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全柱成像等电聚焦毛细管电泳法对双特异性Fc融合蛋白的电荷异质性分析
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作者 袁国刚 罗顺 +2 位作者 林军 林康 昌根琼 《中国科技期刊数据库 医药》 2024年第3期0129-0132,共4页
建立全柱成像等电聚焦毛细管电泳(WCID-CIEF)分析双特异性Fc融合蛋白电荷异质性方法。方法 通过非还原毛细管电泳法观察酶处理前后峰型的变化,初步确认了该Fc融合蛋白电荷异质性唾液酸相关;结合唾液酸酶酶切和方法优化手段,建立了此融... 建立全柱成像等电聚焦毛细管电泳(WCID-CIEF)分析双特异性Fc融合蛋白电荷异质性方法。方法 通过非还原毛细管电泳法观察酶处理前后峰型的变化,初步确认了该Fc融合蛋白电荷异质性唾液酸相关;结合唾液酸酶酶切和方法优化手段,建立了此融合蛋白的WCID-CIEF分析平台;通过液相质谱法(LC-MS)鉴定了唾液酸相关N-糖构型;通过液相荧光法(LC-FLR)测定了唾液酸的含量。结果 经唾液酸酶酶切和方法优化后,此方法在2.5~7.5 mgmL-1浓度范围内线性良好,R2=0.998,回收率在96.3%~104.6%之间,准确性、专属性和耐用性均满足要求。结论 结合酶处理和方法优化手段,WCID-CIEF可较好地分析融合蛋白的电荷异质性,提供了一种简单、有效的融合蛋白质控手段,并可应用于产品放行及稳定性监测。 展开更多
关键词 全柱成像等电聚焦毛细管泳法 双特异性Fc融合蛋白 唾液酸酶酶切 方法开发和确认
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三种酸性蛋白酶等电点测试方法的比较
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作者 刘畅 曾运航 石碧 《皮革科学与工程》 CAS 北大核心 2023年第3期50-56,共7页
采用Zeta电位法、沉淀法和等电聚焦电泳(IEF)法测定了不同来源的四种酸性蛋白酶的等电点(pI),并比较了这三种方法用于测量酸性蛋白酶pI的优缺点。结果表明:Zeta电位法适用于检测各种酸性蛋白酶,但需要指出的是,对于工业级酶制剂,该方法... 采用Zeta电位法、沉淀法和等电聚焦电泳(IEF)法测定了不同来源的四种酸性蛋白酶的等电点(pI),并比较了这三种方法用于测量酸性蛋白酶pI的优缺点。结果表明:Zeta电位法适用于检测各种酸性蛋白酶,但需要指出的是,对于工业级酶制剂,该方法获得的pI值是其各组分pI值的综合结果;沉淀法难以观察到高溶解度蛋白酶的pI沉淀现象,但使用粒径分析仪检测酶溶液的粒径变化情况可以获得准确的pI;IEF法能准确分析pI大于3的酸性蛋白酶,但有些酸性蛋白酶制剂的酶蛋白组分的pI小于3,因此该方法不适用于检测所有的酸性蛋白酶。 展开更多
关键词 酸性蛋白酶 等电 ZETA 沉淀法 等电聚焦
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全柱成像毛细管等电聚焦电泳技术在重组蛋白疫苗电荷异质性分析中的应用 被引量:1
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作者 陈全姚 杜加亮(综述) +1 位作者 刘万卉 王兰(审校) 《国际检验医学杂志》 CAS 2023年第21期2643-2648,共6页
重组蛋白分子表征的稳定性是保证疫苗发挥免疫原性及抗原性的关键。重组蛋白疫苗与治疗性蛋白制品一样,因体外合成和纯化过程的复杂性而表现出异质性。其中,电荷异质性是重组蛋白质的关键质量属性之一。电荷异质性监测有助于推动生产工... 重组蛋白分子表征的稳定性是保证疫苗发挥免疫原性及抗原性的关键。重组蛋白疫苗与治疗性蛋白制品一样,因体外合成和纯化过程的复杂性而表现出异质性。其中,电荷异质性是重组蛋白质的关键质量属性之一。电荷异质性监测有助于推动生产工艺的优化,反映产品生产的一致性和稳定性等,对保证重组蛋白产品的安全和质量至关重要。开发可靠快速、灵敏稳健的电荷异质性分析方法一直是生物制药行业所追求的目标。经典的电荷异质性分析方法主要有离子交换色谱(IEC)、毛细管区带电泳(CZE)以及全柱成像毛细管等电聚焦电泳(WCID-CIEF)等,其中WCID-CIEF提供的等电点(pI)和峰形的生化指纹有助于对疫苗多蛋白成分的分析。基于以上该文将对WCID-CIEF的原理和特点及其在重组蛋白疫苗质量控制中的应用进行概述。 展开更多
关键词 荷异质性 重组蛋白疫苗 质量控制 全柱成像毛细管等电聚焦
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鱼糜废水中蛋白质等电沉淀的规律研究 被引量:12
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作者 逯慎杰 梅术文 +2 位作者 刘秀河 靳恬忆 齐祥明 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第18期93-95,共3页
为寻找鱼糜废水中鱼浆蛋白的优化回收方法,实现鱼糜废水净化及蛋白回收再利用的双重目的,对鱼糜废水中蛋白质的等电沉淀规律进行了研究。在初步了解鱼糜废水中蛋白成分性质的前提下,考察了不同pH、酸种类、离子强度下的蛋白质沉淀规律,... 为寻找鱼糜废水中鱼浆蛋白的优化回收方法,实现鱼糜废水净化及蛋白回收再利用的双重目的,对鱼糜废水中蛋白质的等电沉淀规律进行了研究。在初步了解鱼糜废水中蛋白成分性质的前提下,考察了不同pH、酸种类、离子强度下的蛋白质沉淀规律,并尝试采用分级等电沉淀方法提高蛋白总回收率。结果表明,鱼浆蛋白成分的等电点主要密集分布在4.3和5.9两个位置;多元酸的沉淀效果较优,离子强度提高也有促进蛋白沉淀作用;分级等电沉淀可将蛋白总回收率从传统方法60%左右高至74.36%。本研究所做的基础研究及提出的分级等电沉淀技术思路,将为蛋白沉淀回收技术基础理论的丰富和思路的开拓提供有益补充。 展开更多
关键词 鱼浆蛋白 鱼糜废水 等电 离子强度 分级等电沉淀
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薄层分析等电聚焦方法测定重组MUC1等电点及其性质的应用 被引量:2
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作者 孙琳 张培因 +3 位作者 戴莉 王燕媚 于永利 王丽颖 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第20期3101-3103,共3页
目的采用薄层等电聚焦方法检测含有组氨酸尾的粘蛋白表位疫苗(简称重组MUC1),为不含有组氨酸尾的粘蛋白表位疫苗的下一步离子交换层析纯化蛋白提供参考依据。方法用两性电解质(Ampho-line)制备薄层凝胶,平铺在LKB电泳仪上,先预电泳15min... 目的采用薄层等电聚焦方法检测含有组氨酸尾的粘蛋白表位疫苗(简称重组MUC1),为不含有组氨酸尾的粘蛋白表位疫苗的下一步离子交换层析纯化蛋白提供参考依据。方法用两性电解质(Ampho-line)制备薄层凝胶,平铺在LKB电泳仪上,先预电泳15min,然后加样,电泳至电流不在下降停止电泳。测量等电点标准蛋白距阳极的泳动距离,然后绘制标准曲线,计算出含有组氨酸尾的重组MUC1的等电点值。根据测定的等电点值,选用阴离子交换层析法方法纯化不含有组氨酸尾的重组MUC1。结果等电聚焦方法测定含有组氨酸尾的重组MUC1等电点为5.4,阴离子交换层析法方法纯化获得纯度为83.5%的不含有组氨酸尾的重组MUC1。结论等电聚焦方法间接测定含有组氨酸尾的重组MUC1等电点,为不含有组氨酸尾的重组MUC1进一步的离子交换层析纯化蛋白提供了参考数据。 展开更多
关键词 薄层等电聚焦 重组MUC1 等电
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聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳法测定早孕因子的等电点 被引量:4
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作者 张冬云 王晓华 刘桦 《中国卫生检验杂志》 CAS 2001年第5期542-543,共2页
关键词 早孕因子 聚丙烯酰胺 凝胶等电聚焦 等电
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等电聚焦法测定2.5S NGF的等电点 被引量:1
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作者 蒋琳 沈心亮 +1 位作者 马亚茹 应莲芳 《微生物学免疫学进展》 1999年第2期38-40,共3页
采用水平等电聚焦法测定了25Sm神经生长因子(NGF)的等电点。经测定,纯化的25SmNGF的等电聚焦为三条带,这与文献报道相一致,等电点pH值分别为pH87、90、93,其主要成分为β亚基NGF及其修饰物... 采用水平等电聚焦法测定了25Sm神经生长因子(NGF)的等电点。经测定,纯化的25SmNGF的等电聚焦为三条带,这与文献报道相一致,等电点pH值分别为pH87、90、93,其主要成分为β亚基NGF及其修饰物的混合物,包括在羧基端失去8个氨基酸残基和在氨基端失去1个精氨酸残基,由这三种组分构成的NGF统称为25SmNGF。 展开更多
关键词 等电聚焦 等电 神经生长因子
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单克隆抗体M_(26-32)和3F_9株等电聚焦电泳分析
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作者 李菊林 高琪 +2 位作者 王丽琴 朱昌亮 何伟 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 1997年第6期376-376,共1页
关键词 单克隆抗体 等电聚焦 泳分析 等电 寄生虫病 阴离子交换树脂 防治研究 蛋白带 江苏省 聚丙烯酸胺
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某些灵长类毛发角蛋白的等电聚焦分析
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作者 严品华 徐俊杰 赵珍敏 《法医学杂志》 CAS CSCD 1991年第4期161-164,共4页
本文用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦(PAGIEF)对分属灵长类的5个科的15种动物毛发角蛋白进行了分析,并用激光光密度计对PAGIEF板进行了扫描。结果表明,各种灵长类毛发角蛋白的PAGIEF谱型均有差异。因此,本方法可以用于灵长类动物之间毛发角蛋... 本文用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦(PAGIEF)对分属灵长类的5个科的15种动物毛发角蛋白进行了分析,并用激光光密度计对PAGIEF板进行了扫描。结果表明,各种灵长类毛发角蛋白的PAGIEF谱型均有差异。因此,本方法可以用于灵长类动物之间毛发角蛋白组分的鉴别。 展开更多
关键词 毛发角蛋白 等电聚焦分析 聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦 灵长类动物 光密度计 蛋白组分
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AZTREONAM与阴沟杆菌β-内酰胺酶相互作用的等电聚焦电泳分析
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作者 黎世能 王浴生 雷军 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1990年第S1期64-64,共1页
用超薄层等电聚焦电泳(STL-IEF)研究β-内酰胺抗生素和β-内酰胺酶相互作用过程对分析以酶介导的细菌对抗生素耐药有重大临床意义。取不同剂量Aztreonam(AZ)和4.0mg/ml耐AZ阴沟杆菌1029β-内酰胺酶于25℃混和孵育不同时间,观察酶活... 用超薄层等电聚焦电泳(STL-IEF)研究β-内酰胺抗生素和β-内酰胺酶相互作用过程对分析以酶介导的细菌对抗生素耐药有重大临床意义。取不同剂量Aztreonam(AZ)和4.0mg/ml耐AZ阴沟杆菌1029β-内酰胺酶于25℃混和孵育不同时间,观察酶活性及等电点(PI)变化情况,当AZ浓度为10<sup>-5</sup>Mol时,孵育至0.5h,18h及36h。 展开更多
关键词 阴沟杆菌 AZTREONAM 等电聚焦 内酞胺 超薄层 等电 酶活性 染色体介导 紫外法
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牛血小板衍化生长因子等电点的分析
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作者 陈强 史俊南 王增禄 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 1996年第4期227-229,共3页
目的:测定分析牛血小板衍化生长因子的等电点。方法;用薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦的方法。结果:牛血小板衍化生长因子的等电点为9.6~10.0。结论:牛血小板衍化生长因子是一种强碱性蛋白质,即强阳离子多肽,可能含有相对较... 目的:测定分析牛血小板衍化生长因子的等电点。方法;用薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦的方法。结果:牛血小板衍化生长因子的等电点为9.6~10.0。结论:牛血小板衍化生长因子是一种强碱性蛋白质,即强阳离子多肽,可能含有相对较多的碱性氨基酸。 展开更多
关键词 血小板 衍化生长因子 等电聚焦 等电
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牛凝血酶等电点的初步测定
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作者 常灏 黄耀江 沈光涛 《现代生物医学进展》 CAS 2006年第11期85-88,共4页
作为一种新型的速效局部止血药和工具酶,凝血酶在临床和生物学研究中的应用十分广泛,牛血浆是其重要的来源之一。等电点沉淀是提取牛凝血酶首要和关键的步骤,测定其等电点后,再用此法时将得到更纯的凝血酶粗制品。本实验的目的是采用载... 作为一种新型的速效局部止血药和工具酶,凝血酶在临床和生物学研究中的应用十分广泛,牛血浆是其重要的来源之一。等电点沉淀是提取牛凝血酶首要和关键的步骤,测定其等电点后,再用此法时将得到更纯的凝血酶粗制品。本实验的目的是采用载体两性电解质pH梯度等电聚焦电泳的方法,结合SDS-PAGE测定牛凝血酶的等电点。经双向电泳后,SDS聚丙烯酰胺凝胶中出现了4个清晰的斑点,分别测定它们的分子量和等电点,其中一个斑点与牛凝血酶B链的分子量一致为32kDa,其等电点为5.19。 展开更多
关键词 牛凝血酶 等电 等电聚焦 SDS-聚丙烯酰胺凝肢
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一种改进的超薄聚丙烯酰胺等电聚焦电泳实验
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作者 谢永芳 梁亦龙 +3 位作者 张蕴 秦燕均 伍文勇 何元方 《生物技术通讯》 CAS 2006年第1期70-71,共2页
目的:介绍一种自制、简易、高效的平板微型聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳方法。方法:将载玻片黏合作为制胶模具,剪滤纸制成上样芯子进行等电聚焦电泳。结果:电泳条带清楚,样品容量大,电泳时间短,操作性强。结论:此方法简单、有效、实用,... 目的:介绍一种自制、简易、高效的平板微型聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳方法。方法:将载玻片黏合作为制胶模具,剪滤纸制成上样芯子进行等电聚焦电泳。结果:电泳条带清楚,样品容量大,电泳时间短,操作性强。结论:此方法简单、有效、实用,所需凝胶量少,节约成本,值得推广。 展开更多
关键词 凝胶 等电聚焦 等电
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超薄层等电聚焦技术检测β-内酰胺酶
14
作者 钱元恕 王其南 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1990年第S1期60-60,共1页
分析性等电聚焦电泳是蛋白质分析中高分辨的技术之一,也是对β-内酰胺酶进行分类的重要依据手段。该技术利用各型β-内酰胺酶的等电点不同,在一个稳定的、连续的、线性的pH梯度中对β-内酰胺酶进行分离和分析。本文采用国产试剂,建立超... 分析性等电聚焦电泳是蛋白质分析中高分辨的技术之一,也是对β-内酰胺酶进行分类的重要依据手段。该技术利用各型β-内酰胺酶的等电点不同,在一个稳定的、连续的、线性的pH梯度中对β-内酰胺酶进行分离和分析。本文采用国产试剂,建立超薄层(0.2mm) 展开更多
关键词 等电聚焦 国产试剂 超薄层 蛋白质分析 等电 内酞胺 生物样本 分析性 技术分析 技术利用
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单克隆抗体的超薄琼脂糖等电聚焦
15
作者 陆明 罗玉芳 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 1992年第4期170-170,共1页
单克隆抗体(McAb)lgG和IgM都具有各自不同的等电点(PI)所以测定它们的PI是鉴定和研究McAb性质不可缺少的项目之一。进行等电聚焦(IEF)最常用的抗对流介质虽是聚丙烯酰胺胶,但因该胶的适合分子量超过400KD以上的样品,而McAblgM的分子量约... 单克隆抗体(McAb)lgG和IgM都具有各自不同的等电点(PI)所以测定它们的PI是鉴定和研究McAb性质不可缺少的项目之一。进行等电聚焦(IEF)最常用的抗对流介质虽是聚丙烯酰胺胶,但因该胶的适合分子量超过400KD以上的样品,而McAblgM的分子量约为800KD。 展开更多
关键词 琼脂糖等电聚焦 单克隆抗体 聚丙烯酰胺胶 等电 免疫反应 琼脂糖胶 IGG 聚丙烯酞胺 泳仪 线丛
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毛细管等电聚焦分离蛋白质
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作者 刘彦方 丁天惠 《分析仪器》 CAS 1997年第2期52-56,共5页
毛细管等电聚焦(CIEF)可分离等电点(pI)相差0.02pH单位的蛋白质。本文介绍了CIEF分离蛋白质的基本原理、方法和特点;阐述了CIEF分离蛋白质应解决的基本问题,包括消除或减小电渗的涂层方法。检测方法和条件。蛋白质区带的迁移及p... 毛细管等电聚焦(CIEF)可分离等电点(pI)相差0.02pH单位的蛋白质。本文介绍了CIEF分离蛋白质的基本原理、方法和特点;阐述了CIEF分离蛋白质应解决的基本问题,包括消除或减小电渗的涂层方法。检测方法和条件。蛋白质区带的迁移及pI测定方法。讨论了影响CIEF分离效能的因素,如两性电解质的组成和浓度、毛细管长度、聚焦电压等。列举了应用CIEF分离具有不同pI蛋白质混合物的实例,对CIEF的应用前景进行了展望。 展开更多
关键词 毛细管等电聚焦 等电 蛋白质分离
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近交系小鼠Hb基因位点等电聚焦分析
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作者 宋树奎 胡开元 《实验动物与比较医学》 CAS 1991年第3期137-139,132,共4页
等电聚焦(isoelectric focusing,简称IFF)也称等电点分离。自1960年代初,瑞典学者首次合成两性载体(商品名称有Ampholine和Pharmalyte等)并成功地用于蛋白质分离以来,这项技术得以迅速发展和应用。由于其分辨力高,可用于混合物的分离或... 等电聚焦(isoelectric focusing,简称IFF)也称等电点分离。自1960年代初,瑞典学者首次合成两性载体(商品名称有Ampholine和Pharmalyte等)并成功地用于蛋白质分离以来,这项技术得以迅速发展和应用。由于其分辨力高,可用于混合物的分离或鉴定,国外已应用此项技术对近交系动物进行生化标志基因监测。我们采用本实验室建立的聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦技术对近交系小鼠SMMC/B的Hb基因位点进行遗传关系分析,并与常规聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)作分辨力比较。 展开更多
关键词 近交系小鼠 HB 近交系动物 基因位点 分辨力 等电聚焦分析 等电点分离 isoelectric 蛋白质分离 生化标志
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照相明胶的等电聚焦研究 Ⅱ.不同道次明胶的等电点分布
18
作者 黄明智 缪进康 喻小琦 《明胶科学与技术》 CAS 1990年第2期64-73,共10页
一、前言近年来,等电聚焦电泳法已成为分析、鉴定蛋白质等生物大分子的最基本手段之一。这种分离分析技术已被引用来研究明胶蛋白质分子。等电点是反映明胶分子结构的一个重要参数,明胶的许多理化性能都和这一参数密切相关。例如,在等电... 一、前言近年来,等电聚焦电泳法已成为分析、鉴定蛋白质等生物大分子的最基本手段之一。这种分离分析技术已被引用来研究明胶蛋白质分子。等电点是反映明胶分子结构的一个重要参数,明胶的许多理化性能都和这一参数密切相关。例如,在等电点pH下,明胶溶液的粘度最小,吸水溶胀能力最低,最易发生聚凝作用等。但由于明胶分子的多分散性和体系的两性电解质特性,并不能用一个等电点的平均数值得以真实反映。因此,需要测定出其等电点的分布情况。 展开更多
关键词 照相胶 明胶 等电聚焦 等电点分布
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不同等电点沉淀法和超速离心法提取牛奶乳清蛋白的双向电泳分析 被引量:17
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作者 陈静廷 卜登攀 +2 位作者 马露 杨永新 李发弟 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第20期180-184,共5页
为探索牛奶乳清蛋白提取的最适方法,以生鲜荷斯坦牛奶为对象,采用不同等电点(pH 4.6和pH 4.8)沉淀法和超速离心法提取牛奶乳清蛋白样品,并对提取效果进行双向凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)图谱分析。依据凝胶图谱上... 为探索牛奶乳清蛋白提取的最适方法,以生鲜荷斯坦牛奶为对象,采用不同等电点(pH 4.6和pH 4.8)沉淀法和超速离心法提取牛奶乳清蛋白样品,并对提取效果进行双向凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)图谱分析。依据凝胶图谱上蛋白斑点比较图谱质量,采用PDQuest 8.0凝胶图像分析软件进行凝胶图谱分析。结果显示:2种方法均能有效提取牛奶乳清蛋白,且获得的2-DE凝胶图谱背景清晰、蛋白点个体独立、无明显的拖尾现象,且重复性强,但都存在一定的酪蛋白残留。与超速离心法相比,pH 4.6沉淀法和pH 4.8沉淀法提取乳清蛋白的2-DE凝胶图谱可检测到较多的蛋白质斑点。pH 4.6沉淀法提取乳清蛋白制备的2-DE凝胶图谱中蛋白点的表达丰度略高于pH 4.8沉淀法。研究表明:pH 4.6沉淀法提取乳清蛋白制备2-DE凝胶图谱略优于pH 4.8沉淀法和超速离心法。但2种等电点沉淀法和超速离心法都可有效去除牛奶中的高丰度酪蛋白,提高低丰度蛋白的检出敏感性。 展开更多
关键词 牛奶 乳清蛋白 等电沉淀 超速离心 提取方法 双向凝胶泳图谱
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全柱成像毛细管等电聚焦电泳测定艾塞那肽等电点 被引量:2
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作者 刘洁欣 方均建 +4 位作者 王心正 李海静 程建华 吴胜明 董方霆 《生物技术通讯》 CAS 2014年第3期381-384,共4页
目的:采用新一代全柱成像毛细管等电聚焦电泳技术(CIEF-WCID)测定艾塞那肽等电点。方法:采用互补性金属氧化物半导体成像技术对样品等电聚焦过程进行实时记录,根据适宜的marker计算得到艾塞那肽的等电点,并对方法的准确度与重复性进行... 目的:采用新一代全柱成像毛细管等电聚焦电泳技术(CIEF-WCID)测定艾塞那肽等电点。方法:采用互补性金属氧化物半导体成像技术对样品等电聚焦过程进行实时记录,根据适宜的marker计算得到艾塞那肽的等电点,并对方法的准确度与重复性进行考察。结果:测得艾塞那肽等电点为5.46,与凝胶电泳结果基本一致,相对标准偏差为0.11%。CIEF-WCID方法快速准确,相对误差小于2.5%,重复性良好。结论:CIEF-WCID作为一种新的技术手段可用于艾塞那肽等电点的分析,方法快速、准确、重复性好,可为多肽的质量控制提供一种可靠的分析方法。 展开更多
关键词 全柱成像毛细管等电聚焦 等电 艾塞那肽
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