基于SIRT1/NF-κB通路探究秦艽醇提物对脂多糖诱导大鼠背根神经节神经元炎性损伤的保护作用及机制

1

作者 周松林 黄俊卿 +3 位作者 李科 季鸿飞 都帅刚 杨彬 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2024年第1期179-183,共5页

目的探讨秦艽醇提物对脂多糖诱导大鼠背根神经节神经元(DRGn)炎性损伤的保护作用及其机制。方法大鼠分为假手术组、模型组(建模)、阳性组(建模+16 mg/kg普瑞巴林)和给药组(建模+50 mg/kg秦艽醇提物),测定大鼠建模前及给药前后的机械性... 目的探讨秦艽醇提物对脂多糖诱导大鼠背根神经节神经元(DRGn)炎性损伤的保护作用及其机制。方法大鼠分为假手术组、模型组(建模)、阳性组(建模+16 mg/kg普瑞巴林)和给药组(建模+50 mg/kg秦艽醇提物),测定大鼠建模前及给药前后的机械性触痛阈值(PWPT)。制备正常大鼠血清和秦艽醇提物低、高剂量大鼠含药血清,分离培养DRGn细胞并分为对照组(10%正常大鼠血清)、脂多糖组(100 ng/ml脂多糖+10%正常大鼠血清)、秦艽醇提物低浓度组(100 ng/ml脂多糖+10%秦艽醇提物低剂量大鼠含药血清)、秦艽醇提物高浓度组(100 ng/ml脂多糖+10%秦艽醇提物高剂量大鼠含药血清)及沉默信息调节因子(SIRT)1抑制组(100 ng/ml脂多糖+10%秦艽醇提物高剂量大鼠含药血清+98 nmol/L烟酰胺)。CCK-8测定DRGn细胞活力,流式细胞仪检测DRGn细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定DRGn细胞培养液中白细胞介素(IL)-6、IL-18、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,Western印迹检测DRGn细胞中SIRT1、乙酰化(Ac)-核因子(NF)-κB p65、NF-κB p65蛋白表达。结果给药前模型组、给药组PWPT较建模前均显著降低(P<0.05);给药后,给药组PWPT较给药前、模型组均显著升高(P<0.05),与阳性组差异无统计学意义(P>0.05);与对照组相比,脂多糖组DRGn细胞活力及细胞中SIRT1蛋白水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、细胞中Ac-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白水平及细胞培养液中IL-6、IL-18、TNF-α水平显著升高(P<0.05);与脂多糖组相比,秦艽醇提物低、高浓度组DRGn细胞活力及细胞中SIRT1蛋白水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、细胞中Ac-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白水平及细胞培养液中IL-6、IL-18、TNF-α水平显著降低(P<0.05),且呈剂量依赖性;与秦艽醇提物低、高浓度组相比,SIRT1抑制组DRGn细胞活力及细胞中SIRT1蛋白水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、细胞中Ac-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白水平及细胞培养液中IL-6、IL-18、TNF-α水平显著升高(P<0.05)。结论秦艽醇提物可激活SIRT1,促进NF-κB p65去乙酰化,减轻脂多糖诱导大鼠DRGn细胞炎性损伤。 展开更多

关键词 秦艽醇提物 沉默信息调节因子1/核因子κB通路 脂多糖 背根神经节神经元 炎性损伤

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筋脉通含药血清对高糖培养背根神经节神经元氧化应激及细胞凋亡的影响 被引量：13

2

作者 孙青 梁晓春 +3 位作者 张宏 石玥 张倩 顾蓓 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1390-1395,1448,共7页

目的探讨筋脉通(菟丝子、女贞子、桂枝、延胡索、水蛭、细辛等)含药血清对高糖培养大鼠背根神经节神经元(DRGn)氧化应激及细胞凋亡的影响。方法雄性SD大鼠随机分为3组,分别灌胃筋脉通、维生素C或生理盐水制备含药血清和对照血清。从孕1... 目的探讨筋脉通(菟丝子、女贞子、桂枝、延胡索、水蛭、细辛等)含药血清对高糖培养大鼠背根神经节神经元(DRGn)氧化应激及细胞凋亡的影响。方法雄性SD大鼠随机分为3组,分别灌胃筋脉通、维生素C或生理盐水制备含药血清和对照血清。从孕15 d的SD胎鼠背根神经节取材制备细胞悬液。MTT法确定高糖浓度、筋脉通含药血清浓度及指标检测时间点。将体外培养的DRGn分为高糖组、筋脉通组(加入筋脉通含药血清)、维生素C组(加入维生素C含药血清)及正常对照组,培养24 h后,采用荧光探针法检测DRGn中超氧阴离子、线粒体膜电位水平,免疫印迹法+实时荧光定量聚合酶链式反应法检测Bcl-2和Caspase-3的mRNA及其蛋白表达,原位末端标记法检测凋亡细胞。结果与正常对照组相比,高糖组超氧阴离子水平显著升高,Caspase-3 mRNA及其蛋白表达、细胞凋亡率均显著升高,而线粒体膜电位、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达显著降低(P<0.01);与高糖组比较,筋脉通组超氧阴离子水平明显降低,Caspase-3 mRNA及其蛋白表达、细胞凋亡率均明显降低,而线粒体膜电位、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达显著升高(P<0.01),其作用明显优于维生素C组(P<0.01)。结论筋脉通含药血清可通过抑制高糖所致DRGn氧化应激、减少细胞凋亡起到防治糖尿病周围神经病变的作用。 展开更多

关键词 筋脉通含药血清 糖尿病周围神经病变 背根神经节神经元 氧化应激 细胞凋亡

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筋脉通含药血清对高糖培养大鼠背根神经节神经元氧化应激及UCP3、IGF-1表达的影响 被引量：7

3

作者 王超 梁晓春 +1 位作者 杨丹 吴亚楠 《世界中西医结合杂志》 2017年第6期769-773,884,共6页

目的研究中药筋脉通含药血清对高糖培养大鼠背根神经节神经元(DRGn)氧化应激以及解耦联蛋白3(UCP3)、胰岛素样生长因子(IGF-1)表达的影响。方法雄性Sprague Dawley(SD)大鼠随机分为正常对照组、筋脉通组及牛磺酸组,连续灌胃筋脉通、牛... 目的研究中药筋脉通含药血清对高糖培养大鼠背根神经节神经元(DRGn)氧化应激以及解耦联蛋白3(UCP3)、胰岛素样生长因子(IGF-1)表达的影响。方法雄性Sprague Dawley(SD)大鼠随机分为正常对照组、筋脉通组及牛磺酸组,连续灌胃筋脉通、牛磺酸或蒸馏水3 d以制备筋脉通含药血清、牛磺酸含药血清和正常对照血清。用于制备细胞悬液的背根神经节取自孕15 d的SD胎鼠。CCK-8比色法确定指标检测时间点。体外培养的DRGn分为高糖组(HG组)、筋脉通组(JMT组)、牛磺酸组(Tau组)及正常对照组(CON组),分别加入相应血清培养24 h后,采用原位末端标记法检测DRGn细胞凋亡,荧光探针法检测DRGn中活性氧(ROS)水平,免疫荧光法+免疫印迹法检测UCP3和IGF-1的蛋白表达,实时荧光定量PCR法检测UCP3和IGF-1的mRNA。结果与CON组相比,HG组DRGn细胞活性显著降低,细胞凋亡率显著增加,ROS水平显著升高(P<0.01),UCP3和IGF-1蛋白及mRNA表达水平显著下降(P<0.01);与HG组比较,JMT组和Tau组的细胞凋亡率、ROS水平显著降低,UCP3和IGF-1蛋白及mRNA表达水平显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论筋脉通可上调高糖培养DRGn中UCP3和IGF-1的表达,减轻高糖状态下氧化应激对神经细胞的损伤。 展开更多

关键词 筋脉通 糖尿病周围神经病变 背根神经节神经元 氧化应激 修复再生

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高糖对体外培养背根神经节神经元影响的研究进展 被引量：6

4

作者 孙青 梁晓春 张宏 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2011年第2期214-217,共4页

背根神经节神经元(DRGn)在糖尿病周围神经病变发展过程中起重要作用,近年来探讨高糖对体外培养背根神经节神经元(DRGn)的影响成为研究热点。高糖环境可致DRGn细胞凋亡;同时高糖环境下DRGn在氧化应激、膜受体mGluRs及TRPV1激活、DRGn/SC... 背根神经节神经元(DRGn)在糖尿病周围神经病变发展过程中起重要作用,近年来探讨高糖对体外培养背根神经节神经元(DRGn)的影响成为研究热点。高糖环境可致DRGn细胞凋亡;同时高糖环境下DRGn在氧化应激、膜受体mGluRs及TRPV1激活、DRGn/SCs共培养等方面均与正常培养基不同,具体机制仍需深入研究。 展开更多

关键词 背根神经节神经元 高糖 细胞培养 体外

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苯佐卡因对大鼠背根神经节神经元河豚毒素不敏感型钠离子通道的影响 被引量：3

5

作者 章艳 陈少锐 +2 位作者 贾岩岩 刘培庆 蒋建敏 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1653-1655,共3页

目的研究苯佐卡因(BZC)对大鼠背根神经节(DRG)神经元河豚毒素不敏感型(TTX-r)钠电流的影响,探讨其镇痛作用的机制。方法酶解法分离新生大鼠单个DRG神经元,应用全细胞膜片钳技术记录不同浓度BZC对TTX-r钠电流的影响。结果 BZC浓度依赖性... 目的研究苯佐卡因(BZC)对大鼠背根神经节(DRG)神经元河豚毒素不敏感型(TTX-r)钠电流的影响,探讨其镇痛作用的机制。方法酶解法分离新生大鼠单个DRG神经元,应用全细胞膜片钳技术记录不同浓度BZC对TTX-r钠电流的影响。结果 BZC浓度依赖性静息阻断TTX-r钠电流,30、100和300μmol.L-1的BZC分别使TTX-r钠电流峰值抑制率达(18.83±8.51)%、(33.08±9.19)%、(58.91±12.02)%,并使TTX-r钠电流稳态失活曲线浓度依赖性向超极化方向移动。结论 BZC浓度依赖性阻断DRG神经元TTX-r钠离子通道并改变通道的失活,可能是其影响痛觉传导通路以及产生镇痛作用的机制之一。 展开更多

关键词 苯佐卡因 背根神经节神经元 全细胞膜片钳技术

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大鼠背根神经节神经元的分离方法及电生理特征探讨 被引量：3

6

作者 王腾 黄从新 王高华 《科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第16期32-35,共4页

在获取大鼠背根神经节神经元后,全细胞膜片钳技术记录动作电位和钠电流,探讨大鼠背根神经节细胞的分离方法和细胞形态以及电生理特征。结果显示,本实验能得到完整圆形或椭圆长条形的大鼠背根神经节体。正常的单个背根神经节神经元呈圆... 在获取大鼠背根神经节神经元后,全细胞膜片钳技术记录动作电位和钠电流,探讨大鼠背根神经节细胞的分离方法和细胞形态以及电生理特征。结果显示,本实验能得到完整圆形或椭圆长条形的大鼠背根神经节体。正常的单个背根神经节神经元呈圆形或椭圆形,大小不等,胞膜清晰,折光性好,隐约可见细胞核。在背根神经节细胞上记录的动作电位呈正立锐角三角形,静息电位小,动作电位时程短。背根神经节神经元的钠通道最大电流密度为(-62.04±4.45)pA/pF,几乎能被河豚毒素(TTX)完全抑制。本实验分离方法简单易行,背根神经节神经元容易获得和辨认,电生理特征明确,适用于神经系统疾病的电生理特征研究和治疗药物观察。 展开更多

关键词 膜片钳技术 背根神经节神经元 大鼠 电生理特征

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中药筋脉通对糖尿病大鼠背根神经节神经元超微结构影响的研究 被引量：2

7

作者 杨丹 梁晓春 +4 位作者 屈岭 吴群励 吴亚楠 石玥 戴威 《环球中医药》 CAS 2016年第6期654-658,共5页

目的观察中药筋脉通对链尿佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠背根神经节(dorsal root ganglia,DRG)感觉神经元超微结构的影响。方法雄性SD大鼠18只,腹腔内注射STZ诱导建立糖尿病大鼠模型,随机分为糖尿... 目的观察中药筋脉通对链尿佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠背根神经节(dorsal root ganglia,DRG)感觉神经元超微结构的影响。方法雄性SD大鼠18只,腹腔内注射STZ诱导建立糖尿病大鼠模型,随机分为糖尿病组、筋脉通组与牛磺酸组,每组6只大鼠,并设正常对照组6只。成模后每天1次灌胃给药,持续16周。药物干预16周后,用电子Von Frey仪检测机械痛阈值,取大鼠背根神经节,按常规方法制成切片后,在电镜下观察背根神经节神经元超微结构的病理学改变。结果糖尿病大鼠的机械痛阈值较正常组显著明显下降(P<0.01),背根神经节感觉神经元超微结构出现重度损伤,神经元细胞中线粒体数量显著减少(P<0.01),并且线粒体肿胀及空泡化比率、凋亡率显著升高(P<0.01);中药筋脉通可显著提高机械痛阈值(P<0.01),减轻神经元的损伤,提高神经元中线粒体的数量(P<0.05),并且降低线粒体的肿胀及空泡化比率及凋亡率(P<0.01),且中药筋脉通的疗效优于牛磺酸(P<0.01)。结论中药筋脉通对抑制糖尿病大鼠背根神经节感觉神经元及其线粒体超微结构的损伤而对糖尿病所致周围神经病变起到一定的保护作用。 展开更多

关键词 糖尿病周围神经病变 背根神经节神经元 筋脉通 超微结构 线粒体

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金雀异黄素通过下调HDAC6减轻LPS诱导的大鼠背根神经节神经元炎性损伤 被引量：1

8

作者 周松林 黄俊卿 +3 位作者 李科 都帅刚 杨彬 郭中华 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期707-716,共10页

目的:神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)是一种由躯体感觉神经病变或疾病引起的慢性疼痛,金雀异黄素(genistein,Gen)可能是治疗NP的潜在药物。因此,本研究旨在探讨Gen对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导大鼠背根神经节神经元(dors... 目的:神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)是一种由躯体感觉神经病变或疾病引起的慢性疼痛,金雀异黄素(genistein,Gen)可能是治疗NP的潜在药物。因此,本研究旨在探讨Gen对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导大鼠背根神经节神经元(dorsal root ganglion neuron,DRGn)炎性损伤的作用及其可能的分子机制。方法:取出生1 d的幼年大鼠进行DRGn的分离和培养。取对数生长期的DRGn,分为8组:对照组、LPS组、Tubastatin A盐酸盐(tubastatin A hydrochloride,TSA)+LPS组、Gen1+LPS组、Gen2+LPS组、Gen2+TSA+LPS组、Gen2+pcDNA-组蛋白脱乙酰化酶6(histone deacetylase 6,HDAC6)+LPS组、Gen2+pcDNA3.1+LPS组。LPS组给予1μg/mL LPS处理24 h;TSA+LPS组、Gen1+LPS组、Gen2+LPS组给予5μmol/L TSA、5μmol/L Gen、10μmol/L Gen预处理0.5 h后加入1μg/mL LPS处理24 h;Gen2+TSA+LPS组给予10μmol/L Gen和5μmol/L TSA共同预处理0.5 h后加入1μg/mL LPS处理24 h;Gen2+pcDNA-HDAC6+LPS组、Gen2+pcDNA3.1+LPS组将100 nmol/L pcDNA-HDAC6、pcDNA3.1质粒分别转染至DRGn,转染24 h后,给予10μmol/L Gen预处理0.5 h,再加入1μg/mL LPS处理24 h。采用real-time RT-PCR检测DRGn中HDAC6 mRNA的表达水平,CCK-8法检测DRGn活力,流式细胞术检测DRGn凋亡情况,ELISA检测DRGn培养上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平;蛋白质印迹法检测DRGn中HDAC6、Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、NF-κB p65的蛋白质表达水平。结果:与对照组相比,LPS组大鼠DRGn中HDAC6 mRNA和蛋白质的表达水平,TLR4和MyD88蛋白质表达水平均显著上调,p-NF-κB p65/NF-κB p65比值显著增加,DRGn活性显著降低且凋亡率显著升高,DRGn培养上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著升高(均P<0.05)。与LPS组相比,TSA+LPS组、Gen1+LPS组、Gen2+LPS组和Gen2+TSA+LPS组大鼠DRGn中HDAC6 mRNA和蛋白质的表达水平,TLR4和MyD88蛋白质表达水平均显著下调,p-NF-κB p65/NF-κB p65比值显著降低,DRGn活性显著升高且凋亡率显著降低,DRGn培养上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著降低(均P<0.05),且Gen2+TSA+LPS组上述变化最明显。与Gen2+LPS组相比,Gen2+pcDNA-HDAC6+LPS组大鼠DRGn中HDAC6 mRNA和蛋白质的表达水平,TLR4和MyD88蛋白质表达水平均显著上调,p-NF-κB p65/NF-κB p65比值显著增加,DRGn活性显著降低且凋亡率显著升高,DRGn培养上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著升高(均P<0.05)。结论:Gen可减轻LPS诱导的大鼠DRGn炎性损伤,其作用机制可能与下调HDAC6的表达,进一步抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的激活有关。 展开更多

关键词 金雀异黄素 神经病理性疼痛 背根神经节神经元 组蛋白脱乙酰化酶6 脂多糖

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一氧化氮在背根神经节神经元中的作用 被引量：1

9

作者 成洪聚 李丽 +2 位作者 杨瑞瑞 曹莹莹 司军强 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1746-1748,共3页

关键词 背根神经节神经元 一氧化氮合酶 病理生理过程 DRG神经元 OXIDE 感觉信息 病理过程 临床治疗

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地昔帕明对大鼠背根神经节神经元钠电流的影响 被引量：1

10

作者 程宏 赵丽萍 +3 位作者 王昌松 程洁 高蓉 肖杭 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期259-262,共4页

目的:研究地昔帕明(desipramine,DMI)对大鼠背根神经节神经元电压依赖性钠电流的影响。方法:分离单个大鼠背根神经节,应用全细胞膜片钳技术观察地昔帕明对内向钠电流(INa)的影响。结果:地昔帕明浓度依赖性地抑制INa,即分别加入10,50,100... 目的:研究地昔帕明(desipramine,DMI)对大鼠背根神经节神经元电压依赖性钠电流的影响。方法:分离单个大鼠背根神经节,应用全细胞膜片钳技术观察地昔帕明对内向钠电流(INa)的影响。结果:地昔帕明浓度依赖性地抑制INa,即分别加入10,50,100μmol/L的DMI可使钠电流的抑制率达(5.56±0.62)%,(54.67±13.39)%和(86.63±16.08)%,并且,50μmol/L的DMI可使INa稳态失活曲线左移,V1/2分别由对照组的-(43.71±0.79)mV降低至-(47.91±1.14)mV,k值无明显变化。结论:DMI浓度依赖性地抑制背根神经节神经元Na+通道,并改变通道的失活,这可能是其影响痛觉传导通路,产生镇痛作用的机制之一。 展开更多

关键词 地昔帕明 背根神经节神经元 全细胞膜片钳技术 钠电流

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复合维生素B对坐骨神经结扎大鼠痛觉过敏和背根神经节神经元nNOS表达的影响 被引量：2

11

作者 姚永兴 张励才 +1 位作者 曾因明 宋学军 《中国疼痛医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期171-174,共4页

目的观察复合维生素B对神经病理性疼痛大鼠机械痛敏、热痛敏以及L5背根神经节(DRG)神经元型一氧化氮合酶(nNOS)表达的影响。方法采用坐骨神经结扎(CCI)模型,复合维生素B(含B1B6B12110.01,5mg/kg即B15mg,B65mg和B120.05mg/kg)口服给药,连... 目的观察复合维生素B对神经病理性疼痛大鼠机械痛敏、热痛敏以及L5背根神经节(DRG)神经元型一氧化氮合酶(nNOS)表达的影响。方法采用坐骨神经结扎(CCI)模型,复合维生素B(含B1B6B12110.01,5mg/kg即B15mg,B65mg和B120.05mg/kg)口服给药,连续14天。分别于术前(0天)及术后1,3,5,7,9,11,14天以vonFrey细丝法和热辐射法测定机械缩足反射阈值(mechanicalwithdrawalthreshold,MWT)和热缩足反射潜伏期(thermalwithdrawallatency,TWL);以免疫组织化学结合计算机图像分析的方法,观察复合维生素B对L5背根神经节神经元nNOS表达的影响。结果口服不同剂量的复合维生素B(5mg/kg/d、10mg/kg/d、30mg/kg/d),减轻了大鼠机械痛敏和热痛敏,并抑制了背根神经节nNOS的表达。结论口服复合维生素B具有减轻坐骨神经结扎大鼠机械痛敏和热痛敏的作用,其作用机制可能是抑制初级感觉神经元nNOS的表达和神经元的敏化。 展开更多

关键词 背根神经节神经元 复合维生素B NNOS表达 神经结扎 大鼠 痛觉过敏 坐骨 神经元型一氧化氮合酶 神经病理性疼痛 计算机图像分析 初级感觉神经元 免疫组织化学 热痛敏 口服给药 不同剂量 作用机制 足反射 机械 von 辐射法

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胚胎大鼠背根神经节神经元的原代培养 被引量：2

12

作者 孙青 梁晓春 张宏 《医学研究杂志》 2016年第1期66-68,73,共4页

目的原代培养胚胎大鼠背根神经节神经元(DRGn),并观察其生长特性。方法取E15 SD胎鼠的背根神经节,用胰蛋白酶消化法分离成单细胞,通过密度梯度离心法和差速贴壁法进行分离纯化,在无血清培养基中培养,用抗神经元特异性烯醇化酶(NSE)抗体... 目的原代培养胚胎大鼠背根神经节神经元(DRGn),并观察其生长特性。方法取E15 SD胎鼠的背根神经节,用胰蛋白酶消化法分离成单细胞,通过密度梯度离心法和差速贴壁法进行分离纯化,在无血清培养基中培养,用抗神经元特异性烯醇化酶(NSE)抗体鉴定神经元。结果纯化培养神经元生长状态良好,纯度可达93%左右。结论该方法具有较好的可操作性和可重复性,用于DRGn的相关实验研究。 展开更多

关键词 背根神经节神经元 原代培养 胚胎大鼠

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大鼠背根神经节神经元原代培养中纯化方法的改良 被引量：4

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作者 李晓丽 张石波 +7 位作者 孙晓婷 易剑锋 郭可盈 高小东 李人杰 强亮 丁斐 施海燕 《南通大学学报（医学版）》 2015年第4期257-260,254,共5页

目的 :改进大鼠背根神经节神经元原代培养中的纯化方法以提高细胞纯度。方法 :常规取材并酶解消化大鼠背根神经节神经元,应用牛血清白蛋白溶液对细胞进行密度梯度离心初步分离细胞,再应用差速贴壁法去除非神经元细胞,最后应用阿糖胞苷... 目的 :改进大鼠背根神经节神经元原代培养中的纯化方法以提高细胞纯度。方法 :常规取材并酶解消化大鼠背根神经节神经元,应用牛血清白蛋白溶液对细胞进行密度梯度离心初步分离细胞,再应用差速贴壁法去除非神经元细胞,最后应用阿糖胞苷进一步纯化细胞。纯化后应用显微镜观察细胞形态,采用β-tubulinⅢ免疫细胞化学染色方法进行纯度鉴定,应用CCK-8检测细胞活力。结果:未改良组获得纯化的背根神经节神经元的培养周期长达10 d,而改良组缩短为5 d。相差显微镜可见改良组神经胶质细胞明显减少。改良组的β-tubulinⅢ免疫细胞化学染色阳性细胞比例显著增加,计数结果显示改良组神经元纯度达到93%,未改良组纯度仅达到68%,差异有统计学意义(P<0.05)。CCK-8检测结果显示改良组的细胞活力高于未改良组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 :纯化方法改良后可以在更短的培养周期内获得纯度更高、细胞活力更好的大鼠原代背根节神经元。 展开更多

关键词 背根神经节神经元 细胞培养 纯化方法 大鼠

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大鼠背根神经节神经元H^+-门控电流及其特征

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作者 师春梅 冯丽光 +2 位作者 李之望 赵斌 冯志博 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期294-298,共5页

目的:探讨大鼠背根神经节(DRG)神经元H+-门控电流(也称ASICs电流)及其特征;比较在SD大鼠DRG和三叉神经节(TG)神经元电流分布的异同。方法:在急性分离的大鼠DRG神经元上,采用全细胞膜片钳技术记录电流。结果:依据在pH5.0条件下记录的ASIC... 目的:探讨大鼠背根神经节(DRG)神经元H+-门控电流(也称ASICs电流)及其特征;比较在SD大鼠DRG和三叉神经节(TG)神经元电流分布的异同。方法:在急性分离的大鼠DRG神经元上,采用全细胞膜片钳技术记录电流。结果:依据在pH5.0条件下记录的ASICs电流动力学特征,将急性分离的DRG神经元上的ASICs电流分为四类:T-型、S-型、B-型和O-型;并推断此四种电流类型在周围感觉神经元上分布的一般规律。结论:在SD大鼠DRG和TG神经元ASICs电流都是以"S"型电流为主。4种电流的激活动力学τon(0～63%上升时间)和细胞直径无明显相关性。 展开更多

关键词 背根神经节神经元 全细胞膜片钳技术 H^+-门控电流(ASICs电流) 大鼠

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鸡胚背根神经节神经元在体内培养的研究

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作者 李力 陆兆丰 沈凌 《中国实用神经疾病杂志》 2013年第5期42-43,共2页

目的建立一种易于观察、取材方便、价格低、实验周期短、经济实用的鸡胚背根神经节神经元(dorsal root gan-glions neuron,DRGn)体内培养的方法。方法摘取孵化13～15d间鸡胚的背根神经节,经胰蛋白酶消化分离等方法获得纯化的神经元,将... 目的建立一种易于观察、取材方便、价格低、实验周期短、经济实用的鸡胚背根神经节神经元(dorsal root gan-glions neuron,DRGn)体内培养的方法。方法摘取孵化13～15d间鸡胚的背根神经节,经胰蛋白酶消化分离等方法获得纯化的神经元,将其按一定浓度移植于载体的绒毛尿囊膜层后,继续培养。结果 DRGn在载体的绒毛尿囊膜层培养3～5d时,可观察到神经细胞仍存活;培养6～9d时,可观察到神经细胞的生长;培养11～13d时,可观察到神经网络形成。结论鸡胚背根神经节神经元能在鸡胚的绒毛尿囊膜层生长、分化及再聚集并发育成正常神经网络组织。 展开更多

关键词 鸡胚 背根神经节神经元 传内培养

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大鼠背根神经节神经元P2Y嘌呤受体的表达

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作者 谢辉 李之望 +1 位作者 章伟文 陈宏 《浙江实用医学》 2005年第2期78-80,共3页

目的　探讨P2Y1和P2Y4亚基在大鼠背根神经节(DRG)神经元的表达。方法　应用组织水平和多细胞水平RT -PCR方法从不同角度检测了P2Y1受体的表达情况。结果　两种RT -PCR扩增结果均显示:P2Y1亚型有特异性表达阳性条带出现,而P2Y4亚型则无... 目的　探讨P2Y1和P2Y4亚基在大鼠背根神经节(DRG)神经元的表达。方法　应用组织水平和多细胞水平RT -PCR方法从不同角度检测了P2Y1受体的表达情况。结果　两种RT -PCR扩增结果均显示:P2Y1亚型有特异性表达阳性条带出现,而P2Y4亚型则无特异性表达条带出现。结论　大鼠DRG的大、中、小细胞中均有P2Y1亚型表达。 展开更多

关键词 背根神经节神经元 嘌呤受体 大鼠 特异性表达 PCR方法 PCR扩增 表达情况 Y1受体 不同角度 细胞水平 方法应用 阳性条带 亚型表达 DRG 小细胞 RT 出现

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子宫内膜异位症模型大鼠背根神经节神经元中TRPV1、TRPA1表达及其意义 被引量：2

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作者 刘建刚 王晓波 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2017年第6期617-621,共5页

目的:探讨子宫内膜异位症模型大鼠背根神经节(DRG)神经元中瞬时受体电位通道蛋白V1(TRPV1)、瞬时受体电位通道蛋白A1(TRPA1)表达及其意义。方法:选取雌性、成熟未交配Sprague-Dawley健康大鼠40只,分为模型组和假手术组,模型组采用自体... 目的:探讨子宫内膜异位症模型大鼠背根神经节(DRG)神经元中瞬时受体电位通道蛋白V1(TRPV1)、瞬时受体电位通道蛋白A1(TRPA1)表达及其意义。方法:选取雌性、成熟未交配Sprague-Dawley健康大鼠40只,分为模型组和假手术组,模型组采用自体移植方法建立子宫内膜异位症大鼠模型,假手术组仅做开腹手术。分别检测DRG中TRPV1、TRPA1表达情况,并使用TRPV1、TRPA1拮抗剂处理两组大鼠,观察其热板法痛阈、甩尾潜伏期变化。结果:模型组大鼠TRPV1、TRPA1表达阳性率明显高于假手术组(P<0.05)。术前,两组大鼠热板法痛阈、甩尾潜伏期相近(P﹥0.05)。术后,模型组大鼠热板法痛阈、甩尾潜伏期较术前明显减小(P<0.05),模型组大鼠热板法痛阈、甩尾潜伏期明显小于假手术组(P<0.05)。使用TRPV1、TRPA1拮抗剂前,两组大鼠热板法痛阈、甩尾潜伏期相近(P>0.05)。使用TRPV1、TRPA1拮抗剂后,两组大鼠热板法痛阈、甩尾潜伏期相近(P>0.05),模型组大鼠使用TRPV1、TRPA1拮抗剂前后,热板法痛阈、甩尾潜伏期无明显变化(P>0.05)。结论:TRPV1、TRPA1在子宫内膜异位症模型大鼠中高表达,使用TRPV1、TRPA1拮抗剂降低子宫内膜异位症模型大鼠TRPV1、TRPA1表达,降低大鼠对痛觉的敏感性。 展开更多

关键词 子宫内膜异位症 动物模型 背根神经节神经元 瞬时受体电位通道蛋白V1 瞬时受体电位通道蛋白A1

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高纯度大鼠胚胎背根神经节神经元的培养与鉴定 被引量：2

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作者 韩创业 赵春节 +1 位作者 刘锦愉 杨劲松 《广西医科大学学报》 CAS 2014年第3期358-361,共4页

目的:建立一种取材容易、存活时间长、纯度高的原代大鼠胚胎背根神经节神经元(DRGn)的培养模型。方法:在解剖显微镜下取得胎鼠背根神经节(DRG),通过胰蛋白酶消化,使用Neurobasal(NB)培养基联合抗有丝分裂药物纯化等方法获得DRGn。采用... 目的:建立一种取材容易、存活时间长、纯度高的原代大鼠胚胎背根神经节神经元(DRGn)的培养模型。方法:在解剖显微镜下取得胎鼠背根神经节(DRG),通过胰蛋白酶消化,使用Neurobasal(NB)培养基联合抗有丝分裂药物纯化等方法获得DRGn。采用神经丝蛋白免疫细胞化学染色法和hoechst染核鉴定并测定DRGn的纯度。结果:原代培养的DRGn在含有神经生长因子(NGF)的NB培养基中生长良好,存活时间可达45d,纯度可达到95%以上。结论:该培养模型简单易行,培养稳定,可获得大量高纯度和存活时间长的DRGn。 展开更多

关键词 背根神经节神经元 原代培养 大鼠胚胎

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高糖环境下糖络宁对大鼠背根神经节神经元细胞凋亡水平及MAPKs信号通路的影响 被引量：2

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作者 朱雨菲 郭宇鑫 +2 位作者 王利莹 李矜 张涛静 《中国医药导报》 CAS 2022年第4期9-13,共5页

目的研究糖络宁对高糖环境下大鼠背根神经节神经元(DRGn)细胞凋亡及丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响。方法6~8周体重(215±15)g清洁级雄性SD大鼠60只,按照随机数字表法分为高、中、低浓度糖络宁组和正常组,每组15只。各... 目的研究糖络宁对高糖环境下大鼠背根神经节神经元(DRGn)细胞凋亡及丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响。方法6~8周体重(215±15)g清洁级雄性SD大鼠60只,按照随机数字表法分为高、中、低浓度糖络宁组和正常组,每组15只。各组分别以糖络宁组方生药5、2.5、1.25 g/(kg·d)和等量蒸馏水灌胃,制备含药血清和正常对照血清。新生SD胎鼠制备DRGn细胞,分为正常组(10%正常大鼠血清+Neurobasal培养基),高糖组(正常组基础上+50 mmol/L葡萄糖),糖络宁各浓度组(高糖组基础上+10%低、中、高浓度糖络宁含药血清),培养24 h后检测细胞凋亡及JNK1、p-JNK1、c-Jun、p-c-Jun、Map3k8、p-Map3k8蛋白表达。结果高糖组细胞凋亡率、p-JNK1、p-c-Jun、Map3k8、p-Map3k8表达及p-JNK1/JNK1、p-c-Jun/c-Jun、p-Map3k8/Map3k8比值高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);糖络宁各浓度组细胞凋亡率、p-JNK1、p-c-Jun、p-Map3k8表达及p-JNK1/JNK1、p-c-Jun/c-Jun、p-Map3k8/Map3k8比值明显低于高糖组,差异有高度统计学意义(P<0.01);中浓度糖络宁组细胞凋亡率、p-JNK1、p-c-Jun、p-Map3k8表达及p-JNK1/JNK1、p-c-Jun/c-Jun、p-Map3k8/Map3k8比值明显低于高、低浓度糖络宁组,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05);中、低浓度糖络宁组c-Jun表达低于高糖组,差异有统计学意义(P<0.05),糖络宁各浓度组JNK1、Map3k8及c-Jun表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论糖络宁可能通过抑制MAPKs信号通路降低细胞凋亡水平。 展开更多

关键词 背根神经节神经元细胞 糖尿病周围神经病变 糖络宁 细胞凋亡

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人类免疫缺陷病毒蛋白HIV gp120对培养的大鼠背根神经节神经元的神经毒性作用(英文) 被引量：2

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作者 刘花香 李振中 +6 位作者 邢毅 黄飞 杜芳 刘真 陈淑妍 王丽红 王怀经 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期603-608,共6页

为探讨人类免疫缺陷病毒(HIV)gp120对体外培养的大鼠背根神经节(DRG)神经元的神经毒性作用,我们建立了胎鼠DRG分散培养和器官型培养的模型。以上分散培养和器官型培养的DRG,经不同浓度(250pmol/L,1nmol/L)的HIVgp120处理(2次/7d)。分散... 为探讨人类免疫缺陷病毒(HIV)gp120对体外培养的大鼠背根神经节(DRG)神经元的神经毒性作用,我们建立了胎鼠DRG分散培养和器官型培养的模型。以上分散培养和器官型培养的DRG,经不同浓度(250pmol/L,1nmol/L)的HIVgp120处理(2次/7d)。分散培养的DRG细胞行微管相关蛋白2(MAP2)免疫荧光染色,然后利用荧光显微镜观察神经元胞体和突起的变化情况。器官型培养的DRG在电子显微镜下观察其超微结构的改变。经HIVgp120处理的神经元突起的数目和长度的变化,HIVgp120处理组与对照组相比有显著性意义(P<0.001),而神经元的直径则没有变化(P>0.05)。应用以上不同浓度的HIVgp120处理后,神经元的超微结构出现明显改变,线粒体嵴减少或消失,微管和神经丝之间出现了大量的高电子密度颗粒。以上结果表明,HIVgp120对培养的DRG神经元具有直接的神经毒性作用,其中以线粒体的改变较为敏感。 展开更多

关键词 人类免疫缺陷病毒HIV GP120 神经元背根神经节 大鼠

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