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IQ结构域GTP酶激活蛋白3对HepG2细胞顺铂耐药的影响 被引量：3
1
作者 黄思聪 石永杰 +2 位作者 周强 嘉红云 申刚 《中华实用诊断与治疗杂志》 2021年第7期666-671,共6页
目的探讨IQ结构域GTP酶激活蛋白3(IQ domain GTPase-activating protein 3, IQGAP3)对人肝癌HepG2细胞顺铂耐药的影响及作用机制。方法冻存HepG2细胞株,其中对照组细胞正常培养,IQGAP3组细胞转染IQGAP3,shIQGAP3组细胞转染shIQGAP3,采用... 目的探讨IQ结构域GTP酶激活蛋白3(IQ domain GTPase-activating protein 3, IQGAP3)对人肝癌HepG2细胞顺铂耐药的影响及作用机制。方法冻存HepG2细胞株,其中对照组细胞正常培养,IQGAP3组细胞转染IQGAP3,shIQGAP3组细胞转染shIQGAP3,采用Western blot法检测3组IQGAP3蛋白相对表达量。3组细胞均加入顺铂进行培养,采用MTT法检测培养第1-5天细胞存活率,采用实时荧光定量PCR法检测细胞Nanog mRNA、Oct4 mRNA、Bmi1 mRNA、c-Myc mRNA、cyclinD1 mRNA相对表达量,基因集合富集分析GO、KEGG数据库肝细胞癌样本数据中IQGAP3表达与Wnt/β-catenin通路的关系,采用Top/Fop双荧光素酶报告基因实验检测细胞β-catenin激活程度(Top/Fop比值),采用Western blot法检测细胞β-catenin核浆比例。shIQGAP3组细胞再分为shIQGAP3-氯化锂(lithium chloride, LiCl)组和shIQGAP3对照组,其中shIQGAP3对照组加入顺铂进行培养,shIQGAP3-LiCl组加入顺铂+LiCl进行培养,采用MTT法检测2组培养第1-5天细胞存活率,采用Top/Fop双荧光素酶报告基因实验检测细胞β-catenin激活程度(Top/Fop比值)。结果 IQGAP3组细胞IQGAP3蛋白相对表达量(9.13±0.42)均高于对照组(1.08±0.25)和shIQGAP3组(0.42±0.07)(P<0.05),对照组高于shIQGAP3组(P<0.05)。培养第3-5天,IQGAP3组细胞存活率均高于对照组和shIQGAP3组(P<0.05),对照组高于shIQGAP3组(P<0.05);培养第1-5天,IQGAP3组、shIQGAP3组、对照组细胞存活率均依次降低(P<0.05)。IQGAP3组细胞Nanog mRNA、Oct4 mRNA、Bmi1 mRNA、c-Myc mRNA、cyclinD1 mRNA相对表达量均高于对照组和shIQGAP3组(P<0.05),对照组高于shIQGAP3组(P<0.05)。GO、KEGG数据库肝细胞癌样本数据分析结果显示,活化的Wnt/β-catenin信号通路在IQGAP3表达上调的样本中富集(富集分数=0.497,P<0.001;富集分数=0.527,P<0.001);IQGAP3组细胞β-catenin核浆比例(3.61±0.24)和Top/Fop比值(2.61±0.29)均高于对照组(0.98±0.14、1.13±0.08)和shIQGAP3组(0.25±0.03、0.57±0.13)(P<0.05),对照组高于shIQGAP3组(P<0.05)。shIQGAP3-LiCl组细胞Top/Fop比值(3.18±0.33)高于shIQGAP3对照组(1.02±0.06)(P<0.05);培养第4-5天,shIQGAP3-LiCl组细胞存活率高于shIQGAP3对照组(P<0.05);培养第0-5天,shIQGAP3-LiCl组、shIQGAP3对照组细胞存活率均依次降低(P<0.05)。结论 IQGAP3可能通过激活Wnt/β-catenin通路增加肿瘤干性基因表达,促进HepG2细胞对顺铂耐药。 展开更多
关键词 肝细胞癌 IQ结构域GTP酶激活蛋白3 顺铂耐药 肿瘤干性基因 WNT/Β-CATENIN通路 HEPG2细胞
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