目的探讨激活哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物2(mTORC2)/Akt信号通路对6-羟基多巴胺(6-OHDA)模型小鼠多巴胺能神经元和行为学的影响及可能的机制。方法将36只体重20~25 g 3月龄Nestin-CreERTM::ROSA26-LacZ雄性C57BL/6J小鼠分为NS+玉米油...目的探讨激活哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物2(mTORC2)/Akt信号通路对6-羟基多巴胺(6-OHDA)模型小鼠多巴胺能神经元和行为学的影响及可能的机制。方法将36只体重20~25 g 3月龄Nestin-CreERTM::ROSA26-LacZ雄性C57BL/6J小鼠分为NS+玉米油组、6-OHDA+玉米油组、6-OHDA+PP242组、6-OHDA+A-443654组,并在小鼠右侧纹状体注射6-OHDA制备帕金森病(PD)小鼠模型以及每日腹腔注射mTORC2/Akt信号通路激动剂A-443654或抑制剂PP242。通过ELISA测定血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)的水平;免疫组织化学和免疫荧光染色考察黑质(SN)-纹状体小胶质细胞、脑室周围神经前体细胞(NPCs)和多巴胺能神经元数目,Western blotting检测中脑水管mTORC2/Akt信号通路各相关蛋白Rictor,p-Akt和DNA损伤反应调节1(REDD1)的表达并通过免疫共沉淀验证它们之间的相互作用,最后观察各组小鼠行为学的变化。结果6-OHDA模型小鼠伴随小胶质细胞的激活和炎症因子的增加,黑质多巴胺能阳性神经元数目明显下降,小鼠的运动功能发生障碍,但NPCs数目较对照组小鼠明显增加,mTORC2/Akt信号通路相关蛋白表达也明显上调,在激动剂A-443654处理后随着相关蛋白的表达进一步上调,上述各指标均有明显改善,而抑制剂PP242处理组则呈现与激动剂A-443654完全相反的情况。结论A-443654通过上调mTORC2/Akt信号通路关键蛋白促进NPCs的增殖,增加新生多巴胺能神经元的数目并减少小胶质细胞的激活和炎症反应最终导致PD模型小鼠黑质-纹状体多巴胺能神经元和小鼠行为学的改善。展开更多
文摘目的探讨激活哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物2(mTORC2)/Akt信号通路对6-羟基多巴胺(6-OHDA)模型小鼠多巴胺能神经元和行为学的影响及可能的机制。方法将36只体重20~25 g 3月龄Nestin-CreERTM::ROSA26-LacZ雄性C57BL/6J小鼠分为NS+玉米油组、6-OHDA+玉米油组、6-OHDA+PP242组、6-OHDA+A-443654组,并在小鼠右侧纹状体注射6-OHDA制备帕金森病(PD)小鼠模型以及每日腹腔注射mTORC2/Akt信号通路激动剂A-443654或抑制剂PP242。通过ELISA测定血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)的水平;免疫组织化学和免疫荧光染色考察黑质(SN)-纹状体小胶质细胞、脑室周围神经前体细胞(NPCs)和多巴胺能神经元数目,Western blotting检测中脑水管mTORC2/Akt信号通路各相关蛋白Rictor,p-Akt和DNA损伤反应调节1(REDD1)的表达并通过免疫共沉淀验证它们之间的相互作用,最后观察各组小鼠行为学的变化。结果6-OHDA模型小鼠伴随小胶质细胞的激活和炎症因子的增加,黑质多巴胺能阳性神经元数目明显下降,小鼠的运动功能发生障碍,但NPCs数目较对照组小鼠明显增加,mTORC2/Akt信号通路相关蛋白表达也明显上调,在激动剂A-443654处理后随着相关蛋白的表达进一步上调,上述各指标均有明显改善,而抑制剂PP242处理组则呈现与激动剂A-443654完全相反的情况。结论A-443654通过上调mTORC2/Akt信号通路关键蛋白促进NPCs的增殖,增加新生多巴胺能神经元的数目并减少小胶质细胞的激活和炎症反应最终导致PD模型小鼠黑质-纹状体多巴胺能神经元和小鼠行为学的改善。
