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幽门螺杆菌空泡形成细胞毒素A亚单位的克隆表达和P37抗体的制备 被引量:1
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作者 杨贵珍 刘钟滨 +3 位作者 袁建平 胡宝瑜 时晓东 郭晓奎 《胃肠病学》 2006年第9期542-546,共5页
背景:空泡形成细胞毒素A(VacA)是幽门螺杆菌(H.pylori)的重要致病因子,研究VacA的致病机制有助于进一步明确H.pylori的致病机制。目的:原核表达H.pyloriVacA亚单位P37和P58,制备P37多克隆抗体并分析其活性。方法:以聚合酶链反应(PCR)扩... 背景:空泡形成细胞毒素A(VacA)是幽门螺杆菌(H.pylori)的重要致病因子,研究VacA的致病机制有助于进一步明确H.pylori的致病机制。目的:原核表达H.pyloriVacA亚单位P37和P58,制备P37多克隆抗体并分析其活性。方法:以聚合酶链反应(PCR)扩增H.pylorivacA基因的p37和p58片段,克隆入原核表达载体pQE31,构建重组质粒pQE31-p37和pQE31-p58,转化大肠杆菌(E.coli)M15,诱导蛋白表达。以镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)亲和层析纯化融合蛋白,以纯化P37蛋白免疫家兔,获取抗P37血清,以酶联免疫吸附测定(ELISA)检测抗体效价。以蛋白质印迹法(Westernblot)分析P37抗体与VacA的结合能力,观察P37抗体对VacA致胃癌细胞空泡化的抑制作用。结果:十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示,E.coliM15经诱导后表达相对分子质量分别为37kDa(1Da=0.9921u)和58kDa的P37和P58融合蛋白,经纯化后为单一蛋白。纯化P37蛋白免疫家兔后获得的抗P37血清抗体效价为1×106。P37抗体能中和VacA阳性H.pylori分泌的VacA,抑制VacA对胃癌细胞的空泡化作用。结论:本实验成功构建了原核表达载体pQE31-p37和pQE31-p58,获得了高纯度单一蛋白和高效价P37抗体,该抗体具有中和VacA毒性的作用。 展开更多
关键词 螺杆菌 幽门 空泡形成细胞毒素A 克隆 分子 抗体
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幽门螺杆菌vacA基因型和cagA基因及其表达产物与胃十二指肠疾病的关系
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作者 刘厚钰 张尤历 《现代消化及介入诊疗》 2000年第1期29-31,共3页
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染是慢性胃炎(chronic gastritis,CG)和消化性溃疡(peptic ulcer,PU)的病因之一。也是胃癌(gastric cancer,GC)的危险因素。Hp的空泡形成毒素基因(vacuolating toxin gene,vacA)型和细胞毒素... 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染是慢性胃炎(chronic gastritis,CG)和消化性溃疡(peptic ulcer,PU)的病因之一。也是胃癌(gastric cancer,GC)的危险因素。Hp的空泡形成毒素基因(vacuolating toxin gene,vacA)型和细胞毒素相关基因(cytotoxin-associated gene,cagA) 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 Hp 空泡形成毒素基因 VACA 细胞毒素相关基因 cagA 空泡形成细胞毒素 胃十二指肠疾病
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幽门螺杆菌cagA基因和血清CagA抗体与VacA表达关系的研究
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作者 张尤历 刘厚钰 《中国临床医学杂志》 1999年第4期324-326,共3页
目的:探讨幽门螺杆菌cagA基因和血清CagA抗体与VacA表达的关系。方法:用聚合酶镇反应法(PCR)测定由62例慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者胃窦粘膜分离获得Hp菌株;用酶免疫技术测定患者血清HpCagA抗体;用Hela细胞培养法测定Hp菌株V... 目的:探讨幽门螺杆菌cagA基因和血清CagA抗体与VacA表达的关系。方法:用聚合酶镇反应法(PCR)测定由62例慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者胃窦粘膜分离获得Hp菌株;用酶免疫技术测定患者血清HpCagA抗体;用Hela细胞培养法测定Hp菌株VacA活性。结果:cagA基因阳性和阴性Hp菌株表达VacA阳性率分别为40.00%和33.33%(P>0.05);血清CagA抗体阳性和阴性患者感染Hp菌株体外产生VacA阳性率分别为33.33%和42.11%(P>0.05)。结论:HpcagA基因和血清CagA抗体与VacA表达之间无相互依赖关系,vacA基因是一个独立的标志物。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 空泡形成细胞毒素 CAGA基因 CAGA抗体
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不同基因型幽门螺杆菌感染与三联疗法根除治疗关系探讨 被引量:1
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作者 赵建军 王江滨 杨蕾 《中华消化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期371-372,共2页
关键词 幽门螺杆菌感染 三联疗法 细胞毒素相关基因 CAGA 空泡形成细胞毒素基因
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Lack of correlation of vacA genotype, cagA gene of Helicobacter pylori and their expression products with various gastroduodenal diseases 被引量:1
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作者 张尤历 刘厚钰 周康 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2001年第7期31-34,104,共5页
Abstract:Objective To investigate the correlation among vacA genotypes, cagA gene, VacA, serum CagA antibodies of Helicobacter pylori (H. pylori) and gastroduodenal diseases. Methods vacA genotypes and cagA gene of 62... Abstract:Objective To investigate the correlation among vacA genotypes, cagA gene, VacA, serum CagA antibodies of Helicobacter pylori (H. pylori) and gastroduodenal diseases. Methods vacA genotypes and cagA gene of 62 H. pylori strains isolated from patients with chronic gastritis, peptic ulcer and gastric cancer were tested by polymerase chain reaction, and Hela cell assay for VacA activity in vitro. Serum CagA antibodies were measured by EIA method in the same patients.Results All 62 H. pylori strains possessed the vacA gene and vacA genotypes of all strains were type s1a/m2. Total positive rate of cagA gene was 56.45%; the positive rates of cagA gene of H. pylori strains isolated from patients with chronic gastritis, peptic ulcer and gastric cancer were 55.56%, 54.17% and 63.64%, respectively (P>0.05). The total positive rate of VacA was 37.10%; the positive rates of VacA produced by H. pylori strains isolated from patients with chronic gastritis, peptic ulcer and gastric cancer were 33.33%, 29.17% and 63.64%, respectively (P>0.05). The positive rates of CagA antibodies in patients with chronic gastritis, peptic ulcer and gastric cancer were 70.37%, 79.17% and 40.00%, respectively (P>0.05). The total positive rate of CagA antibodies was 68.85%.Conclusion There was no correlation among cagA gene and vacA genotypes of H. pylori, VacA, serum CagA antibodies and various gastroduodenal diseases. 展开更多
关键词 Helicobacter pylori · vacuolating toxin gene · cytotoxin associated gene · vacuolating cytotoxin · cytoyoxin associated protein · gastroduodenal disease
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