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大鼠脱细胞肝支架的制备研究
1
作者 陈宁 郭安然 +5 位作者 刘安娜 张玲 王彩 邢君 郑敏 李玲 《湖北科技学院学报（医学版）》 2024年第4期313-318,共6页
目的 本研究旨在探索优化脱细胞肝支架的简易脱细胞方案,可为脱细胞肝的下一步应用研究提供良好的生物材料。方法 依次采用0.9%氯化钠注射液500mL冲洗1h、0.5%乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸1500mL冲洗3h和1%十二烷基硫酸钠溶液3000mL冲... 目的 本研究旨在探索优化脱细胞肝支架的简易脱细胞方案,可为脱细胞肝的下一步应用研究提供良好的生物材料。方法 依次采用0.9%氯化钠注射液500mL冲洗1h、0.5%乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸1500mL冲洗3h和1%十二烷基硫酸钠溶液3000mL冲洗大鼠肝脏6h,速度均为120滴/min,用来制备脱细胞肝支架。通过HE染色、扫描电镜和免疫荧光染色、DNA含量检测、X线下显影测试和流动性测试等方式检测脱细胞肝的结构完整性和主要成分。结果 经过10h的灌流,肝脏中的血管清晰可见,HE染色中显示脱细胞肝去除了细胞核,免疫组织化学染色见胶原蛋白I、纤连蛋白和层粘连蛋白表达,扫描电镜显示支架呈疏松多孔的结构,DNA含量显示<50ng/mg,X线测试表明对注射进入的显影剂有良好的显影效果,流动性测试表明脱细胞肝保留了较为完整和通畅的血管系统。结论 本研究所采用的脱细胞方法成功制备了脱细胞肝脏模型,达到了较为理想的脱细胞效果。 展开更多
关键词 脱细胞肝 肝组织工程 脱细胞支架 肝脏
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脱细胞肝支架的结构和成分对细胞相容性的影响
2
作者 姜楠 季茹 +5 位作者 韩炜 王建锋 李伟民 曹阳 张勇 窦科峰 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期2082-2085,共4页
目的 比较不同方法制备脱细胞肝支架（DLBS）的结构和成分以及细胞相容性,探讨其内部联系.方法 取50只成年F344大鼠肝脏,使用文献报道的3种方法[以十二烷基硫酸钠（SDS）、Triton X-100和NP-40为主洗脱剂]制备大鼠DLBS.进行扫描电镜和... 目的 比较不同方法制备脱细胞肝支架（DLBS）的结构和成分以及细胞相容性,探讨其内部联系.方法 取50只成年F344大鼠肝脏,使用文献报道的3种方法[以十二烷基硫酸钠（SDS）、Triton X-100和NP-40为主洗脱剂]制备大鼠DLBS.进行扫描电镜和孔径计算和氨基葡聚糖（GAG）检测.后经门静脉灌注肝卵圆细胞,进行黏附率、增殖情况、免疫荧光、扫描电镜以及白蛋白分泌检测.结果 大体观察、扫描电镜及孔径计算表明NP-40方案细胞外基质较SDS和Triton X-100方案整齐；GAG检测NP-40方案[（44.19±3.35） ng/mg]高于Triton X-100方案[（36.71±2.01） ng/mg]和SDS方案[（21.63 ±2.78） ng/mg]；细胞黏附率显示NP-40方案[（95.78±2.11）％]高于SDS方案[（84.18±3.30）％]和Triton X-100方案[（91.15±2.21）％]；细胞增殖情况Triton X-100方案和NP-40方案的细胞增殖速度显著高于SDS方案（P＜0.05）；白蛋白分泌NP-40方案[（85.77±3.30） mg/106个细胞]明显好于SDS方案[（49.37±2.43） mg/106个细胞]和Triton X-100方案[（74.66 ±4.80） mg/106个细胞].结论 DLBS的结构和成分对支架的细胞相容性具有明显的影响,同时也明显观察到NP-40方案较SDS和Triton X-100方案在制备DLBS的优势. 展开更多
关键词 脱细胞肝支架 组织工程 细胞外基质 卵圆细胞
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人肝组织脱细胞支架的制备 被引量：3
3
作者 郑幸龙 向俊西 +3 位作者 吴万权 刘学民 刘雯雁 吕毅 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1028-1033,共6页
目的探究人肝组织脱细胞支架的制备。方法本研究利用手术切除的人肝血管瘤左外叶组织,经反复冻融,0.01%SDS、0.1%SDS和1%Triton X-100循环灌注制备人肝组织脱细胞支架,并通过灌注过氧乙酸消毒。将L-02细胞通过门静脉插管种植于脱细胞支... 目的探究人肝组织脱细胞支架的制备。方法本研究利用手术切除的人肝血管瘤左外叶组织,经反复冻融,0.01%SDS、0.1%SDS和1%Triton X-100循环灌注制备人肝组织脱细胞支架,并通过灌注过氧乙酸消毒。将L-02细胞通过门静脉插管种植于脱细胞支架内进行培养。结果 HE、DAPI染色和扫描电镜结果显示脱细胞支架内无细胞成分残留,残余DNA检测为25.3±14.6 ng/mg干质量,小于新鲜肝脏DNA含量的1%。免疫组化证实支架内保留了Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原、纤连蛋白、弹力蛋白成分。L-02细胞在支架上生长良好且有增殖,并表达白蛋白及葡萄糖-6-磷酸酶。结论利用手术切除的人肝标本行肝组织脱细胞支架的制备是可行的,且为构建更适用于临床的组织工程肝脏提供了新思路。 展开更多
关键词 肝组织工程 人肝组织脱细胞支架 细胞外基质 三维培养
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肝脏基质水凝胶的制备及其细胞相容性研究 被引量：3
4
作者 梁成宵 古瑞 +6 位作者 李婷 杨冠 吴东叶 屈琳林 李凤君 田伏洲 孙红玉 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期409-413,共5页
目的制备肝脏基质水凝胶并评价其体外细胞毒性,以期为后续该水凝胶的应用提供实验依据。方法采用Triton X-100和SDS法制备大鼠肝脏脱细胞基质,对其进行HE染色和DNA含量测定;将肝脏脱细胞基质溶解制备成肝脏基质水凝胶,对其进行大体形态... 目的制备肝脏基质水凝胶并评价其体外细胞毒性,以期为后续该水凝胶的应用提供实验依据。方法采用Triton X-100和SDS法制备大鼠肝脏脱细胞基质,对其进行HE染色和DNA含量测定;将肝脏脱细胞基质溶解制备成肝脏基质水凝胶,对其进行大体形态观察和扫描电镜检测;在水凝胶表面培养肝细胞BRL-3A,采用Live/Dead染色、Alamar Blue法和细胞骨架染色,研究其细胞毒性、增殖情况及黏附行为。结果组织学和DNA含量检测显示获得了理想的肝脏脱细胞基质材料,该材料经溶解后可制备成温敏性水凝胶,扫描电镜观察可见其呈网状多孔结构。细胞毒性实验显示该水凝胶材料有利于肝细胞的存活,并能促进肝细胞的黏附和增殖。结论成功制备了生物相容性良好的肝脏基质水凝胶,有望作为可注射性水凝胶材料应用于终末期肝病的临床治疗。 展开更多
关键词 肝脱细胞基质 水凝胶 肝细胞 细胞行为
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不同方法制备大鼠肝脏脱细胞支架及其免疫原性研究 被引量：7
5
作者 姜楠 季茹 +5 位作者 王建锋 韩炜 李伟民 曹阳 王德盛 窦科峰 《现代生物医学进展》 CAS 2013年第5期844-849,共6页
目的:肝脏脱细胞支架(decellularized liver bioscaffold,DLB)在组织工程研究中具有良好前景,但对DLB的免疫原性尚未见探讨。本研究利用不同方案制备大鼠DLB,检测支架成分和体内重塑反应,为制备出低免疫原性的DLB提供改进依据。方法:选... 目的:肝脏脱细胞支架(decellularized liver bioscaffold,DLB)在组织工程研究中具有良好前景,但对DLB的免疫原性尚未见探讨。本研究利用不同方案制备大鼠DLB,检测支架成分和体内重塑反应,为制备出低免疫原性的DLB提供改进依据。方法:选取文献报道的三种方案(分别以SDS,Triton X-100和NP-40为主要洗脱成分),制备F344大鼠DLB,进行HE和Masson染色,检测DLB中DNA、氨基葡聚糖(GAG)以及羟脯氨酸(HYP)含量;再将DLB埋植于C57BL/6小鼠的背部皮下,于术后第3、7和14天取出后进行形态学观察和组织学评分。结果:三种方案均成功制备出符合脱细胞标准的大鼠DLB;形态学结果提示Triton X-100和NP-40方案较SDS方案能更好地保护肝脏超微结构;成分检测结果发现NP-40方案去除DNA的能力显著强于SDS和Triton X-100方案(P<0.05),而对GAG含量的洗脱作用最弱(P<0.05);异种体内埋置实验提示NP-40方案制备的DLB引起的免疫反应强度明显弱于SDS和Triton X-100方案,体内重塑结局评分显著高于SDS和Triton X-100方案。结论:与SDS和Triton X-100方案相比,NP-40方案能更有效地去除肝脏DNA,较好地保留GAG,诱导移植受体对DLB的良性重塑反应,为进一步的体内研究提供更优化的支架。 展开更多
关键词 脱细胞肝支架 肝组织工程 细胞外基质 免疫原性
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肝脱细胞基质溶液包被对HepG2细胞增殖及基质金属蛋白酶活性的影响
6
作者 孙东升 刘洋 +4 位作者 张英 赵姗 孙丹 马小军 孙广炜 《现代生物医学进展》 CAS 2017年第29期5601-5606,共6页
目的:建立由猪肝组织制备肝脱细胞基质溶液的新方法,并研究基质溶液包被对人肝癌细胞HepG2增殖及基质金属蛋白酶活性的影响。方法:对猪肝脏进行脱细胞处理,经研磨、冻干及胃蛋白酶消化制备肝脱细胞基质溶液,利用此基质溶液包被聚苯乙烯... 目的:建立由猪肝组织制备肝脱细胞基质溶液的新方法,并研究基质溶液包被对人肝癌细胞HepG2增殖及基质金属蛋白酶活性的影响。方法:对猪肝脏进行脱细胞处理,经研磨、冻干及胃蛋白酶消化制备肝脱细胞基质溶液,利用此基质溶液包被聚苯乙烯培养表面,进行HepG2细胞体外培养,并使用CCK-8、实时定量PCR、明胶酶谱等检测细胞增殖以及基质金属蛋白酶的基因表达和活性。结果:建立了由猪肝组织制备肝脱细胞基质溶液的新方法。与未包被组相比,脱细胞基质溶液包被培养显著促进HepG2细胞增殖,其细胞周期蛋白cyclin D1的基因表达增高,为未包被组的1.95倍(P<0.01)。此外,脱细胞基质溶液包被组HepG2细胞的MMP14基因表达为未包被组的2.01倍(P<0.05),明胶酶谱检测基质溶液包被组细胞的MMP9活性为未包被组的6.66倍(P<0.01)。结论:肝脱细胞基质溶液包被培养可显著促进HepG2细胞增殖并提高其MMP9的活性,在构建模拟肝癌微环境培养体系中具有一定的应用潜力。 展开更多
关键词 肝脱细胞基质溶液 HEPG2 增殖 基质金属蛋白酶
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