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重组小反刍兽疫病毒血凝素蛋白纯化体系的优化
1
作者 胡林杰 朱学亮 +4 位作者 彭泓蛟 邓瑞雪 潘春容 孙跃峰 蒙学莲 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期79-86,共8页
本试验利用发酵技术诱导表达了小反刍兽疫病毒H蛋白胞外区(PPRV tH),优化建立了一套纯化重组PPRV tH的完整工艺体系。通过发酵表达获得的10 L菌液,菌体湿重约达30 g/L,均质机破碎菌体获得包涵体;Tris-0缓冲液(pH=8.0)洗涤包涵体3次,每1 ... 本试验利用发酵技术诱导表达了小反刍兽疫病毒H蛋白胞外区(PPRV tH),优化建立了一套纯化重组PPRV tH的完整工艺体系。通过发酵表达获得的10 L菌液,菌体湿重约达30 g/L,均质机破碎菌体获得包涵体;Tris-0缓冲液(pH=8.0)洗涤包涵体3次,每1 g包涵体加入5 mL含20 mmol/L咪唑的Tris-E缓冲液(pH=8.0)重悬,4℃温和旋转溶解过夜,离心收集上清;按体积比1∶2将层析填料Chelaing Sepharose Fast Flow与上清混匀,以流速1~2 mL/min加入层析柱;依次通过10倍柱体积含50、100、400和500 mmol/L咪唑的Tris-E缓冲液(pH=8.0),4℃静置2 h进行洗脱。优化后的纯化体系可得到较纯的重组PPRV tH蛋白,利用灰度分析可知纯化后的重组PPRV tH蛋白纯度能达到85%。本试验提供的纯化体系可快速、简便、低成本、大批量纯化重组PPRV tH蛋白,而且纯化获得的PPRV tH蛋白具有良好的反应原性。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 血凝素蛋白 蛋白纯化 优化
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羊痘病毒063载体构建及蛋白纯化
2
作者 宁可 齐潇寒 +1 位作者 张惠文 李有文 《现代畜牧科技》 2023年第7期33-36,共4页
为研究羊痘病毒宿主范围因子063基因的特征及其生物学功能,采用PCR方法扩增063基因,通过双酶切和基因同源重组的方法与PGEX-KG载体连接构建成融合表达GST标签的原核表达载体,经酶切和测序鉴定正确的克隆转化大肠杆菌BL21,用IPTG诱导表达... 为研究羊痘病毒宿主范围因子063基因的特征及其生物学功能,采用PCR方法扩增063基因,通过双酶切和基因同源重组的方法与PGEX-KG载体连接构建成融合表达GST标签的原核表达载体,经酶切和测序鉴定正确的克隆转化大肠杆菌BL21,用IPTG诱导表达063蛋白,产物经SDS-PAGE电泳检测和Western Blot鉴定,大量诱导表达063蛋白,通过谷胱苷肽琼脂糖亲合层析法,得到063纯化蛋白。 展开更多
关键词 羊痘病毒 063基因 原核表达 蛋白纯化
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链霉菌FJS31-2 abx R2基因克隆表达及蛋白纯化
3
作者 李泽鑫 王兰林 +5 位作者 栗午娟 杨逸 张悦萌 高佩舒 田红英 岳昌武 《化学与生物工程》 CAS 2023年第12期34-38,共5页
利用原核表达系统获得链霉菌FJS31-2 AbxR2重组蛋白,并进行纯化。通过PCR扩增abx R2基因,将扩增产物克隆至pET32a质粒上构建重组质粒pET32a-abx R2;将重组质粒转化至大肠埃希菌Rosetta(DE3)感受态细胞中进行IPTG诱导表达,并通过尿素洗... 利用原核表达系统获得链霉菌FJS31-2 AbxR2重组蛋白,并进行纯化。通过PCR扩增abx R2基因,将扩增产物克隆至pET32a质粒上构建重组质粒pET32a-abx R2;将重组质粒转化至大肠埃希菌Rosetta(DE3)感受态细胞中进行IPTG诱导表达,并通过尿素洗涤方式对AbxR2重组蛋白进行纯化。酶切和测序结果均证实重组质粒pET32a-abx R2构建成功;在菌液OD 600值为0.6、28℃、110 r·min^(-1)、1.0 mmol·L^(-1) IPTG诱导4 h时,AbxR2重组蛋白的表达效果较好;采用尿素洗涤方式纯化AbxR2重组蛋白,可得到单一特异蛋白条带,效果较好。为研究AbxR2蛋白的结构和功能及提高Zunyimycins产量奠定了基础。 展开更多
关键词 链霉菌 AbxR2 基因簇 原核表达 蛋白纯化
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亲和标签在重组蛋白纯化领域的应用与进展
4
作者 单晨 张超 张传宝 《中国医药生物技术》 2023年第5期435-439,共5页
近年来,随着生物制药、体外诊断和一些新兴技术领域的快速发展,高纯度、高活性蛋白的需求量也在不断增加,但由于蛋白质本身的复杂性与现有技术的局限性,大规模回收和纯化目的蛋白仍然面临很大挑战。目前,利用亲和标签来辅助蛋白质纯化... 近年来,随着生物制药、体外诊断和一些新兴技术领域的快速发展,高纯度、高活性蛋白的需求量也在不断增加,但由于蛋白质本身的复杂性与现有技术的局限性,大规模回收和纯化目的蛋白仍然面临很大挑战。目前,利用亲和标签来辅助蛋白质纯化是学术研究和工业生产的首选方法,借助合适的标签设计可以为最终的蛋白产物提供足够高的纯度和产量,同时保留其固有的结构和功能,大大节省了蛋白质生产过程中的时间和成本。但由于不同的亲和标签各有其优点和局限性,因此常常需要根据所表达蛋白的特点进行合理的选择。此外,随着生物信息学和材料科学的飞速发展,研究人员不仅对现有标签纯化系统进行了优化. 展开更多
关键词 体外诊断 纯化系统 工业生产 蛋白质纯化 生物制药 活性蛋白 材料科学 学术研究
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人HCCR蛋白表达载体的构建、表达及其蛋白纯化 被引量：10
5
作者 林艳 杨杨 +3 位作者 张国新 刘兵团 郝波 黄祖瑚 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期757-760,共4页
目的:构建人HCCR蛋白表达载体,并探讨其体外表达及表达产物的纯化。方法:培养人肝癌细胞,提取总RNA,反转录合成cDNA第一链,以此cDNA为模板经PCR合成插入片段,连接至载体pMBP-C,转化到大肠杆菌Top10F′中,进行诱导表达。表达产物通过Ni-... 目的:构建人HCCR蛋白表达载体,并探讨其体外表达及表达产物的纯化。方法:培养人肝癌细胞,提取总RNA,反转录合成cDNA第一链,以此cDNA为模板经PCR合成插入片段,连接至载体pMBP-C,转化到大肠杆菌Top10F′中,进行诱导表达。表达产物通过Ni-NTA螯合层析进行纯化。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,Westernblot和电喷雾电离串联飞行时间质谱(ESI-TOFMS)鉴定表达产物。结果:构建的表达载体经限制性内切酶酶切分析和DNA测序,证明所构建的质粒含有HCCR基因。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳发现该重组质粒经IPTG诱导后表达一种新的蛋白,这种蛋白不存在于诱导后的空载体表达产物中,表达产物经Westernblot和蛋白质谱鉴定含有HCCR蛋白的部分肽段。结论:成功构建了HCCR蛋白表达载体并进行体外表达及纯化。 展开更多
关键词 HCCR蛋白 基因表达 蛋白纯化
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棉花咖啡酸-O-甲基转移酶基因的原核表达及蛋白纯化鉴定 被引量：8
6
作者 李波 倪志勇 +1 位作者 石庆华 范玲 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1738-1743,共6页
为获得大量高纯度的GhCOMT2蛋白以便研究其功能和性质,以pMD18-GhCOMT2质粒为模板,PCR扩增GhCOMT2基因的cDNA编码区,构建原核表达载体pET-28a-GhCOMT2,经酶切鉴定并测序后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,并采用Western blottin... 为获得大量高纯度的GhCOMT2蛋白以便研究其功能和性质,以pMD18-GhCOMT2质粒为模板,PCR扩增GhCOMT2基因的cDNA编码区,构建原核表达载体pET-28a-GhCOMT2,经酶切鉴定并测序后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,并采用Western blotting方法鉴定表达产物。结果表明:在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中成功表达了与标签蛋白融合的GhCOMT2蛋白,大小约为40.062 kD,浓度为0.62 mg/mL。重组蛋白的最佳诱导条件为:0.2 mmol/LIPTG在16℃诱导12 h。重组蛋白以可溶形式高效表达,用蛋白标签亲和层析柱(HisTrapTMHP)获得纯化重组蛋白,Western blotting分析表明其能与His多克隆抗体起特异性反应。 展开更多
关键词 GhCOMT2 原核表达 蛋白纯化 WESTERN BLOTTING
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山羊Sox2基因克隆、原核表达和GST融合蛋白纯化 被引量：4
7
作者 郑喜邦 杨照海 +4 位作者 刘平 赵华 卢晟盛 卢克焕 毕方方 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1454-1459,共6页
本研究旨在克隆山羊Sox2基因,构建pGEX-Sox2原核表达重组质粒,从大肠杆菌中获得纯化的GST-Sox2融合蛋白。应用RT-PCR方法从6周龄胎山羊生殖嵴扩增Sox2基因编码全序列,将其克隆到pMD18-T载体,然后再亚克隆到pGEX-KG表达载体。重组质粒pGE... 本研究旨在克隆山羊Sox2基因,构建pGEX-Sox2原核表达重组质粒,从大肠杆菌中获得纯化的GST-Sox2融合蛋白。应用RT-PCR方法从6周龄胎山羊生殖嵴扩增Sox2基因编码全序列,将其克隆到pMD18-T载体,然后再亚克隆到pGEX-KG表达载体。重组质粒pGEX-Sox2转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,用SDS-PAGE电泳及Western blotting检测GST-Sox2融合蛋白表达,用谷胱甘肽Sepharose 4B介质分离纯化该融合蛋白。结果表明,山羊Sox2基因编码序列全长为960 bp;在优化的表达条件(1 mmol.L-1IPTG,22℃诱导16h)下,重组质粒(pGEX-Sox2)在大肠杆菌得到了高效表达;谷胱甘肽Sepharose 4B颗粒纯化蛋白得到预期大小的融合蛋白(约60 ku)。结论,本研究克隆了山羊Sox2基因,获得了纯化的GST-Sox2融合蛋白,为制备其多克隆抗体奠定了基础,为进一步研究山羊iPS细胞(Induced pluripotent stem cells)创造了条件。 展开更多
关键词 Sox2基因 原核表达 蛋白纯化 山羊
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重组人3型腺病毒六邻体蛋白纯化及抗原性检测 被引量：8
8
作者 郑红霞 刘勇 +3 位作者 曲章义 郭彩玲 王立群 崔洪波 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 北大核心 2005年第6期471-473,478,共4页
目的纯化重组人3型腺病毒六邻体蛋白并检测其抗原性。方法在原核表达系统中高效表达重组人3型腺病毒六邻体蛋白。利用Ni-NTA琼脂糖亲和层析柱进行蛋白纯化。用纯化的重组六邻体蛋白免疫新西兰家兔,利用免疫印迹技术检测其血清中抗体效... 目的纯化重组人3型腺病毒六邻体蛋白并检测其抗原性。方法在原核表达系统中高效表达重组人3型腺病毒六邻体蛋白。利用Ni-NTA琼脂糖亲和层析柱进行蛋白纯化。用纯化的重组六邻体蛋白免疫新西兰家兔,利用免疫印迹技术检测其血清中抗体效价以鉴定该蛋白的免疫原性和反应原性。结果得到纯化的重组人3型腺病毒六邻体蛋白,该蛋白免疫后产生高效价抗体,该抗体能与重组六邻体蛋白、含有该蛋白的重组工程菌株以及人3型腺病毒发生特异性的免疫印迹反应,证明该重组六邻体蛋白具有良好的抗原性和3型腺病毒特异性。结论所获得的重组人3型腺病毒六邻体蛋白具有良好的抗原性和特异性,为开发基因工程疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 腺病毒 六邻体 蛋白纯化 抗原性
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棉花GhCOMT1基因原核表达载体构建及蛋白纯化和Western鉴定 被引量：6
9
作者 李波 倪志勇 +1 位作者 李晓东 范玲 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1971-1976,共6页
为进一步研究GhCOMT1基因的功能,构建了原核表达载体pET-28a-GhCOMT1,酶切鉴定并测序后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在0.2mmol/L IPTG浓度条件下分别进行不同温度梯度诱导,用蛋白标记亲和层析柱(His TrapTM HP)对重组蛋白进行纯化,并用SD... 为进一步研究GhCOMT1基因的功能,构建了原核表达载体pET-28a-GhCOMT1,酶切鉴定并测序后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,在0.2mmol/L IPTG浓度条件下分别进行不同温度梯度诱导,用蛋白标记亲和层析柱(His TrapTM HP)对重组蛋白进行纯化,并用SDS-PAGE和Western blotting方法鉴定表达产物。结果表明:16℃诱导12h、30℃诱导3h和37℃诱导3h后融合蛋白均以包涵体的形式表达,其中16℃诱导12h的蛋白表达量最大;SDS-PAGE检测目的蛋白相对分子量约为39.748kD;Western blotting分析表明,目的蛋白能与His多克隆抗体起特异性反应。 展开更多
关键词 GhCOMT1 原核表达 蛋白纯化 WESTERN BLOTTING
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斜带石斑鱼MyD88基因的原核表达及蛋白纯化 被引量：5
10
作者 韦友传 孙宝宝 +2 位作者 陆专灵 高谦 罗廷荣 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期200-202,共3页
Toll样受体（Toll-like receptor, TLR）是一类重要的模式识别受体,其胞外结构域可识别特定的病原相关分子模式（Pathogen-associated molecular patterns, PAMPs）,胞内的TIR （Toll-like/IL-1 receptor）结构域则参与启动胞内信号转导... Toll样受体（Toll-like receptor, TLR）是一类重要的模式识别受体,其胞外结构域可识别特定的病原相关分子模式（Pathogen-associated molecular patterns, PAMPs）,胞内的TIR （Toll-like/IL-1 receptor）结构域则参与启动胞内信号转导,诱导细胞产生活性氧中间体（Reactive oxygen intermediate）、活性氮中间体（Reactive nitrogen intermedi-ate）和促炎症因子,在感染早期发挥重要作用[1]。在哺乳动物中,髓样分化因子88（Myeloid differentiation factor 88, MyD88）是TLR信号通路的关键接头分子,其C端TIR域与TLR的TIR相互结合后,通过募集IL-1受体相关激酶（Interleukin-1 receptor-associated kinase, IRAK）IRAK4、IRAK1和IRAK2,激活NF-κB和MAPK,进而诱导IL-1、TNF和IFN等细胞因子表达[2-4]。 展开更多
关键词 斜带石斑鱼 MYD88 原核表达 蛋白纯化
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家蚕孵化酶样基因BmHEL的原核表达及蛋白纯化与功能鉴定 被引量：4
11
作者 唐顺明 卢福浩 +5 位作者 沈兴家 王娜 丁丽平 赵巧玲 张国政 郭锡杰 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期407-412,共6页
孵化酶(hatchingenzyme,HE)是后生动物卵孵化过程中起关键作用的一类蛋白酶。在已完成全长967bp的家蚕孵化酶样基因(BmHEL)克隆及其转录特性分析的基础上,研究了该基因在原核表达系统的表达、产物纯化及其对家蚕卵壳的降解功能。以全长B... 孵化酶(hatchingenzyme,HE)是后生动物卵孵化过程中起关键作用的一类蛋白酶。在已完成全长967bp的家蚕孵化酶样基因(BmHEL)克隆及其转录特性分析的基础上,研究了该基因在原核表达系统的表达、产物纯化及其对家蚕卵壳的降解功能。以全长BmHEL质粒DNA为模板,用PCR方法分别获得了该基因的开放阅读框(BmHELORF,885bp)、缺失信号肽编码区(BmHELa,834bp)和推测成熟酶功能编码区(BmHELb,624bp)的3个片段,并亚克隆入原核表达载体pET28a(+),在大肠杆菌(E.coli)BL21中进行表达。表达的3种外源蛋白均以包涵体形式存在,获得含有6×His-Tag标签的融合蛋白,其分子质量分别为33.4、31.8、24.0kD。通过Westernblot方法检测到了用Ni-NTA亲和层析柱纯化的目的蛋白。纯化复性后的3种孵化酶对家蚕卵壳底物有一定降解活性,其中BmHELORF的活性最高,BmHELb的活性最低。在pH7.1反应条件下3种酶的活性比pH9.5时高。研究结果在蛋白质水平上进一步证实家蚕孵化酶样蛋白参与了蚕卵孵化这一重要生命过程。 展开更多
关键词 家蚕 孵化酶样基因 原核表达 蛋白纯化 卵壳底物 降解
原文传递
鲤鱼重组IL-17N的原核表达条件优化及蛋白纯化 被引量：4
12
作者 张磊 唐永凯 +3 位作者 李红霞 徐逾鑫 李迎宾 俞菊华 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期364-369,共6页
为获得可溶的鲤鱼IL-17N重组蛋白,构建原核重组表达质粒GST-17N、SUMO-GST-17N和MBP-17N,确定IL-17N的最适促溶标签,并优化其诱导表达条件(诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)的浓度、诱导时间和诱导温度)。结果:成功构建了鲤鱼IL-17... 为获得可溶的鲤鱼IL-17N重组蛋白,构建原核重组表达质粒GST-17N、SUMO-GST-17N和MBP-17N,确定IL-17N的最适促溶标签,并优化其诱导表达条件(诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)的浓度、诱导时间和诱导温度)。结果:成功构建了鲤鱼IL-17N原核重组表达载体GST-17N、SUMO-GST-17N和MBP-17N;融合标签MBP、SUMO-GST和GST的促溶效果依次降低,SUMO-GST-17N、MBP-17N上清蛋白占总蛋白比例分别为47.4%、87.0%;MBP-17N的最佳表达条件为0.5 mmol/L IPTG,25℃诱导8~12 h;经过镍柱纯化,获得可溶MBP-17N蛋白,每克总菌约获得0.09 mg MBP-17N蛋白。 展开更多
关键词 鲤鱼 白细胞介素17N 原核表达 重组蛋白 融合标签 蛋白纯化
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磁性免疫微球在人血清白蛋白纯化中的应用(英文) 被引量：4
13
作者 吴明珲 姜玲黎 +2 位作者 曾凡波 王妮丹 唐斓 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期608-614,共7页
目的为了快速地从人血清中提纯人血清白蛋白,利用磁性免疫微球作为提取手段,再用间接酶联免疫法测定人血清白蛋白的回收率。方法将经过羧基修饰的聚苯乙烯微球作为载体,用EDC(碳化亚胺)活化微球表面的羧基,再将兔抗人血清白蛋白抗体包... 目的为了快速地从人血清中提纯人血清白蛋白,利用磁性免疫微球作为提取手段,再用间接酶联免疫法测定人血清白蛋白的回收率。方法将经过羧基修饰的聚苯乙烯微球作为载体,用EDC(碳化亚胺)活化微球表面的羧基,再将兔抗人血清白蛋白抗体包被于微球上,这种微球-抗体复合物能特异性地捕获人血清白蛋白,磁分离复合物后,通过将兔抗人血清白蛋白抗体作为捕获抗体,将酶联羊抗人血清白蛋白抗体作为检测抗体,建立起间接酶联免疫法,用于检测人血清中和磁性免疫微球上吸附人血清白蛋白的浓度,得到微球从人血清中提纯人血清白蛋白的回收率。结果第1次提纯的回收率为(86±4)%,重复利用微球2次,回收率分别为(69.0±0.6)%和(40.8±0.8)%,而提纯的人血清白蛋白的纯度为90%。结论以上结果表明,免疫磁性微球提纯人血清白蛋白的实验是有效的,为工业上大规模提纯人血清白蛋白提供了一条新的思路。 展开更多
关键词 磁性免疫微球 兔抗人血清白蛋白抗体 蛋白纯化 人血清白蛋白 BAS-ELISA
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黑腹果蝇抗真菌肽Drs及其同系物基因的原核表达与蛋白纯化研究 被引量：2
14
作者 杨婉莹 温硕洋 +4 位作者 邓小娟 叶明强 夏庆友 曹阳 黄亚东 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期391-398,共8页
【目的】Drosomycin(Drs)是从黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)中鉴定发现的对丝状真菌有广谱抗性的抗真菌肽因子,此外,在黑腹果蝇基因组中,还存在另外6条Drs同系物的基因序列,对它们推导的氨基酸序列具有与Drs相同的保守位点和CSα... 【目的】Drosomycin(Drs)是从黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)中鉴定发现的对丝状真菌有广谱抗性的抗真菌肽因子,此外,在黑腹果蝇基因组中,还存在另外6条Drs同系物的基因序列,对它们推导的氨基酸序列具有与Drs相同的保守位点和CSαβ模体结构。为鉴定Drs及其6个同系物的抗性功能差异,研究其分子结构与功能的关系,需要对这些同系物基因进行克隆表达,获得有生物学活性的纯化样品。【方法】本文采用PCR分段互补合成的方法准确地获得了Drs同系物基因,并克隆至pET-3C载体上,转化到宿主菌E.coli Origami(DE3)中进行诱导表达,表达产物经阳离子CM SepharoseTM Fast Flow层析、凝胶过滤Sephacryl S-100 High Resolution层析和包涵体的复性及Sephadex G-25脱盐等纯化处理后,进行抑菌活性检测。【结果】经纯化的7个Drs同系物的短肽样品,除Drs-lI外,其它的Drs同系物样品对供试真菌水稻立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)均有较强的抑制作用。【结论】表明本研究中使用的纯化及复性方法对具有多个二硫键的小分子多肽是比较有效的。 展开更多
关键词 黑腹果蝇 抗真菌肽 Drosomycin 同系物 表达 蛋白纯化
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家蚕素Ⅱ基因原核表达及蛋白纯化 被引量：2
15
作者 徐欣 刘朝阳 +5 位作者 崔海波 杨洋 郭晓琪 张涛 刘庆信 崔为正 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期8-12,共5页
【目的】建立一种简便、快速且能大量获得家蚕素Ⅱ(bombyxin-Ⅱ,BBXⅡ)的有效方法。【方法】运用RTPCR技术得到bombyxin-Ⅱ基因全长cDNA序列,采用原核表达技术对该基因进行异源表达,并利用亲和层析的方法得到纯化的BBXⅡ蛋白。【结果】... 【目的】建立一种简便、快速且能大量获得家蚕素Ⅱ(bombyxin-Ⅱ,BBXⅡ)的有效方法。【方法】运用RTPCR技术得到bombyxin-Ⅱ基因全长cDNA序列,采用原核表达技术对该基因进行异源表达,并利用亲和层析的方法得到纯化的BBXⅡ蛋白。【结果】从家蚕Bombyx mori头部mRNA中经过反转录获得bombyxin-Ⅱ基因的cDNA,并构建了原核表达载体pET28a-BBXⅡ,经过异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,使BBXⅡ获得了大量表达,进一步用HisTrap HP亲和层析,成功得到大量纯化的BBXⅡ。【结论】本实验建立的原核表达方法和蛋白纯化技术,是大量制备BBXⅡ的一种简易而有效的方法,为进一步开展BBX的分泌机制和作用机理研究,以及利用原核表达系统研发BBX降血糖药物奠定了基础。 展开更多
关键词 家蚕 类胰岛素肽 家蚕素 基因克隆 原核表达 蛋白纯化
原文传递
贵州黑山羊MSTN基因原核表达条件优化及蛋白纯化 被引量：3
16
作者 石照应 曲月秀 +1 位作者 陈蓉 田兴贵 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第6期2343-2346,共4页
为进一步研究MSTN重组蛋白的表达及相关功能奠定基础,利用RT-PCR克隆贵州黑山羊MSTN基因cDNA序列,构建原核表达载体pET-32a(+)-MSTN69,并对重组菌表达条件进行优化和Ni亲和层析纯化His-MSTN69蛋白。结果表明:表达产物与预期大小相符,His... 为进一步研究MSTN重组蛋白的表达及相关功能奠定基础,利用RT-PCR克隆贵州黑山羊MSTN基因cDNA序列,构建原核表达载体pET-32a(+)-MSTN69,并对重组菌表达条件进行优化和Ni亲和层析纯化His-MSTN69蛋白。结果表明:表达产物与预期大小相符,His-MSTN69蛋白分子量为57.8 kD;在温度31℃和IPTG 0.8 mmol/L的条件下表达5h时,BL21-pET-32a(+)-MSTN69重组菌蛋白表达量最高。 展开更多
关键词 MSTN基因 原核表达 蛋白纯化 贵州黑山羊
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小麦品种“陕253”PDI基因的克隆、原核表达及蛋白纯化 被引量：2
17
作者 臧闻 董剑 +4 位作者 高翔 陈其皎 王延鹏 李志业 史红飞 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期799-804,共6页
为进一步研究控制小麦蛋白二硫键形成的关键蛋白即蛋白质二硫键异构酶(PDI),运用RT-PCR方法克隆出小麦品种"陕253"PDI基因的cDNA序列,基因登陆号为HQ911363。序列分析表明,HQ911363全长为1 539 bp,编码512个氨基酸,含有PDI典... 为进一步研究控制小麦蛋白二硫键形成的关键蛋白即蛋白质二硫键异构酶(PDI),运用RT-PCR方法克隆出小麦品种"陕253"PDI基因的cDNA序列,基因登陆号为HQ911363。序列分析表明,HQ911363全长为1 539 bp,编码512个氨基酸,含有PDI典型的异构酶活性的催化位点-CGHC-和内质网驻留信号肽-KDEL-。构建该基因的原核表达载体,在宿主菌E.coliBL21(DE3)中经IPTG诱导表达融合蛋白,并对表达蛋白进行了纯化。SDS-PAGE及Western-blot检测证实融合蛋白诱导表达并纯化成功。 展开更多
关键词 小麦 蛋白质二硫键异构酶(PDI) 基因克隆 原核表达 蛋白纯化
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Bacillusa myloliquefaciens中性植酸酶基因的原核表达及蛋白纯化和性质 被引量：6
18
作者 陈艳 孙建义 +2 位作者 赵学新 付石军 翁晓燕 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期60-64,72,共6页
淀粉液化芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens 是一种嗜热细菌,其产生的中性植酸酶具有很好的应用前景.通过TD PCR技术将Bacillus amyloliquefaciens 编码的中性植酸酶基因克隆至原核表达载体pET 30a(+)上,在大肠杆菌 BL21(DE3)中得到... 淀粉液化芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens 是一种嗜热细菌,其产生的中性植酸酶具有很好的应用前景.通过TD PCR技术将Bacillus amyloliquefaciens 编码的中性植酸酶基因克隆至原核表达载体pET 30a(+)上,在大肠杆菌 BL21(DE3)中得到了高效表达,表达量占大肠杆菌可溶性蛋白的33.5%.采用金属Ni2+亲和层析对基因表达产物进行纯化,表达产物具有正常的生物学功能. 展开更多
关键词 Bacillus 原核表达 植酸酶基因 蛋白纯化 中性植酸酶 性质 基因表达产物 大肠杆菌 PCR技术 NI^2+ 可溶性蛋白 生物学功能 芽孢杆菌 淀粉液化 嗜热细菌 基因克隆 高效表达 亲和层析 表达量
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柽柳转录因子基因ThbZIP1的原核表达及重组蛋白纯化 被引量：2
19
作者 刘胜男 刘志华 王玉成 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期23-27,共5页
柽柳是重要的抗逆植物,提取柽柳总RNA,克隆了柽柳的16.5 k D b ZIP转录因子基因Thb ZIP1,构建原核表达载体p GEX-Thb ZIP1,导入宿主菌获得重组菌株BL21-Thb ZIP1,用异丙基-β-D-硫代半乳糖(IPTG)进行重组蛋白r Thb ZIP1诱导表达。试验... 柽柳是重要的抗逆植物,提取柽柳总RNA,克隆了柽柳的16.5 k D b ZIP转录因子基因Thb ZIP1,构建原核表达载体p GEX-Thb ZIP1,导入宿主菌获得重组菌株BL21-Thb ZIP1,用异丙基-β-D-硫代半乳糖(IPTG)进行重组蛋白r Thb ZIP1诱导表达。试验结果表明:IPTG浓度为1.0 mmol/L,诱导温度为37℃条件下,诱导4 h,大肠杆菌提取液提取50 min时,所获得重组蛋白r Thb ZIP1表达量最大,占总蛋白的76.42%;经过10%SDS-PAGE电泳检测,发现重组蛋白r Thb ZIP1主要以包涵体的形式存在;并利用电纯化法成功获得纯化的目的蛋白。 展开更多
关键词 柽柳 b ZIP1转录因子 原核表达 蛋白纯化
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鸡肌抑素基因的原核表达及蛋白纯化 被引量：5
20
作者 蓝赐华 刘为民 梁梓森 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2008年第7期18-20,共3页
利用实验室保存的重组质粒pMD18-MSTN重新构建原核表达质粒pET-32a-MSTN,将其转化到宿主菌大肠杆菌BL21上并进行诱导表达,再将所表达的融合蛋白进行纯化。结果表明:该基因在宿主菌中成功表达;目的蛋白被成功纯化,且纯度较高。
关键词 南海黄鸡 肌抑素基因 原核表达 蛋白纯化
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