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斜纹夜蛾核多角体病毒抑制苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒诱导的斜纹夜蛾细胞凋亡 被引量:2
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作者 张萍 杨凯 +2 位作者 代小江 庞义 苏德明 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第5期702-707,共6页
野生型苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 (Autographacalifornicamulticapsidnucleopolyhedrovirus,AcMNPV)感染斜纹夜蛾 (Spodopteralitura)细胞系Sl zsu 1,可引起典型的细胞凋亡 ;但可以在草地夜蛾 (Spodopterafrugiperda)细胞Sf 9中复制并... 野生型苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 (Autographacalifornicamulticapsidnucleopolyhedrovirus,AcMNPV)感染斜纹夜蛾 (Spodopteralitura)细胞系Sl zsu 1,可引起典型的细胞凋亡 ;但可以在草地夜蛾 (Spodopterafrugiperda)细胞Sf 9中复制并形成多角体 .比较了AcMNPV p35基因在病毒感染两种细胞的复制和转录情况 ,认为 p35在非受纳细胞中及时有效的表达能阻止细胞发生凋亡 ;共感染实验结果表明 ,斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodopteralituramulticapsidnucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)可以抑制AcMNPV诱导的细胞凋亡并可帮助病毒进行复制 ,推测SpltMNPV基因组中与 p35同源的 p4 展开更多
关键词 夜蛾核多角体病毒 抑制 苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 诱导 夜蛾细胞凋亡 P35基因
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苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)大立方形多角体突变株的分子生物学研究 被引量:3
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作者 林广云 龙綮新 +2 位作者 何代芬 曲士芮 庞义 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期151-158,共8页
利用空斑技术,从既能形成多角体又含TK酶基因的苜蓿丫纹夜蛾重组核型多角体病毒AcMNPV-TK中,纯化了一株形成大立方形多角体的病毒突变株AcMNPV-TKmt513。用EcoRI、PstⅠ、BglⅡ及KpnⅠ等限制... 利用空斑技术,从既能形成多角体又含TK酶基因的苜蓿丫纹夜蛾重组核型多角体病毒AcMNPV-TK中,纯化了一株形成大立方形多角体的病毒突变株AcMNPV-TKmt513。用EcoRI、PstⅠ、BglⅡ及KpnⅠ等限制性内切酶对它做了酶切分析,并克隆了多角体蛋白全基因及其侧翼部分的片段。对所克隆的部分全序列测定结果,发现在多角体蛋白基因读码框内只出现了一个碱基的突变,导致了第25位的氨基酸密码子由GGT变为GAT,该位氨基酸由甘氨酸(Gly)变为天冬氨酸(Aspq)还利用PCR技术扩增出突变了的多角体蛋白基因部分片段,并将它克隆入转移载体质粒pEV55,与不形成多角体的重组病毒TnNPV-HBsD4DNA共转染Sf9细胞,结果产生同样的大立方形多角体病毒。 展开更多
关键词 昆虫病毒 苜蓿丫纹夜蛾 核型多角体病毒 多角体
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苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒囊膜内核衣壳排列图式的电镜观察 被引量:3
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作者 谢薇 谢天恩 《中国病毒学》 CSCD 1999年第3期280-283,共4页
The arrangement patterns of nucleocapsids within the envelope of \%Autographa californica\% nuclear polyhedrosis virus were studied by electron microscopy. Numbers of nucleocapsids observed in an envelope in their cro... The arrangement patterns of nucleocapsids within the envelope of \%Autographa californica\% nuclear polyhedrosis virus were studied by electron microscopy. Numbers of nucleocapsids observed in an envelope in their cross sections ranged from 1 to 17, and the frequencies at 2,3,4,5,6 and 7 nucleocapsids were significantly higher than the others, suggesting that these numbers of nucleocapsids were more commonly involved in an envelope. The regular arrangement patterns of nucleocapsids within envelope were observed in cross sections. Envelope outlines can be classified into a triangle (3 nucleocapsids in an envelope),lozenge and square (4 nucleocapsids in an envelope), trapeziun (5 nucleocapsids in an envelope), pentagons (5 or 8 nucleocapsids in an envelope) and hexagons (7 or 10 nucleocapsids in an envelope). The irregular arrangement patterns of nucleocapsids within envelopes were also observed in cross sections. 展开更多
关键词 苜蓿丫纹夜蛾 核型多角体病毒 病毒囊膜 电镜
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甜菜夜蛾核多角体病毒VP39蛋白在苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒中的功能研究 被引量:1
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作者 李赛男 吕怡娜 +3 位作者 姜焕焕 黄麟淇 区炳明 刘文华 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期1440-1449,共10页
【目的】构建表达甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exigua multiple nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)VP39蛋白的vp39假型苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica MNPV,AcMNPV),明确SeMNPV VP39是否能取代AcMNPV VP39在AcMNPV... 【目的】构建表达甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exigua multiple nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)VP39蛋白的vp39假型苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica MNPV,AcMNPV),明确SeMNPV VP39是否能取代AcMNPV VP39在AcMNPV中行使功能,为深入探究杆状病毒的核衣壳装配机理打下理论基础。【方法】利用Bac-to-Bac杆状病毒表达载体系统在AcMNPV vp39缺失型重组bacmid(bAcvp39KO)的基础上构建携带SeMNPV vp39基因、绿色荧光蛋白基因(Enhanced green fluorescence protein,egfp)和多角体蛋白基因(Polyhedrin,polh)的重组病毒(vAcSevp39:FLAG)。利用Western blotting检测分析SeMNPV vp39在vAcSevp39:FLAG转染的草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)IPLB-Sf21-AE clonal isolate 9(Sf9)细胞中的表达情况,通过荧光显微镜观察vAcSevp39:FLAG在Sf9中的感染和扩散情况,采用病毒滴度测定并绘制病毒生长曲线检测vAcSevp39:FLAG的感染性芽生型病毒粒子产量,并以电子显微镜观察vAcSevp39:FLAG转染的Sf9细胞中的形态发生情况。【结果】Western blotting检测结果表明,SeMNPV VP39能在vAcSevp39:FLAG转染的Sf9细胞中获得表达;荧光显微镜观察和病毒生长曲线测定结果表明,在vAcSevp39:FLAG转染的Sf9细胞中无感染性的芽生型病毒粒子产生,与AcMNPV vp39缺失型重组病毒(vAcvp39KO)的现象一致;电子显微镜观察发现,与vAcvp39KO不同的是,在vAcSevp39:FLAG转染的细胞中虽然未产生核衣壳,但在感染细胞的核中存在大量空的透明长管状衣壳结构,表明SeMNPV VP39能挽救vAcvp39KO的衣壳结构装配,但在AcMNPV中不具备装配核衣壳的能力。【结论】SeMNPV VP39在AcMNPV中虽能形成衣壳结构,但不能有效装配核衣壳,导致无芽生型病毒粒子和包埋型病毒粒子产生。 展开更多
关键词 苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 vp39 甜菜夜蛾核多角体病毒 芽生型病毒粒子 核衣壳装配
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环境激素壬基酚对鳞翅目昆虫培养细胞的影响 被引量:8
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作者 裔洪根 徐世清 +2 位作者 戴璇颖 曹伟 李达光 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期215-220,共6页
壬基酚(NP)是一种最新确认的环境激素。为了探讨环境激素对鳞翅目昆虫培养细胞的影响及其利用途径,研究了NP对家蚕卵巢细胞(BmN)和苜蓿丫纹夜蛾卵巢细胞(Sf9)的影响。在TC-100培养液中添加NP,体外培养细胞,MTT法调查细胞增殖,抽提细胞DN... 壬基酚(NP)是一种最新确认的环境激素。为了探讨环境激素对鳞翅目昆虫培养细胞的影响及其利用途径,研究了NP对家蚕卵巢细胞(BmN)和苜蓿丫纹夜蛾卵巢细胞(Sf9)的影响。在TC-100培养液中添加NP,体外培养细胞,MTT法调查细胞增殖,抽提细胞DNA进行损伤调查。结果表明,0.032 mmol/L以下浓度的NP对BmN细胞增殖有促进作用(p<0.01),NP浓度继续增加则出现毒害,细胞生长和增殖受到抑制(p<0.01),死亡细胞明显增加,具有浓度效应和时间效应。NP对BmN培养细胞的LC50(72 h)为0.051 mmol/L。浓度超过0.128 mmol/L时,能诱导BmN细胞DNA链发生断裂,导致DNA损伤。NP对Sf9细胞增殖有较强的抑制作用(p<0.01),有明显的浓度效应和时间效应,培养72 h时LC50为0.047 mmol/L;在试验浓度范围内,细胞生长和增殖虽然受到抑制,但死亡细胞并无明显增加。NP对鳞翅目昆虫培养细胞的生长发育具有显著影响,有诱发DNA损伤的可能。 展开更多
关键词 壬基酚 家蚕卵巢细胞 苜蓿丫纹夜蛾卵巢细胞 增殖 DNA损伤
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昆虫病毒重组增效蛋白的广谱增效活性 被引量:11
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作者 袁哲明 孟小林 刘树生 《中国生物防治》 CSCD 北大核心 2004年第1期31-33,共3页
室内生物测定表明 ,大肠杆菌表达的粉纹夜蛾颗粒体病毒重组增效蛋白P96可显著或极显著提高棉铃虫核型多角体病毒、苏云金杆菌和阿维菌素对棉铃虫幼虫的致死率 ,分别提高1 6 9.78%、73.90 %和 36 .0 4 % ;对苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒... 室内生物测定表明 ,大肠杆菌表达的粉纹夜蛾颗粒体病毒重组增效蛋白P96可显著或极显著提高棉铃虫核型多角体病毒、苏云金杆菌和阿维菌素对棉铃虫幼虫的致死率 ,分别提高1 6 9.78%、73.90 %和 36 .0 4 % ;对苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒感染甜菜夜蛾幼虫也有明显增效作用。Na2 CO3 溶解的P96对棉铃虫初孵幼虫有一定致死作用。 展开更多
关键词 重组增效蛋白 广谱增效剂 夜蛾颗粒体病毒 大肠杆菌 苜蓿丫纹夜蛾 棉铃虫 致死作用
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2,4-二氯苯酚对鳞翅目昆虫细胞增殖的影响 被引量:2
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作者 裔洪根 徐世清 +2 位作者 戴璇颖 曹伟 李达光 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第4期992-993,共2页
研究了2,4-DCP对家蚕卵巢细胞(BmN)和苜蓿丫纹夜蛾卵巢细胞(Sf9)的影响。结果表明,2,4-DCP对BmN和Sf9细胞生长发育有很大影响,都表现为低浓度的2,4-DCP促进细胞增殖,超过一定浓度时表现出细胞毒性,导致培养细胞不贴壁生长和分裂,甚至死... 研究了2,4-DCP对家蚕卵巢细胞(BmN)和苜蓿丫纹夜蛾卵巢细胞(Sf9)的影响。结果表明,2,4-DCP对BmN和Sf9细胞生长发育有很大影响,都表现为低浓度的2,4-DCP促进细胞增殖,超过一定浓度时表现出细胞毒性,导致培养细胞不贴壁生长和分裂,甚至死亡并收缩或破裂,有明显的浓度效应和时间效应。2,4-DCP对BmN和Sf9细胞的LC50分别为0.135和0.141 mmol/L。 展开更多
关键词 环境激素 2 4-二氯苯酚 家蚕卵巢细胞 苜蓿丫纹夜蛾卵巢细胞 增殖
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杆状病毒Ac78 C末端保守区域的功能初步分析 被引量:1
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作者 李赛男 杨凯 +1 位作者 刘文华 赵海洲 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期748-756,共9页
杆状病毒模式种苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)的orf78(即Ac78)是最近被发现的杆状病毒核心基因,在杆状病毒的生活周期中具有重要功能.氨基酸序列分析表明,Ac78的C末... 杆状病毒模式种苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)的orf78(即Ac78)是最近被发现的杆状病毒核心基因,在杆状病毒的生活周期中具有重要功能.氨基酸序列分析表明,Ac78的C末端105~108位氨基酸区域在GroupINPVs旁系同源物中高度保守.为研究该保守区域在Ac78功能中的作用,利用Bac—to-Bac杆状病毒表达载体系统成功构建了缺失该保守区域,并且携带绿色荧光蛋白基因和多角体蛋白基因的Ac78截短补回型重组病毒(vAe78:del105.108).荧光显微镜分析和病毒生长曲线测定结果表明,在vAc78:del105.108转染的Sf9细胞中,感染性的芽生型病毒粒子(buddedvirion,BV)产生量与Ac78全长补回型重组病毒(vAc78:HA)基本一致;电镜观察发现,在vAc78:del105.108转染的细胞中,呈现与vAc78:HA的现象一致的典型的杆状病毒感染特征,多粒包埋型病毒粒子(multiple nucleocapsid—enveloped occlusion-derived virion,M—ODV)以及包埋有M-ODV的包涵体均能正常形成;免疫荧光实验表明,在vAc78:del105.108感染的Sf9细胞中,从病毒感染细胞24h时开始,Ac78专一定位于感染细胞的内核膜附近,与vAc78:HA的现象一致.上述结果表明,Ac78的C末端105-108位氨基酸保守区域对于BV和M—ODV的有效产生以及Ac78的亚细胞定位非必需. 展开更多
关键词 苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 C末端保守区域 芽生型病毒粒子 多粒包埋型病毒粒子
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杆状病毒AcMNPV vp39基因的克隆、表达与抗体制备 被引量:1
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作者 李玲玲 李朝飞 +1 位作者 陈维春 庞义 《生物技术》 CAS CSCD 2007年第3期5-7,共3页
目的:构建苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica nucleopolyhedro virus,AcMNPV)VP39的原核表达载体,表达、纯化蛋白并制备多克隆抗体。方法:用PCR方法扩增vp39基因,并将其克隆至pET-21a(+)上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进... 目的:构建苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica nucleopolyhedro virus,AcMNPV)VP39的原核表达载体,表达、纯化蛋白并制备多克隆抗体。方法:用PCR方法扩增vp39基因,并将其克隆至pET-21a(+)上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,采用割胶回收的方法纯化融合蛋白,纯化的融合蛋白作为抗原,免疫新西兰大白兔,Western blot检测抗体活性。结果:构建了pET-VP39原核表达质粒,含有该质粒的大肠杆菌经IPTG诱导超量表达了一个与预期理论值相符的约为40kDa的融合蛋白。对制备的抗体进行免疫印迹分析表明该抗血清能与感染苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒的细胞蛋白样品发生特异性反应。结论:获得了兔抗AcMNPV-VP39多克隆抗体,为进一步深入研究VP39在病毒侵染过程中与宿主因子的相互作用提供了检测工具。 展开更多
关键词 苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 vp39基因 原核表达 抗体
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杆状病毒AcMNPV p35基因的克隆表达及多抗制备 被引量:1
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作者 李玲玲 李朝飞 庞义 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2007年第5期1-4,共4页
用PCR方法扩增得到苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californic anucleopolyhedrovirus,AcM N-PV)p35基因,将其克隆至质粒pET-32a(+)上,构建得到重组质粒pET-p35,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,表达了1条约为55 ku的蛋白带。以... 用PCR方法扩增得到苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californic anucleopolyhedrovirus,AcM N-PV)p35基因,将其克隆至质粒pET-32a(+)上,构建得到重组质粒pET-p35,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,表达了1条约为55 ku的蛋白带。以Ni2+-NTA偶连抗体检测证明所表达的蛋白为带有组氨酸的融合蛋白。采用割胶回收的方法纯化融合蛋白,以纯化的融合蛋白制备多克隆抗体,效价为1/1 024。免疫印迹分析表明,该抗血清能与感染苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒的细胞蛋白样品发生特异性反应。 展开更多
关键词 苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒p35基因基因表达多克隆抗体
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杆状病毒Ac60基因的原核表达与亚细胞定位研究
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作者 李玲玲 李朝飞 +1 位作者 庞义 杨凯 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第4期20-23,共4页
用PCR方法从AcMNPV基因组中扩增到ORF60基因,插入原核表达载体pET-28a(+),构建pET-Ac60质粒,再将该质粒转化大肠埃希菌BL21,在IPTG诱导下表达了分子量约为16 ku的融合蛋白。用纯化的表达产物免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体,应用该抗... 用PCR方法从AcMNPV基因组中扩增到ORF60基因,插入原核表达载体pET-28a(+),构建pET-Ac60质粒,再将该质粒转化大肠埃希菌BL21,在IPTG诱导下表达了分子量约为16 ku的融合蛋白。用纯化的表达产物免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体,应用该抗体检测了AcMNPV感染的昆虫宿主细胞(Sf9)中ORF60基因的表达,结果显示:在感染后的细胞中有2条分子量分别约为33 ku和17 ku蛋白质带能与所制备的抗体发生特异性反应。间接免疫荧光分析发现:在病毒感染的晚期,Ac60蛋白同时存在于所感染宿主的细胞核和细胞质中。 展开更多
关键词 苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 ORF60 原核表达 亚细胞定位
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杆状病毒ac68基因的克隆、表达与抗体制备
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作者 李国辉 陈慧卿 黄国平 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期18-20,共3页
目的:对苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa califorica multicapsid nucleopoly hedrovirus,AcMNPV)开放阅读框68(open reading frame,ORF68,ac68)进行原核表达,制备该蛋白的多克隆抗体,为深入研究其功能提供基础。方法:将ac68基因... 目的:对苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa califorica multicapsid nucleopoly hedrovirus,AcMNPV)开放阅读框68(open reading frame,ORF68,ac68)进行原核表达,制备该蛋白的多克隆抗体,为深入研究其功能提供基础。方法:将ac68基因克隆至原核表达载体pET28a上,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达Ac68蛋白,通过His抗体检测进一步验证所表达的蛋白为带有组氨酸的融合蛋白。以纯化的Ac68蛋白作为抗原,免疫昆明小鼠制备多克隆抗体。结果:实现了ac68基因的原核表达,获得了该蛋白的多克隆抗体并在AcMNPV感染的Sf-9细胞中检测到一条大小为25kD左右的特异杂交带。结论:获得的抗体可用于Ac68蛋白功能的进一步研究。 展开更多
关键词 苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 ac68基因 Ac68蛋白 原核表达 抗体
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AcMNPV polh启动子上游增强序列的部分缺失分析
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作者 柴柯 龙綮新 王询章 《海南大学学报(自然科学版)》 CAS 2004年第1期61-69,共9页
本实验构建了2个用于杆状病毒AcMNPV(苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒)启动子及其调控序列研究的质粒载体:pF SBCAT和pF SBCATPpolh.以此为基础,结合目前对BmNPV(家蚕核多角体病毒)polh(多角体)基因和AcMNPVpolh基因上游增强序列的研究结果,... 本实验构建了2个用于杆状病毒AcMNPV(苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒)启动子及其调控序列研究的质粒载体:pF SBCAT和pF SBCATPpolh.以此为基础,结合目前对BmNPV(家蚕核多角体病毒)polh(多角体)基因和AcMNPVpolh基因上游增强序列的研究结果,构建了AcMNPVpolh基因上游增强序列部分缺失的瞬时表达载体;以cat为报告基因,利用瞬时转染和CATELISA的方法检测报告基因的表达活性,初步研究了对于polh启动子具有增强作用的AcMNPVpolh基因上游序列的结构.结果显示,与BmNPVpolh上游293bp序列同源性极高的AcMNPVpolh上游293bp片段对于polh启动子没有增强活性;CMVm启动子的AcMNPVpolh上游增强序列部分缺失之后不能够增强AcMNPVpolh启动子.因此,这一序列可能不再被缩短,也不大可能存在独立地起作用和更短的正、负调控元件. 展开更多
关键词 ACMNPV polh 增强序列 部分缺失 杆状病毒 苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 家蚕核多角体病毒 BMNPV
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竞争ELISA检测禽血清A型流感抗体
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作者 邱昌庆 《畜牧兽医科技信息》 1998年第12期5-6,共2页
最近,美国A.L.Shafer教授等,用禽流感(AI)琼脂凝胶免疫扩散(AGID)试验,完成了对禽血清A型流感群特异性抗体的血清学筛选工作。他们用杆状病毒载体、苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒,表达流感病毒A/Ann Arbor/6/60的核蛋白(NP)基因。通过用重... 最近,美国A.L.Shafer教授等,用禽流感(AI)琼脂凝胶免疫扩散(AGID)试验,完成了对禽血清A型流感群特异性抗体的血清学筛选工作。他们用杆状病毒载体、苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒,表达流感病毒A/Ann Arbor/6/60的核蛋白(NP)基因。通过用重组的杆状病毒接种草地夜蛾细胞或粉纹夜蛾幼虫,获得了AI病毒的重组NP。用分泌抗A型AI病毒核蛋白(NP)单克隆抗体的杂交瘤细胞系,建立竞争酶联免疫吸附试验(cELISA)。用NP和单克隆抗体(MAbs)做(cELISA)。 展开更多
关键词 ELISA检测 单克隆抗体 竞争酶联免疫吸附试验 杆状病毒载体 草地夜蛾细胞 苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 A型 核蛋白 流感病毒A 杂交瘤
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