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脆性X智力低下蛋白的克隆表达与纯化
1
作者
刘剑
邹柯
+1 位作者
朱宁
沈岩
《基础医学与临床》
CSCD
北大核心
2008年第7期692-695,共4页
目的探讨脆性X智力低下蛋白(FMRP)的克隆表达与纯化条件。方法用分子克隆的方法构建重组质粒pET22b(+)-FMR1,并将其转入原核表达菌株E.coliBL21(DE3)中诱导表达;用固化Ni2+吸收色谱纯化重组FMRP,Western-blot鉴定并将纯化得到的蛋白与...
目的探讨脆性X智力低下蛋白(FMRP)的克隆表达与纯化条件。方法用分子克隆的方法构建重组质粒pET22b(+)-FMR1,并将其转入原核表达菌株E.coliBL21(DE3)中诱导表达;用固化Ni2+吸收色谱纯化重组FMRP,Western-blot鉴定并将纯化得到的蛋白与已知的RNA片段进行结合反应。结果成功构建了重组表达质粒pET22b(+)-FMR1,在E.coliBL21(DE)中表达出相对分子质量约79 000的蛋白;该蛋白为FMRP,且可与特定RNA相互作用。结论在原核系统中表达得到了纯度和活性都较为理想的FMRP蛋白,为相关功能性研究奠定了基础。
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关键词
脆性
x
智力
低下
蛋白
(
fmrp
)
pET22b(+)
BL21(DE3)
RNA结合
下载PDF
职称材料
FMRP检测在脆性X综合征中应用研究进展
被引量:
1
2
作者
吴华平
虞雄鹰
钟建民
《实用临床医学(江西)》
CAS
2007年第7期132-134,共3页
关键词
脆性
x
综合征(F
x
S)
脆性
x
智力
低下
蛋白
(
fmrp
)
快速抗体检测方法
下载PDF
职称材料
腺苷酸环化酶激活剂对脆性X智力低下一号基因重启及蛋白表达的影响
被引量:
2
3
作者
张红琴
陈瑶
+2 位作者
姚英民
陈红武
杨明
《中国优生与遗传杂志》
2011年第11期22-24,共3页
目的在用硝普钠体外封闭脆性X智力低下一号(FMR1)基因建立脆性X综合症细胞模型的基础上,初步研究腺苷酸环化酶激活剂弗司可林(FSK)对FMR1基因的重启及表达的影响。方法利用硝普钠产生的一氧化氮可以诱导FMR1基因启动子区Cp G岛甲基化的...
目的在用硝普钠体外封闭脆性X智力低下一号(FMR1)基因建立脆性X综合症细胞模型的基础上,初步研究腺苷酸环化酶激活剂弗司可林(FSK)对FMR1基因的重启及表达的影响。方法利用硝普钠产生的一氧化氮可以诱导FMR1基因启动子区Cp G岛甲基化的原理,将人类慢性髓源性白血病细胞系(K-562)在加入适宜浓度硝普钠(SNP)的完全培养基中培养,诱导FMR1基因启动子区CpG岛甲基化从而使FMR1基因封闭,并失表达;用普通及Taqman荧光定量PCR、Westblot技术验证腺苷酸环化酶激活剂弗司可林(forskolin,FSK)诱导FMR1基因封闭后的重启及表达。结果浓度1000μmol/L的SNP作用24h后,可使K-562细胞的FMR1基因量降至正常组的0.2%并达到封闭效果,且72h后可抑制脆性X智力低下蛋白(FMRP)的表达,蛋白表达量降至正常组的48%;发现浓度50μmol/L的FSK可以在24h时重新开启封闭的FMR1基因,使其表达量上升到13.3%,最高达13.8%并持续至48h,且72h后体现在FMRP的表达上,其量基本上与正常组相当。结论 FSK可有效地诱导启动子区CpG岛甲基化封闭后的FMR1基因重新启动以及满意的FM-RP表达,FSK对Fra(X)的治疗作用还有待于进一步研究。
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关键词
硝普钠(SNP)
弗司可林(FSK)
脆性
x
智力
低下
一号基因(FMR1)
脆性
x
智力
低下
蛋白
(
fmrp
)
原文传递
题名
脆性X智力低下蛋白的克隆表达与纯化
1
作者
刘剑
邹柯
朱宁
沈岩
机构
中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室
出处
《基础医学与临床》
CSCD
北大核心
2008年第7期692-695,共4页
基金
国家自然科学基金(2004CB518601)
文摘
目的探讨脆性X智力低下蛋白(FMRP)的克隆表达与纯化条件。方法用分子克隆的方法构建重组质粒pET22b(+)-FMR1,并将其转入原核表达菌株E.coliBL21(DE3)中诱导表达;用固化Ni2+吸收色谱纯化重组FMRP,Western-blot鉴定并将纯化得到的蛋白与已知的RNA片段进行结合反应。结果成功构建了重组表达质粒pET22b(+)-FMR1,在E.coliBL21(DE)中表达出相对分子质量约79 000的蛋白;该蛋白为FMRP,且可与特定RNA相互作用。结论在原核系统中表达得到了纯度和活性都较为理想的FMRP蛋白,为相关功能性研究奠定了基础。
关键词
脆性
x
智力
低下
蛋白
(
fmrp
)
pET22b(+)
BL21(DE3)
RNA结合
Keywords
fragile
x
mental retardation protein (
fmrp
)
pET22b( + )
BI21 (DE3)
RNA binding
分类号
R394 [医药卫生—医学遗传学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
FMRP检测在脆性X综合征中应用研究进展
被引量:
1
2
作者
吴华平
虞雄鹰
钟建民
机构
江西省儿童医院神经内科
出处
《实用临床医学(江西)》
CAS
2007年第7期132-134,共3页
关键词
脆性
x
综合征(F
x
S)
脆性
x
智力
低下
蛋白
(
fmrp
)
快速抗体检测方法
分类号
R349.6 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
腺苷酸环化酶激活剂对脆性X智力低下一号基因重启及蛋白表达的影响
被引量:
2
3
作者
张红琴
陈瑶
姚英民
陈红武
杨明
机构
南方医科大学南方医院新生儿科
南方医科大学生物技术学院
出处
《中国优生与遗传杂志》
2011年第11期22-24,共3页
文摘
目的在用硝普钠体外封闭脆性X智力低下一号(FMR1)基因建立脆性X综合症细胞模型的基础上,初步研究腺苷酸环化酶激活剂弗司可林(FSK)对FMR1基因的重启及表达的影响。方法利用硝普钠产生的一氧化氮可以诱导FMR1基因启动子区Cp G岛甲基化的原理,将人类慢性髓源性白血病细胞系(K-562)在加入适宜浓度硝普钠(SNP)的完全培养基中培养,诱导FMR1基因启动子区CpG岛甲基化从而使FMR1基因封闭,并失表达;用普通及Taqman荧光定量PCR、Westblot技术验证腺苷酸环化酶激活剂弗司可林(forskolin,FSK)诱导FMR1基因封闭后的重启及表达。结果浓度1000μmol/L的SNP作用24h后,可使K-562细胞的FMR1基因量降至正常组的0.2%并达到封闭效果,且72h后可抑制脆性X智力低下蛋白(FMRP)的表达,蛋白表达量降至正常组的48%;发现浓度50μmol/L的FSK可以在24h时重新开启封闭的FMR1基因,使其表达量上升到13.3%,最高达13.8%并持续至48h,且72h后体现在FMRP的表达上,其量基本上与正常组相当。结论 FSK可有效地诱导启动子区CpG岛甲基化封闭后的FMR1基因重新启动以及满意的FM-RP表达,FSK对Fra(X)的治疗作用还有待于进一步研究。
关键词
硝普钠(SNP)
弗司可林(FSK)
脆性
x
智力
低下
一号基因(FMR1)
脆性
x
智力
低下
蛋白
(
fmrp
)
分类号
R749.94 [医药卫生—神经病学与精神病学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
脆性X智力低下蛋白的克隆表达与纯化
刘剑
邹柯
朱宁
沈岩
《基础医学与临床》
CSCD
北大核心
2008
0
下载PDF
职称材料
2
FMRP检测在脆性X综合征中应用研究进展
吴华平
虞雄鹰
钟建民
《实用临床医学(江西)》
CAS
2007
1
下载PDF
职称材料
3
腺苷酸环化酶激活剂对脆性X智力低下一号基因重启及蛋白表达的影响
张红琴
陈瑶
姚英民
陈红武
杨明
《中国优生与遗传杂志》
2011
2
原文传递
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