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杜氏盐藻荧光素酶基因表达载体的构建 被引量:3
1
作者 柴玉荣 王天云 +5 位作者 侯桂琴 侯卫红 谢华 袁保梅 王建民 薛乐勋 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2004年第1期29-31,共3页
目的 :构建盐藻荧光素酶基因表达载体。方法 :分别用合适的限制性内切酶消化载体pGL3-Enhancervector、pD -B、pMD -CA和pMD -rbcS ,胶回收适当的片段 ,T4DNA连接酶过夜连接 ,转化宿主菌大肠杆菌JM1 0 9。挑取阳性克隆 ,提取质粒DNA ,... 目的 :构建盐藻荧光素酶基因表达载体。方法 :分别用合适的限制性内切酶消化载体pGL3-Enhancervector、pD -B、pMD -CA和pMD -rbcS ,胶回收适当的片段 ,T4DNA连接酶过夜连接 ,转化宿主菌大肠杆菌JM1 0 9。挑取阳性克隆 ,提取质粒DNA ,酶切鉴定。结果 :得到含盐藻自身启动子碳酸酐酶 (CA)基因启动子、双倍重复碳酸酐酶 (DCA)基因启动子和来自衣藻的 1 ,5二磷酸核酮糖羧化酶 /加氧酶小亚基 (rbcS)基因启动子 ,以及荧光素酶(Luc)基因为外源基因的 3个盐藻表达载体。结论 :构建了 3个杜氏盐藻荧光素酶表达载体。 展开更多
关键词 杜氏盐藻 荧光素酶基因 质粒表达载体
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Tet-On基因表达系统定量调节荧光素酶基因在CHO细胞中的表达 被引量:3
2
作者 伏爽 程康 +2 位作者 王申五 马大龙 王德炳 《北京医科大学学报》 CSCD 1998年第6期512-514,554,共4页
目的:应用TetOn基因表达系统建立CHOTetOn细胞株,通过强力霉素(Dox)调节荧光素酶基因的表达。方法:pTetOn质粒转染CHO细胞株,经G418筛选,得到稳定表达株CHOTetOn。pTRE... 目的:应用TetOn基因表达系统建立CHOTetOn细胞株,通过强力霉素(Dox)调节荧光素酶基因的表达。方法:pTetOn质粒转染CHO细胞株,经G418筛选,得到稳定表达株CHOTetOn。pTRELuc质粒瞬时转染CHOTetOn克隆1至30,培养基中加入2mg·L-1Dox或不加Dox,培养72h后检测荧光素酶活性。结果:克隆18、28、29当培养基中加入Dox(即“On”状态)时荧光素酶活性高,当培养基中不加Dox(即“Of”状态)时荧光素酶活性低,故选择克隆18、28、29作为高表达、低背景的CHOTetOn细胞株。结论:CHOTetOn细胞株的建立,可利用四环素及其衍生物调节多种外源基因的表达,有效调控基因表达的时间和水平,定量诱导毒性蛋白的表达,增加治疗的疗效和安全性,有望为基因治疗提供一条可控的安全途径。 展开更多
关键词 Tet-On基因 基因表达调控 荧光素酶基因 CHO细胞
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萤火虫荧光素酶基因cDNA真核表达载体在细菌中的高效表达 被引量:1
3
作者 李植峰 高丽杰 +2 位作者 曹韫旭 孙树秦 陆德如 《生物学杂志》 CAS CSCD 2001年第3期22-24,共3页
将萤火虫荧光素酶基因cDNA真核表达载体pGL2 导入大肠杆菌HB1 0 1、鼠伤寒杆菌LB50 0 0和X4 0 64中 ,它在这些原核细胞中均有较好的表达效果。它在大肠杆菌HB1 0 1的表达量是该基因cDNA原核表达载体 pUHF12 - 1的表达量的 3 0倍。采用... 将萤火虫荧光素酶基因cDNA真核表达载体pGL2 导入大肠杆菌HB1 0 1、鼠伤寒杆菌LB50 0 0和X4 0 64中 ,它在这些原核细胞中均有较好的表达效果。它在大肠杆菌HB1 0 1的表达量是该基因cDNA原核表达载体 pUHF12 - 1的表达量的 3 0倍。采用计算机PC/GENE程序包分析 ,pGL2 的SV4 0 早期启动子序列中含有SV4 0 基因组HindⅢB片断中一段长为 4 9bp的DNA序列 ,这一序列可能就是SV4 0 基因组HindⅢB片断的原核增强子功能的决定序列 ,正是该序列使pGL2 在细菌中获得了高效表达。 展开更多
关键词 荧光素酶基因 真核表达载体 原核增强子
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含荧光素酶基因的黑胸大蠊浓核病毒重组质粒的构建与表达 被引量:2
4
作者 杨娟 张珈敏 +3 位作者 蒋洪 邓晓军 胡建芳 胡远扬 《中国病毒学》 CSCD 2003年第2期178-180,共3页
A luciferase gene has been inserted into the recombinant plasmid PfDNV-pUC119 which contained partly deletion of genome of Periplanete fuliginosa densovirus (PfDNV). The recombinant plasmid with luciferase gene was co... A luciferase gene has been inserted into the recombinant plasmid PfDNV-pUC119 which contained partly deletion of genome of Periplanete fuliginosa densovirus (PfDNV). The recombinant plasmid with luciferase gene was co-transfected with pfDNV-pUC119 into Periplanele fuliginosa larvae and had a high luciferase gene expression in enteron of the transfected larvae. 展开更多
关键词 黑胸大蠊浓核病毒 重组质粒 荧光素酶基因 蟑螂 基因工程杀虫剂
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阳离子脂质体介导的虫荧光素酶基因表达
5
作者 程香普 张智清 +3 位作者 段芳龄 唐芙爱 郑鹏远 崔静 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2004年第4期391-393,共3页
目的 研究阳离子脂质体Lipofectin介导虫荧光素酶基因在不同细胞株中的表达。方法 质粒pDR2 luc在大肠杆菌DH5α中扩增后用碱裂解法提取 ,并经Sepharose 2B凝胶过滤柱层析 ,通过凝胶电泳及紫外分光光度计分析纯度、定量 ,以Lipofecti... 目的 研究阳离子脂质体Lipofectin介导虫荧光素酶基因在不同细胞株中的表达。方法 质粒pDR2 luc在大肠杆菌DH5α中扩增后用碱裂解法提取 ,并经Sepharose 2B凝胶过滤柱层析 ,通过凝胶电泳及紫外分光光度计分析纯度、定量 ,以Lipofectin分别转染人肝癌细胞株HepG2 、SMMC772 1、人肾癌细胞株GRC及非洲绿猴肾细胞COS7,然后以液体闪烁计数仪单光子计数法测定荧光素酶活性。结果 荧光素酶活性在 4种细胞株中均有表达 ,且均有显著性差异 (均P <0 0 5 )。 展开更多
关键词 阳离子脂质体 基因转染 荧光素酶基因 细胞株
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转座子K1.4可提高荧光素酶基因在转基因家蚕中的整合频率
6
作者 钱信果 周丛照 李振刚 《中国科学技术大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期710-713,共4页
合适的整合表达载体对于获得转基因家蚕具有重要意义,为此本文构建了包含家蚕转座子K1.4、丝素基因上游启动子序列和荧光素酶基因cDNA的质粒SKFL以及不含K1.4的质粒pFL,并将其通过扎卵法转移到家蚕受精卵中.通过... 合适的整合表达载体对于获得转基因家蚕具有重要意义,为此本文构建了包含家蚕转座子K1.4、丝素基因上游启动子序列和荧光素酶基因cDNA的质粒SKFL以及不含K1.4的质粒pFL,并将其通过扎卵法转移到家蚕受精卵中.通过对当代转基因家蚕5龄幼虫丝腺和蚕体DNA进行斑点杂交和Southern杂交发现,荧光素酶基因在家蚕不同组织中的整合是随机的,但携带K1.4的质粒SKFL的整合频率明显高于质粒pFL.这说明转座子K1.4可以有效提高外源基因在转基因家蚕中的整合频率,从而有可能成为构建转基因家蚕的一种有用的整合载体. 展开更多
关键词 家蚕 转座子 荧光素酶基因 整合频率 基因家蚕
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荧光素酶基因在家蚕细胞中的表达 被引量:1
7
作者 陈智毅 陈列辉 +1 位作者 林金明 张永文 《广东蚕业》 1998年第3期30-34,共5页
本文将含有萤火虫荧光素酶基因的质粒pGL3,用脂质体转染方法转染家蚕BmN细胞,加入检测底物后,检测到了荧光素酶基因的表达产物——荧光发射,并进行了荧光扫描测试,测定了在波长562nm处的荧光发射动力学图谱。
关键词 家蚕 荧光素酶基因 基因表达 培养细胞
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建立稳定表达T-抗原、核转录因子-κB的DNA结合域和荧光素酶基因的人脐静脉内皮细胞系
8
作者 刘艳霞 CaoWangsen +1 位作者 IraniKaikobad 李学军 《中国药理通讯》 2003年第3期20-20,共1页
关键词 T-抗原 核转录因子-ΚB DNA结合域 荧光素酶基因 脐静脉内皮细胞系 基因转录 药物筛选
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荧光素酶基因的克隆表达及其产物纯化和鉴定 被引量:1
9
作者 唐晨辉 庄美宝 +3 位作者 徐帆 王章 龙綮新 庞义 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第1期69-78,共10页
利用能形成多角体的杆状病毒载体系统pSXIVVI+X3,把萤火虫荧光素酶(Fireflyluciferase,Luc)cDNA克隆到转移功体质粒pSXIVVI^+3/3通过共转染草地夜蛾(Spodopterafrug... 利用能形成多角体的杆状病毒载体系统pSXIVVI+X3,把萤火虫荧光素酶(Fireflyluciferase,Luc)cDNA克隆到转移功体质粒pSXIVVI^+3/3通过共转染草地夜蛾(Spodopterafrugiperda,Sf)细胞得到重组毒株TnNPV-Luc-OCC,在该重组杆状病毒株中Luc基因受到合成启动子和XIV启动子的双重调控。该重组杆状病毒株在Sf9细胞中能形成多角体,有X- 展开更多
关键词 杆状病毒 病毒杀虫剂 荧光素酶基因 基因工程
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青海弧菌Q67荧光素酶基因luxAB与luxCDABE在大肠杆菌中表达与发光特性比较 被引量:1
10
作者 罗爱红 冯炘 +3 位作者 宁保安 白家磊 彭媛 高志贤 《食品安全质量检测学报》 CAS 2015年第12期4816-4821,共6页
目的对比淡水发光细菌——青海弧菌Q67荧光素酶基因luxAB和luxCDABE在新的表达体系中的表达,为构建特异性检测毒性的重组菌提供基础。方法设计引物扩增得到青海弧菌Q67荧光素酶基因luxAB和luxCDABE,将其分别与表达载体pET-22b连接,转化... 目的对比淡水发光细菌——青海弧菌Q67荧光素酶基因luxAB和luxCDABE在新的表达体系中的表达,为构建特异性检测毒性的重组菌提供基础。方法设计引物扩增得到青海弧菌Q67荧光素酶基因luxAB和luxCDABE,将其分别与表达载体pET-22b连接,转化大肠杆菌DH5α测序,阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行表达。检测两种重组菌的发光特性及重金属离子对其毒性影响。结果通过测定重组菌的相对发光强度(RLU)和OD600值可知:luxAB和luxCDABE重组菌在癸醛和IPTG浓度均为1μL/mL培养基里培养第1小时后达到最大RLU,值分别为750618.5和140901.5。检测重金属离子Cd^(2+)、Hg^(2+)、Cr^(6+)对重组菌的毒性,EC_(50)(半有效浓度)值分别为:luxAB重组菌:5.160、5.129、7.097 mg/L;luxCDABE重组菌:6.137、7.643、7.736mg/L。结论在相同培养条件下,luxAB重组菌比luxCDABE重组菌获得了更大的RLU,说明lux AB表达效果更好。重金属对重组菌的毒性影响检测,luxAB重组菌得到了更低的EC_(50)值,进一步论证了这个观点。 展开更多
关键词 青海弧菌 荧光素酶基因 重组菌 发光特性
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基于化学激活荧光素酶表达基因法和标准方法评估动物源性固态食品中17种二噁英类化合物毒性当量的相关性比较
11
作者 王燕 张敏 +5 位作者 朱晓艳 江玲丽 王如坤 钟莺莺 谭曜 保琦蓓 《理化检验(化学分册)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期1-8,共8页
为使化学激活荧光素酶表达基因法(CALUX)在动物源性固态食品中二噁英类化合物毒性当量筛查中具有更好的适用性,使其能够与标准方法高分辨气相色谱-高分辨质谱法(HRGC-HRGC)的评估结果相互转换,分别基于CALUX和HRGC-HRGC评估了肉类、海... 为使化学激活荧光素酶表达基因法(CALUX)在动物源性固态食品中二噁英类化合物毒性当量筛查中具有更好的适用性,使其能够与标准方法高分辨气相色谱-高分辨质谱法(HRGC-HRGC)的评估结果相互转换,分别基于CALUX和HRGC-HRGC评估了肉类、海鲜类和配方乳粉这3类典型动物源性固态食品中7种2,3,7,8-取代的多氯代二苯并二噁英(PCDDs)和10种2,3,7,8-取代的多氯代二苯并呋喃(PCDFs)的毒性当量,分析两种方法测定结果的相关性,并确定换算关系和适宜样品类型。结果表明:基于HRGC-HRMS得到的样品中17种目标物的毒性当量(TEQ)下限值为0.001~0.106 pg·g^(-1),TEQ上限值为0.004~0.242 pg·g^(-1),远低于欧盟法规EC 1881/2006规定的限量值(3.5 pg·g^(-1));基于CALUX得到的肉类样品中17种目标物的毒性当量(BEQ)值为0.74~1.30 pg·g^(-1),海鲜类样品中17种目标物的BEQ值为0.31~0.63 pg·g^(-1),配方乳粉样品中17种目标物的BEQ值为0.043~0.074 pg·g^(-1);肉类和配方乳粉样品的BEQ值与TEQ值的相关性较差,而海鲜类样品的BEQ值与TEQ上限值相关性较好。 展开更多
关键词 化学激活荧光表达基因法(CALUX) 高分辨气相色谱-高分辨质谱法(HRGC-HRGC) 动物源性固态食品 毒性当量 相关性
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CART基因启动子双荧光素酶重组载体构建 被引量:1
12
作者 高艳萍 任静 李鹏飞 《中国牛业科学》 2023年第1期25-29,共5页
可卡因—苯丙胺调节转录肽(cocaine-and amphetamine regulated transcript peptides,CART)是一种内源性神经肽,广泛分布于中枢神经和外周神经系统。CART具有多种不同的生理功能,在牛繁殖机能研究中发现,CART还可以通过影响雌激素分泌... 可卡因—苯丙胺调节转录肽(cocaine-and amphetamine regulated transcript peptides,CART)是一种内源性神经肽,广泛分布于中枢神经和外周神经系统。CART具有多种不同的生理功能,在牛繁殖机能研究中发现,CART还可以通过影响雌激素分泌抑制卵泡发育。这一发现为深入分析牛卵泡闭锁以及提高母畜繁殖率提供理论依据。然而%CART%基因转录调控机制尚不明确。研究利用pGL3系列萤火虫荧光素酶表达载体,%Mlu%I、%Xho%I双酶切割牛%CART%基因启动子-475 bp~+22 bp区域,成功构建重组质粒,转染293T细胞,检测相对荧光活性,为后续筛选%CART%基因核心启动子活性片段创造条件,进而为%CART%转录调控分子机制的探究奠定基础。 展开更多
关键词 CART双荧光报告基因 启动子 转录调控
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一种检测蛋白酶活性的荧光素酶报告基因系统的构建及应用
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作者 周仕君 宋洁 +3 位作者 李帅 刘佳 李江南 翁长江 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期535-539,共5页
为建立一种检测蛋白酶活性的方法,本研究将IL-1β前体基因和荧光素酶基因融合,克隆至p CAGGS真核载体,构建了基于荧光素酶的报告基因系统(iGLuc),同时构建GLuc真核表达质粒作为对照。以PRRSV nsp4和ASFV S273R蛋白酶为检测对象,利用该... 为建立一种检测蛋白酶活性的方法,本研究将IL-1β前体基因和荧光素酶基因融合,克隆至p CAGGS真核载体,构建了基于荧光素酶的报告基因系统(iGLuc),同时构建GLuc真核表达质粒作为对照。以PRRSV nsp4和ASFV S273R蛋白酶为检测对象,利用该报告基因系统对病毒蛋白酶活性进行检测,将iGLuc中蛋白酶酶切位点(FVCDAN)相对应的基因序列替换为Kpn I酶切位点,构建重组质粒Kpn I-iGLuc,然后分别将PRRSV nsp4和ASFV S273R蛋白酶切割位点对应的核酸序列插入至报告基因Kpn I-iGLuc中的Kpn I位点,构建重组质粒nsp4-iGLuc和S273R-i GLuc。分别将报告基因质粒(iGLuc、GLuc、Kpn I-i GLuc、nsp4-i GLuc和S273R-iGLuc)与不同剂量的相应蛋白酶真核表达质粒共转染HEK293T细胞,24 h后检测上清中荧光素酶GLuc的活性。结果显示,转染i GLuc、nsp4-iGLuc或S273R-iGLuc质粒的上清中荧光信号随着相应蛋白酶的剂量增加而升高,呈现剂量依赖性,而缺失蛋白酶切位点的对照质粒无该现象,表明构建的荧光素酶报告基因能够特异性地检测细胞蛋白酶和病毒蛋白酶的活性。本研究首次建立了一种检测蛋白酶活性的方法,并以PRRSV nsp4和ASFV S273R蛋白酶验证了该方法的应用价值,为后续开展高通量化筛选抗PRRSV、ASFV等药物的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 蛋白活性 荧光报告基因 病毒蛋白 检测方法
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基于Golden Gate高效构建psiCHECK双荧光素酶报告基因的方法及应用
14
作者 杜雅婷 于文君 +2 位作者 李燕 付元磊 孙考祥 《山东第一医科大学(山东省医学科学院)学报》 CAS 2023年第3期180-185,共6页
目的 基于Golden Gate技术构建psiCHECK-CcdB重组双荧光素酶报告载体,并探讨其能否用于RNA干扰(RNA interference, RNAi)药物筛选。方法 通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增CcdB致死基因、氯霉素基因与Golden Gate组... 目的 基于Golden Gate技术构建psiCHECK-CcdB重组双荧光素酶报告载体,并探讨其能否用于RNA干扰(RNA interference, RNAi)药物筛选。方法 通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增CcdB致死基因、氯霉素基因与Golden Gate组装所需的BsmBI酶切位点,将其克隆至psiCHECK-2载体,构建出重组载体psiCHECK-CcdB。利用2种大肠杆菌DB3.1与DH5α对该载体的致死效率进行检测,选用1 387 bp大小的外源片段克隆至psiCHECK-CcdB载体,检测其连接效率,并验证重组载体能否发挥双荧光素酶报告系统功能,监测目的基因的表达变化。结果 菌落PCR以及测序鉴定psiCHECK-CcdB重组质粒构建成功,该质粒可有效致死无法耐受CcdB毒素的大肠杆菌DH5α菌株,在DB3.1菌株中正常生长。采用Golden Gate的方法可将外源片段简单快速克隆至psiCHECKCcdB载体中,连接效率显著提高且低背景克隆。通过测定双荧光素酶表达强度,证实了小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)靶向性结合目的基因可显著下调荧光素酶的表达,成功发挥双荧光素酶报告基因功能。结论 本研究成功构建了psiCHECK-CcdB重组双荧光素酶报告载体,应用Golden Gate组装技术,简化了实验操作流程,降低了实验成本,具备较高的阳性克隆率与多片段一次性组装的潜力,在RNAi药物筛选领域应用前景广阔。 展开更多
关键词 Golden Gate CcdB基因 荧光报告基因 分子克隆 RNAi药物筛选
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FLT-1启动子荧光素酶报告基因重组体的构建和鉴定 被引量:2
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作者 诸葛福媛 吕智美 +1 位作者 郑宏庭 邓华聪 《生物技术》 CAS CSCD 2008年第4期10-12,共3页
目的:为探索FLT-1启动子靶向调控活性分析,克隆FLT-1启动子基因序列,构建并鉴定FLT-1启动子调控的荧光素酶报告基因重组体pGL3-FLT-Basic-luc。方法:应用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增FLT-1启动子序列,定向亚克隆至荧光素酶表达载体pGL3-... 目的:为探索FLT-1启动子靶向调控活性分析,克隆FLT-1启动子基因序列,构建并鉴定FLT-1启动子调控的荧光素酶报告基因重组体pGL3-FLT-Basic-luc。方法:应用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增FLT-1启动子序列,定向亚克隆至荧光素酶表达载体pGL3-Basic-luc中,构建含有正确目的基因的报告基因重组体pGL3-FLT-Basic-luc,通过限性内切酶酶切、PCR及测序进行鉴定。结果:通过酶切鉴定及基因测定证明,所克隆的基因产物与预期结果一致,序列无碱基突变。结论:成功构建了含有FLT-1启动子基因序列的荧光素酶报告基因真核表达载体,为下一步分析该启动子活性及血管疾病的基因治疗奠定基础。 展开更多
关键词 启动子 FIT-1 荧光素酶基因表达载体 基因治疗
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KLF3基因3′-UTR区双荧光素酶报告载体及其突变载体的构建与活性鉴定 被引量:1
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作者 翟博 李旭 +4 位作者 王春昕 赵云辉 孙铭 张立春 张明新 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第3期644-650,共7页
试验旨在构建锌指蛋白3(KLF3)基因3′-UTR区双荧光素酶基因报告载体及其突变载体,初步分析可能调控KLF3基因表达的miRNAs。首先通过PCR方法扩增KLF3基因的3′-UTR序列,将其克隆到经XhoⅠ、NotⅠ双酶切的双荧光素酶报告载体中;运用Target... 试验旨在构建锌指蛋白3(KLF3)基因3′-UTR区双荧光素酶基因报告载体及其突变载体,初步分析可能调控KLF3基因表达的miRNAs。首先通过PCR方法扩增KLF3基因的3′-UTR序列,将其克隆到经XhoⅠ、NotⅠ双酶切的双荧光素酶报告载体中;运用Targetscan软件预测可能与KLF3基因3′-UTR相互作用的miRNA;使用脂质体2000转染试剂将miRNAs mimics与构建好的KLF3基因3′-UTR段双荧光素酶报告载体或突变载体共转染于常规培养的293T细胞中,检测荧光素酶活性。结果表明,KLF3基因3′-UTR可能是miR-21的作用靶位点;双荧光报告显示,miR-21 mimics组(0.6900±0.0144)比突变组(1.000±0.0688)和空白对照组(1.000±0.0159)KLF3基因3′-UTR双荧光素酶基因报告载体和突变载体的活性降低了31%(P<0.01)。本试验成功构建了含有KLF3基因3′-UTR段双荧光素酶基因报告载体与突变载体,初步证实miR-21对KLF3基因有调控作用。 展开更多
关键词 KLF3基因 荧光素酶基因报告载体 MIR-21 3′-非编码区
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鹅垂体特异性转录因子荧光素酶报告基因重组体的构建和鉴定
17
作者 赵荣雪 段修军 +6 位作者 赵文明 董飚 徐琪 孙国波 乔娜 张海波 陈国宏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1032-1038,共7页
为研究垂体特异性转录因子(Pituitary transcription factor 1,Pit1)启动子转录调控机制,将获得的Pit1基因的启动子,插入荧光素酶报告基因载体中,构建Pit1基因启动子调控的报告基因重组表达质粒。本研究利用染色体步移技术扩增鹅Pit1基... 为研究垂体特异性转录因子(Pituitary transcription factor 1,Pit1)启动子转录调控机制,将获得的Pit1基因的启动子,插入荧光素酶报告基因载体中,构建Pit1基因启动子调控的报告基因重组表达质粒。本研究利用染色体步移技术扩增鹅Pit1基因的启动子,定向亚克隆至荧光素酶表达载体pGL3-Basic中,构建含有正确目的基因的报告基因重组体pGL3-Pit1,并通过限性内切酶酶切、PCR及测序进行鉴定。通过酶切鉴定及基因测序证明,所克隆的基因产物与预期结果一致,序列无碱基突变。结果,成功构建了含有Pit1启动子基因序列的荧光素酶报告基因真核表达载体,为下一步分析该启动子活性及转录调控机理奠定基础。 展开更多
关键词 Pit1基因 启动子 荧光素酶基因表达载体
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荧光素酶基因报告载体的构建
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作者 邓廷贤 王建 +2 位作者 杨炳壮 梁贤威 庞春英 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1263-1266,共4页
为筛选和验证人工锌指核酸酶的活性,本研究基于SSA原理,采用LA-PCR法和基因工程操作技术构建了1个荧光素酶基因报告载体。经菌落PCR、限制性内切酶鉴定及DNA测序验证表明,锌指核酸酶筛选验证的报告载体构建成功,为进一步开展锌指核酸酶... 为筛选和验证人工锌指核酸酶的活性,本研究基于SSA原理,采用LA-PCR法和基因工程操作技术构建了1个荧光素酶基因报告载体。经菌落PCR、限制性内切酶鉴定及DNA测序验证表明,锌指核酸酶筛选验证的报告载体构建成功,为进一步开展锌指核酸酶技术研究提供了试验平台。 展开更多
关键词 SSA 锌指核酸 荧光素酶基因
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丙型肝炎病毒cDNA与荧光素酶融合基因可调控逆转录病毒载体的构建
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作者 贾战生 周永兴 +4 位作者 冯志华 连建奇 栾荣华 李谨革 李光玉 《实用肝脏病杂志》 CAS 1999年第1期4-6,共3页
目的 构建丙型肝炎病毒(HCV)cDNA与荧光素酶(Luc)融合基因可调控逆转录病毒载体,以建立容易检测的HCV体外细胞模型。方法 利用基因重组技术,将HCV5’非编码区(5’NCR)和/或核心(C)区基因克隆于pGEM-Luc-DNA载体,使其与Luc基因相融合,然... 目的 构建丙型肝炎病毒(HCV)cDNA与荧光素酶(Luc)融合基因可调控逆转录病毒载体,以建立容易检测的HCV体外细胞模型。方法 利用基因重组技术,将HCV5’非编码区(5’NCR)和/或核心(C)区基因克隆于pGEM-Luc-DNA载体,使其与Luc基因相融合,然后再将融合基因插入可调控逆转录病毒载体(PBPSTR1)。结果pCEM-HCVl和pBPSTRl-HCV经酶切鉴定,HCV5’NCR和/或C区cDNA已与Luc基因融合,并被克隆于pBPSTRl。结论 通过体外分子克隆技术可使HCV基因cDNA带上Luc报告基因,并可克隆于逆转录病毒载体,为建立易检测的HCV细胞模型和进一步抗病毒基因治疗以及药物的筛选奠定了基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 逆转录病毒载体 荧光素酶基因
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FOXP3基因3’-UTR段双荧光素酶报告载体的构建及其活性鉴定
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作者 陈泽志 李劲频 +2 位作者 杜伟伟 刘竞丽 莫雪安 《广西医科大学学报》 CAS 2014年第2期170-173,共4页
目的:构建FOXP3基因3’-UTR双荧光素酶基因报告载体,并通过检测荧光素酶活性,初步分析可能调控FOXP3基因表达的miRNAs。方法:利用PCR方法,根据FOXP3基因3’-UTR序列信息设计其扩增引物,以293T细胞基因组DNA为模板PCR扩增FOXP3基因的3’-... 目的:构建FOXP3基因3’-UTR双荧光素酶基因报告载体,并通过检测荧光素酶活性,初步分析可能调控FOXP3基因表达的miRNAs。方法:利用PCR方法,根据FOXP3基因3’-UTR序列信息设计其扩增引物,以293T细胞基因组DNA为模板PCR扩增FOXP3基因的3’-UTR序列,将其克隆到pmiRB-REPORT双荧光素酶报告载体中;运用Targetscan软件预测可能与FOXP3基因3’-UTR相互作用的miRNAs;利用LipofectaminTM2000试剂将miRNAs mimics与构建好的FOXP3基因3’-UTR段双荧光素酶报告载体共转染于常规培养的293T细胞中,然后使用双荧光素酶试剂盒检测荧光素酶活性,并与空白对照相比较。结果:经酶切及基因测序验证,成功构建含有FOXP3基因3’-UTR段双荧光素酶基因报告载体;Targetscan软件预测显示,FOXP3基因3’-UTR可能是miR-608的作用靶位点;双荧光报告显示,miR-608mimics组比空白对照组[(0.700 0±0.016 41)比(1.000±0.055 75)(P<0.001)]FOXP3基因3’-UTR双荧光素酶基因报告载体的荧光素酶活性下降30%。结论:FOXP3基因3’-UTR段双荧光素酶基因报告载体构建成功,初步证实miR-608对FOXP3有调控作用。 展开更多
关键词 荧光素酶基因报告 转录因子叉头样p3 微小RNA-608 3'-非编码区
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