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LncRNA FEZF1-AS1靶向调控miR-200c-3p对人肺成纤维细胞生物学行为的影响
1
作者 满君 高艳艳 +1 位作者 宋龙飞 高福生 《天津医药》 CAS 2024年第3期231-236,共6页
目的探讨FEZ家族锌指1-反义RNA1(LncRNA FEZF1-AS1)靶向调控miR-200c-3p对人肺成纤维细胞HLF生物学行为的影响。方法采用转化生长因子β1(TGF-β1)诱导HLF向肌成纤维细胞转化,分为空白对照组(Blank组)和造模组(HLF+TGF-β1组),另根据转... 目的探讨FEZ家族锌指1-反义RNA1(LncRNA FEZF1-AS1)靶向调控miR-200c-3p对人肺成纤维细胞HLF生物学行为的影响。方法采用转化生长因子β1(TGF-β1)诱导HLF向肌成纤维细胞转化,分为空白对照组(Blank组)和造模组(HLF+TGF-β1组),另根据转染质粒不同将细胞分为Blank组、TGF-β1+Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组和TGF-β1+Si LncRNA FEZF1-AS1组。采用Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)和波形蛋白(Vimentin)蛋白的表达。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LncRNA FEZF1-AS1和miR-200c-3p的表达。采用CCK-8法检测细胞增殖,细胞划痕实验检测迁移能力,Transwell实验检测侵袭能力;采用双萤光素酶实验检测FEZF1-AS1与miR-200c-3p的靶向作用关系。结果与Blank组比较,HLF+TGF-β1组α-SMA、CollagenⅠ、Vimentin蛋白表达及LncRNA FEZF1-AS1表达水平升高,miR-200c-3p表达水平降低(P<0.05);与TGF-β1+Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组比较,TGF-β1+Si LncRNA FEZF1-AS1组细胞增殖、迁移、侵袭能力下降,LncRNA FEZF1-AS1表达及α-SMA、CollagenⅠ、Vimentin蛋白表达水平降低,miR-200c-3p表达水平升高(P<0.05);FEZF1-AS1与miR-200c-3p基因序列上存在结合位点。结论LncRNA FEZF1-AS1通过抑制miR-200c-3p促进特发性肺间质纤维化的发生、发展。 展开更多
关键词 特发性肺间质纤维化 肺成纤维细胞 肌成纤维细胞 FEZ家族锌指1-反义RNA1 微小RNA-200c-3p
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mTORC1/2双重抑制剂OSI-027抑制高氧诱导的肺成纤维细胞增殖和分化
2
作者 吴黎虹 唐坤 +4 位作者 党红星 符跃强 刘成军 李静 许峰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期464-470,共7页
目的分析哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)复合物1/2(mTOR complex 1/2,mTORC1/2)双重抑制剂OSI-027对高体积分数氧(高氧)所致人胚肺成纤维细胞增殖和分化的抑制作用。方法高氧(95%O_(2))处理人胚肺成纤维细... 目的分析哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)复合物1/2(mTOR complex 1/2,mTORC1/2)双重抑制剂OSI-027对高体积分数氧(高氧)所致人胚肺成纤维细胞增殖和分化的抑制作用。方法高氧(95%O_(2))处理人胚肺成纤维细胞MRC-5建立增殖分化模型,分为对照组、高氧组、高氧+OSI-027组和高氧+雷帕霉素组。Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、I型胶原蛋白(collagen type I,Col I)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、RhoA、Rho相关含卷曲螺旋蛋白激酶1(Rho-associated coiled-coil-containing protein kinase 1,ROCK1)、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)、p-AKT和mTOR的表达;CCK-8实验检测细胞活力;流式细胞术检测细胞周期。结果与对照组相比,PCNA、cyclin D1、Col I和α-SMA表达随高氧处理时间增加而增加(P<0.05)。与高氧组相比,OSI-027及雷帕霉素干预后,细胞活力下降,细胞周期被抑制在G1期(P<0.05)。高氧+OSI-027组PCNA、cyclin D1、Col I及α-SMA蛋白表达明显低于高氧组和高氧+雷帕霉素组(P<0.05)。高氧组mTOR信号通路蛋白RhoA、ROCK1、AKT、p-AKT和mTOR表达显著增高(P<0.05),但经OSI-027处理后均显著下降(P<0.05)。结论高氧可促进MRC-5细胞以时间依赖的方式增殖和分化,同时伴有mTOR信号通路活化。OSI-027可通过抑制mTOR通路抑制高氧处理后MRC-5细胞的增殖和分化,有望为临床干预高氧肺纤维化提供新的靶点。 展开更多
关键词 高氧 OSI-027 细胞增殖 细胞分化 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 肺成纤维细胞
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甘草酸对感染人巨细胞病毒的人胚肺成纤维细胞凋亡和炎性反应的影响 被引量：1
3
作者 沈利霞 苏贤凤 《实用临床医药杂志》 CAS 2023年第1期38-43,共6页
目的 探讨甘草酸对感染人巨细胞病毒(HCMV)的人胚肺成纤维细胞MRC-5增殖、凋亡和炎性反应的影响。方法 体外培养MRC-5细胞,并将其分为对照组、病毒组、更昔洛韦组(50μg/mL)、甘草酸低剂量组(0.25 mg/mL)、甘草酸中剂量组(0.50 mg/mL)... 目的 探讨甘草酸对感染人巨细胞病毒(HCMV)的人胚肺成纤维细胞MRC-5增殖、凋亡和炎性反应的影响。方法 体外培养MRC-5细胞,并将其分为对照组、病毒组、更昔洛韦组(50μg/mL)、甘草酸低剂量组(0.25 mg/mL)、甘草酸中剂量组(0.50 mg/mL)、甘草酸高剂量组(1.00 mg/mL)。接种HCMV不同时间后,分别使用CCK8试剂盒检测细胞增殖活性,使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中活化含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved-caspase3)等蛋白表达情况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平。结果 CCK8实验结果显示,经HCMV感染48、72 h时,病毒组增殖活性均低于对照组,更昔洛韦组、甘草酸中剂量组、甘草酸高剂量组增殖活性均高于病毒组,差异有统计学意义(P<0.05);甘草酸中剂量组与甘草酸高剂量组增殖活性比较,差异无统计学意义(P>0.05),故选择甘草酸中剂量组(0.50 mg/mL)进行后续实验,并简称甘草酸组。流式细胞仪检测结果显示,经HCMV感染48、72 h时,病毒组细胞凋亡率均高于对照组,更昔洛韦组、甘草酸组则低于病毒组,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测结果显示,经HCMV感染48 h后,病毒组细胞中Cleaved-caspase3、TNF-α、IL-6蛋白相对表达量均高于对照组,更昔洛韦组、甘草酸组则低于病毒组,差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA检测结果显示,经HCMV感染24、48、72 h时,病毒组MRC-5细胞TNF-α、IL-6水平均高于对照组,更昔洛韦组、甘草酸组则低于病毒组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 甘草酸具有体外抗HCMV效应,可促进感染HCMV的人胚肺成纤维细胞MRC-5增殖,并抑制HCMV感染诱导的细胞凋亡和细胞炎性反应。 展开更多
关键词 甘草酸 人巨细胞病毒 人胚肺成纤维细胞 增殖 凋亡 炎性反应
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香烟诱导支气管上皮细胞外泌体释放miR-34a靶向CASP2促进肺成纤维细胞增殖
4
作者 李思广 林凌桑 +2 位作者 陈洁 赵洁 丁毅鹏 《海南医学院学报》 2023年第17期1288-1294,1301,共8页
目的:研究香烟模拟物(cigarette smoke extract,CES)通过调控16 HBE支气管上皮细胞中外泌体miR-34a的表达,从而影响MRC-5肺成纤维细胞的增殖。方法:从市售香烟中制备CES,后将6HBE细胞经过CES处理,收集上清中的外泌体miR-34a用于MRC-5细... 目的:研究香烟模拟物(cigarette smoke extract,CES)通过调控16 HBE支气管上皮细胞中外泌体miR-34a的表达,从而影响MRC-5肺成纤维细胞的增殖。方法:从市售香烟中制备CES,后将6HBE细胞经过CES处理,收集上清中的外泌体miR-34a用于MRC-5细胞培养;使用RT-PCR检测外泌体miR-34a的表达水平;MRC-5细胞增殖能力通过细胞计数试剂盒CCK-8测定;通过Western blot检测CASP2的表达,利用双荧光素酶验证miR-34a与CASP2基因的靶向结合。结果:透射电镜下,16 HBE上清液中的外泌体呈球状,粒径在100 nm左右;经过CES处理后,外泌体miR-34a的表达显著增加。进一步研究表明,通过CES诱导的外泌体miR-34a能够促进MRC-5细胞的增殖;miR-34a与CASP2存在靶向结合关系;miR-34a mimic显著抑制了CASP2的表达。结论:在CES诱导的16HBE细胞中,外泌体miR-34a通过与CASP2基因的靶向结合,对成纤维细胞增殖起着关键作用。 展开更多
关键词 COPD 香烟模拟物 外泌体 肺成纤维细胞 MIR-34A
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PI3K/Akt/mTOR通路介导巨噬细胞自噬影响矽尘致肺成纤维细胞表型转化
5
作者 杜悦 黄芳财 +1 位作者 关岚 曾明 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1152-1162,共11页
目的:磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphatidylinositol-3-kinase-protein kinase B-mammalian target of rapamycin,PI3K/Akt/mTOR)信号通路是自噬相关主要信号通路之一。自噬在硅沉着病纤维化形成过程中发... 目的:磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphatidylinositol-3-kinase-protein kinase B-mammalian target of rapamycin,PI3K/Akt/mTOR)信号通路是自噬相关主要信号通路之一。自噬在硅沉着病纤维化形成过程中发挥关键作用。肺成纤维细胞向肌成纤维细胞表型转化是硅沉着病由炎症期进入纤维化期的标志之一。本研究旨在探讨PI3K/Akt/mTOR通路是否通过介导巨噬细胞自噬影响矽尘诱导的肺成纤维细胞向肌成纤维细胞表型转化。方法:采用100 ng/mL佛波酯诱导人单核细胞白血病细胞系THP-1细胞24 h获得巨噬细胞。以不同浓度(0、25、50、100、200、400μg/mL)二氧化硅(silicon dioxide,SiO_(2))粉尘悬浮液染毒巨噬细胞不同的时间(0、6、12、24、48 h)。采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)法检测巨噬细胞存活率,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测巨噬细胞上清液中转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的含量。采用Transwell技术建立巨噬细胞和HFL-1细胞共培养体系,设空白对照组、SiO_(2)组、LY294002组、SC79组、LY294002+SiO_(2)组、SC79+SiO_(2)组。LY294002+SiO_(2)组、SC79+SiO_(2)组分别用LY294002(PI3K抑制剂)、SC79(Akt激活剂)预处理巨噬细胞18 h、24 h,再用SiO_(2)(100μg/mL)粉尘悬浮液染毒巨噬细胞12 h。采用免疫荧光法检测巨噬细胞中微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)的表达情况;蛋白印迹法检测巨噬细胞PI3K、Akt、mTOR、Beclin-1、LC3的蛋白质表达水平及HFL-1细胞中Ⅲ型胶原蛋白(collagen Ⅲ,Col Ⅲ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(tissue matrix metalloproteinase inhibitor-1,TIMP-1)的蛋白质表达水平。结果:用不同浓度的SiO_(2)粉尘悬浮液染毒巨噬细胞12 h,巨噬细胞的存活率随SiO_(2)浓度的增加逐渐降低,与0μg/mL组比较,100、200、400μg/mL组细胞存活率均明显降低,细胞上清液中TGF-β1和TNF-α含量均明显增加(均P<0.05);用100μg/mL SiO_(2)粉尘悬浮液染毒巨噬细胞,巨噬细胞的存活率随染毒时间的延长逐渐降低,与0 h组比较,6、12、24、48 h组细胞存活率明显降低(均P<0.05),细胞上清液中TGF-β1和TNF-α含量均明显增加,Beclin-1和LC3Ⅱ的蛋白质表达水平均明显上调(均P<0.05)。免疫荧光法结果显示:100μg/mL的SiO_(2)粉尘处理巨噬细胞12 h后LC3的荧光呈点状聚集,且荧光强度明显高于空白对照组(P<0.05)。与空白对照组相比,SiO_(2)组HFL-1细胞中Col Ⅲ、FN、α-SMA、MMP-1、TIMP-1的蛋白质表达均上调(均P<0.05);与SiO_(2)组相比,LY294002+SiO_(2)组中巨噬细胞PI3K、Akt、mTOR的蛋白质表达均下调(均P<0.05),LC3Ⅱ和Beclin-1的蛋白质表达均上调(均P<0.05),细胞上清液中TGF-β1和TNF-α含量均降低(均P<0.01),HFL-1细胞中Col Ⅲ、FN、α-SMA、MMP-1、TIMP-1的蛋白质表达均下调(均P<0.05);SC79+SiO_(2)组巨噬细胞PI3K、Akt、mTOR的蛋白质表达均上调(均P<0.05),LC3Ⅱ和Beclin-1的蛋白质表达均下调(均P<0.05),细胞上清液中TGF-β1和TNF-α含量均增加(均P<0.01),HFL-1细胞中Col Ⅲ、FN、α-SMA、MMP-1、TIMP-1的蛋白质表达均上调(均P<0.05)。结论:矽尘染毒引起巨噬细胞的PI3K/Akt/mTOR通路抑制、自噬发生及炎症因子分泌增加,进而促进HFL-1细胞向肌成纤维细胞表型转化;调控PI3K/Akt/mTOR通路可通过影响矽尘对巨噬细胞的自噬诱导及炎症因子分泌,从而调节HFL-1细胞向肌成纤维细胞表型转化。 展开更多
关键词 矽尘 肺成纤维细胞 肌成纤维细胞 巨噬细胞自噬 PI3K/Akt/mTOR通路 转化生长因子β1 肿瘤坏死因子α
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炎性细胞因子对肺血管内皮细胞与肺成纤维细胞三维立体培养基质金属蛋白酶2的影响
6
作者 李超然 闫蕾 +7 位作者 王惠 王学锷 芦莎 谢琳霞 王青 朱运奎 于军 《陕西医学杂志》 CAS 2023年第7期920-924,共5页
目的:探讨炎性细胞因子在肺损伤和肺纤维化过程中与基质金属蛋白酶(MMPs)的相关性。方法:建立肺微血管内皮细胞(HPMEC)/肺成纤维细胞(HFL)+Ⅰ型胶原三维立体培养模型,以不同细胞因子刺激,采用明胶酶谱法检测MMP_(2)的活性,观察组肺细胞... 目的:探讨炎性细胞因子在肺损伤和肺纤维化过程中与基质金属蛋白酶(MMPs)的相关性。方法:建立肺微血管内皮细胞(HPMEC)/肺成纤维细胞(HFL)+Ⅰ型胶原三维立体培养模型,以不同细胞因子刺激,采用明胶酶谱法检测MMP_(2)的活性,观察组肺细胞分泌MMP_(2),各种细胞因子与MMP_(2)之间,以及各细胞因子之间的相互作用。结果:HFL是产生MMP_(2)的主要细胞,在白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)的刺激下产生更多的MMP_(2),白细胞介素-6(IL-6)不诱导HFL产生MMP_(2),HPMEC只能产生极微量的MMP_(2),且各种细胞因子均不能诱导HPMEC产生更多MMP_(2)。HFL与HPMEC混合三维立体培养下,TNF-α、IL-1β、NE能诱导产生多量的MMP_(2)。结论:在HFL与HPMEC混合3D培养条件下,炎性细胞因子TNF-α、IL-1β和NE可以诱导肺成纤维细胞产生大量MMP_(2),参与肺泡基质的降解损伤和致纤维化过程,IL-6不诱导MMP_(2)产生,它可能通过诱导IL-1β和TNF-α的生成起作用。 展开更多
关键词 急性肺损伤 细胞因子风暴 基质金属蛋白酶 三维立体培养 肺成纤维细胞 肺微血管内皮细胞
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大麻素受体2激动剂对人胚肺成纤维细胞株HLF1增殖和分化的影响及机制
7
作者 张育泉 程义局 +6 位作者 杜娟 李瑞雪 潘琳 李向魁 卢琴 杨文婷 吴潇 《贵州医科大学学报》 CAS 2023年第12期1446-1453,共8页
目的探讨大麻素受体2(CB2)激动剂JWH133对人胚肺成纤维细胞株HLF1增殖、分化的影响及机制。方法取对数生长期HLF1细胞株,采用细胞计数试剂-8(CCK8)法检测不同浓度(0.01、0.10、1.00、10.00及20.00μmol/L)JWH133及CB2(0.0、0.5、5.0及5... 目的探讨大麻素受体2(CB2)激动剂JWH133对人胚肺成纤维细胞株HLF1增殖、分化的影响及机制。方法取对数生长期HLF1细胞株,采用细胞计数试剂-8(CCK8)法检测不同浓度(0.01、0.10、1.00、10.00及20.00μmol/L)JWH133及CB2(0.0、0.5、5.0及50.0μmol/L)拮抗剂AM630对HLF1的增殖能力影响;取对数生长期HLF1细胞分为正常(N)组、5μg/L转化生长因子β1(TGF-β1)组(即0μmol/L JWH133)、10.00μmol/L JWH133(J10)组及J10+5.0μmol/L AM630(AM630)组,培养48 h,采用Western blot和逆转录-聚合酶链反应PCR(RT-qPCR)检测各组细胞中胶原蛋白1α1(Col1α1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、磷酸化-AKT(p-AKT)蛋白及Col1α1、α-SMA mRNA,采用细胞免疫荧光检测各组细胞中α-SMA蛋白荧光信号及应力纤维细胞百分比。结果随着JWH133浓度的增大,HLF1细胞的吸光度(OD)值逐渐降低,0.0、0.5、5.0及50.0μmol/L AM630组HLF1存活率均在1附近(P>0.05);J10组HLF1细胞中Col1α1、α-SMA蛋白及p-AKT表达均较TGF-β1组降低(P<0.05),J10+AM630组则较J10组升高(P<0.05);J10组HLF1细胞Col1α1、α-SMA mRNA均较TGF-β1组降低(P<0.05),J10+AM630组则较J10组升高(P<0.05);J10组HLF1细胞α-SMA蛋白荧光信号及应力纤维细胞占总细胞比值均较TGF-β1组减少(P<0.05),J10+AM630组则较J10组增多(P<0.05)。结论CB2受体激动剂JWH133可抑制HLF1细胞的增殖及分化,其机制可能与下调PI3K-AKT通路有关。 展开更多
关键词 细胞增殖 人胚肺成纤维细胞 CB2激动剂JWH133 特发性肺纤维化 PI3K-AKT通路 分化
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特发性肺纤维化病人肺成纤维细胞过度表达单核细胞趋化蛋白-1 被引量：3
8
作者 邓小玲 陈耿臻 许铭炎 《当代医学》 2010年第19期93-94,共2页
目的研究凝血酶对正常人肺成纤维细胞(normalhuman lung fibroblasts,N-LF)和特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)病人肺成纤维细胞(F-LF)单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响。方法 N-LF和F-LF细胞分别培养于96孔培养... 目的研究凝血酶对正常人肺成纤维细胞(normalhuman lung fibroblasts,N-LF)和特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)病人肺成纤维细胞(F-LF)单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响。方法 N-LF和F-LF细胞分别培养于96孔培养板内,凝血酶诱导4和24h后,收集上清液并用ELISA方法检测MCP-1蛋白水平。结果凝血酶可诱导N-LF和F-LF细胞释放MCP-1,但F-LF细胞的MCP-1分泌水平远远高于N-LF细胞。结论人肺成纤维细胞在肺纤维化过程中过度合成和释放MCP-1,凝血酶可进一步促进其过度表达MCP-1。 展开更多
关键词 凝血酶 单核细胞趋化蛋白-1 正常人肺成纤维细胞 肺纤维化病人肺成纤维细胞
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IL-17对肺成纤维细胞的增殖、转化和胶原合成作用 被引量：20
9
作者 董昭兴 康庆鑫 +3 位作者 雷雯 钟红 邰文琳 王殿华 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期75-79,共5页
目的探讨IL-17对博来霉素诱导肺纤维化形成中的肺成纤维细胞增殖、转化、胶原合成作用。方法用5 mg/kg博来霉素气管内注入的方法诱导肺纤维化形成,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-17/IL-17RmRNA在肺纤维化形成中表达的变化,选择表达... 目的探讨IL-17对博来霉素诱导肺纤维化形成中的肺成纤维细胞增殖、转化、胶原合成作用。方法用5 mg/kg博来霉素气管内注入的方法诱导肺纤维化形成,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-17/IL-17RmRNA在肺纤维化形成中表达的变化,选择表达IL-17RmRNA最佳时间的肺成纤维细胞进行原代培养、鉴定。使用四氮唑蓝比色法检测不同浓度的IL-17对肺成纤维细胞的增殖。使用RT-PCR和Western Blotting检测肌成纤维细胞标志物α-SMA以及I和III型胶原的表达。结果(1)IL-17/IL-17RmRNA在肺纤维化形成中明显升高,在第14天表达最高。(2)不同浓度IL-17能够促进肺成纤维细胞的增殖,最佳浓度为50 ng/ml。(3)IL-17促进肺成纤维细胞表达α-SMA增加。(4)IL-17促进肺成纤维细胞I和III型胶原合成。结论 IL-17具有促进小鼠肺纤维化形成中肺成纤维细胞增殖、转化和胶原的合成作用,可能在肺纤维化形成中起重要作用。 展开更多
关键词 白细胞介素17 肺纤维化 肺成纤维细胞 胶原合成
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大蒜新素对HCMV主要即刻早期抗原IE72和IE86在人胚肺成纤维细胞中表达的影响 被引量：8
10
作者 甄宏 方峰 +3 位作者 刘志峰 聂兴草 崔雯 李革 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期47-49,共3页
目的 :研究大蒜新素对人巨细胞病毒 (HCMV)即刻早期抗原 (IEAs)在人胚肺成纤维细胞中表达的影响。方法 :建立HCMVAD16 9毒株 (MOI为 2.5和 0.2 5 )感染细胞模型和大蒜新素 (IC50 和MTC浓度 )干预模型。用WesternBlot检测药物处理后感染... 目的 :研究大蒜新素对人巨细胞病毒 (HCMV)即刻早期抗原 (IEAs)在人胚肺成纤维细胞中表达的影响。方法 :建立HCMVAD16 9毒株 (MOI为 2.5和 0.2 5 )感染细胞模型和大蒜新素 (IC50 和MTC浓度 )干预模型。用WesternBlot检测药物处理后感染细胞中HCMV主要IEAs(IE72和IE86 )表达强度变化 ,并与相应浓度更昔洛韦(GCV)的作用效应相比较。结果 :在高MOI和低MOI感染时 ,不同浓度大蒜新素均能使HCMVIE72和IE86表达强度明显下降 ,对IE86表达的抑制率为IE72的 2倍左右。与GCV相比 ,大蒜新素对IE72的抑制率低于GCV ,而对IE86的抑制效应高于GCV。结论 :大蒜新素明显抑制HCMVIE72和IE86表达 ,对IE86的抑制尤为显著 。 展开更多
关键词 大蒜新素 HCMV 表达 人胚肺成纤维细胞 GCV 抗原 早期 MOI IEA 干预模型
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枇杷叶三萜酸对TGF-β_1刺激的人胚肺成纤维细胞转分化及ERK通路的影响 被引量：10
11
作者 杨雅茹 黄艳 +5 位作者 李俊 吕雄文 金涌 熊自忠 张磊 刘红 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期341-346,共6页
目的研究枇杷叶三萜酸(Triterpene acids of loquat,TAL)对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激人胚肺成纤维细胞转分化、胶原合成及ERK通路的影响。方法体外培养人胚肺成纤维细胞(HFL-Ⅰ),MTT比色法测定TAL对HFL-Ⅰ细胞的增殖抑制率。RT-PCR... 目的研究枇杷叶三萜酸(Triterpene acids of loquat,TAL)对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激人胚肺成纤维细胞转分化、胶原合成及ERK通路的影响。方法体外培养人胚肺成纤维细胞(HFL-Ⅰ),MTT比色法测定TAL对HFL-Ⅰ细胞的增殖抑制率。RT-PCR检测每组中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原(CⅠ)、Ⅲ型胶原(CⅢ)mRNA的水平,Western blot检测各组细胞中p-ERK1/2和ERK1/2表达水平。结果 TAL呈剂量和时间依赖性抑制HFL-Ⅰ细胞的增殖(P<0.05),并能够降低CⅠ、CⅢ、α-SMA、CTGF的过度表达(P<0.05);Western blot结果显示TAL能降低TGF-β1刺激组p-ERK1/2的表达,而对ERK1/2的表达没有差异。结论 TAL能抑制HFL-Ⅰ的增殖,同时也能使活化后HFL-Ⅰ中的α-SMA生成减少,CTGF、胶原和p-ERK1/2表达降低。 展开更多
关键词 枇杷叶三萜酸 TGF-β1 肺纤维化 人胚肺成纤维细胞 ERK CTGF
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放射性肺损伤肺成纤维细胞的活化机制研究 被引量：12
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作者 刘来昱 丁轶 +3 位作者 李启生 陈龙华 蔡绍曦 官键 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期1082-1084,共3页
目的通过研究大鼠放射性肺损伤模型,探讨肺成纤维细胞在放射性肺损伤的作用及机制,为临床预防和治疗放射性肺损伤提供新的思路。方法建立Wistar大鼠半胸照射的放射性肺损伤实验动物模型,35只Wistar大鼠常规分为A～F、N组共7组,每组5只... 目的通过研究大鼠放射性肺损伤模型,探讨肺成纤维细胞在放射性肺损伤的作用及机制,为临床预防和治疗放射性肺损伤提供新的思路。方法建立Wistar大鼠半胸照射的放射性肺损伤实验动物模型,35只Wistar大鼠常规分为A～F、N组共7组,每组5只大鼠。A～F组在接受相同剂量照射后分别在放疗后1d,1、2、4、8和12周处死,N组在实验第1天处死作为正常对照组,分别以免疫组化检测双侧肺组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果照射后照射野内肺成纤维细胞(FB)免疫组化α-SMA呈强阳性,与对照组有显著差异(P=0.001);对侧未照射肺组织也可见散在分布梭形样形态的间质细胞,α-SMA阳性表达且与正常对照组有显著差异性(P=0.001)。结论肺内成纤维细胞无论射野内或射野外肺FB照射后均活化成为功能活跃的肌纤维母细胞(MF),由此猜测具有增殖和分泌活性的MF可能有部分来源于肺外,通过血液传递分布于肺组织照射野内或野外,可能参与了淋巴细胞性放射性肺损伤的发生。 展开更多
关键词 放射性肺损伤 肺成纤维细胞 肌纤维母细胞 发生机制
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天然生物材料壳聚糖支架上人胚肺成纤维细胞的生长 被引量：10
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作者 陈光 周平 +4 位作者 潘銮凤 梅娜 吴春根 陈新 邵正中 《化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第10期992-997,共6页
采用不同粒度的硅胶粒子作为致孔剂 ,按硅胶和壳聚糖重量比 9∶1,制备了三组不同孔径的壳聚糖多孔支架 .以无孔壳聚糖支架为参照 ,对多孔支架的有效孔径、吸水性进行了比较 .结果表明 :孔径大小由硅胶尺寸控制 ,吸水性随孔径增大而增大 ... 采用不同粒度的硅胶粒子作为致孔剂 ,按硅胶和壳聚糖重量比 9∶1,制备了三组不同孔径的壳聚糖多孔支架 .以无孔壳聚糖支架为参照 ,对多孔支架的有效孔径、吸水性进行了比较 .结果表明 :孔径大小由硅胶尺寸控制 ,吸水性随孔径增大而增大 .为研究支架孔径大小对其生物相容性的影响 ,在系列支架上进行了人胚肺成纤维细胞的培养 .细胞种植 1d后 ,多孔支架上的细胞粘附较多 ,而无孔支架上的细胞伸展情况较好 ;细胞培养 5d后 ,所有支架上细胞伸展情况良好 ,孔径越大的支架上细胞增殖越多 . 展开更多
关键词 天然生物材料 壳聚糖 人胚肺成纤维细胞 组织工程支架材料 生物相容性
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沙尘暴颗粒物对人肺成纤维细胞的细胞毒性研究 被引量：10
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作者 金昱 郭新彪 +5 位作者 黄雪莲 乔亚萍 杨艳蕊 王芸 朱彤 胡敏 《环境与健康杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期199-201,共3页
目的探讨沙尘暴颗粒物(PM10、PM2.5)对人肺成纤维细胞的细胞毒性。方法分别用50、100、150、200μg/ml的PM10和PM2.5对人肺成纤维细胞进行染毒,24h后测定细胞线粒体琥珀酸脱氢酶活力、细胞外乳酸脱氢酶和酸性磷酸酶的漏出量。结果50μg... 目的探讨沙尘暴颗粒物(PM10、PM2.5)对人肺成纤维细胞的细胞毒性。方法分别用50、100、150、200μg/ml的PM10和PM2.5对人肺成纤维细胞进行染毒,24h后测定细胞线粒体琥珀酸脱氢酶活力、细胞外乳酸脱氢酶和酸性磷酸酶的漏出量。结果50μg/ml以上浓度的沙尘暴颗粒物可剂量依赖性地抑制人肺成纤维细胞的线粒体琥珀酸脱氢酶活力。在更高染毒浓度,沙尘暴颗粒物可引起细胞外乳酸脱氢酶和酸性磷酸酶的漏出增加。结论沙尘暴颗粒物对人肺成纤维细胞可产生明显的毒性作用。线粒体可能是沙尘暴颗粒物毒作用的敏感部位。 展开更多
关键词 细胞毒性 琥珀酸脱氢酶 乳酸脱氢酶 酸性磷酸酶 人肺成纤维细胞 沙尘暴颗粒物
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β-胡萝卜素和维生素C对Ni_2O_3诱导人肺成纤维细胞转化的保护作用 被引量：11
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作者 张敬 刘艺敏 +2 位作者 张军 祝寿嵩 蔡梅雪 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期237-239,共3页
为了探讨三氧化二镍 (Ni2 O3)诱导人肺成纤维 (HL F)细胞恶性转化作用以及β-胡萝卜素和维生素C的保护作用 ,用不同浓度的 Ni2 O3在体外多次处理 HL F细胞 ,利用刀豆凝集素 A(Con A)凝集实验和软琼脂集落形成实验进行转化细胞的恶性鉴... 为了探讨三氧化二镍 (Ni2 O3)诱导人肺成纤维 (HL F)细胞恶性转化作用以及β-胡萝卜素和维生素C的保护作用 ,用不同浓度的 Ni2 O3在体外多次处理 HL F细胞 ,利用刀豆凝集素 A(Con A)凝集实验和软琼脂集落形成实验进行转化细胞的恶性鉴定 ;同时添加β-胡萝卜素 (5 .4mg/ L )和维生素 C的食物 (1.8mg/ L ) ,观察对 Ni2 O3转化作用的影响。结果表明 Ni2 O3(0 .5～ 2 .0 mg/ L)可诱导 HL F恶性转化 ,转化细胞生长速度加快 ,排列紊乱 ,失去接触抑制 ,呈交叉重叠生长 ,转化率呈剂量 -效应关系。转化细胞可被低浓度 Con A凝集 ,并在软琼脂内生长。添加 β-胡萝卜素和维生素 C的处理组比单用 Ni2 O3 组的转化率显著下降 (P<0 .0 5 ) ,处理后细胞 Con A凝集反应阴性 ,不能在软琼脂内生长。结论认为 Ni2 O3有较强的诱导 HL F细胞恶性转化的能力 ,具有致癌性。β-胡萝卜素和维生素 C对于镍诱导 HL F恶性转化具有保护作用 ,提示职业接触镍的人群有必要在膳食中增加富含β-胡萝卜素和维生素 C,以提高机体的抗氧化能力 。 展开更多
关键词 维生素C 肺成纤维细胞 Β-胡萝卜素 肺肿瘤
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维甲酸下调高氧暴露下胎鼠肺成纤维细胞及Ⅱ型肺泡上皮细胞MMP-2表达 被引量：10
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作者 李文斌 常立文 +5 位作者 祝华平 刘汉楚 张谦慎 容志惠 王利玲 陈红兵 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2005年第2期141-146,共6页
目的探讨维甲酸(RA)对高氧暴露下胎鼠肺成纤维细胞(LFs)和肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)基质金属蛋白酶-2 (MMP -2 )表达的影响及调控。方法原代培养胎鼠肺LFs及AECⅡ,待其生长至亚汇合状态时,随机分为:空气组、空气+RA组、高氧组和高氧+RA... 目的探讨维甲酸(RA)对高氧暴露下胎鼠肺成纤维细胞(LFs)和肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)基质金属蛋白酶-2 (MMP -2 )表达的影响及调控。方法原代培养胎鼠肺LFs及AECⅡ,待其生长至亚汇合状态时,随机分为:空气组、空气+RA组、高氧组和高氧+RA组。于培养2、6、12、2 4和4 8(AECⅡ)或72h(LFs)时,采用半定量RT- PCR方法检测MMP 2和TIMP 2mRNA表达,应用Westernblot检测p38和磷酸化p38(p p38)蛋白表达水平。结果(1)与空气组比较,高氧可促进胎鼠LFs、AECⅡMMP 2mRNA和胎鼠LFsp p38表达(P <0 . 0 1或P <0. 0 5 ) ;(2 )RA能部分下调高氧诱导的胎鼠LFs、AECⅡMMP 2mRNA高表达和明显降低胎鼠LFsp p38表达;(3)高氧、RA对胎鼠LFs、AECⅡTIMP -2mRNA和胎鼠LFsp38蛋白表达无明显影响;(4)胎鼠LFsp p38与MMP 2mRNA表达呈显著性正相关(r =0. 76 7,P <0. 0 1,n =18)。结论高氧可促进胎鼠LFs、AECⅡMMP 2mRNA表达;p38通路参与高氧状态下胎鼠LFsMMP -2表达调控;RA可在转录后水平调节p38的活性状态从而实现对MMP-2的表达调控。 展开更多
关键词 胎鼠 MMP-2 高氧 RA LF 表达 肺成纤维细胞 下调 调高 AEC
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TGFβ1对肺成纤维细胞中转录因子SP1、AP1和Smad3-Smad4活性的影响 被引量：9
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作者 李杨 王德文 +3 位作者 宋良文 彭瑞云 高亚兵 马俊杰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期679-682,共4页
目的:检测转化生长因子β1(TGFβ1)对大鼠肺成纤维细胞(RLF)中转录因子SP1、AP1和Smad3-Smad4活性的影响并探讨其意义。方法:进行大鼠肺成纤维细胞的原代分离培养,应用10μg/L TGFβ1进行处理,通过凝胶阻滞电泳(EMSA)、免疫印迹和免疫... 目的:检测转化生长因子β1(TGFβ1)对大鼠肺成纤维细胞(RLF)中转录因子SP1、AP1和Smad3-Smad4活性的影响并探讨其意义。方法:进行大鼠肺成纤维细胞的原代分离培养,应用10μg/L TGFβ1进行处理,通过凝胶阻滞电泳(EMSA)、免疫印迹和免疫组化染色等方法,检测照射后转录因子SP1、AP1和Smad3-Smad4活性的变化及Ⅰ型胶原和Ⅰ型组织纤溶酶原激活物抑制剂(plasminogen activator inhibi-torⅠ,PAI-1)表达的变化。结果:正常RLF中AP1和Smad3-Smad4形成弱阻滞条带,SP1无阻滞条带形成。以10μg/LTGFβ1处理后,3种转录因子所形成的阻滞条带明显增强,PAI-1和Ⅰ型胶原的表达增多。结论:一定浓度的TGFβ1可促进RLF中转录因子SP1、AP1和Smad3-Smad4的活化,并进而增加PAI-1和Ⅰ型胶原的表达。 展开更多
关键词 TGFΒ1 转录因子 Ⅰ型胶原 肺成纤维细胞
原文传递
丹酚酸B对转化生长因子β_1诱导的人胚肺成纤维细胞生物学行为的影响 被引量：8
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作者 张敏 冯志顺 +4 位作者 邓哲彤 叶小玲 张锐 晋金兰 江颖仪 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1401-1404,共4页
目的观察丹酚酸B(salvianolic acid B,SAB)对人胚肺成纤维细胞MRC-5增殖及分泌Ⅰ型前胶原、内源性转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的影响。方法将MRC-5细胞随机分为4组,对照组未加入TGF-β1或SAB;TGF-β1组加... 目的观察丹酚酸B(salvianolic acid B,SAB)对人胚肺成纤维细胞MRC-5增殖及分泌Ⅰ型前胶原、内源性转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的影响。方法将MRC-5细胞随机分为4组,对照组未加入TGF-β1或SAB;TGF-β1组加入10ng/mLTGF-β1;SAB1组加入10ng/mLTGF-β1和1μmol/LSAB;SAB2组加入10ng/mLTGF-β1和10μmol/LSAB。采用MTT法观察各组细胞增殖能力;放射免疫法测定各组细胞Ⅰ型前胶原蛋白含量;ELISA法检测各组细胞内源性TGF-β1水平。结果与对照组比较,TGF-β1组MTT吸光度、Ⅰ型前胶原蛋白含量及内源性TGF-β1水平均明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与TGF-β1组比较,SAB1组及SAB2组细胞吸光度明显减少,Ⅰ型前胶原蛋白含量和内源性TGF-β1水平降低,且SAB2组效果优于SAB1组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 SAB可以抑制TGF-β1促MRC-5细胞增殖的作用,减弱分泌胶原和内源性TGF-β1的作用,具有阻止或延缓肺纤维化进行性发展的潜能。 展开更多
关键词 丹酚酸B 肺成纤维细胞 增殖 转化生长因子Β1 胶原
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人参皂甙Rb_1、Rg_1、Re和Rh_1对人胚肺成纤维细胞非程序DNA合成的影响 被引量：10
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作者 刘平 葛迎春 +3 位作者 张伟 郭颖杰 马淑云 李宇 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期375-377,共3页
应用３Ｈ－ＴｄＲ和１４Ｃ－ＴｄＲ双标记法，液闪测定不同代龄人胚肺成纤维细胞（２ＢＳ）由丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）诱导的非程序ＤＭＡ合成（ＵＤＳ），以及人参皂甙Ｒｂ１、Ｒｇ１、Ｒｈ１和Ｒｅ对细胞ＵＤＳ的影响。结果表明，当ＭＭ... 应用３Ｈ－ＴｄＲ和１４Ｃ－ＴｄＲ双标记法，液闪测定不同代龄人胚肺成纤维细胞（２ＢＳ）由丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）诱导的非程序ＤＭＡ合成（ＵＤＳ），以及人参皂甙Ｒｂ１、Ｒｇ１、Ｒｈ１和Ｒｅ对细胞ＵＤＳ的影响。结果表明，当ＭＭＣ剂量在１０ｎｇ／ｍｌ时，衰老细胞的ＵＤＳ水平下降，而年轻细胞的ＵＤＳ水平显著升高。人参皂甙Ｒｂ１、Ｒｇ１、Ｒｈ１、Ｒｅ均能显著提高衰老细胞的ＵＤＳ水平，且Ｒｂ１、Ｒｇ１作用更明显。 展开更多
关键词 人胚 肺成纤维细胞 非程序DNA合成 人参皂甙
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SB203580和WP631对照射后肺成纤维细胞内Smad通路信号转导的影响 被引量：6
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作者 李杨 宋良文 +4 位作者 彭瑞云 王德文 金梅红 高亚兵 马俊杰 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第7期698-702,共5页
背景与目的:放射性肺纤维化以成纤维细胞增殖和细胞外基质过度沉积为特征。转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGFβ1)是放射性肺纤维化发生发展的"开关"性分子并被作为治疗的靶分子,因此阻断TGFβ1的信号转导... 背景与目的:放射性肺纤维化以成纤维细胞增殖和细胞外基质过度沉积为特征。转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGFβ1)是放射性肺纤维化发生发展的"开关"性分子并被作为治疗的靶分子,因此阻断TGFβ1的信号转导可能减轻肺纤维化。本研究检测Smad通路抑制剂SB203580和WP631对照射后人肺成纤维细胞(human lung fibroblast,HLF)中信号转导的影响并探讨其效应。方法:将HLF用25"mol/LSB203580和5nmol/LWP631预处理后,再应用3Gy60Coγ射线照射和10"g/LTGFβ1刺激,通过凝胶阻滞电泳(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)、免疫印迹、免疫组织化学及细胞周期流式细胞仪检测等方法检测转录因子SP1和AP1活性的变化、Smad3,4,7和p-Smad3及Ⅰ型胶原和Ⅰ型组织纤溶酶原激活物抑制剂(type Ⅰ plasminogen activator inhibitor,PAI-1)的表达变化及细胞周期的变化。结果:经3Gyγ射线照射及TGFβ1刺激后,与未经预处理的HLF相比,应用SB203580或WP631预处理的HLF出现G2-M期阻滞,S期细胞显著减少。SB203580预处理可减少HLF中P21WAF1/CIP1和p-Smad3的表达,而WP631预处理可减少HLF表达PAI-1,抑制转录因子SP1和AP1的活化。结论:SB203580和WP631通过阻断TGFβ-Smad通路的信号转导,抑制#射线和TGF!1作用所导致的HLF过度增殖和P21WAF1/CIP1及PAI-1表达增多。 展开更多
关键词 SB203580 WP631 γ射线 TGFΒ1 SMAD通路 人肺成纤维细胞 放射性肺纤维化
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