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转基因植物中筛选标记基因的利用及消除 被引量:18
1
作者 侯爱菊 朱延明 +2 位作者 张晶 李杰 张彬彬 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期466-470,共5页
在基因转移过程中,人们常常使用标记基因来筛选转化细胞或组织。常用的筛选标记基因尤其是抗生素抗性基因的使用往往对环境及植物体的生长发育产生不良影响,且影响基因多重转化。为了消除这些弊端,一种全新的发展策略即获取无选择标记... 在基因转移过程中,人们常常使用标记基因来筛选转化细胞或组织。常用的筛选标记基因尤其是抗生素抗性基因的使用往往对环境及植物体的生长发育产生不良影响,且影响基因多重转化。为了消除这些弊端,一种全新的发展策略即获取无选择标记的转基因植物应运而生。本文主要综述转基因植物中有关筛选标记基因及其消除方法。 展开更多
关键词 基因植物 筛选标记基因 基因消除 基因转移
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共转化法删除转基因植物筛选标记基因的研究 被引量:5
2
作者 李桂民 宋凯 +1 位作者 刘立侠 许守民 《分子植物育种》 CAS CSCD 2004年第6期839-845,共7页
筛选标记基因因其在植物基因工程中的重要作用而得到了普遍应用,目前使用的筛选标记主要是抗生素抗性基因或抗除草剂基因,然而一旦获得转基因植株,它的存在不但没有必要,而且还引起人们的种种顾虑。因此如何从转基因植物中删除筛选标记... 筛选标记基因因其在植物基因工程中的重要作用而得到了普遍应用,目前使用的筛选标记主要是抗生素抗性基因或抗除草剂基因,然而一旦获得转基因植株,它的存在不但没有必要,而且还引起人们的种种顾虑。因此如何从转基因植物中删除筛选标记基因成为植物基因工程研究的重要内容。目前已有多个系统用来删除选择标记基因,从而获得无筛选标记基因的转基因植株。其中共转化法操作简便因而得到了广泛的应用。本文综述了共转化法研究的最新进展并对其实际应用的可行性进行探讨。 展开更多
关键词 共转化法 基因植物 筛选标记基因 基因工程 删除方法
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植物筛选标记基因应用进展 被引量:8
3
作者 王相春 程在全 +1 位作者 曾千春 罗琼 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第22期13290-13291,13365,共3页
筛选标记基因在植物遗传转化中担负着区分转化体和非转化体的重要作用。合适的筛选标记基因及其相应的筛选剂是植物转基因成功的关键。综述了迄今为止人们在植物转基因研究中使用过的主要筛选标记基因。
关键词 植物转基因 筛选标记基因 生物安全性标记基因
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水稻新型核转化筛选标记基因的鉴定及应用 被引量:2
4
作者 张娟娟 林拥军 周菲 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期1-8,共8页
将人工合成的来自Escherichia coli的dsdA基因与来自Schizosaccharomyces pombe的dao1基因,通过农杆菌侵染方式转化到水稻中花11中。对转化植株进行分子生物学检测表明,目的基因整合到了水稻核基因组中,其中获得转化dsdA的单拷贝植株7个... 将人工合成的来自Escherichia coli的dsdA基因与来自Schizosaccharomyces pombe的dao1基因,通过农杆菌侵染方式转化到水稻中花11中。对转化植株进行分子生物学检测表明,目的基因整合到了水稻核基因组中,其中获得转化dsdA的单拷贝植株7个,转化dao1的单拷贝植株6个。通过对单拷贝转基因家系表达量检测及T0代种子萌发测验发现,dao1基因在2个(编号6,7)转基因家系中表达量显著,T0代种子在含D-Ala的培养基上,具有明显抗性。dsdA基因在所有的转基因家系中表达量相对偏低,在含D-Ser的培养基上,T0代种子有一定抗性。 展开更多
关键词 水稻 基因 筛选标记基因 D-氨基酸 生物安全
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OsALS S627N是一个新的转基因植物筛选标记基因
5
作者 张红磊 李军玲 +7 位作者 张融雪 郭彦丽 刘静妍 苏京平 佟卉 刘燕清 王胜军 孙玥 《林业科技情报》 2021年第4期1-4,共4页
随着转基因作物商品化和基因组编辑技术的迅速发展,植物基因工程安全性越发引人关注。最常用的转基因植物筛选标记一般是抗生素抗性基因或者除草剂抗性基因,存在安全性和成本问题。通过前期研究发现,乙酰乳酸合成酶(Acetolactate syntha... 随着转基因作物商品化和基因组编辑技术的迅速发展,植物基因工程安全性越发引人关注。最常用的转基因植物筛选标记一般是抗生素抗性基因或者除草剂抗性基因,存在安全性和成本问题。通过前期研究发现,乙酰乳酸合成酶(Acetolactate synthase,ALS)基因突变型OsALS S627N具有咪唑啉酮类除草剂抗性,推测该基因能用于转基因植物筛选。通过构建该基因植物表达载体转化拟南芥,潮霉素、除草剂筛选和GUS染色检测,发现OsALS S627N确实能有效筛选出阳性转基因植株。OsALS S627N来源于植物且动物不含有该基因、无抗生素抗性基因转移风险且咪唑啉酮类除草剂成本低,因此能够作为一个新的安全有效的转基因植物筛选标记。 展开更多
关键词 乙酰乳酸合成酶 水稻 基因植物 除草剂 筛选标记基因
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以木糖异构酶基因为筛选标记的玉米遗传转化 被引量:11
6
作者 郭新梅 张晓东 +2 位作者 梁荣奇 张立全 陈耀锋 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期547-552,共6页
利用木糖异构酶基因作为筛选标记可以在含有不同浓度木糖的培养基上筛选出玉米再生植株,其中50%~100%木糖浓度的总体筛选效果较好,但不同玉米基因型之间筛选的最佳浓度差异很大。通过DNA点杂交、PCR及PCR-Southern印记法检测表明,木糖... 利用木糖异构酶基因作为筛选标记可以在含有不同浓度木糖的培养基上筛选出玉米再生植株,其中50%~100%木糖浓度的总体筛选效果较好,但不同玉米基因型之间筛选的最佳浓度差异很大。通过DNA点杂交、PCR及PCR-Southern印记法检测表明,木糖异构酶基因已经整合到转基因植株中。以木糖作为筛选剂,可以减小潜在的生物安全隐患。 展开更多
关键词 木糖 木糖异构酶 筛选标记基因 玉米
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无选择标记转基因植物研究进展 被引量:2
7
作者 张晶 周长梅 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2004年第4期496-499,共4页
在植物基因转移过程中,筛选标记基因常被用于筛选转化细胞或组织,给转基因工作带来很大方便;但在获得转基因植物之后,筛选标记基因的表达往往对环境及植物体的生长发育产生不良影响,且不利于使用相同标记基因进行多重转化。为了消除这... 在植物基因转移过程中,筛选标记基因常被用于筛选转化细胞或组织,给转基因工作带来很大方便;但在获得转基因植物之后,筛选标记基因的表达往往对环境及植物体的生长发育产生不良影响,且不利于使用相同标记基因进行多重转化。为了消除这些弊端,一种全新的发展策略即获得无选择标记转基因植物应运而生。文章主要综述获得无选择标记转基因植物的方法。 展开更多
关键词 基因植物 筛选标记基因 基因消除
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油菜基因工程研究进展 被引量:9
8
作者 段英姿 牛应泽 郭世星 《中国农学通报》 CSCD 2003年第5期92-98,共7页
近年来 ,油菜的遗传转化研究日趋成熟 ,用于转化的目的基因趋于多样化 ,如 :品质改良、抗病、抗逆、不育基因等 ;较常用的筛选标记基因是新霉素磷酸转移酶基因 (NPTII) ;目前油菜已建立了子叶、下胚轴、茎段、原生质体培养、小孢子培养... 近年来 ,油菜的遗传转化研究日趋成熟 ,用于转化的目的基因趋于多样化 ,如 :品质改良、抗病、抗逆、不育基因等 ;较常用的筛选标记基因是新霉素磷酸转移酶基因 (NPTII) ;目前油菜已建立了子叶、下胚轴、茎段、原生质体培养、小孢子培养的再生体系 ;用于油菜基因转化的方法根癌农杆菌介导法、基因枪法、PEG法、激光微束穿刺法、显微注射法等。 展开更多
关键词 油菜 基因工程 遗传转化 品质改良 不育基因 筛选标记基因 再生体系
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一个新的重组酶系统在转基因植物外源基因删除中的应用 被引量:10
9
作者 罗克明 赵德刚 +1 位作者 Li Yi 裴炎 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期61-66,共6页
为了解决转基因植物可能带来的生物安全性问题,设计了一个新的位点特异性重组酶系统pLFHFGN,该系统中重组酶FLP基因由热激蛋白Hsp18.2基因的启动子控制,所有外源基因(包括重组酶基因FLP、GUS报告基因和NPTII筛选标记基因)都置于两个融... 为了解决转基因植物可能带来的生物安全性问题,设计了一个新的位点特异性重组酶系统pLFHFGN,该系统中重组酶FLP基因由热激蛋白Hsp18.2基因的启动子控制,所有外源基因(包括重组酶基因FLP、GUS报告基因和NPTII筛选标记基因)都置于两个融合识别位点loxFRT之间.将上述重组酶系统通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转化烟草,获得的再生植株分别通过GUS组织染色和PCR分析等方法进行鉴定.然后在37℃下热激处理转基因植株,利用GUS组织染色检测重组酶系统在转基因植株T1代幼苗中删除外源基因的效率,结果显示,该系统删除效率达到了48.2%~84.9%,说明通过重组酶系统pLFHFGN能够有效地删除转基因植物中的外源基因,这为解决转基因植物潜在的安全性问题提供了一条新的途径. 展开更多
关键词 基因植物 酶系统 基因删除 位点特异性重组 GUS报告基因 安全性问题 基因植株 应用 外源基因 筛选标记基因 根癌农杆菌 PCR分析 热激蛋白 识别位点 介导转化 再生植株 热激处理 系统删除 启动子 重组酶 基因 染色
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Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因克隆及其共转化表达载体的构建 被引量:4
10
作者 张秀春 林俊芳 郭丽琼 《热带作物学报》 CSCD 2004年第4期63-67,共5页
采用RT-PCR的方法从海南玻璃苣中克隆了Δ6-脂肪酸脱氢酶基因(Δ6-dsa)。DNA序列测定结果表明,Δ6-dsa全长1347bp编码448个氨基酸。Δ6-dsa序列在genbank中采用BLAST程序进行同源序列分析,结果表明,Δ6-dsa核苷酸序列与克隆自美国德克... 采用RT-PCR的方法从海南玻璃苣中克隆了Δ6-脂肪酸脱氢酶基因(Δ6-dsa)。DNA序列测定结果表明,Δ6-dsa全长1347bp编码448个氨基酸。Δ6-dsa序列在genbank中采用BLAST程序进行同源序列分析,结果表明,Δ6-dsa核苷酸序列与克隆自美国德克萨斯州的玻璃苣Δ6-脂肪酸脱氢酶基因的核苷酸序列完全相同。Δ6-dsa克隆进T-easyVector后形成质粒pGΔ6-DSA。把质粒pGΔ6-DSA上的Δ6-脂肪酸脱氢酶基因片段克隆进含有T-DNA和35S启动子的质粒pGIN22中,形成含有目的基因的表达载体pGIN23。把表达载体pGIN23与另一个含有T-DNA、启动子、筛选标记基因的表达载体pLPN28进行亚克隆,使得筛选标记基因和Δ6-dsa分别插入到同一质粒的2个相互独立的T-DNA内,构建成共转化表达载体pLIN61。 展开更多
关键词 △^6-脂肪酸脱氢酶 表达载体 克隆 共转化 筛选标记基因 基因 DNA DSA 质粒 玻璃苣
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植物叶绿体基因工程研究进展 被引量:5
11
作者 程琳 瞿波 +1 位作者 李和平 廖玉才 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期249-259,共11页
植物叶绿体基因工程与细胞核基因工程相比,具有许多独特的优势,如能够实现外源基因特异整合及高效表达、多基因共表达、外源基因不会随花粉扩散、没有位置效应和基因沉默等。目前已在16种植物中成功获得叶绿体转基因植株,改良了植物的... 植物叶绿体基因工程与细胞核基因工程相比,具有许多独特的优势,如能够实现外源基因特异整合及高效表达、多基因共表达、外源基因不会随花粉扩散、没有位置效应和基因沉默等。目前已在16种植物中成功获得叶绿体转基因植株,改良了植物的农艺性状,特别是在烟草叶绿体中高效表达了40多种外源蛋白,包括多种抗体和疫苗。尽管如此,这项技术目前尚未用于主要粮食作物的性状改良。本文综述了植物叶绿体基因工程的原理、技术、应用、难点及进展。 展开更多
关键词 质体转化 叶绿体 筛选标记基因 植物生物反应器
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以甘露糖作为筛选剂的棉花遗传转化 被引量:20
12
作者 岳建雄 孟钊红 +3 位作者 张炼辉 韩少杰 林亲铁 王巍 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2005年第1期3-7,共5页
以pmi基因作为筛选标记基因,以甘露糖作为筛选剂,通过农杆菌介导法将GFP基因导入棉花细胞并得到再生植株,经过PCR检测、Southern杂交证实外源基因已经整合到棉花基因组中,Westbloting与荧光显微镜检测证明GFP基因得到表达。本文研究讨... 以pmi基因作为筛选标记基因,以甘露糖作为筛选剂,通过农杆菌介导法将GFP基因导入棉花细胞并得到再生植株,经过PCR检测、Southern杂交证实外源基因已经整合到棉花基因组中,Westbloting与荧光显微镜检测证明GFP基因得到表达。本文研究讨论了甘露糖作为棉花转化细胞的筛选剂在农杆菌介导的转化中的应用浓度及方法,即:甘露糖的筛选浓度在30~50g·L 1之间,在愈伤组织诱导初期适当低一点,随着愈伤组织的生长而加大筛选浓度。由于甘露糖不利于再生胚的分化,当愈伤组织转入分化培养基时,要以葡萄糖代替甘露糖。 展开更多
关键词 棉花 筛选标记基因 遗传转化 愈伤组织 浓度 分化培养 再生植株 GFP基因 甘露糖 外源基因
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叶绿体功能基因的工程改造
13
作者 徐昀 胡凯 +1 位作者 崔震海 张立军 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1-4,14,共5页
主要介绍叶绿体功能基因工程改造的目的、受体材料、主要方法、转入外源基因细胞的筛选和鉴定等。
关键词 叶绿体功能 基因工程 同源重组 通用载体 筛选标记基因
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微生物遗传转化筛选标记及其生物安全性的研究进展 被引量:7
14
作者 乐易林 孙宇 +1 位作者 王洪成 邵蔚蓝 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1814-1821,共8页
在分子生物技术中,筛选标记基因是遗传转化载体所必备的基本元件之一,其主要功能是在基因操作中进行目标克隆的筛选,以及在应用过程中通过选择压力维持基因重组性状。抗药基因是微生物遗传转化中常用的筛选标记,大肠杆菌载体和一般穿梭... 在分子生物技术中,筛选标记基因是遗传转化载体所必备的基本元件之一,其主要功能是在基因操作中进行目标克隆的筛选,以及在应用过程中通过选择压力维持基因重组性状。抗药基因是微生物遗传转化中常用的筛选标记,大肠杆菌载体和一般穿梭载体中通常带有抗药基因。带有抗药基因的工程菌可以被广泛地应用于酶和有机化学品的发酵生产,因为工业发酵过程是在封闭系统中进行的,并且最终产品需要经过提炼。但是当人们需要用基因改良的菌株进行食品和饲料加工、环境修复、病虫害生物防治时,抗药基因类筛选标记应该被禁止使用。因此,发展生物安全性筛选标记成为遗传转化技术推广应用中的一个技术关键。本文介绍常用作筛选标记的抗药基因,以及针对抗药基因的安全性问题而发展的无选择标记的遗传转化技术及生物安全性筛选标记的基因工程技术。葡萄糖胺合成酶基因是近年发展起来的新型生物安全性筛选标记,它弥补了其他营养缺陷互补型和功能附加型筛选标记的缺陷,具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 筛选标记基因 生物安全性 葡萄糖胺合成酶基因
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甘露糖阳性选择系统在水稻遗传转化中的应用研究进展 被引量:1
15
作者 王彩芬 付永彩 《中国稻米》 2008年第4期22-24,共3页
甘露糖阳性选择系统是近几年应用较多的一种植物转基因安全筛选体系,该体系是以大肠杆菌6-磷酸甘露糖异构酶基因pmi为筛选标记基因,D-甘露糖为筛选剂进行筛选。本文简要综述了甘露糖阳性选择系统在水稻转基因研究中的应用情况。
关键词 6-磷酸甘露糖异构酶基因 筛选标记基因 水稻遗传转化
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Screening and Cloning of RAPD Marker of Fluoride Tolerance Gene in Silkworm,Bombyx mori 被引量:4
16
作者 徐庆刚 陈克平 +1 位作者 姚勤 刘晓勇 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期69-72,共4页
In this study,silkworm strain T6,tolerant to fluoride,and silkworm strain 733xin,highly sensitive to fluoride,were used to construct the near-isogenic lines.300 random primers were used in RAPD amplification to DNAs o... In this study,silkworm strain T6,tolerant to fluoride,and silkworm strain 733xin,highly sensitive to fluoride,were used to construct the near-isogenic lines.300 random primers were used in RAPD amplification to DNAs of these lines.A molecular marker named S207 was found linked to the fluoride tolerance gene.Examination to F 2 segregated individuals of the above lines verified that this molecular marker was reliable.Subsequently,the molecular marker was cloned into a T vector (pUCm-T) for sequencing.Comparing with sequences available in the GenBank showed that this molecular marker was novel.We plan to convert it into a SCAR marker to facilitate establishment of a molecular marker assisted breeding system. 展开更多
关键词 Bombyx mori Near-isogenic lines Fluoride tolerance RAPD marker
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PMI基因作为选择标记的植物表达载体构建及转化白花丹参体系的建立
17
作者 陶如 张友灿 +4 位作者 方茜 史仁玖 李艳玲 黄璐琦 郝岗平 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1209-1213,共5页
目的:构建含有大肠杆菌6-磷酸甘露糖异构酶(6-phosphomannose isomerase,PMI)基因并替换潮霉素抗性(hygromycin,hyg)基因的植物表达载体pCAMBIA1305-PMI,同时建立以PMI/甘露糖为筛选标记的白花丹参转基因体系。方法:首先从大肠杆菌Esche... 目的:构建含有大肠杆菌6-磷酸甘露糖异构酶(6-phosphomannose isomerase,PMI)基因并替换潮霉素抗性(hygromycin,hyg)基因的植物表达载体pCAMBIA1305-PMI,同时建立以PMI/甘露糖为筛选标记的白花丹参转基因体系。方法:首先从大肠杆菌Escherichia coli DH5α中克隆PMI基因,然后以PMI基因替换植物表达载体pCAMBIA1305中的hyg基因,构建了以PMI基因为选择标记基因的植物表达载体pCAMBIA1305-PMI,并用电击转化方法导入根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens LBA4404中,用叶片浸染法转化白花丹参。结果:在白花丹参MS+6-BA 1.5 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1固体分化培养基中附加20 g·L-1甘露糖和10 g·L-1蔗糖为碳源的选择压力下,pCAMBIA1305-PMI的转化率为23.7%,对再生植株用PCR检测证实了PMI基因的导入。结论:建立了以PMI-甘露糖为选择系统的白花丹参转基因体系,可应用于后续目的基因的转化奠定了基础。 展开更多
关键词 6-磷酸甘露糖异构酶(PMI)基因 甘露糖 白花丹参 基因筛选标记
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Screening Method for Transgenic Maize with Kanamycin Resistance 被引量:2
18
作者 LU Meng-yu DONG Fu-shuang ZHANG Jun-min WANG Hai-bo 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2011年第7期954-957,共4页
[Objective]The paper was to establish simple and effective method to screen marker gene in maize with kanamycin resistance.[Method]Using inbred line "Chang 7-2" and hybrid "Zhengdan 958" of maize a... [Objective]The paper was to establish simple and effective method to screen marker gene in maize with kanamycin resistance.[Method]Using inbred line "Chang 7-2" and hybrid "Zhengdan 958" of maize as test materials,their seeds were soaked with different concentrations and volumes of kanamycin for3 and 4 d,respectively,the rate of albino seedlings and average seedling height after sowing for10 d were investigated.[Result]The rate of albino seedlings not only was related to kanamycin concentration,but also had relationship with solution volume during soaking process.The difference between inbred line and hybrid was no significant.When 100 ml of kanamycin solution with concentration of 200 mg/L was used to soak seeds for 3 d,the rate of albino seedlings basically could reach 100%.When 100 ml of kanamycin solution with concentration of 100 mg/L was used to soak 20 seeds for 3 d to carry out resistance screening,the accuracy was up to 84.8% after verifying the screening test of T1 transgenic maize plants.[Conclusion]The method was feasible,which could be used as a simple method for screening transgenic gene maize with kanamycin resistance. 展开更多
关键词 Transgenic maize KANAMYCIN Screening method
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转基因水稻中HPT蛋白质的检测及表达特征研究 被引量:5
19
作者 杨烁 郝育杰 +7 位作者 兰金苹 韦汉福 魏健 荣瑞娟 武鹏程 刘国振 尹长城 李莉云 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期61-67,共7页
hpt是转基因植物中最常用的筛选标记基因之一,建立了HPT蛋白质免疫印迹检测技术、了解其在转基因植物中的表达特征具有重要的理论意义和应用价值。在大肠杆菌中进行了HPT蛋白质的重组表达,利用纯化的HPT蛋白质制备了其特异性的单克隆抗... hpt是转基因植物中最常用的筛选标记基因之一,建立了HPT蛋白质免疫印迹检测技术、了解其在转基因植物中的表达特征具有重要的理论意义和应用价值。在大肠杆菌中进行了HPT蛋白质的重组表达,利用纯化的HPT蛋白质制备了其特异性的单克隆抗体,采用免疫印迹学方法对转基因水稻4021中HPT蛋白质的表达情况进行了检测,该方法可检测出单粒稻米的10%(约1.5mg)所含的HPT蛋白质。定量分析发现水稻苗期HPT蛋白质含量约占鲜重的0.01‰。对Ca MV35S启动子驱动下的转基因水稻中HPT蛋白质的表达谱进行分析,发现其在苗期和成株期的叶片中表达量较高,在灌浆期的种子中呈现不断增加的趋势,而在茎、分蘖节、茎节、叶鞘、叶枕和根等组织中表达量较低。建立了完整的利用免疫印迹方法检测HPT蛋白质的技术,同时系统分析了HPT蛋白质在转基因水稻中的表达谱。 展开更多
关键词 基因水稻 HPT蛋白质 免疫印迹技术 筛选标记基因
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