蚀斑法测定呼吸道合胞病毒滴度的建立和验证

1

作者 刘悦越 赵荣荣 +5 位作者 赵慧 李淑艳 英志芳 邵铭 王剑锋 李长贵 《山西医科大学学报》 CAS 2023年第11期1515-1519,共5页

目的建立蚀斑法用于呼吸道合胞病毒的病毒滴度测定,并进行验证。方法通过测定样品的病毒滴度,比较滴度结果,筛选最佳覆盖物、覆盖物浓度和病毒孵育时间,从而建立蚀斑法用于测定呼吸道合胞病毒滴度。根据国际人用药品注册技术协调会指导... 目的建立蚀斑法用于呼吸道合胞病毒的病毒滴度测定,并进行验证。方法通过测定样品的病毒滴度,比较滴度结果,筛选最佳覆盖物、覆盖物浓度和病毒孵育时间,从而建立蚀斑法用于测定呼吸道合胞病毒滴度。根据国际人用药品注册技术协调会指导原则和《中华人民共和国药典》要求,验证该方法的准确性、精密性、线性和耐用性。结果采用0.8%微晶纤维素作为覆盖物,病毒孵育2~3 h为建立蚀斑法的最优条件。该蚀斑法测定不同浓度样品病毒滴度的结果相对偏倚均小于10%;试验内和试验间精密性几何变异系数分别为11%和18%;本方法的线性斜率为1.004,相关系数为0.9991;本方法中固定细胞的时间0.5~24 h均适用,差异无统计学意义(F=1.767,P=0.2225)。结论建立的蚀斑法具有较好的准确性、精密性、线性和耐用性,适用于呼吸道合胞病毒的滴度测定。 展开更多

关键词 呼吸道合胞病毒 病毒滴度 蚀斑法 微晶纤维素 方法验证

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应用快速HEPES蚀斑法检测狂犬病毒 被引量：5

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作者 邵益斌 顾勤 曾蓉芳 《中国病毒学》 CSCD 1994年第1期70-73,共4页

应用快速ＨＥＰＥＳ蚀斑法检测狂犬病毒邵益斌，顾勤，曾蓉芳（卫生部上海生物制品研究所；上海２０００５２）关键词ＨＥＰＦＳ蚀斑法，ＭＣ蚀斑法，小鼠脑内毒力滴定，狂犬病毒蚀斑法作为滴定活性病毒效价常用的比较精确的方法早被广... 应用快速ＨＥＰＥＳ蚀斑法检测狂犬病毒邵益斌，顾勤，曾蓉芳（卫生部上海生物制品研究所；上海２０００５２）关键词ＨＥＰＦＳ蚀斑法，ＭＣ蚀斑法，小鼠脑内毒力滴定，狂犬病毒蚀斑法作为滴定活性病毒效价常用的比较精确的方法早被广泛应用。国内外学者已经建立并应用狂... 展开更多

关键词 HEPES蚀斑法 MC蚀斑法 狂犬病毒

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应用蚀斑法滴定17D黄热疫苗效力 被引量：3

3

作者 李淑云 黄浩 +3 位作者 刘瑜瑄 星海 高静 唐巧英 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2000年第3期180-182,共3页

目的　用蚀斑法代替小鼠法滴定黄热疫苗效力。方法　用Vero细胞蚀班法与小鼠法同时滴定 14批黄热疫苗。结果　两种方法滴定结果差异无显著意义 (t=1.14,P >0 .0 5 ) ,二法呈正相关 (r =0 .5 2 89,PFU与LD50 的比率为5 .75 ,在WHO推荐... 目的　用蚀斑法代替小鼠法滴定黄热疫苗效力。方法　用Vero细胞蚀班法与小鼠法同时滴定 14批黄热疫苗。结果　两种方法滴定结果差异无显著意义 (t=1.14,P >0 .0 5 ) ,二法呈正相关 (r =0 .5 2 89,PFU与LD50 的比率为5 .75 ,在WHO推荐的 3～ 30之间[1] )。判定结果时间由原来的 2 1d缩短为 6d。结论　蚀斑法具有快速、经济、操作简单、重复性好诸多优点 。 展开更多

关键词 黄热疫苗 病毒滴定 蚀斑法

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BHK_(21)细胞对蚀斑法检测乙型脑炎减毒活疫苗结果的影响分析 被引量：4

4

作者 吕文利 张雪 +2 位作者 袁瑾 赵新华 肖健 《微生物学免疫学进展》 2016年第1期18-21,共4页

目的分析BHK_(21)细胞对蚀斑法检测乙型脑炎减毒活疫苗系统的影响,降低检测系统误差。方法比较BHK_(21)细胞以不同频次传代培养时的细胞生长状态,以及以不同接种浓度进行疫苗病毒滴度检测时,对检测系统稳定性的影响。结果 BHK_(21)细胞... 目的分析BHK_(21)细胞对蚀斑法检测乙型脑炎减毒活疫苗系统的影响,降低检测系统误差。方法比较BHK_(21)细胞以不同频次传代培养时的细胞生长状态,以及以不同接种浓度进行疫苗病毒滴度检测时,对检测系统稳定性的影响。结果 BHK_(21)细胞培养4 d传代,其形态良好、边缘光滑、胞质透光性好、细胞分散均匀、细胞活率达到95%以上;BHK_(21)以105细胞/m L浓度接种时,乙型脑炎减毒活疫苗及其病毒滴度参考品的变异系数最小,分别为0.66%和0.64%。结论 BHK_(21)细胞培养4 d传代、以105个/m L浓度接种时用蚀斑法检测病毒滴度系统最稳定,可供乙型脑炎减毒活疫苗滴度检测参考。 展开更多

关键词 BHK21细胞 蚀斑法 传代频次 接种浓度 参考

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用蚀斑法进行麻疹疫苗的病毒滴定 被引量：4

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作者 张静 李伟华 +2 位作者 陈顺英 郭秀英 李黎 《微生物学免疫学进展》 1999年第1期35-38,共4页

按世界银行中国疫苗项目对麻疹疫苗检定的要求，建立了麻疹疫苗病毒滴定的蚀斑方法。以蚀斑法对Ｈｕ１９１株生产的冻干麻疹活疫苗样品进行了测定。结果发现，Ｈｕ１９１株生产的麻疹疫苗在琼脂和甲基纤维素覆盖下所形成的蚀斑大小及形... 按世界银行中国疫苗项目对麻疹疫苗检定的要求，建立了麻疹疫苗病毒滴定的蚀斑方法。以蚀斑法对Ｈｕ１９１株生产的冻干麻疹活疫苗样品进行了测定。结果发现，Ｈｕ１９１株生产的麻疹疫苗在琼脂和甲基纤维素覆盖下所形成的蚀斑大小及形状不同，但滴度无显著性差异；在室温和３７℃吸附的滴度无显著性差异，但细胞在３７℃生长较好；在本实验条件下，蚀斑滴定和ＣＣＩＤ５０测定的滴度呈正相关，蚀斑滴定相对较敏感；采用国产６孔聚苯乙稀培养板，Ｖｅｒｏ细胞单层，在３７℃吸附，用甲基纤维素覆盖，经结晶紫及甲醛固定染色后计数空斑，操作简便易行，结果特异敏感，重复性好。 展开更多

关键词 麻疹疫苗 病毒滴定 蚀斑法

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应用蚀斑法和细胞病变法检测乙型脑炎减毒活疫苗病毒的比较 被引量：2

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作者 贾丽丽 王叔桥 +4 位作者 岳广智 王志伟 郑铮 俞永新 王寿贵 《微生物学免疫学进展》 1999年第3期28-30,共3页

应用蚀斑法（ＰＦＵ）和细胞病变法（ＣＰＥ）检测乙型脑炎减毒活疫苗的病毒滴度，比较结果：①两种方法同时对同一批乙脑活疫苗进行１０次测定，ＣＰＥ滴定结果比ＰＦＵ滴定高１０Ｌｏｇ值，标准差Ｓ＝０１９６，变异系数ＣＶ％＝... 应用蚀斑法（ＰＦＵ）和细胞病变法（ＣＰＥ）检测乙型脑炎减毒活疫苗的病毒滴度，比较结果：①两种方法同时对同一批乙脑活疫苗进行１０次测定，ＣＰＥ滴定结果比ＰＦＵ滴定高１０Ｌｏｇ值，标准差Ｓ＝０１９６，变异系数ＣＶ％＝１９２％；②对不同批乙脑活疫苗检测，仍以ＣＰＥ法高于ＰＦＵ，差值Ｘ＝１２０，标准差Ｓ＝０３１，变异系数ＣＶ％＝２５６％；③ＰＦＵ法对同一批疫苗滴定３０次，乙脑活疫苗参考品滴定１８次，变异系数仅为１４８％和１２７％。结果表明，虽然ＣＰＥ法用于滴定乙脑活疫苗的滴度高于ＰＦＵ法，但蚀斑法系统误差小，重复性好，结果客观可靠，可避免ＣＰＥ法中由于细胞退化和工作人员主观判定造成的系统误差。 展开更多

关键词 乙型脑炎 减毒活疫苗 细胞病变法 蚀斑法

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用蚀斑法滴定痘苗病毒的准确性及其精确数学模型的探讨 被引量：2

7

作者 王继麟 朱家鸿 《中国病毒学》 CSCD 1997年第2期178-184,共7页

用蚀斑法滴定病毒是确定感染病毒颗粒存在数量的一种较准确方法。本实验表明，痘苗病毒吸附4h后仍有大量病毒粒子未能吸附到细胞单层，进而测定出病毒接种量、维持液加量和所测病毒滴度间具有一种互为消长的非线性相关性。因而设计了几... 用蚀斑法滴定病毒是确定感染病毒颗粒存在数量的一种较准确方法。本实验表明，痘苗病毒吸附4h后仍有大量病毒粒子未能吸附到细胞单层，进而测定出病毒接种量、维持液加量和所测病毒滴度间具有一种互为消长的非线性相关性。因而设计了几种检测方法，其准确性均优于常规痘苗病毒蚀斑测定法。利用装配有Mathematic软件包的计算机在痘苗病毒接种量、维持液加量和所测病毒滴度间建立了曲线拟合模型和曲面拟合模型。通过曲线拟合模型推断病毒感染滴度为常规法滴定值的近5倍。 展开更多

关键词 蚀斑法 痘苗病毒 准确性 数学模型

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应用蚀斑法检测甲型肝炎中和抗体

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作者 张曦 何静芳 +1 位作者 孙碧芳 胡孟冬 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 1996年第3期123-123,共1页

关键词 甲型肝炎 抗体检测 蚀斑法

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森林脑炎病毒滴度检测蚀斑法的建立及验证

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作者 陈娜娜 陈诗阳 +5 位作者 王颖 杜翔宇 苗会 拱小棠 刘双军 李景良 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期207-210,216,共5页

目的建立原代地鼠肾(primary hamster kidney,PHK)细胞适应的森林脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus,TBEV)株(简称PHKT株)感染性滴度检测的蚀斑法,并对建立的方法进行验证。方法将主代鼠脑适应株TBEV感染原代地鼠肾PHK细胞,连续... 目的建立原代地鼠肾(primary hamster kidney,PHK)细胞适应的森林脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus,TBEV)株(简称PHKT株)感染性滴度检测的蚀斑法,并对建立的方法进行验证。方法将主代鼠脑适应株TBEV感染原代地鼠肾PHK细胞,连续传12代。分别采用蚀斑法(将不同代次PHKT以不同稀释倍数感染单层BHK-21细胞,中性红染色,计算蚀斑数)和小鼠脑内攻毒滴定法(将不同代次PHKT以不同稀倍数经脑腔攻击小鼠,0.03 mL/只,连续观察14 d,Reed-Muench方法计算半数致死量)检测PHKT滴度,并对两种方法检测结果的相关性进行分析。对建立的检测TBEV滴度的蚀斑法进行专属性、重复性和中间精密度验证。结果PHKT病毒蚀斑滴度最高达8.9 lgPFU/mL;蚀斑法与小鼠脑内攻毒滴定法检测结果相关性较好(r=0.92);蚀斑法检测PHKT病毒感染性滴度专属性良好,重复性和中间精密度变异系数(CV)均<5%。结论建立了检测PHKT感染性滴度的蚀斑法,可作为小鼠脑内攻毒滴定法的替代方法。 展开更多

关键词 森林脑炎病毒 蚀斑法 小鼠脑内攻毒滴定法 感染性滴度 森林脑炎灭活疫苗

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狂犬病病毒PM株病毒滴度检测改良蚀斑法的建立 被引量：2

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作者 孙艳 陈智 +6 位作者 钟静 刘莉娜 何敏 范凤鸣 杨欢 曾献武 刘杰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第5期570-574,共5页

目的建立检测狂犬病病毒PM株病毒滴度的改良蚀斑法,并验证其精密度。方法于细胞接种病毒后第6天,分别加入不同浓度(0、50、75、100、200、400 mmol/L)HEPES溶液,以及分别于细胞接种病毒后第2、4、6、8天,加入最适浓度的HEPES溶液,确定HE... 目的建立检测狂犬病病毒PM株病毒滴度的改良蚀斑法,并验证其精密度。方法于细胞接种病毒后第6天,分别加入不同浓度(0、50、75、100、200、400 mmol/L)HEPES溶液,以及分别于细胞接种病毒后第2、4、6、8天,加入最适浓度的HEPES溶液,确定HEPES最适加入浓度及蚀斑最适判定时间,建立改良的蚀斑法,检测48批狂犬病病毒毒力,并与小鼠脑内滴定法进行相关性比较;重复检测3次10批狂犬病病毒收获液毒力,计算变异系数(CV)。结果接种病毒后第6天后加入200 mmol/L HEPES溶液,形成的蚀斑清晰,易于计数。建立的蚀斑法与小鼠脑内滴定法具有高度相关性,3次检测结果的CV在0. 4%～3. 38%之间,重复性良好。结论加入HEPES溶液改良后的蚀斑法,操作便捷,是较为理想的滴定狂犬病病毒PM株毒力的方法,可替代小鼠脑内滴定法。 展开更多

关键词 狂犬病病毒PM株 病毒滴定 蚀斑法

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森林脑炎中和抗体蚀斑减少试验方法的建立及疫苗免疫人体后抗体检测 被引量：4

11

作者 宋宗明 韩亮 +4 位作者 洪成龙 岳立广 刘双军 赵红丽 钱依群 《微生物学免疫学进展》 2003年第2期21-24,共4页

为评价森林脑炎疫苗的免疫效果 ,采用森林脑炎病毒的BHK细胞适应株 ,以BHK细胞为培养基质 ,建立了检测森林脑炎中和抗体的蚀斑减少试验方法 ,并用蚀斑减少法、小鼠法及ELISA法检测了原制森林脑炎灭活疫苗免疫人体后的中和抗体水平 ;免... 为评价森林脑炎疫苗的免疫效果 ,采用森林脑炎病毒的BHK细胞适应株 ,以BHK细胞为培养基质 ,建立了检测森林脑炎中和抗体的蚀斑减少试验方法 ,并用蚀斑减少法、小鼠法及ELISA法检测了原制森林脑炎灭活疫苗免疫人体后的中和抗体水平 ;免疫血清为按疫苗免疫程序免疫健康志愿者采血分离而制备。结果表明蚀斑减少法与小鼠法的特异性相近且敏感性较好、简便快速 ,缩短检测周期 ,为疫苗流行病学调查及新型疫苗的研究提供了快速的检测方法 ;原制灭活疫苗人体二针免疫后 ,人体血清中和抗体阳转率仅 30 %左右 。 展开更多

关键词 森林脑炎病毒 蚀斑法 免疫 中和试验

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用免疫蚀斑方法筛选重组痘苗病毒疫苗株

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作者 谷淑燕 董温平 朱秋屏 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第2期129-134,共6页

用间接免疫酶方法在硝酸纤维膜上检查、筛选和回收重组痘苗病毒。作为人用疫苗株的筛选，此法较核酸杂交方法更简便、直观和准确，在筛选重组病毒的同时确定了病毒在感染细胞上的表达。构建了含痘苗病毒７．５ｋ启动子和ＥＢ病毒膜抗原... 用间接免疫酶方法在硝酸纤维膜上检查、筛选和回收重组痘苗病毒。作为人用疫苗株的筛选，此法较核酸杂交方法更简便、直观和准确，在筛选重组病毒的同时确定了病毒在感染细胞上的表达。构建了含痘苗病毒７．５ｋ启动子和ＥＢ病毒膜抗原基因的转移载体，从转染细胞的病毒混合液中用特异性ＭｃＡｂ和间接免疫酶方法直接筛选表达ＥＢ病毒膜抗原的重组痘苗病毒，并从阳性酶斑中回收具感染性病毒。 展开更多

关键词 重组痘苗病毒 疫苗株 筛选方法 免疫蚀斑法

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用蚀斑法和微滴法滴定脊髓灰质炎病毒的比较 被引量：1

13

作者 戴永祥 李克坚 +1 位作者 王明秀 姜述德 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 1994年第3期268-268,共1页

用蚀斑法和微滴法滴定脊髓灰质炎病毒的比较戴永祥，李克坚，王明秀，姜述德（中国医学科学院医学生物学研究所，昆明６５０１０７）口服脊髓灰质炎活疫苗（ＯＰＶ）生产，一直使用原代猴肾细胞，由于猴子来源困难，而且污染猴病毒，直... 用蚀斑法和微滴法滴定脊髓灰质炎病毒的比较戴永祥，李克坚，王明秀，姜述德（中国医学科学院医学生物学研究所，昆明６５０１０７）口服脊髓灰质炎活疫苗（ＯＰＶ）生产，一直使用原代猴肾细胞，由于猴子来源困难，而且污染猴病毒，直接影响到疫苗生产。用人二倍体细胞代... 展开更多

关键词 脊髓灰质病毒 蚀斑法 微滴法 滴定 疫苗

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蚀斑法检测流感病毒滴度方法的建立及初步验证 被引量：4

14

作者 廖辉 刘苗苗 +3 位作者 吴琼 李璇 杨文腰 周荔葆 《微生物学免疫学进展》 CAS 2021年第5期48-53,共6页

目的建立流感病毒滴度蚀斑检测方法,研究其适用性,为基于Vero细胞基质的四价流感裂解疫苗原液生产过程提供质控手段。方法通过优化覆盖物琼脂糖含量、病毒吸附时间及培养温度等参数,建立蚀斑法检测流感病毒滴度检测的方法,对其进行初步... 目的建立流感病毒滴度蚀斑检测方法,研究其适用性,为基于Vero细胞基质的四价流感裂解疫苗原液生产过程提供质控手段。方法通过优化覆盖物琼脂糖含量、病毒吸附时间及培养温度等参数,建立蚀斑法检测流感病毒滴度检测的方法,对其进行初步验证,并与鸡胚法进行比较。结果通过对流感病毒培养条件的优化,确定覆盖物中最佳琼脂糖终浓度为1.0%(P=0.001,P<0.05)、最佳吸附时间为90 min(P=0.001,P<0.05),与对照差异具有统计学意义;不同温度(33℃、35℃和37℃)培养条件对病毒滴度的影响差异无统计学意义(P>0.05)。对病毒液重复性试验结果显示,由同一组试验人员连续测定8次,CV在3.73%~7.04%之间;同一组试验人员在不同工作日内对3批甲型(H3N2)病毒液测定,CV在3.46%~4.12%之间;不同试验人员测定结果的CV在1.77%~5.63%之间。表明蚀斑法重复性好、准确度高。蚀斑法与鸡胚法检测病毒滴度分别为7.84 lgPFU/mL和7.24 lgEID_(50)/mL,CV分别为2.90%(<5%)和10.21%。蚀斑法在流感病毒2017—2018年流行株病毒滴度检测中应用,均获得稳定的检测结果。结论建立的蚀斑法简便、稳定且灵敏度高,能够准确地检测流感病毒的滴度,可用于流感疫苗生产过程的质量控制研究。 展开更多

关键词 流感病毒 蚀斑法 感染性滴度 VERO细胞

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用双抗夹心ELISA法快速检测灭活乙型脑炎疫苗的效价

15

作者 苏文全 谭煦 +1 位作者 刘海娇 杨栋 《药学服务与研究》 CAS CSCD 2010年第1期44-46,共3页

目的：用单克隆抗体制备的双抗夹心ELISA法快速检测灭活乙型脑炎疫苗中的乙型脑炎病毒包膜蛋白（E）的含量,并探讨其替代蚀斑减少中和试验法的可行性。方法：将疫苗样品用蚀斑减少中和试验法测定,同时选定一批疫苗为参考疫苗,用双抗夹心... 目的：用单克隆抗体制备的双抗夹心ELISA法快速检测灭活乙型脑炎疫苗中的乙型脑炎病毒包膜蛋白（E）的含量,并探讨其替代蚀斑减少中和试验法的可行性。方法：将疫苗样品用蚀斑减少中和试验法测定,同时选定一批疫苗为参考疫苗,用双抗夹心ELISA法检测。结果：用双抗夹心ELISA法测得的中和指数（TE）为1.595-1.655。用蚀斑减少中和试验法测得的中和指数（TP）为1.367-1.932。经F检测,两种检测方法的灵敏度有极显著差异（F=56.25,P〈0.01）,用t检验法对这两种检测方法进行统计分析,表明两组测定值的差异无统计学意义（t=0.079 3,P〉0.05）。结论：双抗夹心ELISA法与蚀斑减少中和试验法测得的中和指数（T）呈正相关性;与蚀斑减少中和试验法比,双抗夹心ELISA法具有重复性好、成本低、快速等优点。用双抗夹心ELISA法取代蚀斑减少中和试验法测灭活乙型脑炎疫苗效价是可行的。 展开更多

关键词 双抗夹心ELISA 乙型脑炎疫苗 灭活 蚀斑减少中和试验法 效价

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水痘-带状疱疹病毒滴定方法的优化与应用评价

16

作者 张菱芳 楚巧鸿 +5 位作者 李佳 霍恕婷 韩笑天 邓瑶 王海生 谭文杰 《国际病毒学杂志》 北大核心 2024年第2期134-139,共6页

目的对水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)病毒滴定方法进行优化,并应用于中和抗体检测和抗病毒药物体外检测。方法采用VZV疫苗株Voka株在48孔板感染人视网膜上皮细胞(adult retinal pigment epithelial cell line-19,ARPE-... 目的对水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)病毒滴定方法进行优化,并应用于中和抗体检测和抗病毒药物体外检测。方法采用VZV疫苗株Voka株在48孔板感染人视网膜上皮细胞(adult retinal pigment epithelial cell line-19,ARPE-19),连续7 d检测感染后病毒复制动力学与蚀斑特点;分别建立并优化活病毒滴定的蚀斑染色法和酶联免疫斑点法(enzyme linked immunospot assay,ELISPOT),同时对两种方法检测结果的相关性进行分析,并将改进后的方法应用于VZV药物抑制效果检测和血清中和抗体检测。结果VZV感染ARPE-19细胞(感染复数为0.05)后,第6天到达复制顶峰并形成肉眼可见蚀斑;蚀斑染色法中,添加0.2 mg/mL二乙胺乙基葡聚糖(diethylaminoethyl-dextran,DEAE-Dextran)后,较未添加组产生更大与边缘更加清晰的蚀斑。ELISPOT法可在感染后第3天进行计数,同时通过改变检测用抗体与显色液等,可产生更加清晰可计的斑点。两种方法可采用机器计数,检测病毒滴度或应用于体外检测抗VZV药物效力与血清中和抗体滴度,具有良好的相关性。结论优化后ELISPOT法快捷灵敏,可替代蚀斑染色法应用于VZV病毒滴度检测与相关应用。本研究为VZV的检测及疫苗药物研发提供了更简捷可靠的实验方法。 展开更多

关键词 水痘-带状疱疹 蚀斑法 酶联免疫斑点法 中和抗体 抗病毒药物

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用免疫近氧化物酶蚀斑试验检测和定量马立克氏病病毒蚀斑

17

作者 李凯年 Silv,RF 《国外兽医学（畜禽传染病）》 1998年第3期52-52,共1页

关键词 免疫过氧化物酶 酶蚀斑测定法 病毒蚀斑

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杆状病毒微滴式数字PCR检测方法的建立及验证

18

作者 黄天威 苏文瀚 +2 位作者 彭涛 许煜华 陈忠正 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第10期1251-1256,1262,共7页

目的建立杆状病毒(baculovirus,BV)微滴式数字PCR检测方法,并对其退火温度、引物及探针浓度优化后,进行方法验证。方法根据GP64基因保守序列特征,设计特异性引物及TaqMan探针,建立靶向BV的微滴式数字PCR检测方法,优化体系的退火温度、... 目的建立杆状病毒(baculovirus,BV)微滴式数字PCR检测方法,并对其退火温度、引物及探针浓度优化后,进行方法验证。方法根据GP64基因保守序列特征,设计特异性引物及TaqMan探针,建立靶向BV的微滴式数字PCR检测方法,优化体系的退火温度、引物及探针浓度,并进行方法的特异性、重复性、灵敏度、线性验证;采用建立的微滴数字式PCR法检测GMP中试生产车间24份样本,并与蚀斑法检测结果继续比较。结果建立了靶向BV的微滴式数字PCR检测方法,优化后的退火温度、引物及探针浓度分别为58.0℃、400 nmol/L、200 nmol/L。仅以BV核酸为模板的反应中检测到阳性液滴,方法特异性良好;批内重复性CV在2.78%~7.45%之间,批间重复性CV在2.28%~7.05%之间,均<10%,方法重复性良好;最低检测限为3.06 copies/μL,约为常规PCR的100倍,方法灵敏度高;24份样本检测结果与蚀斑法接近,相关系数(r)为0.913。结论成功建立了针对BV的优化后的微滴式数字PCR检测方法,该方法具有良好的特异性、重复性、灵敏度、快捷性,可用于生产中BV的快速检测。 展开更多

关键词 杆状病毒 微滴式数字PCR法 蚀斑法

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含GFP-Lac Z基因的伪狂犬病病毒上海株缺失株的构建 被引量：3

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作者 姜焱 张常印 +1 位作者 黄伟坚 陈溥言 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期120-122,共3页

在伪狂犬病病毒 (PRV)上海株gI和gE基因克隆鉴定的基础上 ,用BamHⅠ +BstpⅠ去掉gE基因的 5′端 36 3bp ,在缺失位置插入绿色荧光蛋白 (GFP)和LacZ基因 ,构建含双报告基因的PRV SH转移载体pgEI GFPZ。将pgEI GFPZ转染PRV SH的BHK 2 1细... 在伪狂犬病病毒 (PRV)上海株gI和gE基因克隆鉴定的基础上 ,用BamHⅠ +BstpⅠ去掉gE基因的 5′端 36 3bp ,在缺失位置插入绿色荧光蛋白 (GFP)和LacZ基因 ,构建含双报告基因的PRV SH转移载体pgEI GFPZ。将pgEI GFPZ转染PRV SH的BHK 2 1细胞 ,待出现 80 %病变后收获病毒 。 展开更多

关键词 伪狂犬病病毒 上海株 GFP-Lac Z基因缺失株 蚀斑法 绿色荧光蛋白 基因表达盒 疫苗

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藏药甘青乌头生物碱抗单纯疱疹病毒Ⅱ型体内外作用 被引量：13

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作者 张春江 李薇 +1 位作者 孙振鹏 赵星文 《兰州大学学报（医学版）》 CAS 2010年第4期1-6,共6页

目的探讨藏药甘青乌头脂溶性生物碱（ALA）和水溶性生物碱（AWA）抗单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV-2）的作用和机制。方法四甲基偶氮唑蓝法测定细胞毒性,细胞病变作用法和蚀斑法测定甘青乌头生物碱体外抗HSV-2活性,以半数有效浓度和治疗指数为... 目的探讨藏药甘青乌头脂溶性生物碱（ALA）和水溶性生物碱（AWA）抗单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV-2）的作用和机制。方法四甲基偶氮唑蓝法测定细胞毒性,细胞病变作用法和蚀斑法测定甘青乌头生物碱体外抗HSV-2活性,以半数有效浓度和治疗指数为评价指标;荧光定量聚合酶链式反应法（FQ-PCR）和蚀斑法考察ALA和AWA体外抗HSV-2作用机制。用HSV-2建立小鼠脑炎模型,对AWA体内抗HSV-2的活性进行评价。结果 ALA和AWA对Vero细胞的半数中毒浓度分别为3.57和7.87mg/mL。ALA和AWA半数有效质量浓度分别为4.99和2.81 mg/mL,治疗指数分别为0.72和2.80。ALA和AWA均能直接灭活HSV-2,能够显著抑制HSV-2的感染性。ALA对吸附到非洲绿猴肾细胞的HSV-2没有抑制作用,能微弱抑制HSV-2大分子的增殖,对HSV-2 DNA的复制没有作用。AWA能够抑制HSV-2吸附,抑制HSV-2大分子的增殖,抑制HSV-2 DNA的合成,抑制倍数达10~2。AWA对小鼠的半数中毒质量浓度为0.28mg/kg。AWA延长了小鼠的平均存活时间,对小鼠的死亡显示出10%的保护率。结论 AWA抗HSV-2的活性大于ALA,ALA主要通过直接灭活HSV-2,AWA通过抑制HSV-2复制循环的各个环节起作用。 展开更多

关键词 藏药 甘青乌头 生物碱 单纯疱疹病毒Ⅱ型 细胞病变作用法 蚀斑法 荧光定量聚合酶链式反应法

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