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PRRSV BZ4-19株的分离鉴定及其全基因序列分析
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作者 李思琪 刘莹 +5 位作者 刘濮毓 任晓祥 李岩岩 王文钊 左玉柱 范京惠 《中国兽医科学》 CAS CSCD 2024年第2期200-207,共8页
为了解山东滨州某猪场PRRSV的流行及变异情况,将该猪场采集的疑似PRRSV阳性病料进行RT-PCR检测,检测出的阳性样品用Marc-145细胞进行分离,设计了9对扩增引物用于分离株(BZ4-19)的全基因扩增,将扩增出的全基因序列进行核苷酸及其推导的... 为了解山东滨州某猪场PRRSV的流行及变异情况,将该猪场采集的疑似PRRSV阳性病料进行RT-PCR检测,检测出的阳性样品用Marc-145细胞进行分离,设计了9对扩增引物用于分离株(BZ4-19)的全基因扩增,将扩增出的全基因序列进行核苷酸及其推导的氨基酸序列分析。最终成功在Marc-145细胞上分离到1株RespPRRS MLV-like毒株,全基因扩增结果显示其全长为15412 bp(不含polyA尾);核苷酸同源性分析说明,其与美洲经典株VR2332及RespPRRS MLV(疫苗株)同源性最高,分别为99.4%和99.8%。将BZ4-19分离株与VR2332、RespPRRS MLV的氨基酸序列进行比较分析揭示,VR2332与RespPRRS MLV共有30处氨基酸差异,在这30处差异中,分离株与VR2332有7处一致,与RespPRRS MLV有23处一致。在鉴别VR2332与RespPRRS MLV的9处可能与毒力相关的氨基酸位点时,分离株有7处与VR2332相同,由此推测本研究分离到的毒株属于疫苗株RespPRRS MLV返强毒株,我国具有上述分子变化的PRRSV的流行应被关注。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV) 经典美洲株 RespPRRS MLV株 病毒分离鉴定 流行病学
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三种鉴别诊断PRRSV美洲型经典毒株和变异株的方法比较 被引量：2
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作者 陈仕龙 陈少莺 +7 位作者 江斌 林锋强 朱小丽 王劭 程晓霞 黄梅清 李兆龙 郑敏 《中国动物传染病学报》 CAS 2011年第4期71-75,共5页
我国流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)包括美洲型经典毒株和变异株。本研究应用RT-PCR、直接免疫荧光(direct immunofluorescence asay,DFA)及病毒分离3种检测方法对99份不同... 我国流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)包括美洲型经典毒株和变异株。本研究应用RT-PCR、直接免疫荧光(direct immunofluorescence asay,DFA)及病毒分离3种检测方法对99份不同类型的猪繁殖与呼吸综合征临床疑似病料和人工感染病料进行检测。结果显示,RT-PCR检测试剂盒敏感性最高,DFA鉴别诊断试剂盒次之,病毒分离最差。DFA与病毒分离、RT-PCR的总符合率分别为92%和85.5%。RT-PCR灵敏性高,可作为PRRSV鉴别诊断的首选方法;DFA鉴别诊断法所需时间较短、特异性好,但需要一定的操作经验;病毒分离敏感性低、操作繁琐,阳性分离需要其它方法验证,不适合于PRRSV的鉴别诊断。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲型经典毒株 猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株 RT-PCR DFA免疫荧光诊断试剂盒 病毒分离
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猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲经典株国家核酸标准物质的研制 被引量：4
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作者 原霖 高旭年 +7 位作者 董浩 陈亚娜 闫若潜 兰德松 宋晓晖 吴佳俊 杨林 王传彬 《畜牧与兽医》 北大核心 2018年第11期78-82,共5页
为了研制猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）美洲经典株国家核酸标准物质,将美洲经典株代表PRRSV VR2332接种Marc145细胞,出现细胞病变后,反复冻融并收集病毒液,并灭活分装。制备后... 为了研制猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）美洲经典株国家核酸标准物质,将美洲经典株代表PRRSV VR2332接种Marc145细胞,出现细胞病变后,反复冻融并收集病毒液,并灭活分装。制备后进行均匀性评估、稳定性评估、数字PCR法定值和临床试用。结果表明制备的标准物质的定值为（2. 06±0. 31）×104copies/μL;样品均匀;-20℃稳定保存12个月以上、4℃稳定2个月以上。经全国标准物质管理委员会评审,该制备物达到了国家二级标准物质的要求,可以作为核酸扩增检测的PRRSV美洲经典株核酸标准物质。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲经典株 核酸扩增 标准物质
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对PRRSV快速分型的多重RT-PCR方法的建立与应用 被引量：12
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作者 林华 郭万柱 +6 位作者 韩国全 岳玉红 郭杨 徐志文 颜其贵 王印 李宇 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期6-10,共5页
根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)欧洲株、美洲经典株与高致病性Nsp2变异株的Nsp2基因间的差异,设计3对特异性扩增引物,建立快速检测PRRSV欧洲株、美洲经典株和高致病性Nsp2变异株的多重RT-PCR方法。利用PRRSV欧洲株、经典株和高致病... 根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)欧洲株、美洲经典株与高致病性Nsp2变异株的Nsp2基因间的差异,设计3对特异性扩增引物,建立快速检测PRRSV欧洲株、美洲经典株和高致病性Nsp2变异株的多重RT-PCR方法。利用PRRSV欧洲株、经典株和高致病性Nsp2变异株及其他相关病毒株进行敏感度和特异性试验。结果显示,所建立的多重RT-PCR对欧洲株、美洲经典株与高致病性Nsp2变异株的RNA最小检出量分别为0.050 2、0.055 4、0.056 4ng,与CSFV、TGEV、JEV、SIV的核酸均无交叉反应。用该方法检测病料76份,结果PRRSV欧洲株、美洲经典株和高致病性Nsp2变异株的阳性率分别为0、7.89%和53.9%,未发现3型病毒间有混合感染的情况。检测结果与单一RT-PCR及RT-PCR检测试剂盒检测结果一致,高于病毒分离。 展开更多
关键词 PRRSV欧洲株 PRRSV美洲经典株 PRRSV高致病性Nsp2变异株 多重RT-PCR
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