F81细胞无血清悬浮驯化后培养猫泛白细胞减少症病毒的研究

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作者 张久鑫 邵宝顺 +6 位作者 朱辉 贾浩苒 梁琳 汤新明 崔尚金 梁瑞英 王龙涛 《动物医学进展》 北大核心 2023年第1期48-53,共6页

为解决国内猫泛白细胞减少症生物制品短缺的问题,筛选出适用于猫泛白细胞减少症病毒增殖的猫肾细胞系(F81),通过对贴壁F81进行降血清悬浮驯化培养,得到了无血清全悬浮培养F81细胞系。研究建立的F81细胞系在初始传代细胞密度为1×10^... 为解决国内猫泛白细胞减少症生物制品短缺的问题,筛选出适用于猫泛白细胞减少症病毒增殖的猫肾细胞系(F81),通过对贴壁F81进行降血清悬浮驯化培养,得到了无血清全悬浮培养F81细胞系。研究建立的F81细胞系在初始传代细胞密度为1×10^(6)cells/mL时,培养48 h后细胞密度可达到7.02×10^(6)cells/mL。对培养猫泛白细胞减少症病毒工艺进行摸索,确定最佳接毒工艺为同步接毒法,初始接毒细胞密度为1×10^(6)cells/mL、MOI为3.5×10^(-2),培养72 h后收毒,病毒滴度可达到10^(7.25)TCID_(50)/0.1 mL。该方法使用同源细胞系且未添加动物血清,为猫泛白细胞减少症生物制品生产降低了下游生产纯化难度,同时降低了生产成本,可显著提高产品核心竞争力。研究结果可为其他猫用生物制品相关研究提供参考。 展开更多

关键词 F81细胞 细胞驯化 无血清悬浮培养 猫泛白细胞减少症病毒

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依赖IL-5增殖的细胞株TF-1-9E3的驯化及验证

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作者 李诗洁 代维燕 +5 位作者 王雪莲 柯文锋 韩飞 陈永奇 刘畅 白仲虎 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期109-114,共6页

在IL-5靶点药物的发现阶段,为评价候选药物的阻断活性,需建立依赖IL-5增殖且信噪比高、重现性好的检测用细胞株。TF-1是人白血病细胞,其生长完全依赖IL-3或GM-CSF,而IL-5与IL-3和GM-CSF共用β(βc)受体,因此,研究以GM-CSF依赖的TF-1细... 在IL-5靶点药物的发现阶段,为评价候选药物的阻断活性,需建立依赖IL-5增殖且信噪比高、重现性好的检测用细胞株。TF-1是人白血病细胞,其生长完全依赖IL-3或GM-CSF,而IL-5与IL-3和GM-CSF共用β(βc)受体,因此,研究以GM-CSF依赖的TF-1细胞株为来源,用IL-5替换TF-1细胞生长必需的生长因子GM-CSF,降低血清含量进行细胞驯化培养传代。通过35 d的细胞驯化及3~5次降血清传代培养,采用有限稀释法分离单克隆,一共得到14个单克隆细胞株。对14株细胞进行FACS检测,其中,有9个细胞株IL-5Rα表达量升高。对IL-5Rα过表达的细胞株进行IL-5增殖检测,结果表明,相比8%FBS得到的单克隆,6%FBS得到的单克隆对IL-5刺激更敏感。通过单因素优化实验,细胞增殖检测最优的细胞接种量为2×10^(4)个/孔,FBS含量为3%,血清品牌为Gibco。驯化后的细胞TF-1-9E3对IL-5的剂量-效应曲线的信噪比为3.19,Emax区间为2.15,可用于IL-5的生物学活性检测及IL-5与IL-5Rα的抗体阻断活性检测。 展开更多

关键词 IL-5 TF-1细胞 增殖 阻断活性 细胞驯化

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MDCK细胞无血清悬浮培养技术在流感疫苗研究与生产中的应用进展

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作者 靳莉武 张震宇 +4 位作者 靳冬武 马花 马玉梅 乔自林 王家敏 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期38-47,共10页

流感是一种常见的呼吸道疾病,由流感病毒引起,接种疫苗是预防流感的有效手段。MDCK细胞(Madin-Darby Canine Kidney Cells)具有易于培养和高产量的特点,可以支持流感病毒的复制和增殖,被广泛用于流感疫苗的研究和生产。随着对流感病毒... 流感是一种常见的呼吸道疾病,由流感病毒引起,接种疫苗是预防流感的有效手段。MDCK细胞(Madin-Darby Canine Kidney Cells)具有易于培养和高产量的特点,可以支持流感病毒的复制和增殖,被广泛用于流感疫苗的研究和生产。随着对流感病毒研究的不断深入,为了进一步拓展MDCK细胞用于流感病毒研究和工业应用的能力,研究人员开始发展MDCK细胞无血清全悬浮培养技术。通过长期的培养和优化,驯化的MDCK悬浮细胞株可以更好地适应流感病毒的生长环境,提高流感病毒的产量和感染性。总之,MDCK细胞无血清悬浮培养技术在流感病毒研究和工业应用中发挥着重要作用,为流感疫苗生产和抗流感药物研发提供更好的工具。同时也必须重视MDCK细胞的安全性,采取合适的措施来确保其应用的安全性和可靠性。 展开更多

关键词 MDCK细胞 细胞悬浮驯化 无血清培养基 流感疫苗 安全性

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悬浮驯化CHO细胞并用于抗前列腺特异性膜抗原的抗体表达 被引量：2

4

作者 吴介恒 韩东晖 +6 位作者 魏铭 郑国旭 焦点 席文锦 杨安钢 秦卫军 温伟红 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期1-4,9,共5页

目的将贴壁状态的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞驯化成用无血清培养基培养的悬浮CHO细胞(CHO-S),并验证用该悬浮细胞进行抗体表达的可行性。方法将贴壁状态的CHO-S细胞调整为悬浮培养后,再用逐步降低血清含量的方法将其驯化成用无血清培养基悬... 目的将贴壁状态的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞驯化成用无血清培养基培养的悬浮CHO细胞(CHO-S),并验证用该悬浮细胞进行抗体表达的可行性。方法将贴壁状态的CHO-S细胞调整为悬浮培养后,再用逐步降低血清含量的方法将其驯化成用无血清培养基悬浮培养的CHO-S细胞。根据从噬菌体抗体库筛选获得的抗前列腺特异性膜抗原(PSMA)单链抗体的基因序列,人工设计并合成其重链和轻链基因,分别克隆入真核表达载体pc DNA3.1中,所得载体命名为pc DNA3.1-HC和pc DNA3.1-LC。将构建好的2个载体按照轻、重链比例为3∶1的量用Free Style MAX转染试剂瞬时转染CHO-S细胞,转染7 d后收集培养上清,用SDS-PAGE和Western blot法检测抗体表达情况,用流式细胞术检测其与PSMA阳性细胞的结合活性。结果成功将贴壁CHO细胞驯化成悬浮CHO-S细胞,成功构建了表达抗PSMA人源性抗体重链和轻链基因的真核表达载体,并在CHO-S细胞中实现了抗体的分泌表达,流式细胞术检测证实其可特异性结合PSMA阳性前列腺癌细胞。结论成功驯化获得悬浮CHO-S细胞,驯化后的CHO-S细胞可用于抗体的真核表达,为后续抗体的大量表达纯化及功能研究提供了工具。 展开更多

关键词 细胞驯化 CHO细胞 抗体表达 真核表达 转染

原文传递

BHK21细胞悬浮培养的驯化和质量评价 被引量：6

5

作者 乔自林 马祺 +4 位作者 王家敏 冯若飞 李明生 令世鑫 马忠仁 《西北民族大学学报（自然科学版）》 2018年第3期16-19,共4页

目的:将贴壁培养型BHK21细胞驯化成适合口蹄疫疫苗生产的无血清全悬浮培养型细胞.方法:引进贴壁培养型BHK21细胞,通过改变培养液和降低血清的方法进行悬浮培养的驯化,对驯化得到的悬浮培养型细胞进行生物学检定.结果:引进的BHK21细胞低... 目的:将贴壁培养型BHK21细胞驯化成适合口蹄疫疫苗生产的无血清全悬浮培养型细胞.方法:引进贴壁培养型BHK21细胞,通过改变培养液和降低血清的方法进行悬浮培养的驯化,对驯化得到的悬浮培养型细胞进行生物学检定.结果:引进的BHK21细胞低血清驯化培养22代可悬浮生长,用无血清培养基培养10代后形态趋于稳定生长变快.贴壁和悬浮细胞均有致瘤性,对口蹄疫病毒敏感,适应生物反应器高密度培养,且没有外源物污染.结论:驯化的BHK21细胞可用于口蹄疫疫苗的研究和生产. 展开更多

关键词 BHK21 细胞驯化 口蹄疫

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BHK21细胞的悬浮驯化及其悬浮培养参数研究 被引量：3

6

作者 田波 尚勇良 +4 位作者 武发菊 安芳兰 万玉林 刘学荣 杨进才 《安徽农业科学》 CAS 2014年第31期10855-10857,共3页

[目的]探讨各种悬浮培养条件对BHK-21细胞悬浮培养的影响,尤其是细胞生长过程中出现的细胞结团现象对细胞生长状态的影响,从而摸索出稳定的培养条件。[方法]将BHK-21细胞株进行悬浮驯化培养,通过对悬浮培养的培养液、pH、溶解氧、罐压... [目的]探讨各种悬浮培养条件对BHK-21细胞悬浮培养的影响,尤其是细胞生长过程中出现的细胞结团现象对细胞生长状态的影响,从而摸索出稳定的培养条件。[方法]将BHK-21细胞株进行悬浮驯化培养,通过对悬浮培养的培养液、pH、溶解氧、罐压、搅拌等各种细胞相关生长条件进行研究。[结果]细胞的结团严重影响了细胞的生长代谢。最佳培养条件为最佳接种浓度0.2×106个/ml,牛血清的最佳含量为5%,BHK21细胞培养液理想pH为7.0~7.2,采用2孔通气的100 r/min有利于BHK21细胞的生长。[结论]为体外规模化细胞培养平台奠定理论基础。 展开更多

关键词 BHK21细胞 细胞驯化 悬浮培养

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一株MDBK细胞的低血清悬浮驯化研究

7

作者 王磊 杨承槐 刘莹 《中国兽药杂志》 2021年第4期57-62,共6页

研究选取一株背景清晰、纯净的MDBK贴壁细胞,通过直接驯化和逐级降低血清相结合的办法,获得了一株可以在低血清培养基中全悬浮培养的MDBK细胞。该细胞在含0.5%胎牛血清的培养基中悬浮培养48 h后的细胞密度稳定在5.0×10^(6)/mL以上... 研究选取一株背景清晰、纯净的MDBK贴壁细胞,通过直接驯化和逐级降低血清相结合的办法,获得了一株可以在低血清培养基中全悬浮培养的MDBK细胞。该细胞在含0.5%胎牛血清的培养基中悬浮培养48 h后的细胞密度稳定在5.0×10^(6)/mL以上,培养72 h后细胞密度最高可达1.16×10^(7)/mL,且细胞形态良好,活力在93%以上,具有良好的传代稳定性。应用筛选获得的悬浮培养MDBK细胞株分别接种伪狂犬病毒和传染性牛鼻气管炎病毒后,检测病毒敏感性。细胞在24 h均发生了皱缩,72 h大部分死亡。悬浮培养的MDBK细胞对传染性牛鼻气管炎病毒的滴度在24 h达到最大值107.6TCID50/mL,对伪狂犬病毒的滴度在48 h达到最大值107.6 TCID50/mL,说明虽然细胞的培养方式发生了改变,但并没有影响上述两种病毒在该细胞上的增殖特性。对MDBK细胞的全悬浮驯化研究可为相关病毒类疫苗规模化生产及工艺的升级改进提供细胞学基础资料。 展开更多

关键词 MDBK细胞 全悬浮培养 低血清 细胞驯化

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PK15细胞的无血清全悬浮驯化研究 被引量：10

8

作者 刘天伦 郎洪彬 孔飒 《中国兽药杂志》 2019年第9期12-18,共7页

目前PK15细胞主要用于生产猪圆环病毒2型,传统的培养工艺为滚瓶系统或微载体系统,该两种培养系统都存在各自的劣势。驯化一株全悬浮的PK15细胞可推进工艺的进一步升级,降低成本的同时也简化了培养工艺且更易于产业化。经贴壁降血清培养... 目前PK15细胞主要用于生产猪圆环病毒2型,传统的培养工艺为滚瓶系统或微载体系统,该两种培养系统都存在各自的劣势。驯化一株全悬浮的PK15细胞可推进工艺的进一步升级,降低成本的同时也简化了培养工艺且更易于产业化。经贴壁降血清培养、低血清悬浮优化传代、无血清悬浮传代培养,对一株贴壁的PK15细胞进行了无血清的全悬浮驯化。传代23次后,该株细胞无血清全悬浮培养初始密度为0. 5×106/m L,在72 h密度可增殖到4. 0×106/m L左右,形态良好,倍增时间稳定,且细胞活率达到95%以上,命名为PK15-S,为大规模培养PK15细胞提供了理论依据。 展开更多

关键词 PK15细胞 细胞驯化 无血清 全悬浮

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ST贴壁细胞驯化悬浮及无血清培养工艺开发 被引量：2

9

作者 王嘉琪 钱建宁 +6 位作者 蔡仕君 牛盛蕃 杨云 魏文涛 赵志欣 侯瑞娟 张业炘 《生物技术》 CAS 2020年第6期584-587,共4页

[目的]将购自ATCC的ST贴壁细胞通过自主驯化,使其能在甘肃健顺生物科技有限公司(简称健顺生物)自产的无血清培养基CD ST 258中悬浮生长且能稳定传代,在反应器中能高密度生长。[方法]采用高血清贴壁培养转无血清悬浮培养;单因素实验优化... [目的]将购自ATCC的ST贴壁细胞通过自主驯化,使其能在甘肃健顺生物科技有限公司(简称健顺生物)自产的无血清培养基CD ST 258中悬浮生长且能稳定传代,在反应器中能高密度生长。[方法]采用高血清贴壁培养转无血清悬浮培养;单因素实验优化氨基酸、维生素、无机盐等培养基组分;单因素实验优化生物反应器的pH、溶氧和转速三个参数。[结果]悬浮细胞在无血清培养基中传代,72 h细胞密度高于8.0×10^(6)cells/m L;反应器中细胞最高生长密度可达3.0×10^(7)cells/m L。[结论]ST贴壁细胞可驯化为悬浮细胞,能在无血清培养基中稳定传代且在一次性反应器中可高密度生长。 展开更多

关键词 ST细胞 细胞驯化 无血清悬浮培养 一次性生物反应器

原文传递

无血清全悬浮培养Vero细胞系的建立及生物反应器培养参数优化

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作者 杨惠清 武发菊 +4 位作者 葛玉凤 刘小刚 安芳兰 刘学荣 胡永浩 《动物医学进展》 北大核心 2023年第1期54-59,共6页

为建立无血清全悬浮培养Vero细胞系,并使其在反应器中高密度生长。从美国典型培养物保藏中心(ATCC)引进贴壁培养型Vero细胞,通过降低血清浓度和改变培养液的方式获得1株无血清全悬浮培养型Vero细胞,扩增培养后液氮冻存,建立相应的细胞库... 为建立无血清全悬浮培养Vero细胞系,并使其在反应器中高密度生长。从美国典型培养物保藏中心(ATCC)引进贴壁培养型Vero细胞,通过降低血清浓度和改变培养液的方式获得1株无血清全悬浮培养型Vero细胞,扩增培养后液氮冻存,建立相应的细胞库;复苏细胞后对活力、形态、生长曲线、微生物污染、染色体核型等特性进行检定;通过Box-Behnken试验对生物反应器pH、溶氧和搅拌转速等3个培养参数进行优化,确定最优培养参数。结果显示,筛选的Vero悬浮细胞形态呈圆形、饱满、透亮,大小均匀,呈现较好的悬浮生长状态;生长曲线呈S型;细菌、真菌、支原体及外源病毒检查均为阴性;染色体数目为58或60的占75%;用响应面分析法得出的最优培养参数培养Vero细胞,细胞最高密度可达4.5×10^(6)cells/mL。结果表明,成功筛选出了适应无血清悬浮培养的Vero细胞,通过优化培养参数,可在生物反应器中高密度生长。 展开更多

关键词 VERO细胞 细胞驯化 细胞库 生物反应器

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动物细胞无血清培养技术研究进展 被引量：2

11

作者 阿尔祖古丽 马桂兰 +1 位作者 阿依木古丽 乔自林 《甘肃畜牧兽医》 2018年第10期22-24,共3页

生物医药是21世纪的朝阳产业,动物细胞无血清培养技术在生物医药领域中发挥着重要作用。无血清培养技术包括无血清培养基的开发、适应细胞株的驯化以及细胞规模化培养技术等关键技术,以细胞生物反应器高密度培养技术作为基础的细胞无血... 生物医药是21世纪的朝阳产业,动物细胞无血清培养技术在生物医药领域中发挥着重要作用。无血清培养技术包括无血清培养基的开发、适应细胞株的驯化以及细胞规模化培养技术等关键技术,以细胞生物反应器高密度培养技术作为基础的细胞无血清悬浮培养技术推动了生物制药的快速发展。 展开更多

关键词 无血清培养基 细胞驯化 生物反应器

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悬浮培养型BHK-21细胞生长特性及成瘤性研究 被引量：3

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作者 赵彩红 王美皓 +3 位作者 臧荣鑫 乔自林 马忠仁 王家敏 《西北民族大学学报（自然科学版）》 2019年第4期53-59,共7页

目的:了解低血清驯化的悬浮培养型BHK-21细胞的生长特性及致裸鼠成瘤能力.方法:比较研究悬浮型和贴壁型BHK-21细胞的细胞形态、生长动力学和成瘤性.结果:驯化的悬浮培养型和贴壁培养型BHK-21细胞生长状态均良好,最大增殖浓度分别为517&#... 目的:了解低血清驯化的悬浮培养型BHK-21细胞的生长特性及致裸鼠成瘤能力.方法:比较研究悬浮型和贴壁型BHK-21细胞的细胞形态、生长动力学和成瘤性.结果:驯化的悬浮培养型和贴壁培养型BHK-21细胞生长状态均良好,最大增殖浓度分别为517×10^4/mL和39.67×10^4/mL,群体倍增时间分别为23.03 h和21.36 h,能显著提高细胞培养密度(P<0.05).背部皮下接种致裸鼠成瘤性实验表明,驯化的悬浮培养型组裸鼠的体重增长率均低于贴壁培养型BHK-21细胞、阳性细胞组(Hela)和阴性细胞组(KMB17)(P>0.05),裸鼠成瘤体积增长率均高于其他三组(P<0.05).结论:驯化的悬浮培养型BHK-21细胞能显著提高细胞密度,其成瘤性方面还需进一步改善. 展开更多

关键词 驯化后悬浮培养型BHK-21细胞 贴壁培养型BHK-21细胞 生长特性 成瘤性

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