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端粒酶转录酶及其调节相关蛋白与增殖细胞核抗原在卵巢上皮性肿瘤中的表达及临床意义 被引量：3
1
作者 高冬霞 吕彧 +4 位作者 吕英志 马彩红 王玉萍 张波 廖松林 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期319-322,共4页
目的　探讨端粒酶转录酶 (hTERT)及端粒酶调节相关蛋白 (TRAP)与增殖细胞核抗原(PCNA)在卵巢上皮性肿瘤中的表达和临床意义。方法　收集 10 6例卵巢上皮性肿瘤 (恶性 5 4例 ,交界性 33例 ,良性 19例 )的临床资料 ,行hTERT、TRAP和PCNA ... 目的　探讨端粒酶转录酶 (hTERT)及端粒酶调节相关蛋白 (TRAP)与增殖细胞核抗原(PCNA)在卵巢上皮性肿瘤中的表达和临床意义。方法　收集 10 6例卵巢上皮性肿瘤 (恶性 5 4例 ,交界性 33例 ,良性 19例 )的临床资料 ,行hTERT、TRAP和PCNA 3种抗体的免疫组织化学标记链霉素卵白素生物素 (LSAB)法染色。对 87例恶性和交界性患者进行了随访 ,4 5例获结果 ,随访时间为 2～6 0个月。结果　hTERT蛋白的表达在良性 (4/ 19)和交界性 (90 9% ,30 / 33)以及良性和恶性(94 4 % ,5 1/ 5 4 )间的差异均有显著性 (P均 <0 0 0 1) ,TRAP蛋白的表达在良性 (4/ 15 )和恶性(77 8% ,2 8/ 36 )间的差异有显著性 (P <0 0 0 1) ;hTERT和TRAP蛋白的表达在卵巢癌Ⅰ、Ⅱ期和Ⅲ、Ⅳ期两组病例中的差异均无显著性 (P >0 0 5 ,P >0 3)。PCNA的表达在良性 (6 9± 5 9) %和交界性 (2 6 4± 17 8) %、良性和恶性 (5 1 8± 2 2 1) %以及交界性和恶性间的差异均有显著性 (P <0 0 1,P <0 0 0 1,P <0 0 5 )。 33例交界性患者全部存活 ,5 4例恶性患者中 35例 (6 4 8% )有转移 (包括 5例淋巴结转移 ) ,4例 (7 4 % )死亡。结论　hTERT和TRAP蛋白的表达与卵巢上皮性肿瘤的良恶性有关 ,但与其临床分期无关 ; 展开更多
关键词 端粒酶转录酶 增殖细胞核抗原 卵巢上皮性肿瘤 基因表达 端粒酶调节相关蛋白
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人端粒酶逆转录酶基因RNAi表达载体的构建、鉴定 被引量：4
2
作者 毛立军 郑骏年 +5 位作者 李望 郑宏祥 刘俊杰 孙晓青 陈家存 温儒民 《徐州医学院学报》 CAS 2006年第1期37-39,共3页
目的构建端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的RNA干扰(RNAi)表达载体。方法化学合成能编码针对hTERT基因的短发夹RNA(shRNA)序列的寡核苷酸,退火处理后克隆到pSilencer1.0-U6 shRNA表达载体的U6RNA聚合酶Ⅲ(PolⅢ)启动子的下游,构建重组RNAi质... 目的构建端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的RNA干扰(RNAi)表达载体。方法化学合成能编码针对hTERT基因的短发夹RNA(shRNA)序列的寡核苷酸,退火处理后克隆到pSilencer1.0-U6 shRNA表达载体的U6RNA聚合酶Ⅲ(PolⅢ)启动子的下游,构建重组RNAi质粒pSliencer-hTERT。结果经酶切电泳及测序分析证实,目的序列成功插入到预计位点。结论已成功构建pSliencer-hTERT载体,为进一步研究其对端粒酶活性的抑制作用打下基础。 展开更多
关键词 RNA干扰 短发夹RNA 人端粒酶转录酶 重组质粒
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人端粒酶反转录酶和绿色荧光蛋白融合基因慢病毒表达载体的构建 被引量：7
3
作者 梁旭竞 陈小佳 +4 位作者 金玲 李丽玲 汤绍辉 陈友鹏 杨冬华 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2009年第15期2931-2936,共6页
背景:外源性端粒酶反转录酶的表达可重建端粒酶活性,诱导细胞永生化。目的:采用慢病毒载体作为基因转移载体,克隆人端粒酶反转录酶的编码区全序列,同时选用绿色荧光蛋白作为目的基因表达标志物,构建人端粒酶反转录酶慢病毒表达载体。设... 背景:外源性端粒酶反转录酶的表达可重建端粒酶活性,诱导细胞永生化。目的:采用慢病毒载体作为基因转移载体,克隆人端粒酶反转录酶的编码区全序列,同时选用绿色荧光蛋白作为目的基因表达标志物,构建人端粒酶反转录酶慢病毒表达载体。设计、时间及地点:开放性实验,单一样本观察,于2007-06/2008-03在暨南大学生物工程研究所及暨南大学附属第一医院中心实验室完成。材料:pBABE-puro-hTERT质粒由Robert Weinberg教授惠赠,质粒pDONR221,pLenti6/V5-DEST,ccdBSurvival,Stbl3及293FT细胞由暨南大学生物工程研究所提供。方法:以pBABE-puro-hTERT质粒为模板聚合酶链反应法获取目的基因人端粒酶反转录酶(包含酶切位点BglⅡ、HindⅢ),通过BP反应克隆至pDONR221,以质粒pEGFP-N1为模板,以聚合酶链反应法获取目的基因增强型绿色荧光蛋白(包含酶切位点HindⅢ,BgⅢ),通过酶切及连接反应形成pDONR221-hTERT-EGFP。采用LR重组酶将pDONR221-hTERT-EGFP和pLenti6/V5-DEST进行重组反应,形成pLenti6/V5-DEST-hTERT-EGFP。将pLenti6/V5-DEST-hTERT-EGFP与包装质粒混合,利用脂质体共转染293FT细胞。主要观察指标:通过酶切、聚合酶链式反应及测序验证重组质粒pDONR221-hTERT-EGFP和pLenti6/V5-DEST-hTERT-EGFP是否构建成功。包装重组慢病毒,应用荧光显微镜观察报告基因绿色荧光蛋白在293FT细胞中的表达情况。结果:测序发现慢病毒入门载体pDONR221包含目的基因hTERT1547位点存在点突变(原碱基A变成G),通过定点突变技术成功诱变并鉴定慢病毒表达载体pLenti6/V5-DEST-hTERT-EGFP成功构建。转染后的293FT细胞在荧光显微镜下观察可见强绿色荧光。结论:实验成功构建了人端粒酶反转录酶和绿色荧光蛋白融合基因的慢病毒表达载体,为人端粒酶反转录酶稳定转染提供快速、简洁的方法。 展开更多
关键词 端粒酶反转录酶 绿色荧光蛋白 慢病毒载体
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miR-1182调控胃癌细胞人端粒酶反转录酶的分子机制及其对迁移能力的影响 被引量：4
4
作者 张丹 郝宁波 +5 位作者 唐波 吕沐瀚 谢睿 胡长江 汪苏敏 杨仕明 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1074-1077,共4页
目的研究miR-1182在胃癌细胞中调控人端粒酶反转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)的机制及对其迁移能力的影响。方法胃癌细胞MKN28中转染miR-1182类似物,qRT-PCR检测转染后细胞miR-1182的相对表达量,Western blot检... 目的研究miR-1182在胃癌细胞中调控人端粒酶反转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)的机制及对其迁移能力的影响。方法胃癌细胞MKN28中转染miR-1182类似物,qRT-PCR检测转染后细胞miR-1182的相对表达量,Western blot检测转染后细胞hTERT的表达变化;进一步通过生物信息学预测miR-1182与hTERT mRNA的结合位点,双荧光素酶实验分析miR-1182对hTERT mRNA的作用机制;Transwell实验检测转染miR-1182类似物对MKN28细胞体外迁移能力的影响。结果 qRT-PCR表明miR-1182组的miR-1182的相对表达量(10.168±2.645)明显高于对照组(1.008±0.167)(P<0.01)。Western blot结果显示在胃癌细胞系中过表达miR-1182后,hTERT的蛋白水平下调。双荧光素酶实验表明miR-1182可与hTERT mRNA的ORF区结合,且其主要结合部位为hTERT mRNA的ORF-1;在Transwell迁移实验中,miR-1182类似物转染细胞后,miR-1182组穿膜细胞数为(23.333±4.509)/视野,对照组穿膜细胞数为(71.000±4.582)/视野,miR-1182组细胞迁移能力明显低于对照组(P<0.01)。结论 miR-1182通过与胃癌细胞hTERT的ORF区结合,从而在转录后水平抑制hTERT的表达,并发现其可抑制胃癌细胞的迁移能力。 展开更多
关键词 端粒酶反转录酶 miR-1182 胃肿瘤 肿瘤转移
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端粒酶反转录酶活化与p53金属蛋白酶-9表达对非小细胞肺癌发生的影响 被引量：6
5
作者 杨廷桐 李秀杰 +3 位作者 武俊芳 张艳芳 李磊 刘欣欣 《新乡医学院学报》 CAS 2007年第5期443-447,共5页
目的探讨人端粒酶反转录酶(hTERT)、p53、金属蛋白酶-9(MMP-9)与非小细胞肺癌(NSCLC)发生的内在联系及其作用。方法应用原位杂交、HE及免疫组织化学技术对104例NSCLC组织进行检测,探讨NSCLC发生的分子机制及诊断的可能性。结果(1)hTERT ... 目的探讨人端粒酶反转录酶(hTERT)、p53、金属蛋白酶-9(MMP-9)与非小细胞肺癌(NSCLC)发生的内在联系及其作用。方法应用原位杂交、HE及免疫组织化学技术对104例NSCLC组织进行检测,探讨NSCLC发生的分子机制及诊断的可能性。结果(1)hTERT mRNA、p53、MMP-9在NSCLC中均有较高的表达,阳性率分别为73.08%,69.23%,84.62%。(2)hTERT mRNA在鳞癌中表达为64.71%,腺癌中为88.89%(2χ=6.997,P<0.01)。(3)p53与hTERT mRNA阳性表达呈正相关性(r=0.651,P<0.05),二者的阳性共表达为53.85%,一致性表达为65.40%。p53与MMP阳性表达呈正相关性(r=0.477,P<0.05),二者的阳性共表达为53.85%,一致性表达为53.85%。hTERT mRNA与MMP-9阳性表达呈正相关性(r=0.671,P<0.01),二者阳性共表达率为71.15%,一致性表达率为75.00%。结论p53、hTERT mRNA、MMP-9具有协同促进NSCLC发生的作用;hTERT mRNA的表达与NSCLC的类型有关。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 人端粒酶反转录酶 P53 金属蛋白酶-9
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RNA干扰端粒酶反转录酶基因慢病毒表达载体的构建及鉴定 被引量：7
6
作者 宋扬 徐韬 +3 位作者 杨明坤 王国旗 张恩丰 盛伟斌 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第11期1724-1729,共6页
背景:端粒酶反转录酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)对端粒酶活化起重要作用,但利用构建针对其基因的慢病毒抑制其在脊髓星形胶质细胞中的表达却少有报道。目的:构建用于RNA干扰的靶向大鼠脊髓源星形胶质细胞端粒酶反转录酶... 背景:端粒酶反转录酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)对端粒酶活化起重要作用,但利用构建针对其基因的慢病毒抑制其在脊髓星形胶质细胞中的表达却少有报道。目的:构建用于RNA干扰的靶向大鼠脊髓源星形胶质细胞端粒酶反转录酶基因的慢病毒载体,并观察其对端粒酶反转录酶表达的抑制作用。方法:通过设计合成出shRNA-TERT序列,经聚合酶链反应扩增后定向连接到pLentilox3.7U6载体上构建重组质粒,经转染DH5α细胞筛选阳性菌落后行测序鉴定。将pLentilox3.7U6-TERT重组质粒转染293T细胞,包装产生重组慢病毒Le-TERT并测定其滴度,再用Le-TERT感染大鼠脊髓星形胶质细胞,实时定量-聚合酶链反应检测各细胞株TERT基因表达水平,并利用Western blot和免疫荧光分别检测TERT蛋白的表达。结果与结论:基因测序鉴定证明,pLentilox3.7U6-TERT重组质粒构建成功,并成功包装慢病毒。实时定量PCR、Western blot和免疫荧光检测结果表明,Le-TERT转染星形胶质细胞4 d后,对TERT mRNA的干扰效率可达(63.98±2.6)%,Le-TERT在转然后的星形胶质细胞中呈低表达。结果证实,实验构建的重组表达载体pLentilox3.7U6-TERT能够产生有效滴度的慢病毒,感染大鼠脊髓星形胶质细胞后,该载体可以有效抑制TERT的表达。 展开更多
关键词 组织构建 组织工程 组织构建基础实验 RNA干扰 端粒酶 端粒酶反转录酶 质粒载体 慢病毒 星形胶质细胞 短发夹RNA 脊髓损伤 胶质瘢痕 国家自然科学基金
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不同发育阶段人表皮干细胞端粒酶反转录酶表达的比较 被引量：4
7
作者 刘德伍 黄培信 +3 位作者 毛远桂 陈剑平 蓝蔚 王联群 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2007年第50期10025-10029,共5页
目的:目前已知端粒酶活性的丧失及其增殖相关基因表达的改变是造成多种成体干细胞体外复制和扩增受限的主要原因,而端粒酶反转录酶对端粒酶活性起关键作用。体外分离培养人胚胎、少儿、成人3种不同皮肤来源的表皮干细胞,对比观察不同发... 目的:目前已知端粒酶活性的丧失及其增殖相关基因表达的改变是造成多种成体干细胞体外复制和扩增受限的主要原因,而端粒酶反转录酶对端粒酶活性起关键作用。体外分离培养人胚胎、少儿、成人3种不同皮肤来源的表皮干细胞,对比观察不同发育阶段端粒酶反转录酶表达的差异。方法:实验于2005-09/2007-04在南昌大学第一附属医院烧伤研究所完成。①对象:因创伤等原因致意外流产的妊娠24～26周龄胎儿皮肤标本,4～12周岁少儿及25～45岁成年人烧伤整形植皮手术剩余皮片标本,分别由南昌大学第一附属医院产科、烧伤科提供,产妇与烧伤患者对治疗及实验均知情同意,实验经医院医学伦理委员会批准。②实验方法:取胎儿、少儿和成年人的全层皮肤,用胰蛋白酶和EDTA联合消化法分离表皮,胶原快速贴附法纯化人表皮干细胞,用未黏附的角质细胞作为对照,以含表皮生长因子、角质细胞无血清培养液组成的表皮干细胞培养基进行体外培养。③实验评估:通过β_1整合素、角蛋白19、p63免疫细胞化学染色对培养细胞进行鉴定,计算克隆形成率。以免疫细胞化学染色法和图像定量分析法检测3种不同皮肤来源的表皮干细胞端粒酶反转录酶的表达差异。结果:①细胞生长特征:分离培养的人表皮干细胞呈明显克隆性生长,克隆形成率高于角质细胞对照组(P<0.05)。②表皮干细胞的鉴定:细胞克隆经免疫细胞化学染色后,β_1整合素、角蛋白19、p63均呈阳性表达。③端粒酶反转录酶免疫细胞化学染色及定量表达:不同皮肤来源的表皮干细胞端粒酶反转录酶均呈阳性,但表达强度不同,人胚胎>少儿>成人。3种皮肤来源的表皮干细胞平均吸光度值和阳性面积值均随年龄增加而逐渐降低,人胚胎>少儿>成人(P<0.05)。结论:人胚胎、少儿、成人皮肤来源的表皮干细胞均有端粒酶反转录酶表达,其表达强度依次减弱。提示诱导和增强端粒酶反转录酶的表达对维持表皮干细胞在体外自我更新和增殖能力可能具有重要意义。 展开更多
关键词 表皮干细胞 端粒酶反转录酶 发育阶段
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人端粒酶反转录酶基因诱导人永生化成骨细胞的生物学特性 被引量：5
8
作者 殷晓雪 陈仲强 +2 位作者 党耕町 郭昭庆 马庆军 《中国临床康复》 CSCD 2003年第26期3550-3551,共2页
目的:研究反转录病毒(hTERT)基因诱导的人永生化成骨细胞系Clone5的生物学特性,包括增殖能力、细胞周期和是否恶性变。方法:收集30～31代Clone5和6～7代人成骨细胞(hOB),绘制两种细胞的生长曲线并用流式细胞仪检测细胞周期特征,软琼脂... 目的:研究反转录病毒(hTERT)基因诱导的人永生化成骨细胞系Clone5的生物学特性,包括增殖能力、细胞周期和是否恶性变。方法:收集30～31代Clone5和6～7代人成骨细胞(hOB),绘制两种细胞的生长曲线并用流式细胞仪检测细胞周期特征,软琼脂集落实验和裸鼠致瘤实验检测Clone5是否恶性变。结果:由生长曲线计算出细胞倍增时间:hOB:190h;Clone5:62h;曲线显示Clone5的增殖能力明显增强;流式细胞仪检测发现,Clone5细胞周期中G1期细胞占53.46%,S期细胞占28.24%,凋亡率为0.76%,hOBG1期细胞占79.81%,S期细胞占19.76%,凋亡率为33.33%。和hOB相比,Clone5G1期细胞比例减少,S期比例增加,细胞的凋亡率显著降低;软琼脂集落实验未见细胞团形成,裸鼠接种不致瘤。结论:转导hTERT基因的Clone5增殖能力明显增强,凋亡率降低,且未发生恶性变,可用做组织工程的种子细胞和研究正常骨生理、生化的工具细胞。 展开更多
关键词 人永生化成骨细胞系 Clone5 人端粒酶反转录酶基因 生物学特性 细胞增殖 细胞周期
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榄香烯乳对胃癌细胞人端粒酶反转录酶及其启动子的影响 被引量：9
9
作者 范钰 张尤历 李华 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2006年第5期413-415,共3页
目的:观察榄香烯乳对胃癌细胞株SGC7901人端粒酶反转录酶(hTERT)表达及其启动子的影响,以深入了解榄香烯乳的抗癌机制。方法:以榄香烯乳处理胃癌细胞,分别采用实时定量PCR和免疫荧光标记法检测癌细胞hTERT mRNA和蛋白水平的表达。采用... 目的:观察榄香烯乳对胃癌细胞株SGC7901人端粒酶反转录酶(hTERT)表达及其启动子的影响,以深入了解榄香烯乳的抗癌机制。方法:以榄香烯乳处理胃癌细胞,分别采用实时定量PCR和免疫荧光标记法检测癌细胞hTERT mRNA和蛋白水平的表达。采用脂质体转染法将携带hTERT启动子和报告基因的质粒转染至胃癌细胞株SGC7901细胞中,2 h后加入不同浓度的榄香烯乳,孵育48 h后,分别检测其报告基因萤虫素酶活性。结果:榄香烯乳处理后,胃癌SGC7901细胞hTERT mRNA和蛋白水平呈浓度和时间依赖性下调。榄香烯乳处理组萤虫素酶活性下降,且呈浓度依赖性。结论:榄香烯乳可能通过下调hTERT启动子活性,抑制hTERT表达,从而抑制胃癌细胞端粒酶活性。 展开更多
关键词 榄香烯乳 胃肿瘤 端粒酶 人端粒酶反转录酶 启动子
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辛伐他汀对颅内动脉瘤大鼠端粒长度、端粒酶反转录酶及端粒重复序列结合因子2基因表达的影响 被引量：4
10
作者 张婷 闫海洋 +4 位作者 陈孝储 孙圣凯 付浩 陈旭义 王志宏 《广西医学》 CAS 2017年第8期1195-1197,1202,共4页
目的探讨辛伐他汀对颅内动脉瘤(IA)大鼠端粒长度、端粒酶反转录酶(TERT)和端粒重复序列结合因子2(TRF2)基因表达的影响。方法将36只SD大鼠分为对照组、模型组和辛伐他汀组,每组12只。对模型组及辛伐他丁组的大鼠切除双侧卵巢并结扎左侧... 目的探讨辛伐他汀对颅内动脉瘤(IA)大鼠端粒长度、端粒酶反转录酶(TERT)和端粒重复序列结合因子2(TRF2)基因表达的影响。方法将36只SD大鼠分为对照组、模型组和辛伐他汀组,每组12只。对模型组及辛伐他丁组的大鼠切除双侧卵巢并结扎左侧颈总动脉及双侧肾动脉后支以构建IA模型,对照组仅暴露相应组织及血管后缝合。建模后模型组和辛伐他汀组分别给予生理盐水及辛伐他汀灌胃。于建模后4个月,测定各组大鼠外周血白细胞端粒相对长度、TERT和TRF2 mRNA的相对表达量。结果建模后4个月,模型组和辛伐他汀组各有8只大鼠形成IA,对照组无大鼠形成IA;对照组、辛伐他汀组和模型组大鼠的端粒相对长度依次缩短(P<0.05),而对照组、模型组和辛伐他汀组TRF2 mRNA相对表达量依次升高(P<0.05);模型组和辛伐他汀组的TERT mRNA相对表达量低于对照组(P<0.05),但两组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 IA大鼠可能由于端粒酶活性降低而发生端粒长度缩短,辛伐他汀可通过促进TRF2的表达而发挥保护端粒作用。 展开更多
关键词 颅内动脉瘤 辛伐他汀 端粒 端粒酶反转录酶 端粒结合蛋白 端粒重复序列结合因子 大鼠
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人端粒酶反转录酶小发夹RNA质粒表达载体的构建及鉴定 被引量：2
11
作者 胡凡果 史玉荣 +2 位作者 牛瑞芳 刘彤 只向成 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2012年第50期9357-9363,共7页
背景:端粒酶反转录酶是端粒酶的活性亚基,已成为肿瘤研究的热点。RNA干扰技术作为一种基因沉默方法,具有高效、特异等优点,现已广泛应用于肿瘤、病毒等研究领域。目的:构建针对人端粒酶反转录酶的小发夹RNA质粒表达载体,并观察其对乳腺... 背景:端粒酶反转录酶是端粒酶的活性亚基,已成为肿瘤研究的热点。RNA干扰技术作为一种基因沉默方法,具有高效、特异等优点,现已广泛应用于肿瘤、病毒等研究领域。目的:构建针对人端粒酶反转录酶的小发夹RNA质粒表达载体,并观察其对乳腺癌T47D细胞人端粒酶反转录酶基因的表达和端粒酶活性的影响。方法:以Genbank中人端粒酶反转录酶基因的mRNA序列为基础,设计人端粒酶反转录酶基因的小干扰RNA序列,将其连接到具有G418抗性的质粒pBAsi-hU6-Neo(BamHⅠ/HindⅢ)中,应用基因测序加以验证,扩增提取质粒,以脂质体转染表达小发夹RNA的质粒到乳腺癌T47D细胞,抗生素G418筛选出转染成功的各组细胞。结果与结论:实验所构建的人端粒酶反转录酶的小发夹RNA质粒表达载体,经测序验证无误。将pBAsi-hU6-Neo重组质粒转染入T47D细胞,经G418筛选获得了转染成功的细胞。经RT-PCR和Western blot检测,转染后的人端粒酶反转录酶基因在mRNA和蛋白水平的表达均明显降低(P<0.01),经TRAP-ELISA法检测实验组细胞端粒酶活性出现显著下降(P<0.01)。结果证实,实验成功构建人端粒酶反转录酶的小发夹RNA质粒表达载体,实验所设计的小干扰RNA能有效抑制肿瘤细胞人端粒酶反转录酶基因的表达,进而降低细胞的端粒酶活性。 展开更多
关键词 乳腺癌 端粒 端粒酶 端粒酶反转录酶 端粒酶活性 小干扰RNA RNA干扰 小发夹RNA 组织构建
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胃癌患者外周血人端粒酶反转录酶 基质金属蛋白酶-7 mRNA的表达及临床意义 被引量：4
12
作者 杨牡丹 刘晓玲 +2 位作者 王春艳 高峻 张素珍 《中国药物与临床》 CAS 2012年第7期876-879,共4页
目的应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测胃癌患者外周血中人端粒酶反转录酶(HTERT)及基质金属蛋白酶(MMP)-7mRNA的表达情况,探讨其对监测胃癌血液微转移的临床意义及其对预后的影响。方法采用Trizol法提取血液标本中的总RNA,... 目的应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测胃癌患者外周血中人端粒酶反转录酶(HTERT)及基质金属蛋白酶(MMP)-7mRNA的表达情况,探讨其对监测胃癌血液微转移的临床意义及其对预后的影响。方法采用Trizol法提取血液标本中的总RNA,将其反转录成cDNA,然后用RT-PCR技术检测血液标本中MMP-7mRNA和HTERTmRNA表达,计算样本的△Ct值。结果 126例胃癌患者中,HTERTmRNA阳性58例,阴性68例。MMP-7mRNA阳性46例,阴性80例。不同性别、年龄、分化程度的胃癌患者外周血HTERT、MMP-7mRNA阳性率差异无统计学意义。Ⅲ、Ⅳ期患者外周血HTERTmRNA阳性率较Ⅰ、Ⅱ期患者明显增高,差异有统计学意义。有远处转移的胃癌患者较无远处转移的患者外周血HTERT、MMP-7mRNA阳性率明显增高,差异有统计学意义。癌胚抗原阳性患者外周血HTERT、MMP-7mRNA阳性率较癌胚抗原阴性的患者明显增高,差异有统计学意义。无远处转移的胃癌患者中,HTERT、MMP-7阳性与阴性患者复发转移情况比较,检测后6、12个月HTERT阳性组较阴性组肿瘤复发转移率显著增高,差异有统计学意义。检测后12个月MMP-7阳性组较阴性组肿瘤复发转移率增高,差异有统计学意义。结论胃癌患者外周血HTERT及MMP-7mRNA表达对早期发现血液微转移及预后具有重要意义,值得进一步研究。 展开更多
关键词 胃肿瘤 基质溶解因子 聚合酶链反应 人端粒酶反转录酶
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妊娠期肝内胆汁淤积症患者胎盘线粒体呼吸链酶活性和端粒酶反转录酶改变的研究 被引量：2
13
作者 黄鼎 程蔚蔚 +2 位作者 张慧娟 刘特 秦蕾 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期248-253,I0004,共7页
目的研究胎盘滋养细胞线粒体呼吸链酶活性及端粒酶反转录酶(hTERT)的表达与妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)的关系。方法选取27例ICP患者(ICP组)及18例正常孕妇(对照组),采用酶组织化学法分析各组胎盘滋养细胞中线粒体呼吸链酶活性,采用免疫... 目的研究胎盘滋养细胞线粒体呼吸链酶活性及端粒酶反转录酶(hTERT)的表达与妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)的关系。方法选取27例ICP患者(ICP组)及18例正常孕妇(对照组),采用酶组织化学法分析各组胎盘滋养细胞中线粒体呼吸链酶活性,采用免疫组织化学方法检测各组胎盘滋养细胞中hTERT的表达情况,采用实时荧光定量聚合酶链反应定量检测各组胎盘中hTERTmRNA的表达情况。结果细胞色素c氧化酶、三磷酸腺苷酶和琥珀酸脱氢酶在ICP组(包括ICP轻度亚组及ICP重度亚组)和对照组胎盘滋养细胞中的表达均呈阳性,ICP组上述酶活性均显著低于对照组(P值分别<0.05、0.01)。hTERT在ICP组(112.67±41.40)、ICP轻度亚组(109.56±42.66)及ICP重度亚组(118.89±40.46)胎盘滋养细胞中的表达水平均显著高于对照组(29.06±14.30,P值均<0.05)。ICP轻度亚组与ICP重度亚组间的线粒体呼吸链酶活性和hTERT表达水平的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。ICP组、ICP轻度亚组、ICP重度亚组及对照组hTERTmRNA的表达水平分别为3.10±0.12、3.32±0.13、2.66±0.22、2.76±0.08,18srRNA的表达水平分别为0.09±0.11、0.13±0.14、0.23±0.24、0.10±0.11,各组间hTERTmRNA和18srRNA表达水平的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论 ICP患者胎盘绒毛受损,滋养细胞线粒体呼吸链酶活性下降,hTERT蛋白表达的增加无法弥补增多的细胞凋亡,机体失代偿,导致胎盘功能下降,这可能是ICP胎儿宫内缺氧的一种发生机制。 展开更多
关键词 妊娠期肝内胆汁淤积症 线粒体呼吸链酶 端粒酶反转录酶 胎盘
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人端粒酶反转录酶和脆性组氨酸三联体基因在口腔鳞癌中的表达及意义 被引量：3
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作者 孟彦 郗彦凤 +2 位作者 韩飞 吴雨雷 高太虎 《中国药物与临床》 CAS 2012年第11期1421-1423,共3页
端粒酶被认为是迄今为止最具有人体肿瘤特异性和敏感性的分子标志物,人端粒酶反转录酶（human telomerase reverse transcriptase,hTRT）是端粒酶活性的限速酶,只在端粒酶阳性的肿瘤细胞和永生化细胞中表达,与端粒酶活性平行相关[1]。... 端粒酶被认为是迄今为止最具有人体肿瘤特异性和敏感性的分子标志物,人端粒酶反转录酶（human telomerase reverse transcriptase,hTRT）是端粒酶活性的限速酶,只在端粒酶阳性的肿瘤细胞和永生化细胞中表达,与端粒酶活性平行相关[1]。脆性组氨酸三联体基因（fragile histidine triad,FHIT）是1996年发现的一种抑癌基因, 展开更多
关键词 脆性组氨酸三联体基因 人端粒酶反转录酶 口腔鳞癌 端粒酶活性 分子标志物 肿瘤特异性 永生化细胞 肿瘤细胞
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人端粒酶反转录酶启动子的克隆与肿瘤靶向治疗的研究 被引量：2
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作者 李帆 谭晓华 +2 位作者 彭晓君 蔡红兵 胡大荣 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第2期207-211,共5页
目的克隆hTERT启动子,并观察hTERT启动子调控下tk/GCV系统对人肺癌细胞系A549的特异性杀伤效果。方法设计特异性引物,以HepG2基因组DNA为模板,用PCR方法扩增hTERT启动子;分别构建hTERT启动子和hCMV启动子调控的LacZ、tk基因真核表达载体... 目的克隆hTERT启动子,并观察hTERT启动子调控下tk/GCV系统对人肺癌细胞系A549的特异性杀伤效果。方法设计特异性引物,以HepG2基因组DNA为模板,用PCR方法扩增hTERT启动子;分别构建hTERT启动子和hCMV启动子调控的LacZ、tk基因真核表达载体;将上述质粒用脂质体转染A549细胞和人胚肺成纤维细胞系MRC5后,通过RT-PCR和β-Gal染色观察hTERT启动子工作情况;用MTT法检测不同浓度的GCV对A549和MRC5细胞的细胞毒作用。结果成功克隆hTERT上游-280bp^+40bp的核心启动子。RT-PCR和β-Gal染色显示hTERT启动子能有效地调控其下游tk基因、LacZ基因在端粒酶阳性的肿瘤细胞中特异性转录和表达;hTERT启动子调控的tk/GCV系统对端粒酶阳性的肿瘤细胞系A549有明显的特异性杀伤效应。结论hTERT启动子可特异性地调控目的基因在端粒酶阳性的肿瘤细胞中表达而不影响正常的细胞,表明端粒酶启动子调控自杀基因的表达是一种很有希望的肿瘤靶向基因治疗策略。 展开更多
关键词 肿瘤 HTERT启动子 GCV 调控 表达 人端粒酶反转录酶 特异性杀伤 克隆 目的基因 LACZ基因
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靶向端粒酶反转录酶基因短发夹RNA载体的构建 被引量：2
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作者 宋扬 徐韬 +1 位作者 杨明坤 盛伟斌 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第7期1057-1062,共6页
背景:端粒酶反转录酶对端粒酶活化起重要作用。目的:利用pLentilox3.7.U6载体构建靶向大鼠脊髓星形胶质细胞端粒酶反转录酶基因的短发夹RNA干扰分子表达载体并鉴定其作用。方法:选择端粒酶反转录酶基因上两段序列体外合成RNA干扰分子的... 背景:端粒酶反转录酶对端粒酶活化起重要作用。目的:利用pLentilox3.7.U6载体构建靶向大鼠脊髓星形胶质细胞端粒酶反转录酶基因的短发夹RNA干扰分子表达载体并鉴定其作用。方法:选择端粒酶反转录酶基因上两段序列体外合成RNA干扰分子的正义链和反义链模板序列,经退火成互补双链,与线性化pLentilox3.7.U6载体连接、转化大肠杆菌和序列测定,应用蛋白质印迹和免疫荧光技术,在体外培养的大鼠脊髓星形胶质细胞模型上验证构建的干扰载体抑制端粒酶反转录酶基因表达的效果。结果与结论:蛋白质印迹和免疫荧光检测结果表明,重组质粒干扰组中星形胶质细胞端粒酶反转录酶均呈低表达。结果证实,实验成功构建了针对大鼠脊髓星形胶质细胞端粒酶反转录酶基因的短发夹RNA质粒表达载体,此载体能有效抑制体外培养的大鼠脊髓星形胶质细胞端粒酶反转录酶的表达。 展开更多
关键词 组织构建 组织工程 RNA干扰 端粒酶 端粒酶反转录酶 质粒载体 星形胶质细胞 短发夹RNA 脊髓损伤 胶质瘢痕 国家自然科学基金
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端粒酶反转录酶基因在肝细胞癌中的表达及其意义 被引量：2
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作者 张营 赵金满 尚海 《中国全科医学》 CAS CSCD 2008年第11期951-953,共3页
目的研究肝细胞癌中端粒酶反转录酶（human telomerase reverse transcriptase,hTERT）基因的表达及其临床意义。方法采用原位杂交方法分别对肝细胞癌及肝炎后肝硬化组织中hTERTmRNA进行检测。结果肝癌中hTERTmRNA表达阳性率明显高于肝... 目的研究肝细胞癌中端粒酶反转录酶（human telomerase reverse transcriptase,hTERT）基因的表达及其临床意义。方法采用原位杂交方法分别对肝细胞癌及肝炎后肝硬化组织中hTERTmRNA进行检测。结果肝癌中hTERTmRNA表达阳性率明显高于肝硬化组织,差别有统计学意义（P〈0.01）;中、低分化的肝癌hTERT mRNA阳性强度高于高分化者,差别有统计学意义（P〈0.05）;肝癌中hTERTmRNA表达阴性组患者术后3年生存率高于阳性组患者,差别有统计学意义（P〈0.05）;hTERTmRNA表达弱阳性的肝癌患者生存时间较强阳性者延长,差别有统计学意义（P〈0.05）。结论hTERTmRNA阳性表达普遍存在于肝癌组织中,通过检测肝癌中hTERTmRNA表达情况可用来作为肝癌诊断及预后估计的新标志物。 展开更多
关键词 端粒酶 端粒酶反转录酶mRNA 肝细胞癌 肝硬化 预后
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胃癌形成过程中端粒酶反转录酶基因表达及启动子甲基化状态分析 被引量：1
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作者 申去非 徐晋珩 +1 位作者 赵建业 王正晖 《新乡医学院学报》 CAS 2013年第1期16-19,共4页
目的探索端粒酶反转录酶(hTERT)基因表达情况及启动子区甲基化状态在胃癌形成过程中的变化情况。方法提取正常胃黏膜、胃癌前病变和胃癌3组组织样本的基因组DNA。用聚合酶链反应(PCR)特异性扩增其hTERT基因,用琼脂糖凝胶电泳检测3组组... 目的探索端粒酶反转录酶(hTERT)基因表达情况及启动子区甲基化状态在胃癌形成过程中的变化情况。方法提取正常胃黏膜、胃癌前病变和胃癌3组组织样本的基因组DNA。用聚合酶链反应(PCR)特异性扩增其hTERT基因,用琼脂糖凝胶电泳检测3组组织样本中hTERT基因表达的阳性率;用亚硫酸氢盐修饰上述各组标本DNA,然后检测修饰后的hTERT序列:启动子区CpG位点,未发生甲基化的胞嘧啶(C)变为尿嘧啶(U);在启动子区不含CpG位点的位置,进行引物设计,然后利用PCR进行扩增。扩增产物序列与原序列比对,观察启动子区甲基化情况。结果 hTERT基因在胃癌组表达的阳性率最高,在癌前病变组表达的阳性率明显降低,而在正常胃黏膜组中不表达,3组组织样本hTERT表达阳性率比较差异均有统计学意义(P<0.05)。hTERT启动子区甲基化程度在胃癌组中最高,在胃癌前病变组中明显降低,而在正常胃黏膜中甲基化程度最低,3组组织样本hTERT启动子区甲基化程度比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 hTERT启动子区甲基化程度在正常胃黏膜、胃癌前病变和胃癌中依次升高,故hTERT启动子区甲基化程度的变化可作为胃癌形成过程中肿瘤早期诊断的潜在分子生物学标志。 展开更多
关键词 胃癌 端粒酶反转录酶 癌前病变 启动子 甲基化
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人端粒酶反转录酶对人胚胎皮质神经元损伤的保护 被引量：1
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作者 魏桂芬 刘妍 +2 位作者 李艳玲 张惠爱 孔令平 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第28期5229-5235,共7页
背景:端粒酶可维持端粒长度,避免细胞复制性衰老和凋亡,其催化亚基端粒酶反转录酶还具有抗凋亡和调节细胞生存的作用。目的:观察人端粒酶反转录酶对β淀粉样蛋白1-40引起的人胚胎皮质神经元损伤的影响。方法:分离和培养12-16周龄人胚胎... 背景:端粒酶可维持端粒长度,避免细胞复制性衰老和凋亡,其催化亚基端粒酶反转录酶还具有抗凋亡和调节细胞生存的作用。目的:观察人端粒酶反转录酶对β淀粉样蛋白1-40引起的人胚胎皮质神经元损伤的影响。方法:分离和培养12-16周龄人胚胎皮质神经元,将人端粒酶反转录酶基因重组腺病毒转染至神经元。免疫细胞化学法检测人端粒酶反转录酶基的表达,端粒重复序列扩增酶联免疫吸附法检测端粒酶活性。转染后第3天,给予10μmol/Lβ淀粉样蛋白1-40作用24h后,应用MTT检测细胞活力。荧光探针2’7’-二乙酰二氯荧光素标记检测细胞内活性氧水平,比色法测定细胞匀浆中谷胱甘肽含量。结果与结论:转染后第3天,人端粒酶反转录酶的表达最高,并重建了其端粒酶活性;10μmol/Lβ淀粉样蛋白1-40显著降低神经元的细胞活力和谷胱甘肽的含量(P<0.05和P<0.01),升高活性氧水平(P<0.05)。转染了人端粒酶反转录酶基因的神经元能显著对抗β淀粉样蛋白1-40的毒性作用,增加细胞的活力和谷胱甘肽含量(P<0.05和P<0.01),降低活性氧水平(P<0.05)。结果表明,人端粒酶反转录酶对β淀粉样蛋白1-40引起的人胚胎皮质神经元的损伤有明显保护作用。 展开更多
关键词 组织构建 组织构建细胞学实验 端粒酶 人端粒酶反转录酶 皮质神经元 13淀粉样蛋白 阿尔茨海默病 省级基金
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人端粒酶反转录酶936-1132氨基真核表达载体的构建及在293T细胞中表达 被引量：1
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作者 卢钧雄 江慧贤 +1 位作者 曹莹 庞建新 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2012年第11期1977-1980,共4页
背景:人端粒酶反转录酶是端粒酶的重要组成之一,可使端粒酶表现活性从而拮抗端粒缩短或细胞衰老。目的:构建人端粒酶反转录酶C端936-1132氨基真核表达载体,并在人胚肾细胞293T表达,为其在细胞内定位研究奠定基础。方法:以人端粒酶反转录... 背景:人端粒酶反转录酶是端粒酶的重要组成之一,可使端粒酶表现活性从而拮抗端粒缩短或细胞衰老。目的:构建人端粒酶反转录酶C端936-1132氨基真核表达载体,并在人胚肾细胞293T表达,为其在细胞内定位研究奠定基础。方法:以人端粒酶反转录酶cDNA为模板,PCR扩增出带有酶切位点其C端936-1132氨基序列片段,并与真核表达载体pcDNA3.1-HisA连接,构建出重组质粒pcDNA3.1-HisA-hTERT aa936-1132,将重组质粒转染入人胚肾细胞293T中,使蛋白表达,并对蛋白进行免疫印迹鉴定。结果与结论:经双酶切和基因测序等方法证实,人端粒酶反转录酶C端936-1132氨基重组质粒pcDNA3.1-HisA-hTERT aa936-1132构建成功,经免疫印迹鉴定可检出融合蛋白。 展开更多
关键词 人端粒酶反转录酶C 端 重组质粒 人胚肾细胞293T 蛋白表达 免疫印迹
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