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腹膜透析流出液中人腹膜间皮细胞的培养 被引量:1
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作者 戴宏 刘先英 +5 位作者 张伯科 吴永贵 徐星铭 郝丽 钱浩 阚春明 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2008年第4期464-466,共3页
目的建立从腹膜透析(PD)流出液中培养人腹膜间皮细胞(HPMC)方法。方法从10例PD患者PD流出液标本中收集HPMC并在体外进行原代培养,采用相差倒置显微镜、扫描电镜和免疫组化染色对培养的细胞进行鉴定。结果8例PD患者流出液中HPMC在体外原... 目的建立从腹膜透析(PD)流出液中培养人腹膜间皮细胞(HPMC)方法。方法从10例PD患者PD流出液标本中收集HPMC并在体外进行原代培养,采用相差倒置显微镜、扫描电镜和免疫组化染色对培养的细胞进行鉴定。结果8例PD患者流出液中HPMC在体外原代培养成活,经相差倒置显微镜观察原代培养的HPMC呈典型的铺路石样外观;免疫组化显示培养的HPMC胞浆角蛋白、波形蛋白表达均阳性,白细胞CD45抗原阴性;扫描电镜见培养细胞表面有许多长短不一呈丝状的微绒毛。结论成功建立了从PD流出液中HPMC原代培养方法,该方法将对进一步PD的研究提供实验基础。 展开更多
关键词 腹膜透析 细胞 培养的 腹膜/细胞学
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不同浓度钙对人腹膜间皮细胞影响的实验研究 被引量:3
2
作者 李岩 李军 +3 位作者 彭佑铭 刘虹 刘映红 叶琨 《医学临床研究》 CAS 2006年第2期198-201,共4页
【目的】观察不同浓度钙对体外培养的人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)及细胞外基质的影响。【方法】采用人腹膜间皮细胞株体外培养,用乳酸脱氢酶(LDH)和四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)评估细胞的活力和增殖能力;... 【目的】观察不同浓度钙对体外培养的人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)及细胞外基质的影响。【方法】采用人腹膜间皮细胞株体外培养,用乳酸脱氢酶(LDH)和四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)评估细胞的活力和增殖能力;采用免疫细胞化学法来检测纤维连接蛋白(FN)的表达。【结果】不同浓度钙均可促进HPMCs增殖(P<0.01),而以1.25 mmol/L及1.0 mmol/L钙作用最明显,且呈时间依赖关系。不同浓度钙组与对照组相比均可明显升高LDH水平,其中以1.25 mmol/L钙的LDH水平最低(P<0.01),且呈时间依赖关系。2.0 mmol/L和1.75 mmol/L钙可明显上调FN的表达(P<0.01)。【结论】高钙可明显损伤HPMCs及促进FN合成,其在腹膜纤维化的发生中可能起了一定作用;而浓度为1.25 mmol/L钙可保护腹膜,并在一定程度上有预防腹膜纤维化的作用。 展开更多
关键词 腹膜/细胞学 间质细胞/药物作用
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腹膜透析液中钙对持续性不卧床腹膜透析患者腹膜间皮细胞的影响 被引量:2
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作者 彭翔 李军 彭佑铭 《医学临床研究》 CAS 2007年第10期1745-1747,共3页
【目的】探讨腹膜透析液(PDS)中不同浓度钙对体内腹膜间皮细胞(HPMCs)损伤、增殖及间质纤维化的影响。【方法】选择规律性腹膜透析治疗的终末期肾功能衰竭患者30例,既往使用PD4(钙浓度1.25mmol/L)透析,作为对照组。改用标准钙透析液(钙... 【目的】探讨腹膜透析液(PDS)中不同浓度钙对体内腹膜间皮细胞(HPMCs)损伤、增殖及间质纤维化的影响。【方法】选择规律性腹膜透析治疗的终末期肾功能衰竭患者30例,既往使用PD4(钙浓度1.25mmol/L)透析,作为对照组。改用标准钙透析液(钙浓度1.75 mmol/L)透析4周,每周末作为一个实验组。期间每周末检测腹透引流液中纤维连接蛋白(FN)、CA125、LDH,同时测定血磷、钙、甲状旁腺激素水平变化情况。【结果】换用标准钙透析液治疗后,与对照组相比,腹透引流液中LDH水平随作用时间延长呈上升趋势(P<0.01),第4周CA125、FN浓度值明显降低(P<0.05),血钙浓度显著升高,磷、PTH浓度差异无显著性。【结论】生理钙PDS与标准钙PDS相比,可抑制HPMCs增殖、损伤HPMCs及促进FN合成,能保护腹膜功能并一定程度延缓腹膜纤维化进程。 展开更多
关键词 腹膜透析 腹膜/细胞学 间质细胞
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葛根素对腹膜透析液诱导的体外培养人腹膜间皮细胞损伤的保护作用 被引量:2
4
作者 张苗 蒋春明 陶娜娜 《医学临床研究》 CAS 2009年第11期1985-1987,共3页
【目的】了解葛根素对腹膜透析液干预下的体外培养的人腹膜间皮细胞增殖活性及转化生长因子β1(TGF-β1)分泌的影响。【方法】体外培养的人腹膜间皮细胞,分对照组、PDS组、A组(葛根素终浓度为50μg/mL)、B组(葛根素终浓度为100μ... 【目的】了解葛根素对腹膜透析液干预下的体外培养的人腹膜间皮细胞增殖活性及转化生长因子β1(TGF-β1)分泌的影响。【方法】体外培养的人腹膜间皮细胞,分对照组、PDS组、A组(葛根素终浓度为50μg/mL)、B组(葛根素终浓度为100μg/mL)、C组(葛根素终浓度为200μg/mL)五组观察。检测各组上清液中TGF-β1的含量以及间皮细胞的增殖活性并比较。【结果】腹膜间皮细胞在PDS干预下,TGF-β1分泌显著增加,添加葛根素再干预的A、B、C组TGF-β1分泌与PDS组比较有显著下降。与PDS组比较,A、B、c纽间皮细胞增殖活性显著升高。【结论】葛根素可以抑制腹膜间皮细胞TGF-β1分泌,拮抗腹膜透析液对腹膜间皮细胞增殖活性的抑制作用。 展开更多
关键词 腹膜透析 腹膜/细胞学 间质细胞 葛根素/药理学
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腹膜透析引流液离心法和大网膜消化法原代培养人腹膜间皮细胞
5
作者 张柯 周循 +4 位作者 张浩 邹莎琳 凌光辉 孙林 刘伏友 《医学临床研究》 CAS 2010年第9期1615-1617,1620,共4页
[目的]建立和改善两种人腹膜间皮原代细胞培养的方法.[方法]分别采用离心法从腹膜透析(PD)引流液中及胰蛋白酶-EDTA消化法从人的腹膜组织中分离培养人腹膜间皮细胞(HPMC),并分别对两种原代培养的HPMC采用相差倒置显微镜和免疫组化... [目的]建立和改善两种人腹膜间皮原代细胞培养的方法.[方法]分别采用离心法从腹膜透析(PD)引流液中及胰蛋白酶-EDTA消化法从人的腹膜组织中分离培养人腹膜间皮细胞(HPMC),并分别对两种原代培养的HPMC采用相差倒置显微镜和免疫组化染色对培养的细胞进行鉴定.[结果]①两种方法均在体外原代培养成活,在相差倒置显微镜下观察细胞均呈典型的铺路石样外观,免疫组化显示两种方法培养的HPMC胞浆角蛋白、波形蛋白表达阳性,提示为腹膜间皮细胞.②经大网膜消化法获得的HPMC可传至第四代,保持原有铺路石样外观,PD引流液离心法获得的HPMC传代后生长缓慢,长期接受PD后HPMC可呈现成纤维细胞样改变.[结论]成功应用离心法和消化法进行HPMC原代培养,有助于PD研究体外实验的开展. 展开更多
关键词 腹膜透析 引流 离心法 腹膜/细胞学 间质细胞
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SIP1在TGF—β1诱导的人腹膜间皮细胞转分化的作用
6
作者 周循 凌光辉 +1 位作者 孙林 刘伏友 《医学临床研究》 CAS 2010年第7期1185-1189,共5页
【目的】阐明Smad作用蛋白1(Smad interacting proteinl,SIP1)与转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells)转分化(epithelial—mesenchymal tran... 【目的】阐明Smad作用蛋白1(Smad interacting proteinl,SIP1)与转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells)转分化(epithelial—mesenchymal transition,EMT)的关系,探讨TGF-β1可能通过调控SIP1引起腹膜间皮细胞EMT的机制。【方法】培养的人腹膜间皮细胞株(HMrSV5)随机分为对照组(TGF-β1刺激Oh)和TGF-β1刺激组,通过western blot及realtime PCR检测细胞中E-钙粘素(E-eadherin)、紧密连接蛋白(claudinl)、波形蛋白(vimentin)及纤维连接蛋白(fibronectin,FN)在不同时间点(12h,24h,48h,72h)的表达;并通过western blot及realtime PCR检测相应时间点细胞中SIP1的表达。【结果】5ng/ml TGF-β1刺激后,HMrsV5细胞E-cadherin、claudinl蛋白及mRNA表达水平呈时间依赖性降低(P〈0.01);vimentin、FN蛋白及mRNA表达水平呈时间依赖性升高(P〈0.01);SIP1蛋白及mRNA表达水平呈时间依赖性上调(P〈0.01)。【结论】TGF-β1可能通过上调HMrSV5细胞SIP1表达诱导HMrSV5细胞EMT及细胞外基质(extracellular matrix,ECM)沉积,将为进一步研究腹膜纤维化的分子机制提供新的靶点。 展开更多
关键词 腹膜/细胞学 间质细胞 转化生长因子Β
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辛伐他汀对高糖诱导下人腹膜间皮细胞TGF—β1和CTGF表达的影响
7
作者 何劲松 朱桂松 《医学临床研究》 CAS 2010年第1期67-69,共3页
【目的】探讨辛伐他汀对在高糖诱导下体外培养的人腹膜间皮细胞转化细胞因子-β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。【方法】胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞进行原代培养并传代;采用半定量反转录多聚酶链... 【目的】探讨辛伐他汀对在高糖诱导下体外培养的人腹膜间皮细胞转化细胞因子-β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。【方法】胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞进行原代培养并传代;采用半定量反转录多聚酶链反应法(Semi—QuantitativeRT—PCR)检测细胞内TGF-β1和CTGFmRNA表达;酶联免疫双抗夹心法(ELISA)检测细胞上清液中TGF—β1和CTGF蛋白质水平,细胞沉淀用BCA蛋白检测方法测定细胞蛋白质含量,用以校正ELISA结果。【结果】辛伐他汀能显著降低高糖所致的腹膜间皮细胞TGF-β1和CTGF蛋白质水平(TGF—β1,P〈0.05;CTGF,P〈0.01),并下调其mRNA表达(TGF-β1,P〈0.01;CTGF,P〈0.05),两者在蛋白质和基因水平均呈量效关系。【结论】辛伐他汀能抑制高糖诱导下腹膜间皮细胞致纤维化细胞生长因子TGF-β1和CTGF的过度表达。 展开更多
关键词 腹膜/细胞学 间质细胞 斯伐他汀 转化生长因子β
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川芎嗪对TNF-α诱导的人腹膜间皮细胞t-PA和PAI-1表达的影响 被引量:1
8
作者 田功 何劲松 《医学临床研究》 CAS 2014年第10期1955-1958,共4页
【目的】探讨川芎嗪对体外培养的人腹膜间皮细胞(HPMCs)在肿瘤坏死因子‐α(TNF‐α)诱导后组织型纤溶酶原激活物(t‐PA)和纤溶酶原激活物抑制因子‐1(PAI‐1)表达的影响。【方法】应用胰蛋白酶消化法分离HPMCs进行原代培养并... 【目的】探讨川芎嗪对体外培养的人腹膜间皮细胞(HPMCs)在肿瘤坏死因子‐α(TNF‐α)诱导后组织型纤溶酶原激活物(t‐PA)和纤溶酶原激活物抑制因子‐1(PAI‐1)表达的影响。【方法】应用胰蛋白酶消化法分离HPMCs进行原代培养并传代,分为5组(每组设3个样本):正常对照组(完全培养液)、单纯TNF‐α(1μg/L)诱导组和TNF‐α诱导加低、中、高剂量川芎嗪(10、20和40 mg/L)组。采用半定量反转录聚合酶链反应(RT‐PCR)法检测细胞内t‐PA和PAI‐1 mRNA表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中t‐PA和PAI‐1的蛋白质水平。【结果】与正常组比较,TNF‐α诱导组上清液中 t‐PA的含量减少和PAI‐1含量显著升高,且两组相比较差异有显著性( P <0.01);与TNF‐α诱导组比较,低、中、高剂量川芎嗪组上清液中t‐PA的含量增加,PA I‐1的含量显著降低,且两组相比较差异有显著性( P <0.05或 P <0.01)。与正常组比较,单纯TNF‐α诱导组 HPMCs t‐PA/β‐actin mRNA 下降(87&#177;5)%和 PAI‐1/β‐actin mRNA 上升(3.63&#177;0.12)倍( P <0.01);与TNF‐α诱导组相比,低、中、高剂量川芎嗪组t‐PA/β‐actin mRNA表达明显增加( P<0.05或 P <0.01)和PAI‐1/β‐actin mR‐NA表达明显减少( P<0.05,P<0.01),两者在蛋白质和基因水平均呈量效关系。【结论】川芎嗪干预后能促进 HPMCs在炎症状态下t‐PA生成增加并抑制PAI‐1的表达,从而减少纤维化的发生。 展开更多
关键词 川芎嗪/药理学 肿瘤坏死因子α 腹膜/细胞学 组织型纤溶酶原激活物 纤溶酶原激活物抑制物1
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脂多糖通过NF-κB信号途径上调大鼠腹膜间皮细胞表达IP-10 被引量:1
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作者 张云芳 冯俊霞 +2 位作者 赵世莉 徐嘉琪 李红艳 《中国医师杂志》 CAS 2018年第7期990-994,998,共6页
目的观察脂多糖作用下大鼠腹膜间皮细胞表达干扰素诱导蛋白(IP)-10的情况及核因子(NF)KB信号通路在其中的作用。方法分离及培养大鼠腹膜间皮细胞。于脂多糖不同浓度(0、10、100、1 000、10 000 ng/ml)作用3 h及脂多糖(100 ng/ml)作用不... 目的观察脂多糖作用下大鼠腹膜间皮细胞表达干扰素诱导蛋白(IP)-10的情况及核因子(NF)KB信号通路在其中的作用。方法分离及培养大鼠腹膜间皮细胞。于脂多糖不同浓度(0、10、100、1 000、10 000 ng/ml)作用3 h及脂多糖(100 ng/ml)作用不同时间点(0、1、3、6、12、24、48 h)收集细胞;脂多糖(100 ng/ml)或BAY 11-7085(一种IκBα的磷酸化抑制剂)不同浓度(5μmol/L)预处理2 h加脂多糖,作用3 h后收集细胞;采用RT-PCR方法检测IP-10 mRNA表达。采用蛋白印迹检测NF-κB p65(p65)蛋白表达,采用ELISA方法测定IP-10蛋白的表达。结果与常规培养基对照组相比,10 ng/ml脂多糖组IP-10 mRNA表达显著升高(P <0.05), 1 000 ng/ml脂多糖组最高,但与10 ng/ml脂多糖组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。脂多糖(100 ng/ml)作用下,IP-10 mRNA表达从1 h开始升高,3 h达到高峰,之后逐渐降低。常规培养的大鼠腹膜间皮细胞结构性表达p-p65蛋白;加入脂多糖后,p-p65蛋白表达显著增加,其中30 min至1 h表达最强,之后逐渐降低,至2 h仍显著高于常规培养组(P <0. 05)。加入5μmol/L BAY11-7085后,脂多糖诱导的IP-10基因和蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论脂多糖以时间依赖和浓度依赖模式上调IP-10的表达。NF-κB信号途径参与调节脂多糖诱导的大鼠腹膜间皮细胞IP-10的表达。 展开更多
关键词 脂多糖类/药理学 腹膜/细胞学 上皮/药物作用 趋化因子CXCLIO/代谢 NF-κB 大鼠
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不同浓度钙对人腹膜间皮细胞生长及其分泌TNF—α的影响
10
作者 李岩 李军 彭佑铭 《中国医师杂志》 CAS 2011年第6期746-749,共4页
目的观察不同浓度钙对体外培养的人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)生长及其分泌肿瘤坏死因子-α【(TNF.仅)的影响。方法采用人腹膜间皮细胞株体外培养,用乳酸脱氢酶(LDH)和四甲基偶氮唑盐比色法(MT... 目的观察不同浓度钙对体外培养的人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)生长及其分泌肿瘤坏死因子-α【(TNF.仅)的影响。方法采用人腹膜间皮细胞株体外培养,用乳酸脱氢酶(LDH)和四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)评估细胞的活力和增殖能力;采用免疫细胞化学法来检测HPMCs胞浆TNF-α的表达。结果不同浓度钙均可促进HPMCs增殖(P〈0.01),而以1.25mmol/L。(0.5098±0.016,0.67634±0.048)及1.0mmol/L(0.4853±0.016,0.6678±0.076)钙作用最明显,且呈时间依赖关系。不同浓度钙组与对照组(16.08±1.41,17.27±1.63)相比均可明显升高LDH水平,其中以1.25mmol/L钙的LDH水平最低(17.78±1.18,23.60±1.39,P〈0.01),且呈时间依赖关系。2.0mmol/L[(42.614-3.29)%]和1.75mmol/L[(33.32±1.88)%]钙可明显上调TNF-α的表达(P〈0.01)。结论高浓度钙能损伤HPMCs、促进TNF-α分泌,其在腹膜硬化的发生中可能起了一定作用;而低钙可能有保护腹膜,并在一定程度上有预防腹膜纤维化的作用。 展开更多
关键词 钙/投药和剂量 腹膜/细胞学/代谢 间质细胞/药物作用 肿瘤坏死因子∥代谢
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Cytoreduction and hyperthermic intraperitoneal chemotherapy in the treatment of peritoneal carcinomatosis from pseudomixoma peritonei 被引量:13
11
作者 Tommaso Cioppa Marco Vaira +3 位作者 Camilla Bing Silvia D'Amico Alessandro Bruscino Michele De Simone 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2008年第44期6817-6823,共7页
AIM: To investigate the most important aspects of hyperthermic intraperitoneal chemotherapy (HIPEC) that has been accepted as the standard treatment for pseudomyxoma peritonei (PMP), with special regard to morbid... AIM: To investigate the most important aspects of hyperthermic intraperitoneal chemotherapy (HIPEC) that has been accepted as the standard treatment for pseudomyxoma peritonei (PMP), with special regard to morbidity, overall survival (OS) and disease free survival (DFS) over 10 years. METHODS: Fifty-three patients affected by PMP underwent cytoreduction (CCR) and HIPEC with a "semi-closed" abdomen technique in our institution. The peritonectomy procedure and completeness of CCR were classified according to Sugarbaker criteria. Preoperative evaluation always included thoracic and abdominal CT scan to stage peritoneal disease and exclude distant metastases. Fifty-one patients in our series were treated with a protocol based on administration of cisplatinum 100 mg/m^2 plus mitomycin C 16 mg/m^2, at a temperature of 41.5℃ for 60 min. Anastomoses were always performed at the end of HIPEC. The mean duration of surgery was 12 h including HIPEC. Continuous monitoring of hepatic and renal functions and hydroelectrolytic balance was performed in the postoperative period. RESULTS: Twenty-four patients presented with postoperative complications: surgical morbidity was observed in 16 patients and 6 patients were reoperated. All complications were successfully treated and no postoperative deaths were observed. Risk factors for postoperative morbidity were considered to be gender, age, body surface, duration of surgery,Peritoneal Cancer Index (PCI) and tumor residual value (CC score). No statistically significant correlation was found during the multivariate analysis: only the CC score was statistically significant. The OS in our experience was 81.8%, with a DFS of 80% at 5 years and of 70% at 10 years. CONCLUSION: In our experience, even if HIPEC combined with cytoreductive surgery involves a high risk of morbidity, postoperative complications can be resolved favorably in most cases with correct patient selection and adequate postoperative care, thus minimizing mortality. The association of CCR and HIPEC can be considered as the standard treatment for PNP. The OS and DFS results confirm the validity of this combined approach for the treatment of this rare neoplasm. The impact of preoperative chemotherapy on OS, in our opinion, is due to a major aggressiveness of tumors in treated patients. 展开更多
关键词 PERITONECTOMY Pseudomyxoma peritonei Hyperthermic perfusion Hyperthermic intraperitoneal chemotherapy Peritoneal carcinomatosis Locoregional treatment
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