HepG2细胞。经G418耐药筛选稳定整合抗药基因的细胞单克隆;荧光镜检GFP... 目的建立p100表达抑制的HepG2肝癌细胞稳定株,并初步探讨p100在HepG2肝癌细胞中的功能。方法用脂质体将含有真核细胞筛选标记Neo和GFP的p100 shRNA表达质粒转染入HepG2细胞。经G418耐药筛选稳定整合抗药基因的细胞单克隆;荧光镜检GFP阳性细胞单克隆,挑取单克隆;Western检测HepG2细胞稳定株HepG2(p100I)中p100表达的抑制效果;平板细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;MTS法检测细胞存活;划痕实验检测细胞迁移能力。结果成功获得了p100表达抑制的HepG2肝癌细胞稳定株HepG2(p100I),其中p100的表达明显降低。并且实验表明,该p100表达抑制稳定株的克隆形成能力,抵抗化疗药物Cisplatin诱导的细胞死亡的能力和迁移能力明显低于对照组细胞。结论p100表达抑制的HepG2肝癌细胞稳定株的建立为研究p100蛋白在肝癌中的作用提供了体外细胞系模型,基于此稳定株的研究,发现p100能够影响HepG2肝癌细胞的多种细胞功能。 展开更多
关键词 人类p100蛋白 HEPG2肝癌细胞 SHRNA表达载体 G418耐药筛选 稳定株
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蛋白表达抑制稳定株MDA—MB-231-Tudor—SNI的筛选和鉴定
5
作者 王保亚 刘欣 +4 位作者 高星杰 朱梦瑜 杨振霞 赵秀娟 杨洁 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第5期401-405,共5页
目的采用针对人类Tudor—SN基因的RNA干扰(RNAi)技术建立Tudor—SN表达抑制的乳腺癌MDA—MB-231稳定细胞株。方法利用脂质体转染方法将pGenesil—shRNA—hTudor—SNI质粒转染进入MDA—MB-231细胞,经G418筛选出稳定株,通过RT—PCR检... 目的采用针对人类Tudor—SN基因的RNA干扰(RNAi)技术建立Tudor—SN表达抑制的乳腺癌MDA—MB-231稳定细胞株。方法利用脂质体转染方法将pGenesil—shRNA—hTudor—SNI质粒转染进入MDA—MB-231细胞,经G418筛选出稳定株,通过RT—PCR检测Tudor—SN的mRNA水平,再以Western印迹技术鉴定Tudor—SN蛋白表达情况并计算蛋白表达抑制率。结果与对照组相比,以G418筛选的MDA—MB-231-Tudor—SNI稳定株Tudor—SN的mRNA水平降低(P〈0.01,n=3),蛋白表达水平明显下调(P〈0.01,n=3),蛋白表达抑制率达78.12%。结论成功筛选并鉴定人类Tudor—SN蛋白表达抑制MDA—MB-231稳定株,有助于深入研究Tudor—SN蛋白在乳腺癌中的作用。 展开更多
关键词 人类Tudor—SN蛋白 RNA干扰 细胞筛选 稳定株
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慢病毒介导N2ICD过表达的人胃癌MKN45细胞稳定株的构建及鉴定
6
作者 吴丹琳 温俊杰 +9 位作者 叶健斌 薛杨 林彦青 胡冰心 罗美群 陈中标 谢金玲 宁立军 宁云山 李妍 《生物技术》 CAS 2018年第4期372-376,共5页
[目的]构建慢病毒介导Notch2受体胞内段((Notch2 intracellular domain,N2ICD)过表达的人胃癌MKN45细胞稳定株并进行鉴定。[方法]采用PCR法扩增N2ICD基因并克隆至慢病毒载体PTYE-EF1α-IRES-EGFP(简写为pLV)中,通过酶切及测序鉴定后,三... [目的]构建慢病毒介导Notch2受体胞内段((Notch2 intracellular domain,N2ICD)过表达的人胃癌MKN45细胞稳定株并进行鉴定。[方法]采用PCR法扩增N2ICD基因并克隆至慢病毒载体PTYE-EF1α-IRES-EGFP(简写为pLV)中,通过酶切及测序鉴定后,三质粒共转染HEK293T细胞包装病毒,收集且浓缩病毒毒液用于感染人胃癌MKN45细胞并筛选稳定细胞株,用Western Blot验证。[结果]成功构建慢病毒重组质粒N2ICD/pLV;包装病毒后,荧光显微镜下观察到大部分HEK293T细胞发出绿色荧光;收集病毒毒液感染MKN45细胞,显微镜下观察有部分细胞表达绿色荧光蛋白;流式分选技术筛选得到稳定细胞株,Western Blot鉴定结果显示:相比于空白对照组,稳定株的N2ICD过表达明显。[结论]成功构建慢病毒表达质粒N2ICD/pLV,并建立稳定过表达N2ICD的胃癌细胞株N2ICD/pLV-MKN45。 展开更多
关键词 NOTCH2 N2ICD 慢病毒 稳定株
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新城疫热稳定性天然弱毒株B95免疫学特性的研究 被引量:1
7
作者 李敏 陈燕军 +4 位作者 郝勤宗 裘孝良 顾惠明 田兴华 侯艳红 《中国家禽》 北大核心 2002年第13期10-12,共3页
采免疫鸡口腔、泄殖腔分泌物接种鸡胚,测尿囊液中病毒凝集价表明,免疫后2~11天口腔、泄殖腔分泌物中均有B95病毒粒子的存在。同居感染试验表明,免疫后12、16天时两组鸡抗体水平基本相同。B95经不同途径免疫鸡,均能刺激机体产生良好的... 采免疫鸡口腔、泄殖腔分泌物接种鸡胚,测尿囊液中病毒凝集价表明,免疫后2~11天口腔、泄殖腔分泌物中均有B95病毒粒子的存在。同居感染试验表明,免疫后12、16天时两组鸡抗体水平基本相同。B95经不同途径免疫鸡,均能刺激机体产生良好的免疫应答,其中点眼和喷雾免疫效果最好。与Clone30、V4、LaSota疫苗相比较,B95免疫鸡HI抗体产生快、水平高、持续时间长。 展开更多
关键词 新城疫热稳定性天然弱毒B95 免疫学特性 新城疫病毒 HI抗体
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组培技术在番木瓜株性稳定上的应用研究 被引量:10
8
作者 陈健 游恺哲 +3 位作者 林冠雄 陈春锋 李卫红 周常清 《广东农业科学》 CAS CSCD 2004年第3期22-24,共3页
通过试验研究 ,初步建立了一套株性稳定的番木瓜组培苗生产流程 ,以成龄番木瓜两性株的侧芽为材料 ,在诱芽及继代培养基中能形成丛生芽 ,月增殖系数为 3 .0 ;生根诱导率达 85 % ,并形成完整的番木瓜组培苗 ;定植于大田的组培苗均表现为... 通过试验研究 ,初步建立了一套株性稳定的番木瓜组培苗生产流程 ,以成龄番木瓜两性株的侧芽为材料 ,在诱芽及继代培养基中能形成丛生芽 ,月增殖系数为 3 .0 ;生根诱导率达 85 % ,并形成完整的番木瓜组培苗 ;定植于大田的组培苗均表现为株性稳定的两性株 ,与实生苗植株相比 ,其平均生长量高 5 %~ 10 % ,开花期提前 8~ 10天 ,座果率高 ;因此采用株性稳定的两性株组培苗可以有效提高种植番木瓜的经济效益。 展开更多
关键词 番木瓜 组织培养 稳定
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《中国药典》拟收载洋葱伯克霍尔德菌群(Bcc)检查法中标准菌株的稳定性研究 被引量:2
9
作者 曹蕊 余萌 马仕洪 《中国药事》 CAS 2022年第7期723-735,共13页
目的:应用现有微生物分类鉴定技术手段,对《中国药典》拟收载洋葱伯克霍尔德菌群(Bcc)检查法中所选用的标准菌株进行冻存及传代稳定性考察。方法:选取美国药典USP43-NF38 Bcc检查法中的一株Bcc标准菌株ATCC25416为对照菌株。以3株拟收... 目的:应用现有微生物分类鉴定技术手段,对《中国药典》拟收载洋葱伯克霍尔德菌群(Bcc)检查法中所选用的标准菌株进行冻存及传代稳定性考察。方法:选取美国药典USP43-NF38 Bcc检查法中的一株Bcc标准菌株ATCC25416为对照菌株。以3株拟收载标准菌株和1株对照标准菌株为试验菌株,分别对这些试验菌株冻存0.5年、1年、2年的样本及连续6代的传代样本进行菌落表型观察、Biolog生化鉴定分析、16S rRNA基因测序及Ribo Printer全自动基因指纹图谱分析,并使用Bio Numerics 7.6对核糖体图谱数据进行聚类分析。结果:试验菌株在经冻存及传代后,各菌株表型无明显差异;菌株的Biolog生化鉴定结果虽略有差异,但菌株关键生化代谢属性稳定,其鉴定结果均属Bcc;同时,各菌株的16S rRNA测序结果一致;核糖体带型相似值均大于0.95。结论:在本研究考察的冻存时间及传代次数内,3株《中国药典》洋葱伯克霍尔德菌群检查法拟收载的标准菌株的表型、基因型相对稳定。 展开更多
关键词 洋葱伯克霍尔德菌群 16S rRNA Ribo Printer全自动基因指纹图谱鉴定系统 Biolog全自动生化鉴定系统 稳定
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LILRB2过表达慢病毒载体以及THP-1-LILRB2稳转细胞株的构建
10
作者 白若靖 吕诗韵 +2 位作者 画伟 吴昊 代丽丽 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第1期93-98,共6页
目的采用慢病毒载体(lentivirus,LV)感染并探究其在人髓系白血病单核细胞(human myeloid leukemia mononuclear cells,THP-1)中的最佳感染条件,之后病毒包装白细胞免疫球蛋白样受体B2(leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily... 目的采用慢病毒载体(lentivirus,LV)感染并探究其在人髓系白血病单核细胞(human myeloid leukemia mononuclear cells,THP-1)中的最佳感染条件,之后病毒包装白细胞免疫球蛋白样受体B2(leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 2,LILRB2)的过表达病毒载体并感染THP-1细胞,最终嘌呤霉素筛选出经mRNA和蛋白水平均成功验证LILRB2过表达效果的THP-1稳定转染细胞株,为研究LILRB2在单核细胞中的作用提供前提条件。方法LILRB2过表达慢病毒载体以pLV-SFFV-MCS-EF1-ZsGreen1-T2A-Puro为慢病毒骨架载体,通过Xba I与BamH I位点插入经聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增的LILRB2基因片段构建而成。待筛选阳性克隆与测序鉴定后,病毒感染预实验确定感染复数(multiplicity of infection,MOI);以293T细胞包装病毒,浓缩后获得的原液进行病毒滴度检测。设置过表达(LV-OE-LILRB2)组和对照(LV-OE-NC)组,用荧光显微镜观察各组病毒感染THP-1的绿色荧光情况;嘌呤霉素筛选出稳定表达LILRB2的THP-1细胞株。采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和免疫印迹(Western blotting,WB)的方法分别检测THP-1细胞中LILRB2的mRNA和蛋白表达水平。结果载体中的碱基序列经PCR及测序鉴定正确,确认LILRB2过表达慢病毒载体构建完成。病毒感染预实验确定按MOI=5,感染72 h的条件感染单核细胞系THP-1。病毒滴度测定得出,LV-OE-LILRB2组的滴度为1×108 TU/mL,LV-OE-NC组的滴度为3.3×108 TU/mL。用浓度为2μg/mL嘌呤霉素筛选出的稳转细胞株经qPCR检测结果表明LV-OE-LILRB2组中LILRB2的mRNA表达水平较LV-OE-NC组显著上调(P<0.001);且WB检测表明LV-OE-LILRB2组中LILRB2的蛋白表达水平较LV-OE-NC组明显提高(P<0.05)。结论过表达LILRB2慢病毒载体成功构建并在THP-1细胞株中稳定表达,为研究LILRB2在单核细胞中的作用机制提供了细胞模型。 展开更多
关键词 白细胞免疫球蛋白样受体B2 悬浮细胞 慢病毒载体 稳定转染
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BRD7逆转录病毒稳定系的构建及其功能评价
11
作者 张如华 胡开顺 +1 位作者 武远众 康铁邦 《分子诊断与治疗杂志》 2013年第4期240-244,共5页
目的探索BRD7(bromodomain-containing protein7)是否具有抑癌基因的功能。方法根据NCBI提供的BRD7基因序列设计特异性引物扩增其编码区序列,经酶切、连接转化后进一步挑取单克隆菌落进行菌液PCR筛选及测序鉴定得到阳性重组质粒。共转2... 目的探索BRD7(bromodomain-containing protein7)是否具有抑癌基因的功能。方法根据NCBI提供的BRD7基因序列设计特异性引物扩增其编码区序列,经酶切、连接转化后进一步挑取单克隆菌落进行菌液PCR筛选及测序鉴定得到阳性重组质粒。共转293T细胞后收集浓缩病毒上清并感染U2OS细胞,24h后用嘌呤霉素(puromycin)筛选稳定表达BRD7的细胞株。结果菌落PCR扩增及DNA测序分析证明重组pMSCV-BRD7-GFP质粒克隆成功。GFP绿色荧光结果显示,绝大部分细胞成功整合了pMSCV-GFP或pMSCV-BRD7-GFP外源质粒;Western blotting检测发现感染重组质粒pMSCV-BRD7-GFP的细胞株中BRD7蛋白的表达水平显著高于对照组。功能结果显示,过表达BRD7显著抑制U2OS细胞的增殖,促进下游靶基因p21与MDM2的表达。结论本研究成功构建了针对BRD7基因的逆转录病毒稳定系,且初步证明了BRD7发挥抑癌基因的功能,为下一步深入研究其被调控的机制与功能奠定了基础。 展开更多
关键词 BRD7 病毒载体 稳定株 抑癌基因
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质粒介导LAPTM4B过表达胰腺癌细胞株PANC-1的构建及鉴定
12
作者 张光涛 梁悦 李明华 《岭南现代临床外科》 2019年第1期44-47,共4页
目的筛选低表达LAPTM4B-35细胞株并构建质粒介导的LAPTM4B过表达胰腺癌细胞株并进行鉴定。方法通过RT-PCR及Western-Blot方法检测3种胰腺癌细胞LAPTM4B的表达,筛选出现低表达LAPTM4B细胞株。通过质粒稳定转染胰腺癌细胞PANC-1,pcDNA3.0... 目的筛选低表达LAPTM4B-35细胞株并构建质粒介导的LAPTM4B过表达胰腺癌细胞株并进行鉴定。方法通过RT-PCR及Western-Blot方法检测3种胰腺癌细胞LAPTM4B的表达,筛选出现低表达LAPTM4B细胞株。通过质粒稳定转染胰腺癌细胞PANC-1,pcDNA3.0-AE过表达LAPTM4B基因,应用RT-PCR,Western-blot进行鉴定。结果成功扩增提取pcDNA3.0-AE质粒,转染并筛选稳定细胞株。RT-PCR及Western-Blot显示相对空白对照,稳定株的过表达LAPTM4B-35明显。结论成功构建筛选低表达细胞株,并建立稳定过表达LAPTM4B的胰腺癌细胞株。 展开更多
关键词 LAPTM4B PANC-1 质粒 稳定株 胰腺癌
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稻瘟病菌稳定菌棉筛选初报
13
作者 项寿南 《丽水农业科技》 1990年第1期14-15,共2页
关键词 稻瘟病 病菌 稳定 筛选
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高色价高稳定性红曲霉菌种的选育
14
作者 梁智嫦 《湖南食品》 1998年第3期13-14,共2页
以红曲霉为出发菌株,通过紫外线、酸及高温处理,并采用定向筛选,从大量菌株中筛选出一株高色价、高稳定性菌株。其发酵温度为36℃ ̄38℃,PH范围为2.5 ̄6.5,周期144小时,色价618u/ml,色调紫红。其色价水平... 以红曲霉为出发菌株,通过紫外线、酸及高温处理,并采用定向筛选,从大量菌株中筛选出一株高色价、高稳定性菌株。其发酵温度为36℃ ̄38℃,PH范围为2.5 ̄6.5,周期144小时,色价618u/ml,色调紫红。其色价水平明显优于原生产菌株。 展开更多
关键词 红曲霉 高色价 稳定性菌 菌种选育
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黄淮麦区小麦品种矮秆基因Rht-B1b、Rht-D1b和Rht8的检测及其对农艺性状的影响 被引量:24
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作者 张德强 宋晓朋 +6 位作者 冯洁 马文洁 武炳瑾 张传量 崔紫霞 冯毅 孙道杰 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期975-981,共7页
为了解黄淮麦区小麦品种主要矮秆基因的分布和利用状况及其与主要农艺性状的关系,利用分子标记结合系谱分析对黄淮麦区20世纪及近年来新育成的129份小麦品种所含矮秆基因Rht-B1b、Rht-D1b和Rht8进行检测,并结合田间株高、基部茎秆直径... 为了解黄淮麦区小麦品种主要矮秆基因的分布和利用状况及其与主要农艺性状的关系,利用分子标记结合系谱分析对黄淮麦区20世纪及近年来新育成的129份小麦品种所含矮秆基因Rht-B1b、Rht-D1b和Rht8进行检测,并结合田间株高、基部茎秆直径和壁厚、小穗数、穗粒数、千粒重及不同播期条件下的株高差等农艺性状的调查结果,分析比较了不同矮秆基因对农艺性状的影响。结果表明,129份小麦品种中,含Rht-B1b基因的品种有37份,含Rht-D1b基因的品种有73份,含Rht8基因的品种有89份,不含这3个矮秆基因的品种有6份,所占比例分别为28.68%、56.59%、68.99%和4.65%。其中,同时含Rht-B1b和Rht-D1b的品种有1份,同时含Rht-B1b和Rht8的品种有29份,同时含Rht-D1b和Rht8的品种有44份,同时含Rht-B1b、Rht-D1b和Rht8的品种有1份。不同矮秆基因及其组合的品种,在小穗数、基部茎秆直径及基部茎秆壁厚等性状上无显著差异,但仅含Rht8基因的品种的千粒重、基部茎秆直径及壁厚均大于其他基因型,并且能够显著增加穗粒数。不同矮秆基因的降秆作用强度依次为Rht-D1b>Rht-B1b>Rht8,并具有累加效应。在不同播期条件下,除不含矮秆基因材料外仅含Rht8的品种的株高稳定性最佳,仅含Rht-B1b的品种株高稳定性最差。仅含Rht-B1b的品种小穗数最高,但千粒重却最低,并显著低于不含这3个矮秆基因的品种。以上结果表明,虽然矮秆基因Rht8的降秆作用较弱,但其对农艺性状的有利贡献较多,且在不同播期环境条件下株高稳定性较好,因此在未来小麦育种中应注重矮秆基因Rht8的利用。 展开更多
关键词 小麦 矮秆基因 分子标记 农艺性状 稳定
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Pathogen_resistant Transgenic Plant of Brassica pekinensis by Transfering Antibacterial Peptide Gene and Its Genetic Stability 被引量:16
16
作者 王关林 方宏筠 +2 位作者 王火旭 李洪艳 魏毓堂 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2002年第8期951-955,共5页
The soft rot infected by pathogenic bacterium Erwinia aroideae Holland is one of the three serious diseases of Chinese cabbage ( Brassica pekinensis Rupr.). By constructing vector system of high frequency transformati... The soft rot infected by pathogenic bacterium Erwinia aroideae Holland is one of the three serious diseases of Chinese cabbage ( Brassica pekinensis Rupr.). By constructing vector system of high frequency transformation mediated by Agrobacterium tunefaciens EHA105, anti-bacterial peptide gene with strong bactericidal action to pathogenic bacteria was introduced into Chinese cabbage AB-81 self-bred line and the transgenic plants were obtained. PCR and Southern blotting detection showed that target gene was integrated into plant genome of Chinese cabbage. The tests of bacteriostasis action of the extract from transgenic plants in vitro, and the assay of disease-resistant of transgenic plantlets in the tube and the pot by perfusing inoculation with pathogenic bacteria showed obvious resistance to soft rot. This resistance can be a stable heredity by genetic analysis of generations of transgenic plants self-bred, separation ratio of its R, was 3:1. The resistance to Km and disease of soft rot was still kept in the R-5. These results indicated the possibility of breeding new varieties of anti-soft rot Chinese cabbage by transgenic plants as parents. 展开更多
关键词 Brassica pekinensis antibacterial peptide gene TRANSFORMATION soft rot
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包装西尼罗假病毒稳定细胞株的建立 被引量:1
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作者 卢星 孙莹 +8 位作者 陈国江 王晶 乔春霞 罗龙龙 李新颖 刘成华 沈倍奋 冯健男 肖鹤 《军事医学》 CAS 2022年第10期763-767,共5页
目的 为方便制备西尼罗假病毒,建立可包装西尼罗假病毒的稳定细胞系。方法 构建表达西尼罗病毒(WNV)结构蛋白C、prM和E蛋白的重组质粒pcDNA3.1-CME,转染BHK21细胞后,G418(1 mg/ml)加压筛选;利用流式细胞术、间接免疫荧光染色(IFA)以及We... 目的 为方便制备西尼罗假病毒,建立可包装西尼罗假病毒的稳定细胞系。方法 构建表达西尼罗病毒(WNV)结构蛋白C、prM和E蛋白的重组质粒pcDNA3.1-CME,转染BHK21细胞后,G418(1 mg/ml)加压筛选;利用流式细胞术、间接免疫荧光染色(IFA)以及Western印迹确证稳定细胞株中3种结构蛋白C、prM以及E蛋白的表达;利用103稀释的含海肾荧光素酶报告基因的WNV假病毒上清感染稳定细胞株,检测荧光素酶活性。结果与结论 所构建的稳定细胞株表达结构蛋白C、prM以及E蛋白;其被WNV假病毒感染后分泌的上清进一步感染BHK21细胞后,BHK21细胞产生荧光,证实该稳定细胞株能够包装出WNV假病毒。 展开更多
关键词 西尼罗假病毒 病毒包装 稳定株 重组质粒 BHK21细胞
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乌克兰大麻遗传育种研究 被引量:12
18
作者 王殿奎 《中国麻业》 2005年第5期231-234,共4页
本文通过翻译归纳整理乌克兰大麻方面的科技文献资料,详细介绍了乌克兰大麻科研发展概况、在新品种选育的不同历史发展阶段获取的成绩。特别详尽地介绍了大麻性别遗传、同株稳定性的遗传和育种技术方法等大麻遗传学方面的成就。
关键词 大麻育种 雌雄同 稳定 低毒
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耐热新城疫弱毒株及其热稳定机制研究进展 被引量:5
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作者 曹永忠 张小荣 +3 位作者 黄国胜 刘倩 吴艳涛 刘秀梵 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS 北大核心 2017年第1期20-25,共6页
新城疫严重危害养禽业发展,筛选和创制耐热的新城疫弱毒疫苗株具有重要的经济意义。综述国内外耐热新城疫弱毒株的筛选培育研究进展,概述目前作为疫苗株或疫苗候选株的生物学特性、免疫学特性及其应用情况,讨论国内外关于新城疫耐热株... 新城疫严重危害养禽业发展,筛选和创制耐热的新城疫弱毒疫苗株具有重要的经济意义。综述国内外耐热新城疫弱毒株的筛选培育研究进展,概述目前作为疫苗株或疫苗候选株的生物学特性、免疫学特性及其应用情况,讨论国内外关于新城疫耐热株的热稳定机制主要研究结果,对开展新城疫病毒耐热分子机制解析和新型耐热疫苗株创制进行了展望。 展开更多
关键词 新城疫病毒 稳定弱毒 稳定机制
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生产株性稳定的番木瓜组培苗的方法
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作者 陈健 陈国华 +1 位作者 游恺哲 吴坤林 《科技开发动态》 2004年第8期34-34,共1页
关键词 番木瓜 组培苗 组织培养 稳定 生产方法
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