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题名重组杆状病毒滴度免疫荧光法的建立及验证
被引量：1
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作者
熊宇
左勇
郭靖
孟胜利
申硕
陈晓琦
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机构
武汉生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究一室
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出处
《微生物学免疫学进展》
CAS
2023年第3期14-20,共7页
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基金
国家“重大新药创制”科技重大专项(2015ZX09102021)。
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文摘
目的建立重组杆状病毒滴度间接免疫荧光法的检测方法,并对其进行验证。方法构建含有重组质粒pGEX-6p-1-GST-GP64大肠埃希菌BL21(DE3),进行IPTG(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导,表达并纯化杆状病毒截短GP64糖蛋白。配伍佐剂后采用背部多点注射的方式免疫日本大耳白兔,制备兔抗杆状病毒GP64多抗作为免疫荧光结合抗体,在96孔板里贴壁培养Sf9细胞,接种10倍系列稀释的重组杆状病毒共孵育一定时间,80%冷丙酮固定、透化,一抗稀释比例为1∶200、荧光二抗稀释比例为1∶500,荧光显微镜下显色,计数荧光灶数目计算病毒滴度。并对建立的方法进行验证。结果成功制备了GP64兔多抗;检测时Sf9细胞与重组杆状病毒共孵育时间4 d;重组杆状病毒感染细胞可与GP64抗体发生特异的荧光灶反应,未感染细胞对照组未出现特异性荧光灶;组内和组间测定结果的RSD均<5%;同一样品不同人员检测差异无统计学意义(F=1.86,F<F_(表));同一样品梯度稀释后,稀释倍数的对数与病毒滴度呈线性相关(R^(2)=0.997);病毒滴度的回收率在90%~110%之间。结论建立了间接免疫荧光法测定重组杆状病毒滴度的方法,该方法具有良好的专属性、精密度、线性和准确度。
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关键词
杆状病毒
GP64糖蛋白
间接免疫荧光方法
荧光灶反应
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Keywords
Recombinant baculovirus
GP64 glycoprotein
Indirect immunofluorescence method
Fluorescence foci reaction
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分类号
R378
[医药卫生—病原生物学]
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