期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到122篇文章
< 1 2 … 7 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
结核分枝杆菌热休克蛋白65与汉坦病毒G2糖蛋白融合基因真核表达载体的构建与表达
1
作者 黄浩 黄汉菊 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期49-51,共3页
目的构建以结核分枝杆菌热休克蛋白65(HSP65)和汉坦病毒G2糖蛋白重组融合基因为基础的真核表达载体,为进一步研究其在结核病和出血热防治中的作用奠定基础。方法采用聚合酶链反应从结核分枝杆菌H37Rv株基因中,扩增出HSP65的编码基因,从T... 目的构建以结核分枝杆菌热休克蛋白65(HSP65)和汉坦病毒G2糖蛋白重组融合基因为基础的真核表达载体,为进一步研究其在结核病和出血热防治中的作用奠定基础。方法采用聚合酶链反应从结核分枝杆菌H37Rv株基因中,扩增出HSP65的编码基因,从T-H8205G2质粒扩增出G2糖蛋白的编码基因,经相应限制性核酸内切酶消化后,插入真核表达载体pcDNA3.1/His,并将此重组质粒通过脂质体介导转染NIH3T3细胞,用SDS-PAGE、免疫组织化学及免疫荧光方法分别测定表达产物的相对分子量及特异性。结果获得正向插入的pcDNA3.1/His-HSP65-G2重组表达质粒,表达产物的相对分子量为105 kD,与理论预期大小一致,并且可与汉坦病毒H8205株的腹水抗体和HSP65单抗起特异反应。表明构建的pcDNA3.1/His-HSP65-G2能在哺乳动物细胞中表达并具有抗原性。结论编码HSP65和G2抗原基因的重组基因的真核表达载体构建成功。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 热休克蛋白65 汉坦病毒 G2糖蛋白
下载PDF
结核分枝杆菌热休克蛋白65的最新研究进展
2
作者 康健 柏银兰 +2 位作者 王丽梅 张琳 徐志凯 《教育教学论坛》 2013年第12期163-165,共3页
结核病(tuberculosis,TB)是一种由结核分枝杆菌引起的人兽共患的慢性传染病。而HSP(heat shock protein)是一类在原核和真核细胞中高度保守的蛋白质,在正常细胞的蛋白转位、折叠和装配过程中起着分子伴侣的作用。目前在MTB中研究最多的... 结核病(tuberculosis,TB)是一种由结核分枝杆菌引起的人兽共患的慢性传染病。而HSP(heat shock protein)是一类在原核和真核细胞中高度保守的蛋白质,在正常细胞的蛋白转位、折叠和装配过程中起着分子伴侣的作用。目前在MTB中研究最多的是HSP65,他的细胞表位较多,是机体免疫系统识别的重要细胞内抗原。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 真核表达 热休克蛋白65 融合蛋白
下载PDF
结核分枝杆菌热休克蛋白GroEL1的研究进展 被引量：5
3
作者 何磊 张鹭 +1 位作者 彭超 王洪海 《微生物与感染》 2010年第3期186-191,共6页
结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)的GroEL1蛋白是基因复制产物,作为热休克蛋白(HSP)一员,不但行使原有的助折叠分子伴侣功能,而且可作为抗原,在抗原呈递中起作用。另外,由于其独特的结构特点,GroEL1还具有多种生物功能,如作为... 结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)的GroEL1蛋白是基因复制产物,作为热休克蛋白(HSP)一员,不但行使原有的助折叠分子伴侣功能,而且可作为抗原,在抗原呈递中起作用。另外,由于其独特的结构特点,GroEL1还具有多种生物功能,如作为蛋白分子伴侣,控制细胞因子依赖性肉芽肿的产生;作为DNA分子伴侣,保护DNA免受损害。而在分枝杆菌属的其他物种如耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)中却行使不同的生物学功能。这些功能产生的原因和机制有待进一步研究,从而为结核病的发生及结核分枝杆菌的进化机制提供更多的依据。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 GroEL1 热休克蛋白 抗原 分子伴侣
下载PDF
结核分枝杆菌热休克蛋白Hsp70在原核表达载体中的克隆表达与鉴定 被引量：2
4
作者 苏洁 蔡宏 朱玉贤 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期712-715,共4页
目的对结核分枝杆菌的一种热休克蛋白Hsp70基因进行克隆,鉴定,并在原核系统中表达。方法以结核杆菌H37Rv菌株基因组DNA为模板,用PCR法对基因Hsp70进行扩增,产物与载体质粒pET-22b(+)构建表达Hsp70的重组质粒,将此重组质粒先转化到E.coli... 目的对结核分枝杆菌的一种热休克蛋白Hsp70基因进行克隆,鉴定,并在原核系统中表达。方法以结核杆菌H37Rv菌株基因组DNA为模板,用PCR法对基因Hsp70进行扩增,产物与载体质粒pET-22b(+)构建表达Hsp70的重组质粒,将此重组质粒先转化到E.coliDH5α内提取质粒,酶切鉴定,再转化入表达宿主E.coliBL21(DE3)PlysS菌株内,对转化菌株以IPTG进行诱导后,破菌,离心,上清进行SDS-PAGE,通过电转移将胶中蛋白转到硝酸纤维素薄膜上后进行免疫印迹分析。结果电泳发现转化了重组质粒的菌株有表达蛋白,所表达的蛋白质相对分子质量为70 000,抗体检测有特异带大小为70kDa。结论成功进行了结核杆菌分泌热休克蛋白Hsp70基因的克隆表达。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 热休克蛋白 载体 克隆 表达与鉴定
下载PDF
结核分枝杆菌热休克蛋白HtpG基因的原核表达与鉴定 被引量：2
5
作者 陈竹 王维斯 +7 位作者 韦一鸣 王雪岩 任坤雨 胡琪 余才涛 李顺 吕樵岚 陈勇 《热带病与寄生虫学》 2019年第4期206-209,232,共5页
目的克隆并表达结核分枝杆菌HtpG分子,并鉴定其免疫反应性。方法采用聚合酶链式反应扩增结核分枝杆菌H37Ra HtpG基因,并克隆至pET22b质粒,测序筛选到重组成功的质粒。重组质粒pET22b-HtpG转化大肠埃希菌BL21(DE3),表达的HtpG重组蛋白通... 目的克隆并表达结核分枝杆菌HtpG分子,并鉴定其免疫反应性。方法采用聚合酶链式反应扩增结核分枝杆菌H37Ra HtpG基因,并克隆至pET22b质粒,测序筛选到重组成功的质粒。重组质粒pET22b-HtpG转化大肠埃希菌BL21(DE3),表达的HtpG重组蛋白通过镍柱纯化。Western blot鉴定表达蛋白,并使用HtpG重组蛋白经ELISA法检测肺结核患者血清特异性抗体水平。结果成功构建了pET22b-HtpG重组质粒;在大肠埃希菌中表达出分子质量约73kDa的重组蛋白。Western blot鉴定该重组蛋白具有良好免疫反应性,ELISA法检测肺结核患者血清中存在特异性抗HtpG抗体。结论在大肠埃希菌内成功表达HtpG重组蛋白,为将该蛋白用于结核免疫诊断试剂的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 热休克蛋白 HTPG 表达 纯化
下载PDF
结核分枝杆菌热休克蛋白60编码基因的克隆与原核表达
6
作者 姚炜 范雄林 +2 位作者 王芳 胡松 黄汉菊 《华中医学杂志》 2006年第6期521-522,共2页
目的克隆结核分枝杆菌热休克蛋白60(Hsp60)编码基因,并在大肠杆菌中表达。方法利用PCR技术从结核杆菌H37Rv株中扩增hsp60基因,并将其与pZero-T载体连接,进行DNA测序。将得到的hsp60基因亚克隆到表达载体pProEXHTb中,构建重组原核表达质... 目的克隆结核分枝杆菌热休克蛋白60(Hsp60)编码基因,并在大肠杆菌中表达。方法利用PCR技术从结核杆菌H37Rv株中扩增hsp60基因,并将其与pZero-T载体连接,进行DNA测序。将得到的hsp60基因亚克隆到表达载体pProEXHTb中,构建重组原核表达质粒pProEXHTb-TBhsp60,并在大肠杆菌BL21中诱导表达。结果成功地克隆了结核分枝杆菌hsp60基因。DNA测序证实,与GenBank公布的序列一致。含pProEXHTb-TBhsp60基因表达质粒的大肠杆菌经IPTG诱导后,能够高效表达相对分子质量(KD)约为60KD的融合蛋白。结论获得了结核分枝杆菌hsp60基因,成功地构建了原核表达质粒pProEXHTb-TBhsp60,并在大肠杆菌得到表达,为研究其免疫学特性奠定了基础。 展开更多
关键词 结核样杆菌 热休克蛋白质类 基因
下载PDF
结核分枝杆菌H37Ra热休克蛋白16.3敲除菌株对小鼠骨髓来源巨噬细胞炎性细胞因子表达及趋化功能的影响 被引量：1
7
作者 蒙祖迪 张焱皓 +3 位作者 亓凯 卫麟娜 高雪涵 罗军敏 《遵义医科大学学报》 2023年第4期335-342,共8页
目的初步探讨结核分枝杆菌H37Ra热休克蛋白16.3敲除菌株对小鼠骨髓来源巨噬细胞炎性细胞因子表达及趋化功能的影响。方法从BALB/c小鼠胫腓骨中提取骨髓细胞,与GM-CSF共培养获得骨髓来源的巨噬细胞,流式细胞术检测巨噬细胞表面F4/80和CD... 目的初步探讨结核分枝杆菌H37Ra热休克蛋白16.3敲除菌株对小鼠骨髓来源巨噬细胞炎性细胞因子表达及趋化功能的影响。方法从BALB/c小鼠胫腓骨中提取骨髓细胞,与GM-CSF共培养获得骨髓来源的巨噬细胞,流式细胞术检测巨噬细胞表面F4/80和CD11b的表达;分别用H37Ra野生型菌株(WT)、H37Ra热休克蛋白16.3回补菌株(COMP)、H37Ra热休克蛋白16.3敲除菌株(MUT)感染小鼠骨髓来源巨噬细胞,Real-time PCR检测巨噬细胞炎性细胞因子TNF-α、IL-6和iNOS以及趋化因子CCL2、CCL3、CCL4、CCL5和CCL12 mRNA的相对表达水平;ELISA以及Western blot检测TNF-α、IL-6和iNOS的表达水平;Transwell实验检测巨噬细胞的趋化功能;流式细胞术检测F4/80^(+)CCR1^(+)、F4/80^(+)CCR2^(+)和F4/80^(+)CCR5^(+)的细胞数量。结果F4/80^(+)CD11b^(+)的细胞数量占比为97.8%,提示小鼠骨髓来源巨噬细胞诱导成功;相较于WT和COMP菌株感染组,在感染巨噬细胞3 h后MUT感染组CCL2、CCL3、CCL4、CCL5和CCL12 mRNA的相对表达水平上调,继续感染24 h,相较于WT和COMP菌株感染组,MUT菌株感染组TNF-α和IL-6mRNA的相对表达水平更高,各感染组间iNOS mRNA的相对表达水平没有差异,而在感染48 h后,各感染组间TNF-α和IL-6mRNA的相对表达水平没有差异,MUT菌株感染组相较于WT和COMP菌株感染组iNOSmRNA的相对表达水平更低;ELISA结果显示TNF-α和IL-6的分泌水平在各感染组间没有差异;Western blot结果显示iNOS的表达在各感染组间也没有明显差异;Transwell实验结果显示,MUT感染组能够趋化更多数量的巨噬细胞至下室;流式结果显示,各感染组间F4/80^(+)CCR1^(+)的细胞数量没有差异,MUT菌株感染组F4/80^(+)CCR2^(+)和F4/80^(+)CCR5^(+)的细胞数量相较于WT和COMP菌株感染组明显上调。结论MTB Hsp16.3能在基因表达水平调控小鼠骨髓来源巨噬细胞炎性细胞因子TNF-α、IL-6和iNOS的表达且可能通过CCL3、CCL4、CCL5/CCR5和CCL2、CCL12/CCR2抑制小鼠骨髓来源巨噬细胞的趋化功能。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 热休克蛋白16.3 巨噬细胞 炎性细胞因子 趋化因子
下载PDF
转染miR-223模拟物的巨噬细胞结核分枝杆菌清除能力、凋亡、炎症反应变化及miR-223与NLRP3靶向关系
8
作者 李达 刘波 +1 位作者 刘丽红 李秋平 《山东医药》 CAS 2024年第24期33-37,共5页
目的 观察肺结核患者血清微小RNA-223(miR-223)水平变化,以及转染miR-223模拟物的巨噬细胞结核分枝杆菌(MTB)H37Rv清除能力、凋亡、炎症反应变化,并分析miR-223与NLRP3靶向关系。方法 选取37例份活动性肺结核患者血清标本(肺结核组)和同... 目的 观察肺结核患者血清微小RNA-223(miR-223)水平变化,以及转染miR-223模拟物的巨噬细胞结核分枝杆菌(MTB)H37Rv清除能力、凋亡、炎症反应变化,并分析miR-223与NLRP3靶向关系。方法 选取37例份活动性肺结核患者血清标本(肺结核组)和同期40例健康体检者血清标本(健康组),采用RT-PCR法检测两组血清标本中miR-223。体外培养人单核细胞株THP-1,经佛波脂刺激24 h后分化为巨噬细胞,将巨噬细胞随机分为健康组、MTB组、MTB+mimics-NC组、MTB+miR-223 mimics组,健康组细胞常规培养,MTB组、MTB+mimics-NC组、MTB+miR-223 mimics组均用MTB标准株H37Rv感染巨噬细胞,感染后MTB+mimics-NC组和MTB+miR-223 mimics组应用脂质体转染法分别将mimics-NC、miR-223 mimics转染至细胞中,采用RT-PCR法检测各组细胞miR-223及NLRP3、TNF-α、IFN-γ mRNA,流式细胞术测算各组细胞凋亡率,菌落形成单位(CFU)计数法检测各组H37Rv细菌负荷量。取对数生长期THP-1细胞,随机分为miR-223 mimics+NLRP3-WT组、mimics-NC+NLRP3-WT组、miR-223mimics+NLRP3-MUT组、mimics-NC+NLRP3-MUT组,用Lipofectamine 2000按照试剂盒说明书操作分别将miR-223mimics和NLRP3-WT、mimics-NC和NLRP3-WT、miR-223 mimics和NLRP3-MUT、mimics-NC和NLRP3-MUT共转染至各组细胞,转染后24 h检测各组细胞的相对荧光素酶活性,双荧光素酶报告基因实验验证miR-223与NLRP3是否存在靶向关系。结果 与健康组比较,肺结核组血清miR-223表达降低(P<0.05)。与健康组比较,MTB组miR-223表达、细胞凋亡率降低,NLRP3、TNF-α、IFN-γ mRNA表达及H37Rv细菌负荷量升高(P均<0.05);与MTB+mimics-NC组比较,MTB+miR-223 mimics组miR-223表达、细胞凋亡率升高,NLRP3、TNF-α、IFN-γ mRNA表达及H37Rv细菌负荷量降低(P均<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,NLRP3是miR-223的靶向基因。结论 肺结核患者血清miR-223表达降低,转染miR-223模拟物能够促进巨噬细胞凋亡,增强MTB感染的巨噬细胞的除菌能力,减轻炎症反应,其机制可能与靶向调控NLRP3有关。 展开更多
关键词 微小RNA-223 结核分枝杆菌 巨噬细胞 肺结核病 活动性肺结核病 NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3
下载PDF
结核分枝杆菌热休克蛋白16．3及其合成肽诱导小鼠免疫应答的研究 被引量：3
9
作者 师长宏 张廷芬 +6 位作者 朱德生 张海 白冰 赵勇 岳晨莉 赵雷 刘建利 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期603-607,共5页
目的比较MTB的热休克蛋白（HSP）16．3和HSP16．3合成肽在小鼠体内诱导的免疫应答及保护力。方法80只BALB／c小鼠分为5组，3个实验组：蛋白组：HSP16．3／溴化二甲基双十八烷酸铵（DDA）／单磷酰脂质A（MPL），合成肽组：HSP16．3合成肽... 目的比较MTB的热休克蛋白（HSP）16．3和HSP16．3合成肽在小鼠体内诱导的免疫应答及保护力。方法80只BALB／c小鼠分为5组，3个实验组：蛋白组：HSP16．3／溴化二甲基双十八烷酸铵（DDA）／单磷酰脂质A（MPL），合成肽组：HSP16．3合成肽／DDA／MPL，佐剂组：HSP16．3合成肽／弗氏不完全佐剂组；2个对照组：卡介苗组和生理盐水组。每只小鼠蛋白和合成肽免疫剂量为50μg／次，共免疫3次，间隔2周。卡介苗为单次免疫5×10^6CFU／只。分别于第1次免疫后0、2、4、6、8周采集血液，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清中抗HSP16．3的抗体浓度及第8周时血清中抗体滴度。末次免疫完成后4周，每组取8只小鼠分离脾淋巴细胞，用HSP16．3刺激后，噻唑蓝法测定脾淋巴细胞的增殖指数，夹心ELISA法检测相同抗原刺激下脾淋巴细胞诱生的γ-干扰素水平。每组剩余小鼠用10’CFU的H37Rv毒株攻击，4周后取小鼠脾脏和肺脏，组织匀浆，倍比稀释后涂7H10平板，4周后计数菌落数。采用LSD-t检验统计学分析。结果抗HSP16．3抗体在免疫的前4周均增长迅速，之后趋于缓和。免疫8周时，3个实验组（蛋白组、合成肽组和佐剂组）抗体水平分别为1：2000、1：2000和1：1000，均高于卡介苗组（1：500）。3个实验组（蛋白组、合成肽组和佐剂组）的脾淋巴细胞增殖指数（3．13±0．18、3．21±0．21和2．40±0．15）均显著高于卡介苗组（1．67±0．12）和生理盐水组（1．04±0．09），蛋白组和合成肽组均显著高于佐剂组。3个实验组诱生的γ-干扰素水平·（182±6）、（194±9）和（179±8）mg／L]均显著低于卡介苗组[（275±10）mg／L]，高于生理盐水组[（71±3）mg/L]，3个实验组之间均无显著差别。3个实验组均对MTB在脾脏[细菌数为（6．74±0．14）-（6．81±0．28）lgCFU]和肺脏[细菌数为（5．74±0．27）-（6．65±0．32）IgCFU]中的增殖有明显抵抗作用，但效果均未超过卡介苗组[细菌数分别为（5．95±0．17）和（5．624±0．23）IgCFU]。结论HSP16．3和HSP16．3合成肽在免疫学特性方面各有优势，提示二者均有望成为结核病疫苗的候选组分。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 热休克蛋白质类 疫苗 亚单位 感染
原文传递
结核分枝杆菌感染小鼠肺泡巨噬细胞诱导结核分枝杆菌小分子热休克蛋白HSP16.3分泌表达模型的建立及鉴定 被引量：3
10
作者 董江涛 徐芳 +6 位作者 田玺择 姚楠 吴芳 章乐 王远志 曹旭东 张万江 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2012年第2期198-201,共4页
为了建立及鉴定结核分枝杆菌感染小鼠肺泡巨噬细胞诱导结核分枝杆菌小分子热休克蛋白HSP16.3分泌表达的模型。采用将0.3mL浓度约为1.0×107个/mL结核分枝杆菌菌悬液经昆明小鼠尾静脉注射,复制结核分枝杆菌感染小鼠模型,经鉴定小鼠... 为了建立及鉴定结核分枝杆菌感染小鼠肺泡巨噬细胞诱导结核分枝杆菌小分子热休克蛋白HSP16.3分泌表达的模型。采用将0.3mL浓度约为1.0×107个/mL结核分枝杆菌菌悬液经昆明小鼠尾静脉注射,复制结核分枝杆菌感染小鼠模型,经鉴定小鼠感染模型复制成功后第15天,进行小鼠肺泡的灌洗,收集小鼠肺泡灌洗液,获取感染小鼠肺泡巨噬细胞,以提取的感染小鼠肺泡巨噬细胞内的结核分枝杆菌基因组DNA为模版PCR扩增结核分枝杆菌小分子热休克蛋白HSP16.3的基因,同时进一步利用激光共聚焦显微镜观察小鼠肺泡巨噬细胞的方法进行研究。PCR结果证实感染结核分支杆菌的巨噬细胞内有结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3的基因表达;同时激光共聚焦显微镜下可见感染小鼠肺泡巨噬细胞内吞噬有大量结核分枝杆菌,并且证实有结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3的分泌表达。成功建立了结核分枝杆菌感染小鼠肺泡巨噬细胞诱导结核分枝杆菌小分子热休克蛋白HSP16.3分泌表达的模型。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 肺泡巨噬细胞 结核分枝杆菌小分子热休克蛋白HSP16.3 表达 模型
下载PDF
结核分枝杆菌热休克蛋白65与人白细胞介素-2的融合蛋白诱导小鼠免疫应答及保护力的研究
11
作者 师长宏 张海 +4 位作者 席丽 张廷芬 赵勇 王丽梅 徐志凯 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期777-780,共4页
热休克蛋白65（Hsp65）是结核分枝杆菌（mycobacterium tuberculosis，MTB）感染过程中一个重要的保护性抗原，具有很强的免疫原性，而白细胞介素-2（IL-2）是一种辅助性T淋巴细胞（Th1）型的细胞免疫佐剂，不仅可增强机体的免疫应答，... 热休克蛋白65（Hsp65）是结核分枝杆菌（mycobacterium tuberculosis，MTB）感染过程中一个重要的保护性抗原，具有很强的免疫原性，而白细胞介素-2（IL-2）是一种辅助性T淋巴细胞（Th1）型的细胞免疫佐剂，不仅可增强机体的免疫应答，而且可以诱导机体的免疫反应向Th1型方向发展。因此，我们构建并表达了Hsp65与IL-2的融合蛋白，观察该融合蛋白在小鼠体内诱导产生的免疫应答及保护力，为结核病新型疫苗的研究奠定基础。 展开更多
关键词 人白细胞介素-2 热休克蛋白65 结核分枝杆菌 免疫应答 保护力 蛋白诱导 tuberculosis 小鼠
原文传递
绿脓杆菌外毒素A受体结合亚基-结核分枝杆菌热休克蛋白65融合蛋白的表达及纯化 被引量：1
12
作者 冯越 张国利 +7 位作者 赵福广 万忠海 岳玉环 吴广谋 田园 刘雪 张亮 朱平 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第10期1395-1399,共5页
目的在大肠埃希菌中融合表达绿脓杆菌外毒素A(pseudomonas exotoxin A,PEA)受体结合亚基-结核分枝杆菌热休克蛋白65(heat shock protein 65,HSP65),并进行纯化。方法从含PEA的质粒中扩增PEA受体结合区亚基PEAⅠ,克隆至pET-28a-HSP65质粒... 目的在大肠埃希菌中融合表达绿脓杆菌外毒素A(pseudomonas exotoxin A,PEA)受体结合亚基-结核分枝杆菌热休克蛋白65(heat shock protein 65,HSP65),并进行纯化。方法从含PEA的质粒中扩增PEA受体结合区亚基PEAⅠ,克隆至pET-28a-HSP65质粒中,构建重组表达质粒pET-28a-HSP65-PEAⅠ,转化大肠埃希菌(E.coil)BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达的重组融合蛋白经SDS-PAGE分析;利用抗PEA受体结合区单抗杂交瘤细胞制备抗PEA受体结合亚基单抗,偶联免疫亲和层析介质,将表达的重组蛋白经DEAE Sepharose 4FF阴离子交换层析、Phenyl Sepharose 6FF疏水层析和免疫亲和层析进行纯化。结果重组质粒经PCR鉴定及测序,证明构建正确;表达的重组HSP65-PEAⅠ蛋白相对分子质量约93 000,主要以可溶性形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上;抗PEA受体结合亚基单抗效价可达1∶10 000。纯化的重组HSP65-PEAⅠ蛋白纯度达90%以上。结论已成功在大肠埃希菌中表达并纯化了重组融合蛋白HSP65-PEAⅠ,为防止PA感染后多器官衰竭综合征的免疫制剂的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 绿脓杆菌外毒素A 分枝杆菌 热休克蛋白 融合蛋白 表达 纯化
原文传递
小分子热休克蛋白Hsp16.3参与介导结核分枝杆菌致巨噬细胞凋亡的研究进展
13
作者 黄丹丹 《系统医学》 2018年第3期193-195,共3页
结核病是世界范围内亟待解决的问题之一。Hsp16.3分布于结核分枝杆菌,其可介导MTB在巨噬细胞内稳定生长,并延迟、减少巨噬细胞凋亡。该研究进展总结出在巨噬细胞凋亡过程中,Hsp16.3可通过影响LC3,miR-181a、miR-146a,TLR2与LAG3等4条可... 结核病是世界范围内亟待解决的问题之一。Hsp16.3分布于结核分枝杆菌,其可介导MTB在巨噬细胞内稳定生长,并延迟、减少巨噬细胞凋亡。该研究进展总结出在巨噬细胞凋亡过程中,Hsp16.3可通过影响LC3,miR-181a、miR-146a,TLR2与LAG3等4条可能的通路,进而减少细胞凋亡过程。此外,该研究还针对Hsp16.3提出早期分子检测、靶向药物开发、Hsp16.3疫苗研发等临床应用意见,以期为临床治疗提供帮助指导。 展开更多
关键词 小分子热休克蛋白 结核分枝杆菌 巨噬细胞 凋亡 靶向治疗
下载PDF
前脑啡肽原和热休克蛋白参与宿主对结核分枝杆菌感染的应答
14
作者 徐霖 乐军 +3 位作者 刘丽蓉 梁莉 王洪海 谢建平 《西南师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期126-130,共5页
利用双向电泳比较了由临床分离的结核分枝杆菌感染离体巨噬细胞 U937 前后的全细胞蛋白组表达差异,肽指纹鉴定和生物信息学分析2个表达明显上调的斑点, 确定它们分别为热休克蛋白 HSP105β和前脑啡肽原. 比较蛋白质组学和转录组学研究发... 利用双向电泳比较了由临床分离的结核分枝杆菌感染离体巨噬细胞 U937 前后的全细胞蛋白组表达差异,肽指纹鉴定和生物信息学分析2个表达明显上调的斑点, 确定它们分别为热休克蛋白 HSP105β和前脑啡肽原. 比较蛋白质组学和转录组学研究发现, 热休克蛋白表达提高可能源于转录增加. 提出了从神经免疫学角度研究结核分枝杆菌致病和宿主免疫机理的新思路, 为解释吸毒人群中结核病高发病率提供了基础. 展开更多
关键词 前脑啡肽原 热休克蛋白 巨噬细胞U937 结核分枝杆菌 蛋白质组
下载PDF
结核杆菌热休克蛋白70刺激表位在融合基因疫苗中的佐剂作用 被引量：2
15
作者 段秀梅 邹亚斌 +4 位作者 马洪喜 李树蕾 王银萍 王超 李玉琴 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期506-511,共6页
目的:探讨结核杆菌热休克蛋白70(mtHSP70)的刺激表位在肝细胞癌相关抗原661(HCA661)融合基因疫苗pCI-HCA661-mtHSP70中的佐剂作用,为提高基因疫苗的免疫效果提供依据。方法:18只BALB/c小鼠随机分为pCI-neo组、pCI-HCA661-mtHSP70C免疫组... 目的:探讨结核杆菌热休克蛋白70(mtHSP70)的刺激表位在肝细胞癌相关抗原661(HCA661)融合基因疫苗pCI-HCA661-mtHSP70中的佐剂作用,为提高基因疫苗的免疫效果提供依据。方法:18只BALB/c小鼠随机分为pCI-neo组、pCI-HCA661-mtHSP70C免疫组和pCI-HCA661-mtHSP70E免疫组,每组6只,分别肌肉注射100μg空质粒pCI-neo、重组质粒pCI-HCA661-mtHSP70C和pCI-HCA661-mtHSP70E,流式细胞术分析小鼠脾T细胞亚群变化;ELISA法检测体外培养脾细胞上清中干扰素γ(IFNγ)的含量及免疫小鼠血清中HCA661特异性抗体的滴度;体外特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)杀伤试验观察融合基因疫苗对肿瘤细胞的抑制作用。结果:pCI-HCA661-mtHSP70C免疫组和pCI-HCA661-mtHSP70E免疫组的CD3+、CD4+T淋巴细胞的百分比和CD4+/CD8+比值与pCI-neo组比较差异有统计学意义(P<0.05);pCI-HCA661-mtHSP70E免疫组的CD3+、CD4+百分比和CD4+/CD8+比值均高于pCI-HCA661-mtHSP70C免疫组,差异有统计学意义(P<0.05);在抗原肽刺激下,pCI-HCA661-HSP70E免疫组小鼠脾细胞培养上清中IFNγ含量较pCI-mtHCA661-HSP70C免疫组明显提高(P<0.05);pCI-HCA661-mtHSP70C免疫组和pCI-HCA661-mtHSP70E免疫组IFNγ含量均高于pCI-neo组(P<0.05)。pCI-HCA661-mtHSP70E免疫组诱导的HCA661特异性抗体水平较pCI-HCA661-mtHSP70C免疫组显著增高(P<0.05);pCI-HCA661-mtHSP70E免疫组可以产生更强的CTL抗肿瘤效应。结论:mtHSP70刺激表位可以诱导机体对HCA661融合基因疫苗的特异性免疫应答,发挥更强的佐剂作用。 展开更多
关键词 融合基因疫苗 肝细胞癌相关抗原661 结核分枝杆菌热休克蛋白70 基因佐剂
下载PDF
结核分枝杆菌热休克蛋白基因真核表达载体的构建及表达
16
作者 张继明 徐苏娟 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2016年第10期1043-1046,共4页
目的构建结核分枝杆菌热休克蛋白X(heat shock protein X,HspX)基因与EGFP融合基因的真核表达载体p EGFP-N1-HspX,并在小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7中表达。方法以结核分枝杆菌(H37Rv)基因组DNA为模板,PCR扩增HspX基因,定向插入至质粒p EG... 目的构建结核分枝杆菌热休克蛋白X(heat shock protein X,HspX)基因与EGFP融合基因的真核表达载体p EGFP-N1-HspX,并在小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7中表达。方法以结核分枝杆菌(H37Rv)基因组DNA为模板,PCR扩增HspX基因,定向插入至质粒p EGFP-N1的多克隆位点,经酶切及测序鉴定正确后,将质粒p EGFP-N1-HspX转染RAW264.7细胞,荧光显微镜下观察GFP的表达,Real-time PCR及Western blot法鉴定HspX基因的表达。结果质粒p EGFP-N1-HspX经酶切及测序鉴定,证明构建正确;质粒p EGFP-N1-HspX转染24 h后,荧光显微镜下可见GFP表达,表达的重组融合蛋白Flag-HspX相对分子质量约43 000;转染组细胞中HspX基因m RNA水平明显高于空载体组(P<0.01)。结论成功构建了p EGFP-N1-HspX融合基因真核表达载体,并在RAW264.7细胞中获得表达。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 热休克蛋白 基因 真核表达
原文传递
结核分枝杆菌的热休克蛋白及其抗原
17
作者 Douglas B.Yong Thomas R.Garle 陈爱荣 《微生物学免疫学进展》 1992年第4期57-58,共2页
由病原性分枝杆菌引起的疾病,仍然是人类发病率和死亡率引起的主要原因,在发展中国家的死亡率中仅结核病就达7％。目前预防和控制分枝杆菌感染的研究,已转向包括病原菌与其哺乳类宿主细胞间相互关系的分子机理的阐明。根据结核杆菌和麻... 由病原性分枝杆菌引起的疾病,仍然是人类发病率和死亡率引起的主要原因,在发展中国家的死亡率中仅结核病就达7％。目前预防和控制分枝杆菌感染的研究,已转向包括病原菌与其哺乳类宿主细胞间相互关系的分子机理的阐明。根据结核杆菌和麻风杆菌一些重要蛋白抗原的序列分析,已知它们是热休克蛋白谱系中的成员,和大肠杆菌蛋白的Dnak、GroEL和GroES相关。本文分析了热休克对结核杆菌蛋白合成的作用,以期为阐明分枝杆菌分子遗传学与宿主-寄生间相互关系提供重要资料。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 热休克蛋白 抗原
下载PDF
不同耐药型的结核分枝杆菌hspX基因序列与表达的比较
18
作者 杨瑜 王楠 +5 位作者 李华 吴玲 王琪 谢贝 刘志辉 孟繁荣 《新医学》 CAS 2023年第5期340-343,共4页
目的比较不同耐药型的结核分枝杆菌(MTB)热休克蛋白基因hspX序列与表达,初步探讨hspX与MTB的耐药是否存在相关性。方法选取4种一线抗结核药物全部敏感株(S)、同时对异烟肼和利福平耐药(MDR)和一种耐药[单耐利福平(MTB^(R+))、单耐异烟肼... 目的比较不同耐药型的结核分枝杆菌(MTB)热休克蛋白基因hspX序列与表达,初步探讨hspX与MTB的耐药是否存在相关性。方法选取4种一线抗结核药物全部敏感株(S)、同时对异烟肼和利福平耐药(MDR)和一种耐药[单耐利福平(MTB^(R+))、单耐异烟肼(MTB^(H+))、单耐链霉素(MTB^(S+))和单耐乙胺丁醇(MTB^(E+))]的菌株各10株,采用改良的十二烷基苯磺酸钠裂解法和TRIzol法分别提取各组菌株的DNA和RNA,使用特异性引物进行PCR和实时荧光定量PCR确定hspX基因的存在及其表达。对PCR产物进行测序以检查正向和反向的多态性,并用DNAman软件进行与标准株H37Rv序列比对。以敏感菌株(S)组为对照组进行两两对比分析不同耐药型的MTB菌株hspX表达的差异。结果PCR成功获得各组特异性的hspX基因,与H37Rv序列比对具有97%~99%的同一性,无存在明显差异;以相对定量2^(-ΔΔCt)法计算获得S、MDR、MTB^(R+)、MTB^(H+)、MTB^(S+)和MTB^(E+)菌株hspX的表达分别为0.98(0.89,1.23)、1.49(1.10,2.04)、1.41(0.55,2.80)、1.37(0.68,2.71)、0.91(0.59,1.62)和0.70(0.48,1.18)。以敏感菌株(S)组为对照组,不同耐药型菌株组与其比较,hspX表达差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论hspX基因在MTB中是保守的。在自然状态下,hspX基因在MTB的耐药性方面无明显相关性。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 热休克蛋白 hspX基因 耐药性
下载PDF
分枝杆菌热休克蛋白65重组质粒的构建与原核表达 被引量：1
19
作者 张青苗 王雯雯 +1 位作者 张会勇 张光谋 《新乡医学院学报》 CAS 2016年第12期1028-1030,1035,共4页
目的研究分枝杆菌热休克蛋白65(HSP65)重组质粒的构建与原核表达。方法 HSP65的开放阅读框经聚合酶链反应(PCR)扩增后,经NcoⅠ与NotⅠ内切酶依次酶切,连接至酶切后的原核表达载体PET-28a中,然后将重组质粒转入大肠杆菌BL-21中,PCR筛选... 目的研究分枝杆菌热休克蛋白65(HSP65)重组质粒的构建与原核表达。方法 HSP65的开放阅读框经聚合酶链反应(PCR)扩增后,经NcoⅠ与NotⅠ内切酶依次酶切,连接至酶切后的原核表达载体PET-28a中,然后将重组质粒转入大肠杆菌BL-21中,PCR筛选阳性克隆,并经DNA测序进一步验证。阳性克隆进一步扩大培养,并进行乳糖诱导,十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳对菌体蛋白进行检测。结果成功扩增出1 623 bp的目的片段HSP65;测序结果显示,该片段与目的序列完全相符,重组子PET-28a/HSP65构建成功;乳糖诱导后的HSP65在大肠杆菌中实现高表达。结论分枝杆菌HSP65蛋白的成功表达,为研究其在抗肿瘤疫苗中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 热休克蛋白 重组质粒 融合蛋白 原核表达 分枝杆菌
下载PDF
结核分枝杆菌Hsp16.3蛋白影响小鼠巨噬细胞自噬形成的实验研究 被引量：12
20
作者 师长宏 江鹰 +4 位作者 赵勇 毛峰峰 张彩琴 白冰 张海 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1301-1303,共3页
目的:观察热休克蛋白Hsp16.3对感染结核分枝杆菌(MTB)的巨噬细胞自噬体形成的作用。方法:以50 ng/μL雷帕霉素诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7自噬体形成后,用结核分枝杆菌毒株H37Rv感染巨噬细胞,再用Hsp16.3蛋白作用于巨噬细胞,电镜观察自噬... 目的:观察热休克蛋白Hsp16.3对感染结核分枝杆菌(MTB)的巨噬细胞自噬体形成的作用。方法:以50 ng/μL雷帕霉素诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7自噬体形成后,用结核分枝杆菌毒株H37Rv感染巨噬细胞,再用Hsp16.3蛋白作用于巨噬细胞,电镜观察自噬体相成的变化,抗酸染色观察胞内细菌形态,计数MTB的菌落数。提取巨噬细胞总蛋白,Western blot方法检测自噬相关蛋白LC3表达水平的变化。结果:雷帕霉素诱导巨噬细胞形成自噬后感染结核分枝杆菌可使胞内细菌局限化,加入Hsp16.3蛋白可明显抑制了自噬体的形成,影响了结核分枝杆菌在巨噬细胞内的生存,显著增加了细菌的菌落形成单位,降低了自噬相关蛋白LC3的表达(P<0.05)。结论:Hsp16.3蛋白可能通过调节Atg8的表达水平抑制自噬体的形成。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 自噬 热休克蛋白Hsp16.3 微管相关蛋白轻链3
原文传递
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 7 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部