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穿心莲糖苷水解酶基因ApGH的克隆、生物信息学分析及表达研究
1
作者 李媛 任广喜 +4 位作者 康颖泉 王迷娜 范勇 姜丹 刘春生 《中国现代中药》 CAS 2024年第7期1141-1149,共9页
目的:对穿心莲糖苷水解酶(ApGH)基因进行克隆、生物信息学分析、原核表达和相对表达量分析。方法:取穿心莲新鲜叶片,提取RNA并反转录为互补脱氧核糖核酸(cDNA)作为模板,以穿心莲转录组中筛选到的糖苷水解酶ApGH基因开放阅读框(ORF)设计... 目的:对穿心莲糖苷水解酶(ApGH)基因进行克隆、生物信息学分析、原核表达和相对表达量分析。方法:取穿心莲新鲜叶片,提取RNA并反转录为互补脱氧核糖核酸(cDNA)作为模板,以穿心莲转录组中筛选到的糖苷水解酶ApGH基因开放阅读框(ORF)设计特异性引物,进行聚合酶链式反应(PCR)扩增,经测序后获得的基因序列利用生物信息学软件预测基因编码蛋白特征,构建原核表达载体在大肠埃希菌中诱导表达目的蛋白质,并利用实时荧光定量PCR分析ApGH基因的表达模式。结果:克隆所得ApGH基因的ORF全长1734 bp,编码577个氨基酸(GenBank登录号:OR887606)。ApGH为稳定亲水蛋白质,无信号肽和跨膜结构域,属于糖苷水解酶家族;系统进化分析表明,ApGH归属于GH1家族。将ApGH基因构建到原核表达载体HIS-MBP-pET28a上,在大肠埃希菌Transetta(DE3)中成功表达出重组蛋白质。实时荧光定量PCR检测结果表明,ApGH基因在叶中表达量最高,茎和根中表达量较低。结论:克隆得到穿心莲ApGH基因并对其蛋白质序列特征进行了系统分析,证明其在大肠埃希菌中成功表达重组蛋白质,且主要在穿心莲叶中表达。研究结果为进一步探索穿心莲糖苷水解酶的催化功能提供了依据。 展开更多
关键词 穿心莲 糖苷水解酶 基因克隆 生物信息学分析 基因表达
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铁皮石斛糖苷水解酶GH3基因家族鉴定及表达模式分析
2
作者 李亚萍 金福来 +5 位作者 黄宗贵 张涛 段晓婧 姜武 陶正明 陈家栋 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第4期790-799,共10页
利用生物信息学方法对铁皮石斛GH3基因家族成员进行筛选、鉴定,对其基因结构、蛋白理化性质、亚细胞定位、系统进化、蛋白质二级结构及跨膜预测、基序及染色体定位进行分析,同时分析GH3基因家族在不同组织以及低磷与正常磷水平下的表达... 利用生物信息学方法对铁皮石斛GH3基因家族成员进行筛选、鉴定,对其基因结构、蛋白理化性质、亚细胞定位、系统进化、蛋白质二级结构及跨膜预测、基序及染色体定位进行分析,同时分析GH3基因家族在不同组织以及低磷与正常磷水平下的表达模式。在铁皮石斛全基因组中筛选得到13个GH3家族基因,其中一个基因存在可变剪切,表达为14个GH3蛋白。GH3基因家族蛋白可分为3个亚家族,各亚家族中不同基因相对保守;各成员均含有内含子与外显子,内含子相位在0~2,13个基因分布在8染色体上。GH3基因家族在铁皮石斛的8个组织中均有表达,其中白根和花蕾表达量高,茎和唇瓣低,推测GH3基因家族可能参与铁皮石斛根系生长以及开花现蕾。低磷与正常磷水平表达结果表明,低磷水平下叶中基因LOC 110110392、LOC 110100144表达上调,根中基因LOC 110095762、LOC 110107269表达上调。该研究对铁皮石斛糖苷水解酶GH3基因家族成员生物信息学、在不同组织以及正常磷与低磷条件下的表达水平进行研究分析,筛选响应低磷信号的糖苷水解酶基因,为后期研究糖苷水解酶参与低磷条件下铁皮石斛多糖代谢调节机制提供研究基础。 展开更多
关键词 铁皮石斛 糖苷水解酶GH3 生物信息学分析 基因表达模式
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禾谷炭疽菌中糖苷水解酶互作蛋白找寻及遗传关系预测分析
3
作者 薄淑文 韩长志 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期443-450,共8页
【目的】糖苷水解酶(GH)作为破坏植物细胞壁的重要酶类,在植物病原菌致病过程中发挥着重要作用。为了解GH蛋白之间的互作机制,对禾谷炭疽菌GH互作蛋白及其遗传关系进行研究。【方法】基于前期所获得的禾谷炭疽菌GH蛋白,通过STRING网络... 【目的】糖苷水解酶(GH)作为破坏植物细胞壁的重要酶类,在植物病原菌致病过程中发挥着重要作用。为了解GH蛋白之间的互作机制,对禾谷炭疽菌GH互作蛋白及其遗传关系进行研究。【方法】基于前期所获得的禾谷炭疽菌GH蛋白,通过STRING网络在线分析不同GH蛋白之间的互作关系,通过ProtComp v9.0在线分析GH蛋白的亚细胞定位,利用Clustal X和MEGA 11软件对GH蛋白进行多重比对和构建系统进化树,并选取互作关系多的蛋白通过GRAMM在线软件进行分子对接。【结果】禾谷炭疽菌中89个GH蛋白之间的互作表现为3大类的聚集关系,其中,Ⅰ类聚集了34个GH蛋白,Ⅱ类聚集了33个GH蛋白,Ⅲ类聚集了22个GH蛋白;85个GH蛋白定位于细胞外(分泌),仅4个GH蛋白定位于细胞核、内质网、细胞质膜。系统发育树分为4大类,有一些GH亚家族蛋白只存在于一类中,也有一些GH亚家族蛋白同时存在于两类及两类以上中;分子对接发现,互作蛋白之间均存在多个相互作用的氨基酸残基位点。【结论】禾谷炭疽菌GH蛋白之间有3种互作情况,即不同亚家族GH蛋白之间的互作、同一亚家族中不同GH蛋白之间的互作以及不存在互作关系;大部分GH蛋白定位于细胞外;大多数GH亚家族中不同蛋白亲缘关系较近,蛋白之间可通过氢键相互作用。 展开更多
关键词 禾谷炭疽菌 糖苷水解酶 蛋白互作 协同作用
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植物病原丝状真菌中糖苷水解酶的研究进展
4
作者 肖会 韩长志 《江苏农业科学》 北大核心 2024年第8期1-7,共7页
植物病原丝状真菌中的糖苷水解酶是碳水化合物活性酶中的一类,在植物病原真菌侵染植物的过程中通过分解其细胞壁中的碳水化合物组分从而实现真菌对植物免疫防卫反应的进一步操控。前期对植物病原丝状真菌中碳水化合物活性酶展开了综述... 植物病原丝状真菌中的糖苷水解酶是碳水化合物活性酶中的一类,在植物病原真菌侵染植物的过程中通过分解其细胞壁中的碳水化合物组分从而实现真菌对植物免疫防卫反应的进一步操控。前期对植物病原丝状真菌中碳水化合物活性酶展开了综述性评价,近年来,随着生物技术和生物信息学、分子生物学等试验方法的发展,以及基因组学、代谢组学、蛋白质组学、转录组学等组学的不断发展,研究者对糖苷水解酶的研究不断深入和完善。旨在对糖苷水解酶进行综述性评价,重点关注其分类、功能及研究方法。在分类方面,主要涉及底物特异性、结构相似性、催化作用机制和水解位置。在功能方面,重点研究其在稻瘟病菌菌、禾谷炭疽病病菌和希金斯炭疽病病菌等病原丝状真菌侵染过程中的作用。此外,还探究了分离和鉴定、生物学特性及基因克隆和表达分析等方面的研究方法。研究的最终目标是深入分析上述研究成果,系统梳理糖苷水解酶在上述真菌中的功能,以期为今后解析病原丝状真菌中糖苷水解酶的功能提供重要理论支撑,并对今后学术界的研究重点、难点及热点进行展望,为未来开展糖苷水解酶功能解析、互作蛋白找寻及加工应用提供研究思路。 展开更多
关键词 植物病原 丝状真菌 糖苷水解酶 功能 碳水化合物活性酶 研究进展
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烟草糖苷水解酶GH3基因家族鉴定与表达分析
5
作者 张贞宇 罗正飞 +4 位作者 杨帅 顾江南 尹协 韦银龙 聂琼 《山东农业科学》 北大核心 2024年第4期9-19,共11页
糖苷水解酶GH3基因家族在植物的糖代谢和生长发育中起着重要作用,而烟草GH3基因家族目前尚未见相关鉴定和分析研究报道。本研究采用生物信息学方法在烟草基因组中鉴定GH3家族基因,并对其在不同组织中及逆境条件下的表达模式进行了分析... 糖苷水解酶GH3基因家族在植物的糖代谢和生长发育中起着重要作用,而烟草GH3基因家族目前尚未见相关鉴定和分析研究报道。本研究采用生物信息学方法在烟草基因组中鉴定GH3家族基因,并对其在不同组织中及逆境条件下的表达模式进行了分析。结果表明,在普通烟草K326的基因组中共鉴定出35个GH3基因,其中23个被定位在14条染色体上,存在6对共线性基因;GH3家族蛋白均为热稳定性蛋白,其基因上游启动子区均包含多个激素和胁迫响应元件。转录组数据表明,GH3家族基因大多数在烟苗茎尖高表达,少部分在根和茎中高表达,表达量受光照时间影响;烟苗受到干旱胁迫后GH3家族成员都有不同程度的响应。挑选4个NtGH3基因进行qRT-PCR分析,结果表明,NtGH3-5、NtGH3-19、NtGH3-22、NtGH3-26可能参与响应低温以及ABA处理。这可为深入了解烟草GH3基因家族及其功能提供依据。 展开更多
关键词 烟草 GH3基因家族 糖苷水解酶 生物信息学分析 表达模式
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具有辅助降解纤维素功能的大斑刚毛座腔菌糖苷水解酶GH61的鉴定、异源表达及功能分析 被引量：2
6
作者 马玉倩 孙东辉 +3 位作者 岳浩峰 辛佳瑜 刘宁 曹志艳 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期124-135,共12页
糖苷水解酶61家族(GH61)属于一类同时具有氧化作用和水解作用的纤维素降解酶类,既具有微弱的纤维素内切酶活性,也可通过氧化作用破坏纤维素晶体结构促进纤维素酶对木质纤维素的降解,在生物质资源的利用方面具有潜在的应用价值。对大斑... 糖苷水解酶61家族(GH61)属于一类同时具有氧化作用和水解作用的纤维素降解酶类,既具有微弱的纤维素内切酶活性,也可通过氧化作用破坏纤维素晶体结构促进纤维素酶对木质纤维素的降解,在生物质资源的利用方面具有潜在的应用价值。对大斑刚毛座腔菌Setosphaeria turcica的GH61家族基因进行鉴定及生物信息学分析,通过转录组数据分析及荧光定量PCR验证,筛选出受玉米秸秆木质纤维素底物诱导表达的GH61家族基因StGH61-11。将StGH61-11进行重组表达,使用2,6-二甲氧基苯酚氧化反应测定其酶活力并优化诱导条件,表征其酶学性质并检测其对纤维素酶水解木质纤维素的促进作用。结果表明,在S.turcica基因组中存在21个GH61家族基因,且S.turcica在玉米秸秆的诱导下滤纸酶活明显增加,对其进行转录组分析发现,在以玉米秸秆为碳源时GH61家族基因中有11个基因的表达量增加。将其中StGH61-11基因在大肠杆菌中诱导表达,最佳诱导条件为25℃、1 mmol/L IPTG诱导9 h,此时获得的蛋白比活力可达到(54.08±1.67)U/g。重组蛋白StGH61-11的最佳催化条件为温度50℃、pH 5,在最佳催化条件下可以显著提高纤维素酶水解玉米秸秆的活性,协同度最高可达2.5,糖化率最高可达46.5%。 展开更多
关键词 GH61糖苷水解酶家族 多糖单加氧酶 纤维素酶 AA9 大斑刚毛座腔菌 协同降解 异源表达
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高产大豆异黄酮糖苷水解酶菌株的发酵工艺研究 被引量：10
7
作者 谢明杰 徐春华 +2 位作者 刘长江 卢明春 金凤燮 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期41-44,共4页
Absidia sp.R是从酒曲中分离出的一株产大豆异黄酮糖苷水解酶活性较高的菌株。该菌最佳产酶条件为:2.5％的麦麸为碳源,1％的硝酸钠为氮源,培养基起始pH为7.0,瓶装量为40mL/250mL,接种量8％,培养温度为30℃,转数为160r/min,培养时间为84h... Absidia sp.R是从酒曲中分离出的一株产大豆异黄酮糖苷水解酶活性较高的菌株。该菌最佳产酶条件为:2.5％的麦麸为碳源,1％的硝酸钠为氮源,培养基起始pH为7.0,瓶装量为40mL/250mL,接种量8％,培养温度为30℃,转数为160r/min,培养时间为84h,其酶活力可达到82U/mL。除Cu2+对该菌产酶有较强的抑制作用外,金属离子对产酶影响不大。 展开更多
关键词 大豆异黄酮糖苷水解酶 发酵条件 ABSIDIA sp.R菌株
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水稻糖苷水解酶基因OsBE1在叶绿体发育中的功能 被引量：6
8
作者 王兴春 王敏 +4 位作者 季芝娟 陈钊 刘文真 韩渊怀 杨长登 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期2090-2097,共8页
叶绿体在植物碳水化合物代谢中起着至关重要的作用,然而有关碳水化合物代谢在叶绿体发育过程中的功能却知之甚少。从水稻中克隆了一个Oryza sativa Branching Enzyme 1(OsBE1)基因,该基因编码一个糖苷水解酶13家族的蛋白。OsBE1与拟南芥... 叶绿体在植物碳水化合物代谢中起着至关重要的作用,然而有关碳水化合物代谢在叶绿体发育过程中的功能却知之甚少。从水稻中克隆了一个Oryza sativa Branching Enzyme 1(OsBE1)基因,该基因编码一个糖苷水解酶13家族的蛋白。OsBE1与拟南芥AtBE1的一致性为66%,但与水稻典型淀粉分支酶的一致性仅约为40%。该基因的T-DNA插入功能缺失突变体osbe1幼苗白化,且其白化表型不能用外源糖类拯救。osbe1突变体幼苗最终在三叶期死亡。淀粉染色表明,osbe1突变体中淀粉的含量与野生型无明显差异。进一步的研究表明,osbe1突变体叶绿体数目较少,且无明显的基质片层结构。构建了OsBE1基因过量表达载体p CAMBIA1300-35S-OsBE1,并将其转化水稻中花11。获得的108株转基因水稻中,77株表现不同程度的黄化。本文初步揭示了碳水化合物代谢调控叶绿体发育的机制,并为深入研究糖苷水解酶BE1的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 糖苷水解酶 碳水化合物代谢 OsBE1 叶绿体 水稻
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糖苷水解酶第3家族β-葡萄糖苷酶的研究进展 被引量：18
9
作者 周林芳 江波 +1 位作者 张涛 李淑华 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2017年第14期330-335,共6页
β-葡萄糖苷酶属于糖苷水解酶家族,在食品、医药、生物质转化中有着重要的作用。本文主要对糖苷水解酶家族3的β-葡萄糖苷酶进行综述,主要包括理化性质、底物特异性、反应动力学、三维结构、催化残基和酶基因克隆表达等几个方面,为从基... β-葡萄糖苷酶属于糖苷水解酶家族,在食品、医药、生物质转化中有着重要的作用。本文主要对糖苷水解酶家族3的β-葡萄糖苷酶进行综述,主要包括理化性质、底物特异性、反应动力学、三维结构、催化残基和酶基因克隆表达等几个方面,为从基础领域研究该家族此酶的催化机理及表达调控机制提供参考。 展开更多
关键词 Β-葡萄糖苷酶 糖苷水解酶家族 三维结构 催化残基 克隆表达
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福寿螺糖苷水解酶基因核心片断的克隆及序列分析 被引量：5
10
作者 欧阳嘉 谢承佳 +1 位作者 李双 何冰芳 《南京林业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期29-32,共4页
从福寿螺的胃部组织中获得总RNA,经RT-PCR扩增、测序得到1条新糖苷水解酶基因片段。分析显示其ORF(Open Reading Frame)全长882 bp,编码294个氨基酸。与福寿螺多功能纤维素酶EGX的C端高度同源性达到89.8%,含有糖苷水解酶第10家族的保守... 从福寿螺的胃部组织中获得总RNA,经RT-PCR扩增、测序得到1条新糖苷水解酶基因片段。分析显示其ORF(Open Reading Frame)全长882 bp,编码294个氨基酸。与福寿螺多功能纤维素酶EGX的C端高度同源性达到89.8%,含有糖苷水解酶第10家族的保守性氨基酸序列。 展开更多
关键词 福寿螺 糖苷水解酶 纤维素 木聚糖
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聚腺苷二磷酸核糖糖苷水解酶调节癫痫大鼠海马组织凋亡诱导因子及炎症因子的研究 被引量：3
11
作者 王胜军 赵秀鹤 +3 位作者 刘学伍 张同霞 陈学兰 迟兆富 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期258-262,共5页
目的:探讨聚腺苷二磷酸核糖糖苷水解酶(PARG)对癫痫大鼠海马神经元损伤的影响及其分子机制,探讨PARG抑制剂单宁酸对凋亡诱导因子(AIF)、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的调节作用。方法:应用Nissl染色方法检测海藻氨酸... 目的:探讨聚腺苷二磷酸核糖糖苷水解酶(PARG)对癫痫大鼠海马神经元损伤的影响及其分子机制,探讨PARG抑制剂单宁酸对凋亡诱导因子(AIF)、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的调节作用。方法:应用Nissl染色方法检测海藻氨酸致痫大鼠海马神经元在单宁酸干预前后的变化;应用Western blot-ting检测单宁酸干预前后致痫大鼠海马组织聚腺苷二磷酸核糖、AIF、IL-1β和TNF-α表达的变化。结果:单宁酸干预明显减少癫痫大鼠损伤海马神经元数目(P<0.05);增加致痫大鼠海马组织聚腺苷二磷酸核糖水平(P<0.05);增加致痫大鼠海马组织线粒体蛋白中AIF含量,降低核蛋白中AIF含量(P<0.05);可显著降低致痫大鼠海马组织IL-1β和TNF-α蛋白表达(P<0.05)。结论:PARG抑制剂单宁酸可减轻癫痫大鼠海马神经元损伤,阻断线粒体AIF的核转位,抑制海马组织IL-1β和TNF-α的表达。 展开更多
关键词 癫痫 聚腺苷二磷酸核糖糖苷水解酶 单宁酸 海马
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阿拉伯呋喃糖苷水解酶对啤酒大麦麦芽过滤性能的影响 被引量：3
12
作者 高飞 金昭 +2 位作者 蔡国林 董建军 陆健 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第14期237-240,255,共5页
阿拉伯呋喃糖苷水解酶(Arabinoxylan arabinofuranohydrolase,AXAH)是阿拉伯木聚糖完全降解的关键酶之一。本文比较了过滤性能差异显著的江苏单二和港啤大麦麦芽与进口Metcalfe和Baudin大麦麦芽中的AXAH活力,发现单二和港啤中的AXAH平... 阿拉伯呋喃糖苷水解酶(Arabinoxylan arabinofuranohydrolase,AXAH)是阿拉伯木聚糖完全降解的关键酶之一。本文比较了过滤性能差异显著的江苏单二和港啤大麦麦芽与进口Metcalfe和Baudin大麦麦芽中的AXAH活力,发现单二和港啤中的AXAH平均活力只是Metcalfe和Baudin中平均活力的60%。为了进一步确定AXAH对大麦麦芽过滤性能的影响,文章通过硫酸铵分级沉淀、SP FF和Q FF离子柱层析以及Sephacryl S-100 HR凝胶过滤层析技术对单二大麦麦芽中AXAH进行了纯化,并将其添加到协定糖化过程的起始阶段。结果发现,当加酶量达到6mU/g时,协定糖化麦汁的过滤速度提高了34.2%,粘度降低了5.5%,麦汁浊度增加了32.5%。这一结果表明,添加AXAH及其与其他水解酶协同作用,促进了多聚阿拉伯木聚糖、β-葡聚糖以及高分子氮的降低,也促进了阿拉伯木聚糖和麦汁总氮含量的升高。 展开更多
关键词 大麦麦芽 过滤性能 阿拉伯呋喃糖苷水解酶 协定糖化
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绿色木霉产生的糖苷水解酶类 被引量：2
13
作者 高培基 曲音波 王祖农 《自然科学进展（国家重点实验室通讯）》 1991年第6期551-554,共4页
利用微生物的纤维素酶水解纤维素为可溶性糖类的研究是具有广泛应用前景的工作,但由于在植物残体中纤维素总是与半纤维素、木素以及甘露聚糖、果胶等聚合物形成复杂的高聚物,因而任一单独的酶类都不能对其进行有效的酶解。通常都需用物... 利用微生物的纤维素酶水解纤维素为可溶性糖类的研究是具有广泛应用前景的工作,但由于在植物残体中纤维素总是与半纤维素、木素以及甘露聚糖、果胶等聚合物形成复杂的高聚物,因而任一单独的酶类都不能对其进行有效的酶解。通常都需用物理、化学方法脱除半纤维素、木素之后,纤维素始可被有效酶解。但是,这类预处理方法又有成本高,能耗大,副产物不易被利用等缺点,因此,利用多种糖苷酶类对植物材料进行全组分水解,以实现生物量的全利用,被认为是解决上述难题的合理途径。 展开更多
关键词 绿色木霉 糖苷水解酶类
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粗毛纤孔菌糖苷水解酶5基因克隆及蛋白质结构分析
14
作者 刘晓晗 王峰 +6 位作者 董爱荣 陈俏丽 刘立宏 零雅茗 王博文 丁晓霞 王世新 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第2期163-168,共6页
【目的】克隆得到粗毛纤孔菌糖苷水解酶5基因,并对该基因进行生物信息学分析、蛋白质原核表达和酶活研究,为糖苷水解酶的利用提供依据。【方法】分离纯化粗毛纤孔菌,并于PDA斜面长期保存。应用TRIzol提取粗毛纤孔菌总RNA,通过AMV反转录... 【目的】克隆得到粗毛纤孔菌糖苷水解酶5基因,并对该基因进行生物信息学分析、蛋白质原核表达和酶活研究,为糖苷水解酶的利用提供依据。【方法】分离纯化粗毛纤孔菌,并于PDA斜面长期保存。应用TRIzol提取粗毛纤孔菌总RNA,通过AMV反转录系统将RNA反转录成c DNA,构建c DNA文库;应用NCBI BLAST分析并检测糖苷水解酶基因家族5阳性序列,RACE法克隆基因全长命名为Ih GH5-1并提交NCBI注册;ORF-Finder分析Ih GH5-1基因开放阅读框,推导出氨基酸序列;筛选NCBI登录的糖苷水解酶家族5同源序列,Clustal W进行保守结构域区段多序列比对;应用Mega 5.05选用WAG+G模型构建最大似然树;应用PSIPRED server对Ih GH5-1进行α螺旋和β折叠的蛋白质二级结构分析,应用SWISS-MODEL对Ih GH5-1进行三维建模,应用VMD1.8.6分析Ih GH5-1三维结构;设计原核表达引物并进行PCR扩增,将扩增得到的基因片段连接至p QE-30 UA载体并转入大肠埃希菌JM109感受态细胞,诱导表达后通过SDS-PAGE电泳检测表达量;测定糖苷水解酶活性并计算酶活。【结果】TRIzol提取的粗毛纤孔菌总RNA经分光光度计检验符合标准(OD260/OD280=2.0,OD260/OD230>1.8),c DNA文库成功构建并测序;RACE法克隆得到5'序列长度为770 bp,3'序列长度为1 562 bp且含有Poly A的序列,5'和3'序列拼接得到基因全长序列长1 727 bp,NCBI注册号为KM368321;ORF分析得到Ih GH5-1氨基酸序列含有300个氨基酸,分子质量为31.226 55 k D,等电点(p I)为9.24;结构域分析表明Ih GH5-1具有保守的催化结构域;最大似然树分析表明多数子囊菌糖苷水解酶家族5聚在一起,多数担子菌糖苷水解酶家族5聚在一起,粗毛纤孔菌Ih GH5-1蛋白质与太瑞斯梭孢壳霉和球毛壳菌等子囊菌的糖苷水解酶亲缘关系更近;蛋白质三维结构分析表明粗毛纤孔菌Ih GH5-1含有7个α螺旋、4个β折叠,三维比对表明粗毛纤孔菌Ih GH5-1三维结构与其他真菌糖苷水解酶家族5蛋白空间结构相近,进化关系与最大似然树分析相符;原核表达及酶活测定表明该基因成功表达,表达产物在65℃时相对酶活性最高。【结论】本研究可为白腐菌纤维素酶大规模的工业化应用提供前期研究基础和理论依据。 展开更多
关键词 粗毛纤孔菌 糖苷水解酶家族5 水曲柳 木材白色腐朽
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贝西滑刃线虫糖苷水解酶16基因克隆及功能
15
作者 刘晓晗 王峰 +7 位作者 李丹蕾 董爱荣 陈俏丽 牛春阳 王博文 零雅茗 江珊 段颜祯 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期124-127,共4页
为研究线虫寄生相关基因,基于贝西滑刃线虫转录组高通量测序数据,筛选并克隆了贝西滑刃线虫糖苷水解酶16基因,对该基因进行了功能分析;应用Mega 5.05选用WAG模型所构建的最大似然树进行分析比对;通过原位杂交,定位了糖苷水解酶16基因在... 为研究线虫寄生相关基因,基于贝西滑刃线虫转录组高通量测序数据,筛选并克隆了贝西滑刃线虫糖苷水解酶16基因,对该基因进行了功能分析;应用Mega 5.05选用WAG模型所构建的最大似然树进行分析比对;通过原位杂交,定位了糖苷水解酶16基因在线虫体内的表达部位,分析了糖苷水解酶蛋白的三维空间结构。结果表明:贝西滑刃线虫糖苷水解酶16基因与真菌亲缘关系近,是通过基因平移解说的一个重要佐证。 展开更多
关键词 贝西滑刃线虫 糖苷水解酶16基因 基因克隆 基因平移
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尖吻蝮蛇毒NAD糖苷水解酶荧光光谱和荧光猝灭研究
16
作者 陈真龙 刘清亮 +2 位作者 张玉慧 余华明 张祖德 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第5期842-843,共2页
70年代就有报道从蛇毒中提纯NAD糖苷水解酶(NADase,E.C.3.2.2.5)和一些生物性质方面的研究.Huang等[1]从皖南尖吻蝮蛇毒中分离得到的NADase是由两个相同亚基组成,含糖33%,等电点为7.6.刘清亮等[2]研究了NADase的ESR谱,推知Cu2+离子至少... 70年代就有报道从蛇毒中提纯NAD糖苷水解酶(NADase,E.C.3.2.2.5)和一些生物性质方面的研究.Huang等[1]从皖南尖吻蝮蛇毒中分离得到的NADase是由两个相同亚基组成,含糖33%,等电点为7.6.刘清亮等[2]研究了NADase的ESR谱,推知Cu2+离子至少与三个氮原子配位.本文主要研究多种?.. 展开更多
关键词 尖吻蝮蛇毒 NAD 糖苷水解酶 荧光光谱 荧光猝灭
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嗜酸糖苷水解酶研究进展
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作者 罗会颖 姚斌 范云六 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期1-7,共7页
随着极端微生物及极端酶的广泛研究,嗜酸酶因其在极端酸性环境中具有高的酶活性和稳定性而倍受关注,并取得了较大的研究进展。嗜酸糖苷水解酶是嗜酸酶中最重要的一类,在生物能源、饲料、食品等工业中具有重要的应用前景。综述了重要嗜... 随着极端微生物及极端酶的广泛研究,嗜酸酶因其在极端酸性环境中具有高的酶活性和稳定性而倍受关注,并取得了较大的研究进展。嗜酸糖苷水解酶是嗜酸酶中最重要的一类,在生物能源、饲料、食品等工业中具有重要的应用前景。综述了重要嗜酸糖苷水解酶,包括嗜酸淀粉酶、嗜酸纤维素酶、嗜酸木聚糖酶和甘露聚糖酶在基因的挖掘、表达、分子改良嗜酸机制研究以及应用等方面国内外的研究进展,展望了嗜酸糖苷水解酶未来可能的研究方向和发展前景。 展开更多
关键词 极端酶 嗜酸菌 嗜酸糖苷水解酶 嗜酸机制
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糖苷水解酶32家族结构与功能的研究进展 被引量：5
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作者 陆璐 陶雅军 +1 位作者 罗学娅 马君燕 《中国酿造》 CAS 北大核心 2019年第8期14-19,共6页
糖苷水解酶32(GH32)家族是一类广泛存在于植物、真菌和细菌中的水解酶,作用于果聚糖苷键的水解或合成,在果聚糖的生物合成、细胞壁代谢、植物防御、植物细胞分化和发育、果聚糖类物质动员、刺激肠道有益细菌生长等各种生物过程发挥重要... 糖苷水解酶32(GH32)家族是一类广泛存在于植物、真菌和细菌中的水解酶,作用于果聚糖苷键的水解或合成,在果聚糖的生物合成、细胞壁代谢、植物防御、植物细胞分化和发育、果聚糖类物质动员、刺激肠道有益细菌生长等各种生物过程发挥重要的作用。GH32家族的三维结构高度保守,由N-端催化结构域和C-端β-三明治结构域组成。目前,GH32家族已有10 146个家庭成员,其中15种酶的晶体结构得到解析,明确了酶的三维结构和催化机制。该文综述了GH32家族的成员及生物学功能、三维结构、催化活性中心和催化机制,论述了芳香族区域在酶与底物识别中的重要作用,展望了GH32家族工业用酶的改造方向。 展开更多
关键词 糖苷水解酶32家族 三维结构 活性中心 催化机制 芳香族区域
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猪链球菌2型05ZYH33糖苷水解酶SSU05_1921和SSU05_1922的表达纯化及功能研究 被引量：3
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作者 卫东 高广娟 +4 位作者 武柳君 朱金鲁 刘思国 刘冉 张跃灵 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期269-276,共8页
为了研究猪链球菌2型(SS2)05ZYH33菌株高甘露糖型N-聚糖水解酶的结构域及功能,本研究通过BLAST检索,发现该菌株中存在分别与肺炎链球菌高甘露糖型N-聚糖水解酶SpGH92和EndoD同源的蛋白,分别为SSU05_1921(后简写为1921)和SSU05_1922(后... 为了研究猪链球菌2型(SS2)05ZYH33菌株高甘露糖型N-聚糖水解酶的结构域及功能,本研究通过BLAST检索,发现该菌株中存在分别与肺炎链球菌高甘露糖型N-聚糖水解酶SpGH92和EndoD同源的蛋白,分别为SSU05_1921(后简写为1921)和SSU05_1922(后简写为1922)。本研究通过原核表达系统和Ni-NTA柱亲和层析纯化,获得了1921和1922全长蛋白,以及1922蛋白的糖苷水解酶结构域1922-Cat。通过6个蛋白反应(不加蛋白的阴性对照、分别仅加1921和1922的蛋白反应2、3,同时加入1921和1922的蛋白反应4、5及同时加入1921和1922-Cat的蛋白反应6)的RNase B去糖基化试验,反应结束后分别通过SDS-PAGE及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析RNase B的水解(即去糖基化)产物,研究1921和1922水解高甘露糖型N-聚糖的功能。结果显示,1921为外切α-1,2-甘露糖苷酶,水解RNase B高甘露糖型N-聚糖末端的α-1,2-甘露糖苷键;1922为内切β-1,4-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶,水解RNase B高甘露糖型N-聚糖中的几丁二糖,作用位点为β-1,4-N-乙酰氨基葡萄糖苷键。且只有在1921去除所有的α-1,2-甘露糖苷键,1922才能彻底水解高甘露糖型N-聚糖。二者的联合作用(反应4)结果显示,在15 ku处出现单一条带,表明二者联合作用于RNase B的高甘露糖型N-聚糖后,将其彻底去糖基化为R-GlcNAc,且1921与1922-Cat的联合作用与上述联合作用结果一致,表明1922的主要催化结构域即为1922-Cat。因此选择1921与1922-Cat联合作用于RNase B的去糖基化反应研究不同pH、不同金属离子及EDTA和EGTA螯合物对该联合作用的影响。结果显示,该联合作用的最适pH为7.0~8.0,二价金属离子Cu^(2+)、Fe^(2+)、Ni^(2+)、Co^(2+)、Zn^(2+)均明显抑制1921与1922-Cat的联合作用,Ca;部分抑制该联合作用,而二价离子Mg;、Mn;和一价离子K^(+)、Na^(+)及二价金属离子螯合物EDTA和EGTA对该联合作用无明显抑制作用,表明1921和1922-Cat的联合作用不依赖于二价金属离子。本研究首次较详细探究了SS2高甘露糖型N-聚糖水解酶的功能和生化特性,为解析SS定植和感染过程中糖类营养物质获取的机制奠定了基础。 展开更多
关键词 猪链球菌2型05ZYH33 SSU05_1921 SSU05_1922 糖苷水解酶 高甘露糖型N-聚糖
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一种新型糖苷水解酶的异源表达及酶学性质研究 被引量：2
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作者 徐龙威 雍婕 周海燕 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期650-658,共9页
为得到MtGH6最优的表达宿主,构建了质粒pET21a-MtGH6、pBES-MtGH6、pPICZαA-MtGH6,以大肠埃希菌BL21、枯草芽孢杆菌RIK1285及毕赤酵母GS115为工程菌,对MtGH6进行异源表达及分离纯化,并对表达MtGH6的3个宿主菌的生长状况、产酶量、纯化... 为得到MtGH6最优的表达宿主,构建了质粒pET21a-MtGH6、pBES-MtGH6、pPICZαA-MtGH6,以大肠埃希菌BL21、枯草芽孢杆菌RIK1285及毕赤酵母GS115为工程菌,对MtGH6进行异源表达及分离纯化,并对表达MtGH6的3个宿主菌的生长状况、产酶量、纯化回收率、酶活力等参数进行比较分析。结果表明:大肠埃希菌BL21及枯草芽孢杆菌RIK1285在生长稳定后,OD值维持在1.5,而毕赤酵母GS115生长稳定后,OD值维持在2.0;毕赤酵母GS115生产的MtGH6为77mg/L,纯化回收率为15.40%,产酶量和纯化回收率均高于大肠埃希菌BL21、枯草芽孢杆菌RIK1285生产的MtGH6;由毕赤酵母GS115表达的MtGH6的酶活力为15.60U/mg,由大肠埃希菌BL21及枯草芽孢杆菌RIK1285表达的MtGH6分别为7.45、10.06U/mg,说明毕赤酵母GS115是MtGH6的最优表达宿主;对其分泌的MtGH6的酶学性质展开研究,结果表明在降解微晶纤维素的反应中,该酶最适pH为8.0,最适温度为60℃,添加0.5 mmol/L Mn2+可使其活性提高,表明MtGH6在生物燃料生产中可能具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 糖苷水解酶 异源表达 宿主菌 酶学性质
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