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鸡黑素皮质素受体-4反向激动剂细胞筛选模型的建立 被引量:2
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作者 周家华 李栋 +4 位作者 姜军娜 柴继田 王建兵 李颖颖 王志强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第7期1661-1667,共7页
本试验旨在建立体外鸡黑素皮质素受体-4(cMC4R)反向激动剂的细胞筛选模型,为从中草药中筛选出能与cMC4R作用且存在活性的中药成分提供一些基础性的研究。将成功构建的cMC4R真核表达质粒cMC4RpcDNA3.1(+)-myc与报告基因质粒pGL4.29[luc2p... 本试验旨在建立体外鸡黑素皮质素受体-4(cMC4R)反向激动剂的细胞筛选模型,为从中草药中筛选出能与cMC4R作用且存在活性的中药成分提供一些基础性的研究。将成功构建的cMC4R真核表达质粒cMC4RpcDNA3.1(+)-myc与报告基因质粒pGL4.29[luc2p/CRE/Hygro]按1∶5的比例共转染到CHO-K1细胞,两周后经有限稀释法获得单克隆;将获得的单克隆分别用CRE激活剂Forskolin和MC4R激动剂NDP-MSH作用6h,挑选萤火虫荧光素酶的相对表达量最高的单克隆作为阳性细胞株;提取阳性细胞总RNA,RT-PCR检测阳性细胞内cMC4R基因、荧光素酶报告基因的转录水平;对MC4R激动剂NDP-MSH的终浓度、NDP-MSH孵育时间及溶剂DMSO的终浓度进行优化,应用Z’因子对筛选方法进行评估。结果显示,获得了5个单克隆(A2、F7、F8、F9、H10),其中单克隆A2的萤火虫荧光素酶的相对表达量最高,将其作为阳性细胞株;RT-PCR在预期位置扩增出大小分别为996和1 653bp的两条目的条带;激动剂NDP-MSH终浓度为10-9 mol/L、NDP-MSH孵育时间为8h、溶剂DMSO终浓度小于2%时,筛选模型Z’因子为0.82。结果表明,本试验所建立的筛选方法可靠、稳定,细胞筛选模型可用于cMC4R反向激动剂的筛选,为进一步从中药中筛选出有效物质奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡黑素皮质素受体-4(cMC4R) 报告基因 细胞筛选模型
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抗SARS冠状病毒药物细胞筛选模型的建立及应用 被引量:4
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作者 李晓萸 朱舜亚 +3 位作者 魏云玲 杨佩英 祝庆余 秦鄂德 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2003年第5期325-326,369,共3页
目的 :建立抗SARS冠状病毒 (SARS_CoV)药物细胞筛选模型 ,应用于抗SARS_CoV药物的筛选 ,为SARS的防治奠定基础。方法 :将一定数量的细胞接种 96孔板 ,根据药物的作用机制采用不同的给药途径 ,以观察到的细胞病变 (cytopathiceffect,CPE... 目的 :建立抗SARS冠状病毒 (SARS_CoV)药物细胞筛选模型 ,应用于抗SARS_CoV药物的筛选 ,为SARS的防治奠定基础。方法 :将一定数量的细胞接种 96孔板 ,根据药物的作用机制采用不同的给药途径 ,以观察到的细胞病变 (cytopathiceffect,CPE)为指标 ,按照Reed_Muench法 ,计算药物的细胞半数中毒浓度 (TD50 )和抑制细胞半数病变的有效浓度 (IC50 )。结果与结论 :Vero_E6细胞接种SARS_CoV后 2 4h即可出现CPE ,且CPE明显 ,便于观察 ,可作为抗SARS病毒药物细胞筛选模型。依此模型筛选了 3类 87种药物 ,确认 6种药物在Vero_E6细胞上具有抑制SARS病毒的作用。该模型的建立也为其他的抗病毒药物的筛选提供了技术平台。 展开更多
关键词 细胞筛选模型 SARS-COV VERO-E6细胞 抗病毒药物
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HCV NS3/4A蛋白酶抑制剂细胞筛选模型
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作者 丁存宝 刘海燕 +2 位作者 李桂秋 吴尚卓 贾长虹 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期492-495,共4页
丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)持续感染可导致慢性丙型肝炎,并可发展为肝硬化和肝细胞癌。HCV NS3/4A蛋白酶在HCV复制和致病机制中起着非常关键的作用,已成为HCV研究热点。由于候选药物分子必须具有易进入细胞、稳定性好等特征,... 丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)持续感染可导致慢性丙型肝炎,并可发展为肝硬化和肝细胞癌。HCV NS3/4A蛋白酶在HCV复制和致病机制中起着非常关键的作用,已成为HCV研究热点。由于候选药物分子必须具有易进入细胞、稳定性好等特征,建立一种细胞水平上酶活性的测定系统对于筛选抗NS3/4A药物无疑有着重要意义。目前已有多种NS3/4A蛋白酶筛选系统开发出来,本文将对此作一综述。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 NS3/4A蛋白酶 细胞筛选模型
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γ-分泌酶抑制剂的高通量细胞筛选模型的建立及研究
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作者 雷希岭 于晶 吴方 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期47-51,共5页
目的:阿尔茨海默症(又称老年痴呆症)是一类常见的进行性发展的致死性神经退行性疾病。膜蛋白复合体γ-分泌酶被认为是阿尔茨海默症的重要靶点蛋白。γ-分泌酶的精细高级结构未知,其新型抑制剂的获得主要通过生物活性筛选。因此,我们构... 目的:阿尔茨海默症(又称老年痴呆症)是一类常见的进行性发展的致死性神经退行性疾病。膜蛋白复合体γ-分泌酶被认为是阿尔茨海默症的重要靶点蛋白。γ-分泌酶的精细高级结构未知,其新型抑制剂的获得主要通过生物活性筛选。因此,我们构建了基于γ-分泌酶的高通量细胞筛选模型。方法:利用荧光色素酶报告系统构建基于γ-分泌酶直接底物APP的高通量细胞筛选模型。结果:构建了新型的基于细胞的γ-分泌酶抑制剂的高通量筛选方法,并应用此方法筛选了417个天然产物化合物并最终得到了1个γ-分泌酶的天然产物抑制剂。结论:该方法的灵敏度高且易于高通量筛选,可用于分泌酶的抑制剂的筛选。 展开更多
关键词 Γ-分泌酶 阿尔茨海默症 抑制剂 细胞筛选模型
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基于JAK/STAT信号通路的高通量药物筛选细胞模型的建立 被引量:5
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作者 黄梅 戎煜 +3 位作者 宁红秀 王春华 王银银 常智杰 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期164-167,共4页
目的 建立基于JAK STAT信号通路的高通量药物筛选细胞模型 ,筛选调节免疫系统、造血系统和抗肿瘤药物。方法 构建以串连的多个STAT的DNA结合序列为调控序列 ,以荧光酶基因作为报告基因的表达载体。通过将该载体分别转入体外培养的不... 目的 建立基于JAK STAT信号通路的高通量药物筛选细胞模型 ,筛选调节免疫系统、造血系统和抗肿瘤药物。方法 构建以串连的多个STAT的DNA结合序列为调控序列 ,以荧光酶基因作为报告基因的表达载体。通过将该载体分别转入体外培养的不同细胞系中使之稳定表达 ,建立具有激活STAT活性的药物筛选模型 ,并利用多个抗过敏和抗肿瘤药物样品进行检测。结果 建立多株药物筛选细胞模型 ,筛选方法简便 ,操作容易 ,灵敏度高 ,结果稳定。 展开更多
关键词 JAK/STAT信号通路 高通量药物筛选细胞模型 模型建立 信号传导 转录激活因子
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基于CaCC的TRPV4调节剂高通量筛选细胞模型的建立 被引量:1
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作者 肖云萍 解宇浩 +3 位作者 张嘉琪 洪啟元 郝峰 王国庆 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1032-1039,共8页
目的构建基于钙激活氯离子通道(CaCC)的瞬时受体电位香草酸亚型4(TRPV4)调节剂的高通量筛选细胞模型。方法采用RT-PCR检测Fischer大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞中内源性表达的TRPV4,所得PCR产物切胶回收后测序;采用Western blotting检测... 目的构建基于钙激活氯离子通道(CaCC)的瞬时受体电位香草酸亚型4(TRPV4)调节剂的高通量筛选细胞模型。方法采用RT-PCR检测Fischer大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞中内源性表达的TRPV4,所得PCR产物切胶回收后测序;采用Western blotting检测FRT细胞中TRPV4蛋白的表达情况。应用脂质体转染法构建共表达钙激活氯离子通道蛋白1(ANO1)和YFP-H148Q/I152L的FRT细胞模型,倒置荧光显微镜下观察ANO1和YFP-H148Q/I152L在细胞中的表达情况,应用荧光淬灭动力学实验测定细胞模型的有效性。加入TRPV4激活剂和抑制剂,应用荧光淬灭动力学实验检测模型能否筛选TRPV4调节剂;加入TRPV4激活剂,应用Fura-2荧光探针法检测细胞内的Ca2+浓度;通过Z'因子评估细胞模型是否适用于高通量筛选。结果RT-PCR和Western blotting检测结果显示,FRT细胞内源性表达TRPV4。倒置荧光显微镜下清晰可见ANO1表达在FRT细胞膜上,YFP-H148Q/I152L表达在FRT细胞质中,即成功构建了共表达ANO1和YFP-H148Q/I152L的FRT细胞模型。荧光淬灭动力学实验结果显示,该模型可以筛选TRPV4调节剂,斜率(Slope)值与TRPV4调节剂的浓度呈剂量依赖关系;该模型可敏感检测细胞内Ca2+的浓度变化,通过Slope值可反映细胞内Ca2+浓度的高低;Z'因子为0.728,表明该模型可高通量筛选TRPV4调节剂。结论成功构建了一种可以敏感高效筛选TRPV4调节剂的高通量筛选细胞模型。 展开更多
关键词 瞬时受体电位香草酸亚型4 钙激活氯离子通道 YFP-H148Q/I152L 高通量筛选细胞模型
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基于CFTR的H2受体调节剂高通量筛选细胞模型的构建 被引量:1
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作者 刘雪莹 吴明达 +4 位作者 高雪伟 冯剑南 高俊涛 郝峰 庄文越 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期109-115,共7页
目的建立基于囊性纤维化跨膜传导调节因子(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator, CFTR)高通量筛选组胺H2受体(histocompatibility-2)调节剂的模型。方法应用RT-PCR、Western blot检测H2受体在Fischer大鼠甲状腺滤泡上... 目的建立基于囊性纤维化跨膜传导调节因子(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator, CFTR)高通量筛选组胺H2受体(histocompatibility-2)调节剂的模型。方法应用RT-PCR、Western blot检测H2受体在Fischer大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞中表达情况。采用脂质体转染获取同时表达CFTR和黄色荧光蛋白双突变体YFP-H148Q/I152L的FRT细胞。荧光淬灭动力学实验检测细胞模型功能,判断该模型是否可以筛选H2受体的调节剂。结果 RT-PCR、Western blot结果显示,FRT内源性表达H2受体。采用倒置荧光显微镜观察,证实成功构建同时表达CFTR和YFP-H148Q/I152L的细胞模型。荧光淬灭动力学实验证明该模型具有cAMP激活氯离子通道的特性,可用于H2受体调节剂的筛选,且荧光斜率(slope)值与H2受体调节剂的浓度呈剂量依赖关系。结论成功构建基于CFTR高通量筛选H2受体调节剂的细胞模型。 展开更多
关键词 囊性纤维化跨膜传导调节因子 H2受体 cAMP激活氯离子通道 大鼠甲状腺滤泡上皮细胞 高通量筛选细胞模型
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现代生物学技术在中药药效研究中的应用 被引量:3
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作者 张惠君 陈鸿英 《天津药学》 2006年第1期41-43,共3页
现代生物技术的迅猛发展为中药和中药复方药效学的研究搭建了新的平台,本文从动物整体、细胞和分子水平的药物筛选模式和技术,综述了现代生物技术在单味及复方中药的活性成分研究中的应用和展望。
关键词 中药药效 转基因动物模型 细胞筛选模型 分子水平筛选
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桑叶中对PPARγ有激活作用的组分分离和活性鉴定 被引量:1
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作者 宋如鋆 耿明星 +2 位作者 吕正兵 钱坤 舒建洪 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期511-517,共7页
过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPARγ)是调节脂肪细胞基因表达和分化的重要因子,也称作胰岛素增敏剂受体,一些脂肪酸对PPARγ有激活作用。桑叶中含有多种脂肪酸,以其为材料,利用构建的COS-7细胞高通量筛选模型筛选具有PPARγ配体活性... 过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPARγ)是调节脂肪细胞基因表达和分化的重要因子,也称作胰岛素增敏剂受体,一些脂肪酸对PPARγ有激活作用。桑叶中含有多种脂肪酸,以其为材料,利用构建的COS-7细胞高通量筛选模型筛选具有PPARγ配体活性的组分及单体。桑叶粉通过正己烷提取和石油醚萃取后,石油醚萃取组分(Fr.P)对PPARγ的激活倍数可达到阴性对照DMSO的3.34倍。经气相色谱-质谱(GC-MS)分析,从桑叶正己烷提取物(Fr.H)和Fr.P组分中共获得19种脂肪酸,其中Fr.H中的亚麻酸质量分数为1.91%,亚油酸为0.94%,十四酸为0.11%。高通量细胞筛选模型分析显示,与阴性对照DMSO比较,100μmol/L十四酸对PPARγ的激活倍数为1.51,50μmol/L十五酸对PPARγ的激活倍数为2.12,150μmol/L亚麻酸对PPARγ的激活倍数为2.48,100μmol/L亚油酸对PPARγ的激活倍数为2.21,而其他脂肪酸均无PPARγ配体活性。通过十四酸、亚麻酸和亚油酸的协同PPARγ激活效应分析,推测桑叶中可能含有非脂肪酸的PPARγ激动剂成分。研究结果提示有望从桑叶中寻找到新的天然胰岛素增敏剂。 展开更多
关键词 过氧化物酶体增殖物激活受体-Γ COS-7细胞高通量筛选模型 桑叶 脂肪酸
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枳实薤白桂枝汤抗心肌细胞损伤活性成分的发现研究 被引量:10
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作者 王程 张玉峰 赵筱萍 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1601-1605,共5页
用H2O2损伤乳鼠心肌细胞,并用二乙酸荧光素(fluorescein diacetate,FDA)标记活细胞,建立心肌细胞损伤模型用于心肌细胞保护物质的筛选;以抗坏血酸(Vc)为阳性对照,对枳实薤白桂枝汤的43个组分进行快速筛选,发现了7个心肌细胞保护作用较... 用H2O2损伤乳鼠心肌细胞,并用二乙酸荧光素(fluorescein diacetate,FDA)标记活细胞,建立心肌细胞损伤模型用于心肌细胞保护物质的筛选;以抗坏血酸(Vc)为阳性对照,对枳实薤白桂枝汤的43个组分进行快速筛选,发现了7个心肌细胞保护作用较明显的组分;采用液相色谱-质谱联用法(LC-MS)对C18,D14,D15,D16和E09进行定性分析,推测出11个化学成分;对其中6个成分进行快速筛选,发现橙皮苷、新橙皮苷和圣草酚具有心肌细胞保护作用,而圣草酚的活性最强,且呈良好的量效关系。 展开更多
关键词 枳实薤白桂枝汤 原代乳鼠心肌细胞 中药活性组分快速筛选 抗心肌细胞损伤筛选模型 圣草酚
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Cell models and drug discovery for mitochondrial diseases 被引量:5
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作者 Shuang-yi HU Qian-qian ZHUANG +2 位作者 Yue QIU Xu-fen ZHU Qing-feng YAN 《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》 SCIE CAS CSCD 2019年第5期449-456,共8页
Mitochondrion is a semi-autonomous organelle,important for cell energy metabolism,apoptosis,the production of reactive oxygen species(ROS),and Ca2+homeostasis.Mitochondrial DNA(mtDNA)mutation is one of the primary fac... Mitochondrion is a semi-autonomous organelle,important for cell energy metabolism,apoptosis,the production of reactive oxygen species(ROS),and Ca2+homeostasis.Mitochondrial DNA(mtDNA)mutation is one of the primary factors in mitochondrial disorders.Though much progress has been made,there remain many difficulties in constructing cell models for mitochondrial diseases.This seriously restricts studies related to targeted drug discovery and the mechanism and therapy for such diseases.Here we summarize the characteristics of patient-specific immortalized lymphoblastoid cells,fibroblastoid cells,cytoplasmic hybrid(cybrid)cell lines,and induced pluripotent stem cells(iPSCs)-derived differentiation cells in the study of mitochondrial disorders,as well as offering discussion of roles and advances of these cell models,particularly in the screening of drugs. 展开更多
关键词 Mitochondrial diseases Mitochondrial DNA Cell model Drug discovery
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