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蛋鸡Ⅰ亚群禽腺病毒与大肠杆菌混合感染的诊断 被引量：1
1
作者 王志昌 《北方牧业》 2023年第14期38-38,共1页
腺病毒科目前被分为哺乳动物腺病毒属和禽腺病毒属,其中禽腺病毒属包含14个与禽类有关的腺病毒种,它们具有共同的抗原性。根据群特异性抗原的差异,禽腺病毒属被分为3个亚群,Ⅰ亚群禽腺病毒主要引起鸡包涵体肝炎、心包积水综合征和肌胃... 腺病毒科目前被分为哺乳动物腺病毒属和禽腺病毒属,其中禽腺病毒属包含14个与禽类有关的腺病毒种,它们具有共同的抗原性。根据群特异性抗原的差异,禽腺病毒属被分为3个亚群,Ⅰ亚群禽腺病毒主要引起鸡包涵体肝炎、心包积水综合征和肌胃糜烂症,Ⅱ亚群禽腺病毒主要引起火鸡出血性肠炎,Ⅲ亚群禽腺病毒主要引起鸡减蛋综合征。根据六邻体基因和血清交叉中和试验,已分离的I亚群禽腺病毒可进一步分为禽腺病毒A、B、C、D、E 5个种,包含12个血清型(血清1、2、3、4、5、6、7、8a、8b、9、10、11型)。其中,血清4型Ⅰ亚群禽腺病毒感染是我国家禽中流行的优势血清型。 展开更多
关键词 交叉中和试验 禽腺病毒 出血性肠炎 鸡包涵体肝炎 优势血清型 混合感染 群特异性抗原 腺病毒科
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HCVC基因腺病毒表达载体骨架质粒pAd.HCV-C的构建、鉴定及表达 被引量：15
2
作者 郝春秋 周永兴 +3 位作者 冯志华 李谨革 贾战生 王平忠 《世界华人消化杂志》 CAS 2001年第6期635-639,共5页
目的构建能表达HVC基因的腺病毒表达载体的重组骨架质粒,为进一步包装能高效表达HCVC基因的腺病毒载体做准备。方法用分别含有BgⅡ及HindⅢ酶切位点的HCVC区基因上、下游引物,以含有HCV H株基因序列的质粒pBRTM/HCV1-3011为模板,通过PC... 目的构建能表达HVC基因的腺病毒表达载体的重组骨架质粒,为进一步包装能高效表达HCVC基因的腺病毒载体做准备。方法用分别含有BgⅡ及HindⅢ酶切位点的HCVC区基因上、下游引物,以含有HCV H株基因序列的质粒pBRTM/HCV1-3011为模板,通过PCR扩增获得HCVC区基因片段,基因片段回收后,以BglⅡ及HindⅢ双酶切,定向插入到腺病毒骨架质粒pAd,CMV-Link.1中CMV启动子下游BglⅡ与HindⅢ位点之间,获得重组表达质粒pAd.HCV-C通过BglⅡ/HindⅢ双酶切、PCR及插入片段序列测定对质粒进行了鉴定,以抗HCVC单克隆抗体为一抗,利用间接免疫荧光法检测了pAd.HCV-C在人肝癌细胞7721中的瞬时表达。结果酶切、PCR及测序鉴定证实,pAd,HCV-C插入片段为HCVC区基因片段,免疫荧光法检测表明其可以在7721细胞中瞬时表达。结论构建的质粒pAd.HCV-C可以在7721细胞中瞬时表达HCVC区基因,为包装表达HCVC基因的腺病毒载体奠定了基础。 展开更多
关键词 C型肝炎样病毒属 遗传学 病毒基因 腺病毒科 遗传载体
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1146例腺病毒抗原检测阳性呼吸道感染住院患儿病例分析 被引量：5
3
作者 舒畅 刘友学 +3 位作者 叶孟良 王莹 刘爱良 黄英 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第19期2201-2203,共3页
目的分析近两年重庆医科大学儿童医院住院患儿腺病毒(ADV)感染情况。方法对该院2009年6月至2011年12月呼吸道感染住院1 146例患儿、经鼻咽分泌物免疫荧光检测显示腺病毒抗原阳性者进行病例分析。结果 (1)腺病毒抗原检测阳性呼吸道感染... 目的分析近两年重庆医科大学儿童医院住院患儿腺病毒(ADV)感染情况。方法对该院2009年6月至2011年12月呼吸道感染住院1 146例患儿、经鼻咽分泌物免疫荧光检测显示腺病毒抗原阳性者进行病例分析。结果 (1)腺病毒抗原检测阳性呼吸道感染住院患儿共1 146例,其中,男739例,女407例,年龄呈偏态分布,中值年龄为1岁。(2)病例来源于重庆及周边地区。(3)发现自2010年12月鼻咽分泌物中检出腺病毒抗原阳性病例逐渐增多,2011年5月达高峰(最多128例/个月),2011年8月后下降至普通水平。(4)2010年12月开始腺病毒抗原阳性住院患儿中重症肺炎的百分比明显增高,到2011年2月达高峰(40.30%),其后缓慢下降,到2011年9月降至正常水平。(5)2010年12月至2011年7月腺病毒肺炎预后不良率(包括死亡和病重放弃治疗)比较2009年6月至2010年11月显著增高(χ2=6.75>3.84,P<0.05)。(6)重症组的平均(1.28±0.09)岁,非重症组的平均(2.18±0.08)岁,两组有显著性差异(P<0.01);重症组合并先天性心脏病的比例高于非重症患组(χ2=17.64>3.84,P<0.05),合并先天性气道发育异常的比例也高于非重症组(χ2=26.44>3.84,P<0.05)。结论年龄小、合并先天性心血管发育畸形或气道发育畸形是患儿发生重症感染的危险因素。 展开更多
关键词 腺病毒科 感染 儿童 病例分析
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点滴性银屑病患者咽拭子腺病毒的相关检测 被引量：6
4
作者 张理涛 张铁楠 +6 位作者 徐丽敏 张峻岭 聂振华 孙晓慧 毛舒和 潘小钢 蔚志仁 《天津医药》 CAS 北大核心 2006年第12期836-837,I0001,共3页
目的:探讨点滴性银屑病患者是否存在腺病毒的近期感染。方法:应用病毒培养、PCR方法对44例点滴性银屑病患者咽拭子标本进行腺病毒相关检测,并对PCR阳性结果进行测序分析。结果:患者咽拭子腺病毒培养阳性率为13.6%,腺病毒DNAPCR检测阳性... 目的:探讨点滴性银屑病患者是否存在腺病毒的近期感染。方法:应用病毒培养、PCR方法对44例点滴性银屑病患者咽拭子标本进行腺病毒相关检测,并对PCR阳性结果进行测序分析。结果:患者咽拭子腺病毒培养阳性率为13.6%,腺病毒DNAPCR检测阳性率为18.2%,高于健康对照组(P<0.05)。DNA测序结果表明腺病毒种类主要为3型和7型,与流行病学分型一致。结论:腺病毒感染可能和点滴性银屑病的发病有关。人群中存在人类腺病毒的隐伏感染。 展开更多
关键词 银屑病 腺病毒科 聚合酶链反应 咽
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LR重组法构建重组腺病毒rAd5-Vpr 被引量：6
5
作者 冯学泉 徐军 +2 位作者 王金环 徐新女 王淑杰 《天津医药》 CAS 北大核心 2008年第11期840-842,共3页
目的:构建携带HIV-1Vpr基因的重组腺病毒。方法:采用限制性内切酶消化和T4DNA连接酶连接的方法,将Vpr基因克隆至腺病毒穿梭质粒pTrack-C上,然后通过重组穿梭质粒pTrack-C-Vpr和腺病毒骨架质粒pAdeno体外LR位点特异性重组的方法,将Vpr基... 目的:构建携带HIV-1Vpr基因的重组腺病毒。方法:采用限制性内切酶消化和T4DNA连接酶连接的方法,将Vpr基因克隆至腺病毒穿梭质粒pTrack-C上,然后通过重组穿梭质粒pTrack-C-Vpr和腺病毒骨架质粒pAdeno体外LR位点特异性重组的方法,将Vpr基因转移至腺病毒骨架质粒pAdeno上,最后重组骨架质粒pAdeno-Vpr鉴定正确后经PacI酶切,转染HEK293细胞,包装成重组腺病毒rAd5-Vpr。同时在HEK293细胞中进行病毒扩增,利用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,用微量全细胞病变法检测病毒滴度。结果:PCR鉴定重组腺病毒rAd5-Vpr构建成功;扩增后检测病毒滴度约为5×108PFU/mL。结论:应用LR重组法能成功构建携带HIV-1 Vpr基因的重组腺病毒,扩增后滴度能满足实验需要,为进一步相关研究的开展奠定了基础。 展开更多
关键词 腺病毒科 质粒 聚合酶链反应 HIV
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IRE1α重组腺病毒载体对ATDC5软骨干细胞增殖及凋亡的影响 被引量：5
6
作者 李祥柱 张鹏 +3 位作者 韩晓凤 李美玲 夏飞 郭风劲 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期639-643,共5页
目的构建重组人IRE1α腺病毒,观察其对软骨干细胞ATDC5增殖与凋亡的影响。方法应用pAdEasyTM腺病毒载体系统构建包含全长IRE1α基因和RNase+Kinase核心结构域的重组穿梭质粒pAdTrack-IRE1α、pAdTrack-R+K,通过电转法分别与腺病毒骨架质... 目的构建重组人IRE1α腺病毒,观察其对软骨干细胞ATDC5增殖与凋亡的影响。方法应用pAdEasyTM腺病毒载体系统构建包含全长IRE1α基因和RNase+Kinase核心结构域的重组穿梭质粒pAdTrack-IRE1α、pAdTrack-R+K,通过电转法分别与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组,获得重组腺病毒pAd-IRE1α、pAd-R+K。随后在HEK-293细胞中包装并扩增重组腺病毒颗粒Ad-IRE1α、Ad-R+K。用直接PCR法鉴定重组腺病毒,后者体外感染软骨干细胞ATDC5,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)感染效率,并应用流式细胞仪分别检测在内质网应激(ERS)和非ERS状态时重组腺病毒对ATDC5细胞增殖和凋亡的影响。结果酶切鉴定和PCR证实成功构建了重组腺病毒质粒pAd-IRE1α、pAd-R+K。流式细胞仪检测结果显示,在ERS状态时,重组腺病毒质粒Ad-IRE1α、Ad-R+K感染后ATDC5细胞G1期比例明显降低,S期细胞比例明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显增高(P<0.05)。结论含IRE1α基因的重组腺病毒感染可促进ATDC5细胞的增殖和凋亡。 展开更多
关键词 IRE1α 腺病毒科 ATDC5细胞 细胞增殖 细胞凋亡
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80例成人腺病毒B组55型感染临床分析 被引量：32
7
作者 谢杨新 涂波 +6 位作者 陈威巍 周志平 聂为民 王传力 秦恩强 李文刚 赵敏 《传染病信息》 2013年第1期45-47,共3页
目的对80例成人腺病毒B组55型感染者的资料进行总结,以进一步指导临床诊治。方法主要采用描述性流行病学方法对患者资料进行回顾性分析。结果本组患者多为18～29岁的青年,呈人群聚集分布,有接触史,主要症状包括发热(100%)、咳嗽(92.5%)... 目的对80例成人腺病毒B组55型感染者的资料进行总结,以进一步指导临床诊治。方法主要采用描述性流行病学方法对患者资料进行回顾性分析。结果本组患者多为18～29岁的青年,呈人群聚集分布,有接触史,主要症状包括发热(100%)、咳嗽(92.5%)、咽痛(88.8%)、咳痰(85.0%)和畏寒(78.8%)。最常见体征为咽部充血(88.8%)。患者外周血白细胞计数正常或偏低,多数中性粒细胞比例升高。结论成人腺病毒B组55型感染可引起暴发流行,以发热、咳嗽、咽痛和咳痰为主要表现,临床症状轻,预后良好。 展开更多
关键词 腺病毒科感染 传染病 流感 人 诊断
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腺病毒载体介导四环素调控的DT/VEGF体系的基因治疗 被引量：11
8
作者 潘欣 潘卫 +3 位作者 柯重伟 张斌 曹广文 戚中田 《世界华人消化杂志》 CAS 2000年第10期1121-1126,共6页
目的研究重组腺病毒在四环素调控下传递 DT_(390)-VEGF_(165)及DT_(390)-VEGF_(exon7)融合基因治疗肝癌的可行性.方法构建4种四环素 tet-off 调控的 DT_(39)-VEGF_(165)或 DT_(390)-VEGF_(exon7)融合基因重组腺病毒载体,用脂质体介导包... 目的研究重组腺病毒在四环素调控下传递 DT_(390)-VEGF_(165)及DT_(390)-VEGF_(exon7)融合基因治疗肝癌的可行性.方法构建4种四环素 tet-off 调控的 DT_(39)-VEGF_(165)或 DT_(390)-VEGF_(exon7)融合基因重组腺病毒载体,用脂质体介导包装出4种重组腺病毒,分别感染肝细胞癌 HepG2细胞,在没有四环素的情况下观察肝癌细胞的形态变化,用2种粗制重组腺病毒治疗荷肝癌裸鼠,用免疫组化鉴定融合基因的表达.结果在培养液中加入 3mg·L^(-1)的四环素可包装出携带毒素融合基因的重组腺病毒,用噬斑分析法测定重组腺病毒滴度均为1×10^(10)pfu·L^(-1);粗制重组腺病毒感染 HepG2细胞8h 后换以无四环素的正常培养液,发现72h 后 HepG2细胞发生病变,细胞死亡率达95%;感染细胞经白喉抗毒素-FITC 免疫荧光抗体染色均呈现黄绿色荧光;用粗制重组腺病毒AdCA13-tTA-TRE-DT_(390)-VEGF_(165)和 AdCA13-tTA-VEGF_(165)-DT_(390)-TRE 注射肝癌瘤体可观察到瘤体生长明显得到抑制,AFP 值显著下调,免疫组化结果显示融合基因在瘤体内得到了表达.结论重组腺病毒可以提高转基因效率. 展开更多
关键词 腺病毒科 肝肿瘤 基因治疗
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BMP-2和EGFP重组腺病毒体外转染兔骨髓间充质干细胞的研究 被引量：5
9
作者 陈佳滨 李强 +3 位作者 茹嘉 武成聪 宁寅宽 蔡伟良 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期193-195,199,共4页
目的体外培养兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)并观察其生物学特性,通过腺病毒介导人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)和EGFP基因转染兔BMSCs后,观察BMP-2和EGFP的表达情况。方法通过密度梯度离心联合贴壁法,分离、培养兔BMSCs,流式细胞仪检测细胞周... 目的体外培养兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)并观察其生物学特性,通过腺病毒介导人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)和EGFP基因转染兔BMSCs后,观察BMP-2和EGFP的表达情况。方法通过密度梯度离心联合贴壁法,分离、培养兔BMSCs,流式细胞仪检测细胞周期和表面标记,体外诱导兔BMSCs向成骨细胞方向分化。转染后,免疫细胞化学染色及蛋白质印迹法(Western blot)检测外源基因的表达。结果兔BMSCs周期约有56.84%处于G1期;CD44表达阳性,CD45表达阴性;经成骨细胞诱导后,Ⅰ型胶原免疫组织化学染色阳性,茜素红染色阳性。转染后,Western blot及免疫细胞化学染色显示细胞内BMP-2有较强的表达。结论成功分离、培养兔BMSCs,并鉴定其具有成骨分化能力;构建的Ad-BMP-2/EGFP可高效转染兔BMSCs,并能稳定表达BMP-2目的基因。 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白质类 腺病毒科 骨髓 充质干细胞 基因 转染
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白细胞介素18重组腺病毒对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响 被引量：6
10
作者 姚航平 张立煌 +1 位作者 冷建杭 曹雪涛 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2001年第6期248-251,共4页
目的 :研究白细胞介素 1 8重组腺病毒 ( Adms IL -1 8)对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响 ,并对其机理作一探讨。方法 :重组腺病毒腹腔注射 BAL B/ C小鼠 ,每周注射 1次 ,共 2次。 2周后制备腹腔巨噬细胞 ,经 L PS刺激 ,采用 EL ISA法... 目的 :研究白细胞介素 1 8重组腺病毒 ( Adms IL -1 8)对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响 ,并对其机理作一探讨。方法 :重组腺病毒腹腔注射 BAL B/ C小鼠 ,每周注射 1次 ,共 2次。 2周后制备腹腔巨噬细胞 ,经 L PS刺激 ,采用 EL ISA法检测培养上清 m IL-1 8、m IL-1 β、m TNFα的水平 ;酶还原法检测 NO的含量 ;L DH释放法检测巨噬细胞的杀伤活性。结果 :Adms IL -1 8注射后 ,小鼠腹腔巨噬细胞高效表达 m IL-1 8,同时巨噬细胞分泌 m IL-1 β、m TNFα、NO水平明显增加 ,并增强巨噬细胞的杀伤活性 ,与其它对照组比较均 P<0 .0 1。结论 :小鼠腹腔注射 Adms IL-1 8,能显著增加巨噬细胞表达 m IL -1 8、m IL -1β、m TNFα、NO,增强巨噬细胞的杀伤活性。 展开更多
关键词 白细胞介素18 巨噬细胞 重组腺病毒科 细胞毒作用 细胞因子 小鼠
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人血管生成素-1和血管内皮生长因子VEGF_(165)腺病毒载体构建 被引量：11
11
作者 周磊 张馥敏 +7 位作者 杨志建 马文珠 陆丽 丁兆丰 丁必森 高翔 哈团柱 李传富 《中国临床康复》 CSCD 2003年第3期434-436,共3页
目的:克隆人血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor165,VEGF165)和血管生成素-1(angiopoietin-1)的全长编码基因,构建表达该基因的复制缺陷型腺病毒载体Ad-Ang1和Ad-VEGF165。方法:通过RT-PCR方法克隆人VEGF165和Ang1全长... 目的:克隆人血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor165,VEGF165)和血管生成素-1(angiopoietin-1)的全长编码基因,构建表达该基因的复制缺陷型腺病毒载体Ad-Ang1和Ad-VEGF165。方法:通过RT-PCR方法克隆人VEGF165和Ang1全长编码基因。Ad-VEGF165和Ad-Ang1通过同源重组方法构建。将Ad-VEGF165和/或Ad-Ang1转染大鼠胚胎心脏成肌细胞(H9C2)24h后,Westernblot方法分析VEGF165和Ang1蛋白表达量;核酸电泳分析细胞基因组降解检测凋亡水平。结果:测序显示VEGF165序列与基因库序列相同;Ang1序列与基因库序列存在一个碱基的差异,但编码氨基酸无改变。VEGF165和Ang1蛋白表达分别为对照组的11.65倍和3.53倍。Ad-VEGF165和/或Ad-Ang1转染后的H9C2细胞对过氧化氢诱导的细胞凋亡具有明显的抵抗能力。结论:所构建的Ad-Ang1和Ad-VEGF165能有效转染心脏成肌细胞,表达出功能性目的蛋白,具有抗细胞凋亡作用。 展开更多
关键词 血管生成因子 内皮生长因子 碱性成纤维细胞生长因子 腺病毒科 重组 遗传 缺血性心脏病 治疗
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重组腺病毒介导的HBV核心蛋白和hEDN融合蛋白基因在小鼠肝脏的表达 被引量：6
12
作者 赵亚 刘军 +3 位作者 宫卫东 李英辉 丁劲 薛采芳 《第四军医大学学报》 北大核心 2004年第12期1073-1076,共4页
目的 :使HBc hEDN基因重组腺病毒载体 (AdHBc hEDN)及其对照载体AdhEDN在小鼠肝脏获得表达 .方法 :将体外扩增获得的高滴度AdHBc hEDN和AdhEDN经尾静脉注射感染小鼠 ,并用免疫组化的方法检测AdHBc hEDN和Ad hEDN在小鼠肝脏中的表达 .结... 目的 :使HBc hEDN基因重组腺病毒载体 (AdHBc hEDN)及其对照载体AdhEDN在小鼠肝脏获得表达 .方法 :将体外扩增获得的高滴度AdHBc hEDN和AdhEDN经尾静脉注射感染小鼠 ,并用免疫组化的方法检测AdHBc hEDN和Ad hEDN在小鼠肝脏中的表达 .结果 :重组腺病毒AdHBc hEDN和AdhEDN在小鼠肝脏均获得了阳性表达 .结论 :HBc 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 重组融合蛋白质类 腺病毒科 重组 遗传 免疫组织化学
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腺病毒介导XAF1基因诱导人肝癌细胞株SMMC7721凋亡的实验研究 被引量：8
13
作者 朱黎明 涂水平 +2 位作者 姚玮艳 乔敏敏 江石湖 《胃肠病学》 2009年第2期74-78,共5页
背景：X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）相关因子1（XAF1）是新近鉴定的肿瘤抑制基因,在许多人类恶性肿瘤中低表达甚至不表达。目的：研究Ad5/F35腺病毒介导XAF1基因诱导人肝癌细胞株SMMC7721凋亡的作用及其可能机制。方法：构建重组腺病毒Ad5... 背景：X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）相关因子1（XAF1）是新近鉴定的肿瘤抑制基因,在许多人类恶性肿瘤中低表达甚至不表达。目的：研究Ad5/F35腺病毒介导XAF1基因诱导人肝癌细胞株SMMC7721凋亡的作用及其可能机制。方法：构建重组腺病毒Ad5/F35-XAF1、对照病毒Ad5/F35-Null和报告病毒Ad5/F35-增强型绿色荧光蛋白（EGFP）,分别按不同感染复数（MOI）在同一作用时间点感染人肝癌细胞株SMMC7721。以荧光显微镜和流式细胞仪检测Ad5/F35-EGFP的感染效率;分别以逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法检测XAF1mRNA和蛋白表达;以甲基噻唑基四唑（MTT）法检测细胞增殖率;以Annexin V-FITC/PI双染法和原位末端标记TUNEL法检测细胞凋亡率;以蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-8和caspase-9的表达。结果：Ad5/F35-EGFP感染48h,MOI为2.0时,92%以上的SMMC7721细胞表达绿色荧光蛋白。Ad5/F35-XAF1感染48h后,SMMC7721细胞中XAF1 mRNA和蛋白表达增高,细胞增殖受到抑制,细胞凋亡剂量依赖性地增多,并伴随凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-8和caspase-9的裂解。结论：重组腺病毒Ad5/F35-XAF1在人肝癌细胞株SMMC7721中具有很强的感染效率,可促进XAF1基因表达,且能明显抑制人肝癌细胞增殖和诱导凋亡,此作用可能与XAF1激活了内、外源性凋亡通路有关。 展开更多
关键词 X连锁凋亡抑制蛋白质 腺病毒科 肝肿瘤 细胞凋亡
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121例成人55型腺病毒肺炎胸部CT影像分析 被引量：20
14
作者 涂波 谢杨新 +5 位作者 张昕 陈威巍 周志平 秦恩强 聂为民 赵敏 《传染病信息》 2014年第1期49-51,共3页
目的回顾性分析121例成人55型腺病毒肺炎的胸部CT影像学表现,为该病的影像学诊断提供参考。方法总结2012年2月某单位暴发的55型腺病毒感染疫情,选择其中121例经肺部CT确诊的肺炎患者为研究对象,分析其临床表现及胸部CT特点。结果 121例... 目的回顾性分析121例成人55型腺病毒肺炎的胸部CT影像学表现,为该病的影像学诊断提供参考。方法总结2012年2月某单位暴发的55型腺病毒感染疫情,选择其中121例经肺部CT确诊的肺炎患者为研究对象,分析其临床表现及胸部CT特点。结果 121例体温为(39.22±0.77)℃,热程为(7.12±2.23)d,所有患者均有咳嗽、咳痰、咽痛及咽充血,其中87.60%扁桃体肿大,64.46%颈部淋巴结肿大。90例表现为肺部单叶或多叶段少许渗出性病变,22例为多叶段片状团簇状影,8例为肺部单叶条索状影,1例为支气管扩张伴感染。单肺叶病变组热程短于多肺叶病变组(P<0.05),但2组间最高体温、白细胞计数、中性粒细胞比例及CRP差异无统计学意义。结论成人55型腺病毒感染与普通上呼吸道病毒感染临床表现类似,胸部CT提示多数患者存在肺部影像学异常,肺外表现较少;多肺叶受累者并未表现出明显的重症倾向。 展开更多
关键词 腺病毒科感染 肺炎 放射摄影术
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腺病毒CNHK200-hEndostatin质量控制方法的研究 被引量：3
15
作者 薛惠斌 施军霞 +2 位作者 朱文川 陈敏 钱其军 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1011-1014,共4页
目的:建立基因-病毒治疗系统CNHK200-hEndostatin的质量控制方法。方法:分别建立腺病毒蛋白鉴定、腺病毒基因组鉴定、人内皮抑素(hEndostatin)基因鉴定、人内皮抑素表达量检测、腺病毒颗粒数测定、腺病毒滴度和比滴度测定、纯度测定、... 目的:建立基因-病毒治疗系统CNHK200-hEndostatin的质量控制方法。方法:分别建立腺病毒蛋白鉴定、腺病毒基因组鉴定、人内皮抑素(hEndostatin)基因鉴定、人内皮抑素表达量检测、腺病毒颗粒数测定、腺病毒滴度和比滴度测定、纯度测定、野生型腺病毒(AdWT)检测、残余宿主DNA含量检测和牛血清蛋白残余量检测等腺病毒质量控制项目的方法,并对纯化的腺病毒样品进行初步检测。结果:建立用SDS-PAGE方法对腺病毒进行蛋白鉴定,用限制性内切酶图谱分析的方法对腺病毒进行基因组鉴定,用PCR方法鉴定人内皮抑素基因,用ELISA方法检测人内皮抑素表达量,用D260法和HPLC方法进行腺病毒颗粒数测定,用D260/D280方法和HPLC方法进行纯度检测,用PCR方法进行野生型腺病毒检测,用杂交方法进行残余宿主DNA含量检测,用反向间接血凝实验测定牛血清蛋白残余量。结果表明建立的方法可有效应用于腺病毒样品检测,并且我们制备的纯化腺病毒样品均符合要求。结论:基本建立了腺病毒CNHK200-hEndostatin的质量控制方法,改良的应用HPLC对腺病毒颗粒数进行定量检测的方法准确迅速,优于传统方法。应用建立的方法对纯化的腺病毒样品进行检测,基本符合临床应用要求。 展开更多
关键词 腺病毒科 内皮抑素类 基因疗法 质量控制
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人乳头瘤病毒E6E7基因重组腺病毒的构建及鉴定 被引量：6
16
作者 潘巍巍 成海恩 +3 位作者 赖国旗 易发平 马永平 宋方洲 《第四军医大学学报》 北大核心 2006年第24期2220-2222,共3页
目的:利用AdEasy系统构建人乳头瘤-16(HPV-16)E6E7基因重组腺病毒,并通过WesternBlot方法检测E6E7蛋白的表达.方法:将质粒pET-32a(+)-E6E7扩增、酶切获得E6E7片段插入腺病毒穿梭载体质粒pAdTrack-CMV的巨细胞病毒(CMV)启动子下游,构建... 目的:利用AdEasy系统构建人乳头瘤-16(HPV-16)E6E7基因重组腺病毒,并通过WesternBlot方法检测E6E7蛋白的表达.方法:将质粒pET-32a(+)-E6E7扩增、酶切获得E6E7片段插入腺病毒穿梭载体质粒pAdTrack-CMV的巨细胞病毒(CMV)启动子下游,构建重组穿梭载体pAdTrack-CMV-E6E7,线性化后与骨架载体AdEasy-1在细菌BJ5183内同源重组得到腺病毒质粒pAd-E6E7,经人胚肾293细胞包装后得到复制缺陷型重组腺病毒Ad-E6E7;用包装后的病毒上清再次感染293细胞,提取细胞中的蛋白,通过WesternBlot方法检测E6E7蛋白的表达.结果:连接、重组后通过酶切和测序法筛选出pAd-E6E7;经人胚肾293细胞包装,3d后观察到绿色荧光蛋白(GFP)明显表达,氯化铯梯度离心纯化最终获得6.9×1010pfu/L滴度的重组病毒;用该滴度的Ad-E6E7重新感染人胚肾293细胞3d后,提取细胞蛋白,WesternBlot检测,E6E7有明显表达.结论:利用新型腺病毒载体AdEasy系统可在短期内制备同时表达GFP和E6E7的重组腺病毒AdE6E7. 展开更多
关键词 人类乳头状瘤病毒 人 腺病毒科
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糖皮质激素及NAC对腺病毒E1A蛋白上调IL-8及ICAM-1的抑制作用 被引量：4
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作者 郭园园 冉丕鑫 +3 位作者 张锦 郑西卫 李冰 陈娟 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期235-240,共6页
目的探讨腺病毒E1A蛋白在致炎因素TNF-α作用下对人肺腺癌细胞(A549)炎症因子IL-8和ICAM-1表达的影响以及地塞米松(DXM)和N-乙酰半胱氨酸(NAC)的干预作用。方法构建稳定表达E1A蛋白的A549细胞系(E1A+组)及对照质粒转染细胞系(E1A-组)。... 目的探讨腺病毒E1A蛋白在致炎因素TNF-α作用下对人肺腺癌细胞(A549)炎症因子IL-8和ICAM-1表达的影响以及地塞米松(DXM)和N-乙酰半胱氨酸(NAC)的干预作用。方法构建稳定表达E1A蛋白的A549细胞系(E1A+组)及对照质粒转染细胞系(E1A-组)。用TNF-α刺激、DXM以及NAC干预细胞,用ELISA检测炎症因子IL-8蛋白的表达,流式细胞术检测ICAM-1的表达。结果E1A+组在10μg.L-1的TNF-α作用前后细胞IL-8蛋白浓度分别为(48.49±0.27)ng.L-1和(22 841.75±12.92)ng.L-1,明显高于E1A-组作用前的(1.67±0.07)ng.L-1和作用后的(3 576.04±3.20)ng.L-1,两组相比差异有统计学意义(P<0.01)。与TNF-α单独作用组相比,DXM和NAC预作用细胞可明显降低TNF-α诱导下IL-8的高表达,差异有统计学意义(P<0.01)。E1A+组在10μg.L-1的TNF-α作用前后细胞ICAM-1蛋白浓度(荧光强度)分别为17.12±3.32和35.12±3.19,均高于E1A-组作用前0.59±0.09和作用后29.72±3.32,两组相比差异有统计学意义(P<0.01)。与TNF-α单独作用组相比,DXM和NAC预作用细胞可明显降低TNF-α诱导的ICAM-1的表达,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 E1A蛋白能够增加TNF-α诱导下的IL-8和ICAM-1蛋白的表达。DXM和NAC能够明显拮抗TNF-α诱导下的IL-8和ICAM-1的蛋白表达,具有较强的抗炎作用。腺病毒E1A蛋白对NAC及DXM的抗炎作用无明显拮抗作用。 展开更多
关键词 腺病毒科 即早蛋白质类 糖皮质激素 N-乙酰半胱氨酸 炎症反应 慢性阻塞性肺疾病
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增强型绿色荧光蛋白腺病毒表达载体构建及其在移植干细胞示踪和定量中的初步应用 被引量：7
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作者 宗兆文 程天民 +5 位作者 粟永萍 李楠 董世武 艾国平 冉新泽 徐辉 《中国临床康复》 CSCD 北大核心 2006年第21期10-12,i0001,共4页
目的:构建增强型绿色荧光蛋白腺病毒表达载体,并观察其在移植真皮多能干细胞示踪和定量中的应用。方法:实验于2004-08/2005-10在解放军第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所完成。①细菌内同源重组构建含增强型绿色荧光蛋白基因的骨... 目的:构建增强型绿色荧光蛋白腺病毒表达载体,并观察其在移植真皮多能干细胞示踪和定量中的应用。方法:实验于2004-08/2005-10在解放军第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所完成。①细菌内同源重组构建含增强型绿色荧光蛋白基因的骨架质粒,PacⅠ酶切后转染293细胞,包装出增强型绿色荧光蛋白腺病毒载体。增强型绿色荧光蛋白腺病毒表达载体鉴定正确后,收集293细胞反复冻融离心收集上清,粗制病毒液感染293细胞,扩增重组病毒载体。②选取新生1d雄性大鼠1只作为供体,剪取皮肤进行真皮多能干细胞的分离培养鉴定。将第7代粗制病毒液加入生长状态良好的真皮多能干细胞,转染后5d观察绿色荧光蛋白阳性细胞数量,计数绿色荧光蛋白阳性细胞百分比。③选取60只成年Wistar大鼠作为受体,随机分为全身照射组和正常对照组,各30只。全身照射组大鼠接受总剂量为5Gy的γ射线照射,正常对照组不接受放射。两组大鼠均接受尾静脉移植的1mL增强型绿色荧光蛋白腺病毒载体转染的真皮多能干细胞悬液。两组分别于照射后5d,1,2,3,4周荧光显微镜下观察真皮多能干细胞在骨髓组织中的分布情况,每个时相点6只大鼠;同时定量分析骨髓中真皮多能干细胞的含量。结果:作为受体的60只大鼠全部进入结果分析。成功地构建了增强型绿色荧光蛋白腺病毒载体,并发现其可转染和标记真皮多能干细胞。增强型绿色荧光蛋白标记的真皮多能干细胞在移植后4周内在大鼠体内的分布可被有效地检测,荧光激活细胞分类结果显示全身照射组大鼠骨髓中真皮多能干细胞的含量从移植后5d～4周均明显高于正常对照组大鼠(P<0.01)。结论:增强型绿色荧光蛋白腺病毒载体可有效地标记真皮多能干细胞,并能很好地示踪和定量分析移植到大鼠体内真皮多能干细胞的分布情况。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白质类/遗传学 荧光抗体技术 多能干细胞 转染 基因表达 腺病毒科/遗传学
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重组反义c-myc腺病毒对HL-60细胞PCNA表达及其生长影响的研究 被引量：4
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作者 陈龙 王湘辉 陈洁平 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2008年第21期1643-1646,共4页
目的:研究重组反义c-myc腺病毒(Ad-AS-c-myc)对人急性早幼粒HL-60细胞系的c-myc、增殖细胞核抗原(PCNA)表达及细胞生长抑制。方法:采用重组腺病毒Lac-Z(Ad-LacZ)及Ad-AS-c-myc联合多聚阳离子转染HL-60细胞,X-gal染色判断转染效率。采用... 目的:研究重组反义c-myc腺病毒(Ad-AS-c-myc)对人急性早幼粒HL-60细胞系的c-myc、增殖细胞核抗原(PCNA)表达及细胞生长抑制。方法:采用重组腺病毒Lac-Z(Ad-LacZ)及Ad-AS-c-myc联合多聚阳离子转染HL-60细胞,X-gal染色判断转染效率。采用MTT、RT-PCR及免疫细胞化学等方法进行研究。结果:多聚阳离子可提高腺病毒对HL-60细胞的转染,Ad-LacZ加入鱼精蛋白硫酸盐转染率达79.8%。Ad-AS-c-myc能抑制HL-60细胞c-myc基因在转录及蛋白水平的表达。Ad-AS-c-myc抑制HL-60细胞生长及活力(抑制率51%),细胞生长停滞后PCNA蛋白表达降低。结论:Ad-AS-c-myc对HL-60细胞具有使生长减缓、增殖能力降低作用,其生物学作用与HL-60细胞c-myc和PCNA的表达受抑有关。Ad-AS-c-myc在急性早幼粒白血病基因治疗中具有潜在的临床价值,其生物学活性与HL-60细胞c-myc和PCNA表达受抑有关。 展开更多
关键词 寡核苷酸类 反义 基因 MYC 腺病毒科 重组 遗传 增殖细胞核抗原
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寻找基因转染人脂肪来源的成体干细胞合适载体:脂质体介导质粒pEGFP-N1、重组腺病毒Ad5-EGFP与重组腺相关病毒rAAV-2/1-EGFP 被引量：3
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作者 靳小兵 孙永生 +1 位作者 娄思权 张克 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期1205-1208,共4页
目的:观察脂质体介导质粒pEGFP-N1、重组腺病毒Ad5-EGFP、重组腺相关病毒rAAV-2/1-EGFP基因转染人脂肪来源成体干细胞后增强型绿色荧光蛋白的表达及细胞毒性,探讨适用于脂肪来源的成体干细胞的转基因方法。方法:实验于2006-01/07在国家... 目的:观察脂质体介导质粒pEGFP-N1、重组腺病毒Ad5-EGFP、重组腺相关病毒rAAV-2/1-EGFP基因转染人脂肪来源成体干细胞后增强型绿色荧光蛋白的表达及细胞毒性,探讨适用于脂肪来源的成体干细胞的转基因方法。方法:实验于2006-01/07在国家人类基因组北方中心和北京大学第三医院完成。全髋关节置换术患者的皮下脂肪由北京大学第三医院骨科提供,均征得患者及其家属同意。pEGFP-N1(Clotech公司),Ad5-EGFP,rAAV-2/1-EGFP(本元正阳公司)。②自成人皮下取少量脂肪组织,经机械剪切及Ⅰ型胶原酶消化后获取脂肪来源的成体干细胞,体外培养扩增。③采用脂质体介导质粒pEGFP-N1、重组腺病毒Ad5-EGFP、重组腺相关病毒rAAV-2/1-EGFP3种转染方法,观察增强型绿色荧光蛋白的表达及对细胞毒性的影响。④细胞转染后24h,将5×104细胞悬液接种于24孔板中,每周换液3次,绘制细胞生长曲线。以正常未转染细胞作为正常对照。观察不同转染方法对细胞增殖的影响。结果:①不同转染方法的感染效率比较:pEGFP-N1脂质体转染后细胞毒性较大,且感染效率低,仅为10.5%。重组腺病毒Ad5-EGFP转染率高,当感染复数为5×102时,感染效率达82.5%;当感染复数低于1×103时,对细胞无明显损害。重组腺相关病毒rAAV-2/1-EGFP转染法不能有效感染人脂肪来源的成体干细胞。②不同转染方法对细胞增殖的影响:重组腺病毒Ad5-EGFP转染和重组腺相关病毒AAV-2/1-EGFP转染人脂肪来源的成体干细胞后,对细胞增殖能力无明显影响,基本同正常对照细胞(P>0.05)。而pEGFP-N1脂质体转染后细胞增殖能力较正常对照明显下降,转染后3～10d差异有显著性意义(P<0.05)。结论:重组腺病毒Ad5-EGFP可作为一种高效的脂肪来源成体干细胞的示踪工具,提示5型复制缺陷型腺病毒是其合适的转基因载体。 展开更多
关键词 转基因 腺病毒科 重组 遗传 脂质体 转染
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