类猪圆环病毒P1的感染及其分子特征 被引量：1

1

作者 温立斌 何孔旺 +3 位作者 王凤芝 俞正玉 茅爱华 解建平 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2013年第5期34-37,共4页

类猪圆环病毒P1是新发现的一种病原,能引起仔猪出现类似猪断奶后多系统衰竭综合征症状,是目前所知的具有最小基因组的病毒。为了解P1感染范围和基因组分子特征,采用PCR方法扩增P1全基因组,克隆测序后,应用生物信息学进行序列同源性比较... 类猪圆环病毒P1是新发现的一种病原,能引起仔猪出现类似猪断奶后多系统衰竭综合征症状,是目前所知的具有最小基因组的病毒。为了解P1感染范围和基因组分子特征,采用PCR方法扩增P1全基因组,克隆测序后,应用生物信息学进行序列同源性比较及遗传进化分析。结果显示,P1已在我国猪场流行,分离株之间的核苷酸序列同源性为99.1%～100%,可分为2个亚分支;同时免疫组化结果也证实了P1在样品中的分布。 展开更多

关键词 类猪圆环病毒p1 pCR 免疫组化 分子特征

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类猪圆环病毒P1诱导PK15细胞自噬的研究

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作者 温立斌 王凤芝 +2 位作者 何孔旺 解建平 贾化生 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2014年第B12期85-88,共4页

旨在探讨类猪圆环病毒P1感染对PK15细胞自噬的影响。将同一批PK15细胞分成对照组和感染组,感染组在类猪圆环病毒P1感染PK15细胞后14,24,48 h分别收集细胞,对照组也在同样时间收获,用透射电镜观察自噬现象的发生。结果表明,与对照组相比... 旨在探讨类猪圆环病毒P1感染对PK15细胞自噬的影响。将同一批PK15细胞分成对照组和感染组,感染组在类猪圆环病毒P1感染PK15细胞后14,24,48 h分别收集细胞,对照组也在同样时间收获,用透射电镜观察自噬现象的发生。结果表明,与对照组相比,感染组PK15细胞内出现典型自噬形态学变化。揭示类猪圆环病毒P1能诱导PK15细胞发生自噬,但细胞发生自噬的相关信号传导通路还有待进一步研究。 展开更多

关键词 类猪圆环病毒p1 pK15细胞 自噬

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免疫亲和层析纯化类猪圆环病毒P1 被引量：2

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作者 温立斌 何孔旺 +4 位作者 解建平 杨浩 周建新 金全胜 王玉然 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2013年第S1期397-399,共3页

通过免疫亲和层析对类猪圆环病毒因子P1纯化进行了研究。采用环氧活化及NHS活化的琼脂糖凝胶,与兔抗P1表位肽抗体偶联,对P1进行了免疫亲和吸附,通过电镜技术证实获得了纯化病毒。结果表明,免疫亲和层析是有效的P1病毒纯化方法。

关键词 类猪圆环病毒因子p1 纯化 免疫亲和层析

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类猪圆环病毒P1的免疫电镜观察 被引量：1

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作者 温立斌 何孔旺 +4 位作者 解建平 杨浩 周建新 金全胜 王玉然 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2013年第S1期400-402,共3页

采用氯化铯平衡密度梯度离心获得较为纯净的病毒粒子后,经过免疫电镜技术(液相免疫电镜法和免疫胶体金标记法)对P1病毒进行了观察鉴定。结果表明,P1病毒呈球形、无囊膜、直径约为25 nm。

关键词 类猪圆环病毒因子p1 形态学 免疫电镜技术

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类猪圆环病毒 P1转录的 Northern Blot 分析 被引量：2

5

作者 温立斌 王凤芝 +10 位作者 何孔旺 倪艳秀 张雪寒 李彬 王小敏 郭容利 周俊明 俞正玉 茅爱华 吕立新 解建平 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2014年第4期160-163,共4页

为鉴定类猪圆环病毒P1的转录本,采用地高辛标记的RNA探针,通过Northern Blot方法,对转染PK15细胞的类猪圆环病毒P1进行了RNA转录分析。结果表明,Northern杂交可检测到2个RNA转录本,包括正链上ORF3的RNA和负链上ORF1的RNA。同时,ORF3 RN... 为鉴定类猪圆环病毒P1的转录本,采用地高辛标记的RNA探针,通过Northern Blot方法,对转染PK15细胞的类猪圆环病毒P1进行了RNA转录分析。结果表明,Northern杂交可检测到2个RNA转录本,包括正链上ORF3的RNA和负链上ORF1的RNA。同时,ORF3 RNA表达时间比ORF1的短,且丰度也大大低于ORF1。类猪圆环病毒P1至少存在ORF1和ORF3 2个转录本。 展开更多

关键词 类猪圆环病毒p1 转录分析 NORTHERN BLOT

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类猪圆环病毒因子P1核酸链型和极性的研究 被引量：8

6

作者 温立斌 何孔旺 +8 位作者 倪艳秀 张雪寒 李彬 王小敏 郭容利 周俊明 俞正玉 茅爱华 吕立新 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2012年第3期120-122,共3页

研究报道类猪圆环病毒因子P1的核酸链型和极性的研究结果。采用氯化铯平衡密度梯度离心获得较为纯净的病毒粒子后,提取病毒DNA,经S1核酸酶消化、特异性单引物第一轮PCR扩增结合常规第二轮PCR扩增等研究,结果表明,类猪圆环病毒因子P1为... 研究报道类猪圆环病毒因子P1的核酸链型和极性的研究结果。采用氯化铯平衡密度梯度离心获得较为纯净的病毒粒子后,提取病毒DNA,经S1核酸酶消化、特异性单引物第一轮PCR扩增结合常规第二轮PCR扩增等研究,结果表明,类猪圆环病毒因子P1为单股、负链基因组。 展开更多

关键词 类猪圆环病毒因子p1 核酸链型 极性

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应用高分辨熔点曲线分析区分类猪圆环病毒因子P1和猪圆环病毒2型 被引量：4

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作者 温立斌 何孔旺 +5 位作者 杨汉春 郭容利 钟书霖 周俊明 李成仁 陈梦海 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第2期315-319,共5页

为评价高分辨熔点曲线分析在快速鉴别类猪圆环病毒因子P1和猪圆环病毒2型中的应用。在Cor-bett Rotor-Gene 6000定量PCR仪上,利用EvaGreen荧光染料对靶核苷酸序列进行扩增,建立HRM分析P1和PCV2的工作流程。在优化各种条件基础上,利用HR... 为评价高分辨熔点曲线分析在快速鉴别类猪圆环病毒因子P1和猪圆环病毒2型中的应用。在Cor-bett Rotor-Gene 6000定量PCR仪上,利用EvaGreen荧光染料对靶核苷酸序列进行扩增,建立HRM分析P1和PCV2的工作流程。在优化各种条件基础上,利用HRM分析可区分相差1个碱基的靶序列。因此,HRM分析可为P1和PCV2的分子诊断提供一种新的技术手段。 展开更多

关键词 高分辨熔点曲线 类猪圆环病毒因子p1 猪圆环病毒2型 鉴别

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2016年江苏省类猪圆环病毒P1分子流行病学回顾性调查

8

作者 盛少阳 温立斌 +4 位作者 茅爱华 朱雪姣 李彬 任子利 何孔旺 《畜牧与兽医》 北大核心 2019年第3期97-100,共4页

旨在了解2016年江苏省类猪圆环病毒P1流行及毒株变异情况。运用PCR技术对江苏省9个县级市送检的330份血清进行检测,并进行全基因组测序,应用BioEdit和DNAStar对获得的P1全长基因组及ORF1与GenBank中的参考毒株进行序列比对及同源性分析... 旨在了解2016年江苏省类猪圆环病毒P1流行及毒株变异情况。运用PCR技术对江苏省9个县级市送检的330份血清进行检测,并进行全基因组测序,应用BioEdit和DNAStar对获得的P1全长基因组及ORF1与GenBank中的参考毒株进行序列比对及同源性分析,并进行系统进化树分析。共检出阳性样品43份,占总样品数的13%;9个地级市P1检出率差异显著,其中,沛县检出率最高为38.2%,其余各地0%～20%不等。选取9个县级市的代表毒株进行全基因组测序,共获得12株P1全长序列,12株毒株核苷酸同源性在99.4%～100%,ORF1核苷酸同源性在99.1%～100%;与参考毒株相比,ORF1核苷酸同源性在99.4%～100%,氨基酸同源性在99.1%～100%。研究表明,2016年江苏省各地区P1感染率差异显著,但整体感染率较高,毒株变异较小。 展开更多

关键词 类猪圆环病毒p1 序列分析 江苏

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2种猪圆环病毒2型TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及比较（英文） 被引量：2

9

作者 周忠涛 王小敏 +4 位作者 汪伟 茅爱华 温立斌 倪艳秀 何孔旺 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2015年第1期3-8,共6页

[目的]实现在体外对猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）的定量检测。[方法]设计合成2组特异性引物和Taq Man探针,构建分别包含PCV2 ORF1和ORF2基因全长的重组质粒作为标准品,经过反应体系和反应条件的优化,绘制标准曲线,... [目的]实现在体外对猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）的定量检测。[方法]设计合成2组特异性引物和Taq Man探针,构建分别包含PCV2 ORF1和ORF2基因全长的重组质粒作为标准品,经过反应体系和反应条件的优化,绘制标准曲线,建立2种检测PCV2的分别基于PCV2 ORF1和ORF2的Taq Man荧光定量PCR方法。[结果]所建立的2条标准曲线的Ct值与模板拷贝数的对数之间具有良好的线性关系,相关系数R均在0.99以上,扩增效率均在90%~110%;重复性好,组内变异系数均小于5%;特异性强,以猪细小病毒（PPV）、猪圆环病毒1型（PCV1）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）为模板时均无扩增;敏感性高,ORF1方法可达1.0×101copies/μl,ORF2方法可达1.0×102copies/μl。用建立的2种荧光定量PCR方法分别对80份临床样品进行检测并对结果进行比较,结果表明,其中72份临床样品的定量结果数量级基本一致,有8份临床样品的定量结果数量级不一致。利用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法对8份样品进行了检测,证明这8份样品中确实存在P1的感染。[结论]基于ORF1建立的定量检测方法更为准确,可用于PCV2的快速诊断和定量检测。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 TAQ Man荧光定量 ORF1 ORF2 类猪圆环病毒因子p1

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类猪圆环病毒因子P1在自然感染仔猪体内的组织分布 被引量：5

10

作者 温立斌 何孔旺 +9 位作者 俞正玉 茅爱华 高晓静 倪艳秀 张雪寒 郭容利 李彬 王小敏 周俊明 吕立新 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期1-3,共3页

选用3头自然感染仔猪和1头阴性对照猪,剖杀后采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰脏、脑、空肠、扁桃体、胸腺、淋巴结、膀胱、性腺等组织,用荧光定量PCR方法检测病毒在组织中的分布及病毒载量。结果显示,类猪圆环病毒因子P1分布在仔... 选用3头自然感染仔猪和1头阴性对照猪,剖杀后采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰脏、脑、空肠、扁桃体、胸腺、淋巴结、膀胱、性腺等组织,用荧光定量PCR方法检测病毒在组织中的分布及病毒载量。结果显示,类猪圆环病毒因子P1分布在仔猪的心脏、肝脏、肺脏、胰脏、脑和膀胱等组织,病毒载量以胰脏、脑和膀胱为最高,可达105拷贝/g以上;对照猪脏器中没有检测到病毒核酸。该研究为P1的诊断及致病机制奠定了基础。 展开更多

关键词 类猪圆环病毒因子p1 组织分布 病毒载量

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PCV2、P1和TTV混合感染的流行病学调查 被引量：3

11

作者 王小敏 何孔旺 +6 位作者 王东田 周忠涛 茅爱华 俞正玉 汪伟 倪艳秀 温立斌 《福建农业学报》 CAS 2013年第9期864-868,共5页

【目的】研究2012年我国部分地区猪圆环病毒2型(PCV2)、类猪圆环病毒P1和猪输血传播病毒(TTV)混合感染的情况。【方法】采用PCR方法对采集自我国江苏、安徽和浙江3省的108份组织和血清样品进行PCV2、P1和TTV检测。【结果】PCV2感染率为6... 【目的】研究2012年我国部分地区猪圆环病毒2型(PCV2)、类猪圆环病毒P1和猪输血传播病毒(TTV)混合感染的情况。【方法】采用PCR方法对采集自我国江苏、安徽和浙江3省的108份组织和血清样品进行PCV2、P1和TTV检测。【结果】PCV2感染率为64.81%,P1感染率为12.96%,TTV1感染率为33.33%,TTV2感染率为51.85%,其中8份样品表现为PCV2和P1的混合感染,42份样品表现为PCV2和TTV的混合感染,4份样品表现为PCV2、P1和TTV的混合感染,分别占样品总数的7.41%、38.89%和3.7%。【结论】猪群中PCV2和TTV的感染比较普遍,P1的感染率较低,PCV2和TTV的混合感染率较高,混合感染种类复杂,加重了疫病防控的难度。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 类猪圆环病毒因子p1 猪输血传播病毒

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