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RBMX通过下调PKM2抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移、侵袭和糖酵解 被引量：1
1
作者 颜秋霞 曾鹏 +9 位作者 黄树强 谭翠钰 周秀琴 乔静 赵晓英 冯玲 朱振杰 张国志 胡鸿 陈彩蓉 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期9-16,共8页
目的探讨X连锁RNA结合基序蛋白(RBMX)对膀胱癌细胞(1376细胞和UC-3细胞)的增殖、迁移、侵袭的影响以及其在糖酵解中的作用。方法采用慢病毒表达系统和siRNA干扰技术,分别构建RBMX过表达和敲低的膀胱癌细胞模型(1376细胞和UC-3细胞)。采... 目的探讨X连锁RNA结合基序蛋白(RBMX)对膀胱癌细胞(1376细胞和UC-3细胞)的增殖、迁移、侵袭的影响以及其在糖酵解中的作用。方法采用慢病毒表达系统和siRNA干扰技术,分别构建RBMX过表达和敲低的膀胱癌细胞模型(1376细胞和UC-3细胞)。采用RT-qPCR和Westernblotting分别在mRNA水平和蛋白水平上检测细胞模型是否构建成功。通过EdU增殖实验和克隆形成实验检测过表达和敲低RBMX后细胞的生长和集落形成能力,同时通过Transwell实验分析过表达和敲低RBMX后对细胞迁移、侵袭能力的影响;随后,采用Westernblotting检测过表达和敲低RBMX后糖酵解关键蛋白PKM1(M1型丙酮酸激酶)和PKM2(M2型丙酮酸激酶)的表达变化;最后,利用葡萄糖和乳酸检测试剂盒分析过表达和敲低RBMX对膀胱癌细胞糖酵解的影响。结果RT-qPCR和Westernblotting结果显示,过表达RBMX膀胱癌细胞的mRNA和蛋白表达水平显著高于阴性对照组(P<0.05),敲低RBMX膀胱癌细胞的mRNA和蛋白表达水平显著低于阴性对照组(P<0.05)。过表达RBMX明显抑制膀胱癌细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭,敲低RBMX则作用相反。Westernblotting实验结果显示,过表达RBMX使PKM1表达上升,PKM2表达下降,敲低RBMX则作用相反。葡萄糖消耗及乳酸生成实验表明,过表达RBMX均能抑制膀胱癌细胞葡萄糖消耗及乳酸生成(P<0.05),敲低RBMX均能促进膀胱癌细胞葡萄糖消耗及乳酸生成(P<0.05)。结论RBMX通过下调PKM2抑制膀胱癌的发生发展和糖酵解能力,有望成为膀胱癌诊断和治疗的潜在分子靶标。 展开更多
关键词 X连锁RNA结合基序蛋白 M2型丙酮酸激酶 膀胱癌 PKM2 糖酵解
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萝卜硫素通过调节ALOX5/NF-κB信号通路调控巨噬细胞糖酵解抑制糖尿病肾病进展 被引量：1
2
作者 乌日娜 丁海东 +2 位作者 常宏 孙娜娜 张磊 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第3期390-397,共8页
目的探讨萝卜硫素(SFN)调节花生四烯酸5-脂氧合酶基因(arachidonic acid 5-lipoxygenase,ALOX5)/核因子kappa B(NF-κB)信号通路调节巨噬细胞糖酵解对糖尿病肾病(DN)进展的影响。方法生物信息学分析SFN治疗DN的靶基因。使用30 mmol/L高... 目的探讨萝卜硫素(SFN)调节花生四烯酸5-脂氧合酶基因(arachidonic acid 5-lipoxygenase,ALOX5)/核因子kappa B(NF-κB)信号通路调节巨噬细胞糖酵解对糖尿病肾病(DN)进展的影响。方法生物信息学分析SFN治疗DN的靶基因。使用30 mmol/L高葡萄糖(HG)处理人近端肾小管上皮细胞系(HK-2细胞)诱导体外DN模型。将HK-2细胞分为如下组:正常糖(NG)组、HG组、HG+SFN(3 mmol/L)组、HG+ALOX5组、HG+SFN(3 mmol/L)+ALOX5组、HG处理的巨噬细胞+HK-2细胞组、HG+SFN(3 mmol/L)处理的巨噬细胞+HK-2细胞组、HG+ALOX5转染处理的巨噬细胞+HK-2细胞组、HG+SFN(3 mmol/L)+ALOX5转染处理的巨噬细胞+HK-2细胞组。CCK-8检测细胞活力,原位末端脱氧核苷酸转移酶标记(TUNEL)法检测细胞凋亡;葡萄糖和乳酸试剂盒检测各组细胞中葡萄糖和乳酸水平;Western blot检测各组细胞中ALOX5、NF-κB以及糖酵解相关蛋白己糖激酶-2(HK2)、丙酮酸激酶M2(PKM2)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)的表达;使用链脲佐菌素(STZ)构建DN小鼠模型,DN小鼠给与SFN(0.5 mg/kg)治疗;检测小鼠各项生化指标,HE染色检测肾组织病理变化;Western blot检测小鼠肾脏巨噬细胞中糖酵解相关蛋白己糖激酶-2(HK2)、丙酮酸激酶M2(PKM2)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)的表达。结果生物信息学分析结果显示ALOX5是SFN治疗DN的靶基因。与HG组相比,SFN处理增强HK-2细胞活力并抑制细胞凋亡(P<0.05);同时,SFN处理抑制HG诱导的巨噬细胞糖酵解相关蛋白的表达,减弱巨噬细胞介导的HK-2细胞损伤(P<0.05);Western blot结果表明SFN抑制ALOX5和NF-κB的表达(P<0.05);小鼠实验结果显示,SFN治疗改善DN小鼠肾功能和肾组织病理学改变,抑制肾组织中巨噬细胞糖酵解相关蛋白的表达(P<0.05)。结论SFN通过抑制ALOX5/NF-κB信号通路抑制巨噬细胞糖酵解从而改善DN进展。 展开更多
关键词 萝卜硫素 糖尿病肾病 巨噬细胞 糖酵解 花生四烯酸5-脂氧合酶 NF-ΚB信号通路
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“己糖碳链等分”教学法在糖酵解教学中的应用 被引量：1
3
作者 朱笠 赫荣乔 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2024年第10期2773-2782,共10页
糖酵解是生物化学课程教学中有关葡萄糖代谢的重点内容之一,也是微生物学、海洋生物学、动物学、细胞生物学、生物工程学等相关专业教学中所涉及的难点内容之一。糖酵解途径十分复杂,有10个反应步骤,参与的酶多,中间产物多,既消耗ATP又... 糖酵解是生物化学课程教学中有关葡萄糖代谢的重点内容之一,也是微生物学、海洋生物学、动物学、细胞生物学、生物工程学等相关专业教学中所涉及的难点内容之一。糖酵解途径十分复杂,有10个反应步骤,参与的酶多,中间产物多,既消耗ATP又合成ATP。在现有教学中,教师们通常按照糖酵解的反应步骤依次讲解(本文称顺序教学法,简称顺序法),导致教与学的效果不太理想。本研究聚焦糖酵解途径中葡萄糖的碳链变化,提出一种新的教学思路:从结果来看,糖酵解就是一分子(6C)葡萄糖等分成为两分子(3C)丙酮酸的过程。要实现己糖分子的等分,就需要在己糖碳链的首尾分别加上一个磷酸基团,生成1,6-二磷酸果糖,导致分子中间(C3-C4)发生化学键断裂,产生两分子磷酸丙糖。之后发生的5步反应,是磷酸丙糖经过磷酸基团转移等步骤生成丙酮酸。这种从“己糖碳链等分”入手进行糖酵解教学的方法,称为“己糖碳链等分教学法”(简称己糖等分法)。招募研究生(n=63)和本科生(n=39)作为教学调研的被试,他们在本科阶段均接受过“顺序法”教学。采用“己糖等分法”开展糖酵解的教学并进行问卷调查。结果显示,在接受“己糖等分法”教学之前,同学们普遍认为要理解和记住“糖酵解”的反应步骤比较困难,要准确默写出“糖酵解”每一步化学反应就更加困难,并且记住后又容易遗忘。采用“己糖等分法”教学和学习后,绝大多数研究生感觉“糖酵解”的每一步反应都变得容易理解和记忆了,并且要写出反应步骤变得相对简单。对本科生进行同样的教学与调研,将其统计分析结果与研究生进行比较,二者无显著差异(P>0.05)。因此,“己糖等分”教学法能够让学生更容易理解糖酵解机理,便于记忆,也有助于培养学生自觉动脑、勤于分析的习惯,从而获得更好的学习效果。 展开更多
关键词 糖酵解 葡萄糖 丙酮酸 教学方法
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糖酵解在非小细胞肺癌吉非替尼耐药中的作用研究 被引量：1
4
作者 李楠 路晨阳 +4 位作者 祝阿妮 杨栋才 马倩 严奉奇 贾卫红 《中国癌症防治杂志》 CAS 2024年第1期50-55,共6页
目的探讨糖酵解在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)吉非替尼(Gefitinib)耐药中的变化及作用。方法体外培养NSCLC亲本细胞PC-9和A549,并采用浓度递增法构建NSCLC吉非替尼耐药细胞PC-9-GR和A549-GR,通过CCK-8和平板克隆形... 目的探讨糖酵解在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)吉非替尼(Gefitinib)耐药中的变化及作用。方法体外培养NSCLC亲本细胞PC-9和A549,并采用浓度递增法构建NSCLC吉非替尼耐药细胞PC-9-GR和A549-GR,通过CCK-8和平板克隆形成实验鉴定细胞耐药性,葡萄糖摄取检测试剂盒和乳酸测试盒分别检测葡萄糖代谢和乳酸产出水平,qRT-PCR和Western blot实验检测细胞糖酵解关键酶的mRNA和蛋白表达水平。采用糖酵解抑制剂2-脱氧-D-葡萄糖(2-deoxy-D-glucose,2-DG)抑制细胞糖酵解后,观察细胞活力及吉非替尼耐药性的变化情况。结果相较于各自亲本细胞,耐药细胞PC-9-GR和A549-GR对吉非替尼抵抗性增强(均P<0.01),葡萄糖代谢速率和乳酸产出水平提高(均P<0.01);糖酵解关键酶HK2、LDHA和PFK的mRNA表达水平升高(均P<0.001),HK2、LDHA、PFKP和PKM2的蛋白表达水平增加(均P<0.001)。2-DG对耐药细胞活力的抑制作用较各自亲本细胞更明显(均P<0.05),且在一定程度上可增强吉非替尼对耐药细胞的杀伤效应。结论NSCLC吉非替尼耐药伴随着糖酵解的激活,该过程可能与糖酵解关键酶表达升高有关,抑制其水平或活性可能是逆转吉非替尼耐药的有效措施。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 吉非替尼 耐药 糖酵解 代谢重编程
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基于生物信息学的中药调控糖酵解用药规律探究及实验验证
5
作者 刘珊 李璇 +3 位作者 尹晓岚 王萍 王凤云 唐旭东 《世界中医药》 CAS 北大核心 2024年第18期2762-2770,共9页
目的:探究调节糖酵解的中药活性成分及用药规律。方法:基于GeneCards数据库获得与糖酵解有关靶点,DAVID数据库分析靶点参与的生物学过程及信号通路。将靶点信息导入中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)获取其对应的活性成分和中药,... 目的:探究调节糖酵解的中药活性成分及用药规律。方法:基于GeneCards数据库获得与糖酵解有关靶点,DAVID数据库分析靶点参与的生物学过程及信号通路。将靶点信息导入中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)获取其对应的活性成分和中药,构建糖酵解“靶点-活性成分-中药”网络,并统计药物性味归经及功效,分析调节糖酵解的中药用药规律。最后采用细胞实验验证丹参、黄芪对胃癌前病变细胞(MC)中糖酵解相关蛋白表达的影响。结果:获得24个糖酵解相关靶点,与238种活性成分及337种中药相匹配。其中槲皮素、山柰酚、木犀草素等可能是干预糖酵解的主要有效成分,甘草、钩藤、丹参等可能是干预糖酵解的主要中药。用药规律分析显示,药性以寒、温为多;药味以苦、甘为主;归经以肝经、肺经居多;功效以清热药、补虚药等为主。实验结果表明,丹参、黄芪均可降低MC细胞糖酵解相关蛋白缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、己糖激酶2(HK2)、丙酮酸激酶M2型(PKM2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)的表达。结论:本研究通过生物信息学方法分析得到了调控糖酵解的活性成分及中药用药规律,以期为治疗与糖酵解相关疾病提供组方用药思路,并为相关中药新药研发及机制研究等提供一定参考。 展开更多
关键词 糖酵解 生物信息学 网络药理学 数据挖掘 活性成分 中药 用药规律
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UCHL1通过调控肿瘤微环境糖酵解代谢促进肺腺癌细胞增殖和转移
6
作者 李爱科 林萍萍 +5 位作者 赵继伟 郭研 张立广 李富博 董怡 杜新生 《现代肿瘤医学》 CAS 2024年第16期2975-2981,共7页
目的:探讨泛素羧基末端水解酶L1(ubiquitin C-terminal hydrolase-L1,UCHL1)通过调控缺氧诱导因子1(hypoxia-inducible factor 1,HIF-1)介导的代谢重编程促进肺腺癌细胞的增殖和转移。方法:免疫组化和实时定量聚合酶链反应检测肺腺癌组... 目的:探讨泛素羧基末端水解酶L1(ubiquitin C-terminal hydrolase-L1,UCHL1)通过调控缺氧诱导因子1(hypoxia-inducible factor 1,HIF-1)介导的代谢重编程促进肺腺癌细胞的增殖和转移。方法:免疫组化和实时定量聚合酶链反应检测肺腺癌组织和细胞中UCHL1和HIF-1的表达;Kaplan-Meier Plotter和UALCAN数据库分析了UCHL1和HIF-1的表达量与患者生存期的关联,并进一步分析了二者在不同临床病理等级以及淋巴转移患者肿瘤组织中的表达;克隆形成、迁移和侵袭评估肺腺癌HCC4006细胞转染UCHL1 siRNA后恶性生物学行为变化;Western Blot检测沉默UCHL1后肿瘤细胞糖酵解信号通路IL-6/STAT3标志分子的表达。结果:免疫组化、实时定量聚合酶链反应以及相关性分析,结果显示肺腺癌组织和细胞中UCHL1和HIF-1的表达较癌旁组织和正常人支气管上皮细胞中显著增加,且二者表达水平呈正相关(P<0.01),与Oncomine数据库中UCHL1和HIF-1的表达趋势相一致。生信分析结果显示,UCHL1和HIF-1异常高表达与肺腺癌患者的生存期呈负相关、而与患者的病理等级和淋巴结转移呈正相关(P<0.01)。转染UCHL1 siRNA的肺腺癌HCC4006细胞的克隆形成、迁移和侵袭能力较对照组细胞显著降低,同时细胞的耗氧量显著增加,并抑制细胞中LDH活性和LD分泌(P<0.01)。Western Blot结果显示,沉默UCHL1可抑制HIF-1表达,并降低缺氧介导的肿瘤细胞糖酵解信号通路IL-6/STAT3标志分子的表达(P<0.01)。结论:肺腺癌细胞通过UCHL1-HIF-1轴介导的代谢重编程获得较强的增殖和转移表型,为靶向该基因网络的治疗提供了理论依据。 展开更多
关键词 肺腺癌 泛素羧基末端水解酶L1 糖酵解 增殖 转移
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miR-19a调控TGF-β1/Smad信号通路对胃癌细胞增殖、侵袭及糖酵解的影响
7
作者 单彪 卞良 +4 位作者 李书君 王佩显 吴殿超 雷秋香 刘登湘 《现代肿瘤医学》 CAS 2024年第22期4278-4284,共7页
目的:探究微小RNA-19a(miR-19a)通过调控转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad信号通路对人胃癌AGS细胞增殖、侵袭和糖酵解的影响。方法:体外培养人胃癌AGS细胞,采用脂质体进行转染分别将inhibitor NC、mimics NC、miR-19a inhibitor、miR-19... 目的:探究微小RNA-19a(miR-19a)通过调控转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad信号通路对人胃癌AGS细胞增殖、侵袭和糖酵解的影响。方法:体外培养人胃癌AGS细胞,采用脂质体进行转染分别将inhibitor NC、mimics NC、miR-19a inhibitor、miR-19a mimics转染至人胃癌AGS细胞记为inhibitor NC组、mimics NC组、miR-19a inhibitor组和miR-19a mimics组,不做转染处理的为对照组,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测miR-19a的表达量,用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞活力,发现敲低miR-19a可显著抑制胃癌AGS细胞活力。所以后续实验分为对照组、inhibitor NC组、miR-19a inhibitor组、抑制剂组(miR-19a inhibitor转染+10μmol/L TGF-β1/Smad通路抑制剂LY2109761)和激活剂组(miR-19a inhibitor转染+10μmol/L TGF-β1/Smad通路激活剂SRI-011381),采用RT-qPCR法、5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)、Transwell小室、乳酸、葡萄糖检测试剂盒及蛋白免疫印迹(WB)法分别对细胞miR-19a的表达、增殖率、侵袭数、乳酸含量、葡萄糖消耗水平及糖酵解、TGF-β1/Smad相关蛋白表达水平进行分析。结果:敲低miR-19a可显著抑制胃癌AGS细胞活力,所以选用转染miR-19a inhibitor进行后续通路验证实验。结果发现,对照组与inhibitor NC组在miR-19a的表达水平、细胞增殖率、侵袭数、葡萄糖消耗及乳酸水平、增殖细胞核抗原(PCNA)、己糖激酶2(HK2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、TGF-β1、p-Smad3蛋白表达水平等各项指标均无统计学差异(P>0.05)。miR-19a inhibitor组细胞miR-19a的表达、增殖率、侵袭数、葡萄糖消耗及乳酸水平、PCNA、HK2、LDHA、GAPDH、TGF-β1、p-Smad3蛋白水平低于inhibitor NC组(P<0.05)。抑制剂组细胞miR-19a的表达、增殖率、侵袭数、葡萄糖消耗及乳酸水平、PCNA、HK2、LDHA、GAPDH、TGF-β1、p-Smad3蛋白表达水平低于miR-19a inhibitor组,而激活剂组这些指标高于miR-19a inhibitor组(P<0.05)。结论:下调miR-19a可抑制人胃癌AGS细胞增殖、侵袭和糖酵解,其作用机制与阻滞TGF-β1/Smad信号转导有关。 展开更多
关键词 胃癌 微小RNA-19a 转化生长因子-β1/Smad 增殖 侵袭 糖酵解
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miR-218-5p靶向PDE7A调节人非小细胞肺癌A549细胞的糖酵解
8
作者 牛海英 赵刚 +3 位作者 苏姗娜 白荣荣 穆培娟 张冬 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期592-597,共6页
目的:探究miR-218-5p靶向磷酸二酯酶7A(PDE7A)调节人非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞糖酵解过程的机制。方法:常规培养A549细胞,用Lipo3000将miR-218-5pmimic、mimic-NC、PDE7A过表达质粒(PDE7A-oe)和PDE7A对照质粒(PDE7A-NC)转染A549细胞... 目的:探究miR-218-5p靶向磷酸二酯酶7A(PDE7A)调节人非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞糖酵解过程的机制。方法:常规培养A549细胞,用Lipo3000将miR-218-5pmimic、mimic-NC、PDE7A过表达质粒(PDE7A-oe)和PDE7A对照质粒(PDE7A-NC)转染A549细胞,记为miR-218-5pmimic组、mimic-NC组、PDE7A-oe组和PDE7A-NC组。qPCR法验证转染效率,WB法检测糖酵解关键酶蛋白的表达,葡萄糖测定法和乳酸生成测定法检测各转染组A549细胞中2脱氧葡萄糖和乳酸含量,双萤光素酶报告基因实验验证miR-218-5p与PDE7A靶向结合关系,用TCGA数据库数据分析PDE7AmRNA在肺癌组织中的表达水平。结果:在A549细胞中成功地过表达了miR-218-5p(P<0.01)。过表达miR-218-5p均能显著抑制A549细胞中PDE7A、HK2、PKM2蛋白的表达(均P<0.01)、葡萄糖摄取量和乳酸生成量(均P<0.01)。过表达PDE7A均可显著促进A549细胞中PDE7A、HK2、PKM2蛋白的表达(均P<0.01),以及葡萄糖摄取量和乳酸生成量(均P<0.01)。A549细胞中miR-218-5p可与PDE7AmRNA的3´-UTR直接结合。数据库数据分析结果显示,PDE7AmRNA在肺鳞状细胞癌组织中呈高表达(P<0.01)。结论:miR-218-5p靶向PDE7A调控A549细胞中HK2和PKM2的表达水平,进而抑制糖酵解过程,miR-218-5p/PDE7A可能是NSCLC临床诊断和治疗的潜在靶点。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 A549细胞 miR-218-5p 磷酸二酯酶7A 糖酵解
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糖酵解在复发性流产中作用的研究进展
9
作者 高靖茹 冯晓玲 《现代妇产科进展》 2024年第8期636-638,共3页
复发性流产(RSA)是一种令人痛苦的疾病,目前仍有约50%的RSA患者无法明确病因,治疗上存在困难。母胎界面免疫微环境、子宫内膜蜕膜化、滋养细胞的增殖和侵袭都与RSA相关。许多研究表明,妊娠和非妊娠期间女性代谢差异非常大,妊娠期间异常... 复发性流产(RSA)是一种令人痛苦的疾病,目前仍有约50%的RSA患者无法明确病因,治疗上存在困难。母胎界面免疫微环境、子宫内膜蜕膜化、滋养细胞的增殖和侵袭都与RSA相关。许多研究表明,妊娠和非妊娠期间女性代谢差异非常大,妊娠期间异常代谢导致不良妊娠风险增高。本文从代谢角度出发,对异常糖酵解在RSA中的作用机制进行综述,以期为RSA的病理机制和治疗策略提供进一步参考。 展开更多
关键词 复发性流产 糖酵解 妊娠 有氧糖酵解
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灵芝酸A对非小细胞肺癌PC9细胞糖酵解及其关键限速酶的影响
10
作者 任爱华 董彦伯 +2 位作者 苗润芝 吕俞娇 刘岩峰 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期682-688,共7页
目的:探讨不同剂量灵芝酸A(GAA)对非小细胞肺癌(NSCLC) PC9细胞的生物活性、糖酵解及其限速酶表达的影响,并阐明其作用机制。方法:体外培养NSCLC PC9细胞,将PC9细胞分为空白对照组、低剂量(25μmol·L^(-1)) GAA组、中剂量(50μmol&... 目的:探讨不同剂量灵芝酸A(GAA)对非小细胞肺癌(NSCLC) PC9细胞的生物活性、糖酵解及其限速酶表达的影响,并阐明其作用机制。方法:体外培养NSCLC PC9细胞,将PC9细胞分为空白对照组、低剂量(25μmol·L^(-1)) GAA组、中剂量(50μmol·L^(-1)) GAA组和高剂量(100μmol·L^(-1)) GAA组。采用噻唑蓝(MTT)法检测各组PC9细胞存活率,Transwell小室实验检测各组PC9细胞迁移细胞数,葡萄糖检测试剂盒检测各组PC9细胞葡萄糖摄取量,三磷酸腺苷(ATP)检测试剂盒检测各组PC9细胞中ATP水平,乳酸检测试剂盒检测各组PC9细胞中乳酸水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组PC9细胞中己糖激酶2(HK2)和M2型丙酮酸激酶(PKM2) mRNA表达水平,Westernblotting法检测各组PC9细胞中HK2和PKM2蛋白表达水平。结果:MTT法,培养24、48和72 h时,与空白对照组比较,中和高剂量GAA组PC9细胞存活率明显降低(P<0.05);培养72 h时,与低剂量GAA组比较,高剂量GAA组细胞存活率明显降低(P<0.05)。Transwell小室实验,与空白对照组比较,中和高剂量GAA组细胞迁移数明显减少(P<0.05);与低剂量GAA组比较,高剂量GAA组细胞迁移数明显减少(P<0.05)。与空白对照组比较,中和高剂量GAA组PC9细胞中葡萄糖摄取量和乳酸水平均明显降低(P<0.05),高剂量GAA组PC9细胞中ATP水平明显降低(P<0.05)。RT-qPCR法,与空白对照组比较,中和高剂量GAA组PC9细胞中HK2和PKM2 mRNA表达水平均明显降低(P<0.05)。Western blotting法,与空白对照组比较,中和高剂量GAA组PC9细胞中HK2和PKM2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:中和高剂量GAA可抑制PC9细胞增殖及迁移的生物活性,降低糖酵解作用,其作用机制可能与抑制关键限速酶HK2和PKM2的表达有关。 展开更多
关键词 灵芝酸A 癌 非小细胞肺 己糖激酶2 M2型丙酮酸激酶 糖酵解
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微RNA在乳腺癌糖酵解代谢中的研究进展
11
作者 朱晓丹 徐晓庆 +1 位作者 耿雨晴 金春晖 《中国现代医生》 2024年第4期115-117,125,共4页
目的乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,其严重损害女性身心健康。乳腺癌细胞依赖糖酵解途径产生三磷酸腺苷供能,是乳腺癌进展的重要特征。微RNA(microRNA,miRNA)是由若干核苷酸组成的内源性单链非编码RNA,在乳腺癌细胞中异常表达,可通... 目的乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,其严重损害女性身心健康。乳腺癌细胞依赖糖酵解途径产生三磷酸腺苷供能,是乳腺癌进展的重要特征。微RNA(microRNA,miRNA)是由若干核苷酸组成的内源性单链非编码RNA,在乳腺癌细胞中异常表达,可通过调控细胞代谢途径影响乳腺癌的病理生理过程。研究表明,miRNA参与乳腺癌糖代谢过程,是乳腺癌能量代谢研究的热点之一。本文概述miRNA在乳腺癌糖酵解代谢中的研究进展,旨在深入了解乳腺癌的发病特征和糖酵解的作用机制,寻找新的治疗靶点,从而为乳腺癌治疗策略的制订提供理论依据。 展开更多
关键词 微RNA 乳腺癌 糖酵解 代谢
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PI3K/Akt信号通路通过上调HKDC1促进人肝癌HepG2细胞糖酵解、增殖及迁移
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作者 刘峰 邓萍 +1 位作者 闫光志 金刚 《中国实验诊断学》 2024年第9期1079-1086,共8页
目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通过调节含己糖激酶结构域的蛋白1(HKDC1)对人肝癌HepG2细胞糖酵解、增殖和迁移的影响及机制。方法将体外培养的对数期人肝癌HepG2细胞,分为对照组、LY294002组和MK-2206组,RT-qPCR法检... 目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通过调节含己糖激酶结构域的蛋白1(HKDC1)对人肝癌HepG2细胞糖酵解、增殖和迁移的影响及机制。方法将体外培养的对数期人肝癌HepG2细胞,分为对照组、LY294002组和MK-2206组,RT-qPCR法检测各组细胞HKDC1 mRNA的表达水平,western blotting法分析各组细胞HKDC1蛋白的表达水平。将细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-HKDC1组(转染si-HKDC1),western blotting法分析各组细胞HKDC1蛋白的表达水平,CCK-8、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)实验检测各组细胞增殖活力和划痕,Transwell实验检测各组细胞迁移率,细胞外酸化率(ECAR)实验检测分析各组细胞的糖酵解和糖酵解能力,葡萄糖及乳酸含量测定实验检测各组细胞内葡萄糖及乳酸含量。将细胞分为对照组、LY294002组、过表达HKDC1+LY294002组、MK-2206组、过表达HKDC1+MK-2206组,葡萄糖及乳酸含量测定实验检测各组细胞内葡萄糖及乳酸含量。结果与对照组比较,LY294002组细胞HKDC1 mRNA表达明显降低(P<0.001),HKDC1蛋白表达降低(P<0.01);MK-2206组细胞HKDC1 mRNA表达降低(P<0.01),HKDC1蛋白表达明显降低(P<0.001)。与si-NC组相比,si-HKDC1组细胞HKDC1蛋白表达降低(P<0.001);与si-NC组相比,si-HKDC1组细胞增殖活力降低(P<0.05),EdU阳性细胞数明显减少(P<0.01);与si-NC组相比,si-HKDC1组细胞划痕愈合率明显降低(P<0.001),迁移细胞数明显减少(P<0.001);与si-NC组相比,si-HKDC1组细胞糖酵解和糖酵解能力明显减弱(P<0.01);与si-NC组相比,si-HKDC1组细胞内葡萄糖和乳酸含量明显降低(P<0.05)。与LY294002组相比,过表达HKDC1+LY294002组细胞内葡萄糖和乳酸含量明显升高(P<0.01);与MK-2206组相比,过表达HKDC1+MK-2206组细胞内葡萄糖和乳酸含量明显升高(P<0.001,P<0.01)。结论PI3K/Akt信号通路通过HKDC1促进人肝癌HepG2细胞糖酵解、增殖和迁移。 展开更多
关键词 磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B 含己糖激酶结构域的蛋白1 有氧糖酵解 增殖 迁移
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烯醇化酶在阴道加德纳菌和乳杆菌的表达及其对糖酵解影响的研究
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作者 张瑞 吴益青 +6 位作者 尹海旭 李昶 马爱昕 王君竹 白会会 刘朝晖 廖秦平 《广西医科大学学报》 CAS 2024年第5期676-680,共5页
目的:研究烯醇化酶在阴道加德纳菌菌株和乳杆菌菌株的胞膜上和胞质内表达的差异情况,并比较两种菌的糖酵解能力的区别。方法:从细菌性阴道病患者阴道分泌物中分离、纯化、鉴定的加德纳菌菌株,从健康女性阴道分泌物中分离乳杆菌菌株,同... 目的:研究烯醇化酶在阴道加德纳菌菌株和乳杆菌菌株的胞膜上和胞质内表达的差异情况,并比较两种菌的糖酵解能力的区别。方法:从细菌性阴道病患者阴道分泌物中分离、纯化、鉴定的加德纳菌菌株,从健康女性阴道分泌物中分离乳杆菌菌株,同等条件下,在体外培养一段时间后,检测菌液中残余葡萄糖、乳酸、丙酮酸和三磷酸腺苷(ATP)的浓度。分别提取加德纳菌和乳杆菌的胞膜和胞质蛋白,采用蛋白质免疫印迹法(western blotting)检测胞质和胞膜中的烯醇化酶的情况。结果:加德纳菌的培养基中残余的葡萄糖明显变少,而培养乳杆菌的培养基中残余葡萄糖含量相对较多,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);加德纳菌产生的ATP含量显著高于乳杆菌(P<0.05)。当在反应体系中加入烯醇化酶抗体后,残余葡萄糖的量有所增加,而ATP、乳酸和丙酮酸含量都有所减少;所有加德纳菌和乳杆菌的胞质中均存在烯醇化酶,其中加德纳菌的烯醇化酶的含量显著高于乳杆菌(P<0.05)。仅部分加德纳菌菌株和乳杆菌菌株的胞膜上存在烯醇化酶,加德纳菌胞膜上的烯醇化酶的含量显著高于乳杆菌(P<0.05)。结论:烯醇化酶在阴道加德纳菌和乳杆菌的表达存在一定差别,这种差别一定程度上影响了两种菌种代谢的能力。 展开更多
关键词 细菌性阴道病 烯醇化酶 阴道加德纳菌 阴道乳杆菌 糖酵解
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异丙酚通过GLUT4抑制肺癌糖酵解及肿瘤进展
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作者 王文博 白海昕 +1 位作者 张弹 牛丽 《实用肿瘤学杂志》 CAS 2024年第2期104-111,共8页
目的 研究异丙酚对肺癌糖酵解的作用,并进一步探究其通过葡萄糖转运体4(Glucose transporter 4,GLUT4)抑制肺癌糖酵解的潜在机制。方法 培养A549人源肺癌细胞系和LLC鼠源肺癌细胞系,实验分组设置为空白对照组(Control组)和异丙酚(10μm... 目的 研究异丙酚对肺癌糖酵解的作用,并进一步探究其通过葡萄糖转运体4(Glucose transporter 4,GLUT4)抑制肺癌糖酵解的潜在机制。方法 培养A549人源肺癌细胞系和LLC鼠源肺癌细胞系,实验分组设置为空白对照组(Control组)和异丙酚(10μmoL)组(Propofol组)。采用CCK-8检测细胞活力;免疫荧光检测细胞及肿瘤组织Ki-67表达水平;细胞外酸化率(Extracellular acidification rate, ECAR)和线粒体耗氧量(Mitochondrial oxygen consumption, OCR)实验检测细胞代谢水平;ELISA检测细胞乳酸和丙酮酸含量;采用CB-Dock在线工具进行分子对接实验,检测GLUT4与异丙酚结合能力;葡萄糖摄取试剂盒检测葡萄糖摄取情况;Western blot检测各组的GLUT4、HK2和PFK1的蛋白表达变化。结果 在10μmoL异丙酚的作用下,A549细胞(0.661±0.052)和LLC细胞(0.632±0.033)的细胞活力被明显抑制(P<0.001)。与对照组相比,A549和LLC阳性细胞的Ki-67荧光平均强度(0.663±0.064和0.540±0.070)均被明显抑制(P<0.001)。ELISA结果显示,与对照组相比,异丙酚组乳酸和丙酮酸水平降低(P<0.001),在异丙酚的作用下,细胞的葡萄糖摄取能力降低(P<0.001)。采用CB-Dock在线工具进行分子对接实验,检测出GLUT4与异丙酚结合力最强,Western blot结果显示GLUT4及其下游HK2和PFK1蛋白表达水平下降。瞬时转染敲低GLUT4后,细胞乳酸(P<0.001)和丙酮酸含量(P<0.01)下降,葡萄糖摄取能力降低,异丙酚对糖酵解的抑制作用消失。肺肿瘤组织中,给药组的肿瘤大小明显小于模型组(P<0.001)。与模型组相比,异丙酚组乳酸含量和丙酮酸含量降低(P<0.001)。结论 异丙酚能够通过抑制肺癌细胞糖酵解抑制肺癌细胞增殖及荷瘤小鼠肺癌进展,其机制可能与靶向GLUT4影响肺癌细胞糖酵解有关。 展开更多
关键词 肺癌 异丙酚 糖酵解 葡萄糖转运体4
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秦皮乙素对人胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移、侵袭和糖酵解的影响
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作者 贾绍华 郭浩 +1 位作者 丁海鑫 孙萌遥 《中南药学》 CAS 2024年第3期679-684,共6页
目的探讨秦皮乙素(AES)对胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移、侵袭和糖酵解的影响及相关机制。方法采用MTT法检测细胞增殖活性;采用划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;葡萄糖摄取量测定和乳酸含量测定实验检测细胞糖酵解情况;Wes... 目的探讨秦皮乙素(AES)对胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移、侵袭和糖酵解的影响及相关机制。方法采用MTT法检测细胞增殖活性;采用划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;葡萄糖摄取量测定和乳酸含量测定实验检测细胞糖酵解情况;Western blot法检测迁移、侵袭及糖酵解相关蛋白的表达水平。结果AES能够抑制SGC-7901细胞的增殖活力,且这种抑制效果与AES的剂量成正相关。随着AES剂量的梯度增加,SGC-7901细胞的迁移、侵袭及糖酵解能力逐渐降低(P<0.05)。AES可以下调SGC-7901细胞HIF-1α、MMP-2、MMP-9、GLUT1、LDHA蛋白的表达水平(P<0.05)。结论AES对人胃癌SGC-7901细胞增殖活性及迁移、侵袭能力有抑制作用,通过抑制人胃癌SGC-7901细胞的葡萄糖摄取及乳酸生成降低糖酵解水平。AES可能通过影响缺氧诱导因子HIF-1α抑制SGC-7901细胞迁移、侵袭及有氧糖酵解过程。 展开更多
关键词 秦皮乙素 人胃癌SGC-7901细胞 增殖 迁移 侵袭 糖酵解
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降低有氧糖酵解增强非小细胞肺癌耐药细胞对顺铂的敏感性
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作者 丁世凯 张正华 张秀莉 《现代肿瘤医学》 CAS 2024年第11期1973-1977,共5页
目的:探究顺铂耐药的非小细胞肺癌细胞糖代谢的特点及抑制有氧糖酵解对非小细胞肺癌细胞顺铂耐药细胞的影响及其机制。方法:通过梯度倍增浓度法建立非小细胞肺癌顺铂耐药细胞模型(A549/DDP);酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbe... 目的:探究顺铂耐药的非小细胞肺癌细胞糖代谢的特点及抑制有氧糖酵解对非小细胞肺癌细胞顺铂耐药细胞的影响及其机制。方法:通过梯度倍增浓度法建立非小细胞肺癌顺铂耐药细胞模型(A549/DDP);酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,Elisa)检测A549/DDP与A549细胞两组葡萄糖消耗量、三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)释放量、乳酸生成及丙酮酸生成量的差异;CCK-8法(cell counting kit-8)检测2-脱氧葡萄糖(2-deoxyglucose,2-DG)及顺铂处理后A549/DDP与A549细胞增殖能力的变化;Elisa检测2-DG处理A549/DDP细胞与A549细胞葡萄糖消耗量、ATP释放量、乳酸生成及丙酮酸生成量的差异;Elisa检测2-DG处理A549/DDP细胞与A549细胞后对非神经元性烯醇化酶(recombinant enolase 1,ENO1)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)、缺氧诱导因子-α(hypoxia inducible factor-α,HIF-α)表达的影响。结果:与A549细胞相比,顺铂耐药细胞株短时间内生长速度无明显差异。A549/DDP细胞消耗葡萄糖量增多、有氧糖酵解产生ATP增多、乳酸生成及丙酮酸释放量也增多,有氧糖酵解能力明显增强,差异具有统计学意义。2-DG处理后能够显著逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药性,增强对顺铂的敏感性,达到抑制A549/DDP细胞增殖的效果,差异具有统计学意义。2-DG能够抑制A549/DDP细胞的葡萄糖摄取,减少ATP的释放,减少乳酸生成及丙酮酸的产生,差异具有统计学意义。与A549细胞相比,A549/DDP细胞ENO1、G6PD、HIF-α表达水平升高,2-DG抑制有氧糖酵解后三者表达水平均降低,差异具有统计学意义。结论:2-DG抑制非小细胞肺癌细胞顺铂耐药有氧糖酵解,可在一定程度上逆转其对顺铂的耐药性。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 顺铂耐药 有氧糖酵解 2-脱氧葡萄糖
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吕志民教授/许大千研究员团队成果揭示糖酵解酶PFKL调节肿瘤细胞脂质代谢的新机制
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《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期399-399,共1页
2024年5月21日,浙江大学转化医学研究院/浙江大学医学院附属第一医院/国家基础科学中心/浙江大学基础交叉研究院吕志民教授/许大千研究员团队在《自然·代谢》(Nature Metabolism)杂志上发表了题为“Glycolytic enzyme PFKL governs... 2024年5月21日,浙江大学转化医学研究院/浙江大学医学院附属第一医院/国家基础科学中心/浙江大学基础交叉研究院吕志民教授/许大千研究员团队在《自然·代谢》(Nature Metabolism)杂志上发表了题为“Glycolytic enzyme PFKL governs lipolysis by promoting lipid droplet-mitochondria tethering to enhanceβ-oxidation and tumor cell proliferation”(DOI:10.1038/s42255-024-01047-2)的研究论文。该研究揭示了糖酵解酶磷酸果糖激酶-肝型(PFKL)通过其非经典功能——蛋白激酶功能促进脂滴脂解的新机制。PFKL是糖酵解途径中的关键限速酶,通常位于细胞浆中,其功能是将果糖-6-磷酸(F-6-P)转化为果糖-1,6-二磷酸(F-1,6-BP)。研究人员发现,当肿瘤细胞处于葡萄糖缺乏的状态时,p38 MAPK被激活并磷酸化PFKL的Thr331位点,导致PFKL从四聚体转变为低代谢酶活性的单体形式,并转移到脂滴上,与脂滴包被蛋白2(PLIN2)结合。 展开更多
关键词 糖酵解酶 磷酸果糖激酶 细胞浆 糖酵解途径 脂质代谢 吕志
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NO介导低氧诱导因子-1α对宰后牦牛肉糖酵解及嫩度的影响及机制 被引量：1
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作者 孙楠 朱熙锦 +2 位作者 辛可启 韩玲 余群力 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1-9,共9页
为探究一氧化氮(NO)介导宰后牦牛肉成熟过程中低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)对糖酵解水平和嫩度的影响及调控机制,本研究以牦牛背最长肌为研究对象,采用0.9%生理盐水、200μmol/L S-亚硝基谷胱甘肽(S-nitroso... 为探究一氧化氮(NO)介导宰后牦牛肉成熟过程中低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)对糖酵解水平和嫩度的影响及调控机制,本研究以牦牛背最长肌为研究对象,采用0.9%生理盐水、200μmol/L S-亚硝基谷胱甘肽(S-nitrosoglutathione,GSNO)、200μmol/L GSNO+100μmol/L YC-1(HIF-1α抑制剂)、200μmol/L GSNO+50μmol/L PD98059注射处理,分别成熟3、6、9、12、24、72 h,分析NO含量、HIF-1α、有丝分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)/细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)通路水平、糖酵解相关酶活性、剪切力等相关指标。结果表明,宰后3~72 h,GSNO组NO含量显著高于对照组(P<0.05),并在6 h达到峰值,ERK1/2和p-ERK1/2表达水平显著高于对照组和GSNO+PD98059组(P<0.05),并在24 h达到峰值,HIF-1α表达水平显著高于对照组和GSNO+YC-1组(P<0.05),并在12 h达到峰值;GSNO组的己糖激酶(hexokinase,HK)、丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性分别在9、12 h和12 h达到最大值(P<0.05),并显著高于对照组,糖酵解潜力在3、12、72 h显著高于其余两组(P<0.05),pH值在6、9、72 h显著低于其余两组(P<0.05);此外,通过测定剪切力和苏木精-伊红染色评估牦牛嫩度,GSNO组剪切力、肌纤维横截面积、肌纤维直径低于其余两组,肌纤维细胞之间的空隙高于其余两组。综上所述,宰后成熟初期,NO通过介导MAPK/ERK信号通路激活HIF-1α表达水平以及上调HK、PK、LDH活性,加快牦牛肉宰后糖酵解速率,降低p H值,进而改善牦牛肉嫩度。因此,该研究结果可能作为影响宰后牦牛肉嫩度的一个潜在调控机制,为完善宰后成熟过程中糖酵解与嫩度的理论体系提供一定的理论基础。 展开更多
关键词 嫩度 低氧诱导因子-1Α 一氧化氮 牦牛肉 糖酵解
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WIN55212-2通过调控mTOR/HIF-1α/PFKFB3信号通路抑制糖酵解并减轻脓毒症小鼠急性肺损伤 被引量：3
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作者 段倩雯 董旭鹏 +3 位作者 马源 刘澈 张铭 马玉清 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期521-526,共6页
目的:探究大麻素受体激动剂WIN55212-2(WIN)对脓毒症小鼠急性肺损伤(ALI)的影响,并探讨其通过糖酵解发挥作用的可能机制。方法:采用腹腔注射脂多糖(LPS)创建小鼠脓毒症ALI模型。将雄性C57BL/6J小鼠随机分为4组:对照(control)组、LPS组(... 目的:探究大麻素受体激动剂WIN55212-2(WIN)对脓毒症小鼠急性肺损伤(ALI)的影响,并探讨其通过糖酵解发挥作用的可能机制。方法:采用腹腔注射脂多糖(LPS)创建小鼠脓毒症ALI模型。将雄性C57BL/6J小鼠随机分为4组:对照(control)组、LPS组(腹腔注射10 mg/kg LPS)、LPS+WIN组(注射LPS前30 min腹腔注射1 mg/kg WIN)和LPS+WIN+MHY1485[哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)活化剂]组(LPS造模前1 d腹腔注射10 mg/kg MHY1485,并在造模前30 min腹腔注射1 mg/kg WIN和10 mg/kg MHY1485),每组6只。造模24 h后取材,计算肺指数;HE染色观察肺组织病理变化;ELISA检测肺组织炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)和IL-10表达水平,以及血清乳酸和乳酸脱氢酶A(LDHA)水平;Western blot检测mTOR/缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2,6-双磷酸酶3(PFKFB3)信号通路相关蛋白水平。结果:相比于control组,LPS组小鼠肺指数增加,HE染色显示肺组织受损,肺组织中IL-10水平降低(P<0.05),IL-1β水平升高(P<0.05),血清乳酸和LDHA水平升高(P<0.05),磷酸化mTOR(p-mTOR)、HIF-1α和PFKFB3蛋白水平升高(P<0.05)。相较于LPS组,LPS+WIN组肺指数降低(P<0.05),HE染色显示肺组织受损减轻,肺组织IL-1β水平降低(P<0.05),IL-10水平升高(P<0.05),血清乳酸和LDHA水平降低(P<0.05),p-mTOR、HIF-1α和PFKFB3蛋白水平降低(P<0.05)。相较于LPS+WIN组,LPS+WIN+MHY1485组肺指数增加,HE染色显示肺组织受损,肺组织IL-1β水平升高(P<0.05),IL-10水平降低(P<0.05),血清乳酸和LDHA水平升高(P<0.05),p-mTOR、HIF-1α和PFKFB3蛋白水平升高(P<0.05)。结论:WIN55212-2可以减轻脓毒症小鼠ALI,其机制可能是通过调控mTOR/HIF-1α/PFKFB3信号通路,抑制糖酵解,减轻炎症反应。 展开更多
关键词 WIN55212-2 脓毒症 急性肺损伤 糖酵解 mTOR/HIF-1α/PFKFB3信号通路
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