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羊布鲁氏菌外膜蛋白质的组成鉴定 被引量：4
1
作者 曲勍 王玉飞 +7 位作者 徐杰 钟志军 乔凤 杜昕颖 汪舟佳 黄留玉 于雅琴 陈泽良 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期805-811,共7页
目的:通过蛋白质组技术阐明羊布鲁氏菌外膜蛋白的主要组成。方法:提取并纯化羊布鲁氏菌的外膜蛋白,应用双向电泳技术进行分离,选取双向电泳图上主要的蛋白点进行质谱分析,同时主要蛋白质点的肽指纹图谱利用Mascot在NCBInr蛋白数据库中... 目的:通过蛋白质组技术阐明羊布鲁氏菌外膜蛋白的主要组成。方法:提取并纯化羊布鲁氏菌的外膜蛋白,应用双向电泳技术进行分离,选取双向电泳图上主要的蛋白点进行质谱分析,同时主要蛋白质点的肽指纹图谱利用Mascot在NCBInr蛋白数据库中进行检索。结果:共鉴定到67个蛋白点,主要外膜蛋白为Omp25和Omp31,其他外膜蛋白如Imp、Frp、GroEL等,功能涉及物质运输、能量代谢、应激等。结论:对主要外膜蛋白Omp25和Omp31的识别与分析不仅有助于对布鲁氏菌致病机制的研究,而且为布鲁氏菌病的疫苗研制提供靶标蛋白。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 细菌外膜蛋白质类 双向电泳
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幽门螺杆菌的免疫外膜蛋白质组学及其与胃部疾病的关系 被引量：3
2
作者 庞智 萧树东 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2005年第2期172-177,共6页
目的:应用蛋白质组学技术研究幽门螺杆菌(HP)的候选抗原,用于胃部疾病临床诊断、治疗和疫苗开发。方法:选择自胃腺癌患者胃粘膜分离出且经确定的HP菌株(HP161),采用二维凝胶电泳(2-DE)分析外膜蛋白,并通过PDQuest图像分析软件分析蛋白... 目的:应用蛋白质组学技术研究幽门螺杆菌(HP)的候选抗原,用于胃部疾病临床诊断、治疗和疫苗开发。方法:选择自胃腺癌患者胃粘膜分离出且经确定的HP菌株(HP161),采用二维凝胶电泳(2-DE)分析外膜蛋白,并通过PDQuest图像分析软件分析蛋白质图谱,进行蛋白斑点检测和分析;收集20例HP感染患者和10例非HP感染相关性胃炎患者血清,采用免疫印迹技术分析HP161的外膜蛋白质与上述血清的反应性。结果:HP161有129个蛋白斑点;被慢性活动性胃炎和胃癌患者血清不同识别的特定抗原有10个;应用胃癌患者血清时,具有免疫反应性,而用胃炎患者血清时则无,等电点范围较宽,分子量多数在31kDa以下。结论: 2-DE是研究HP外膜蛋白质组学的重要途径之一,并可能对其进行鉴定作为临床诊断的候选分子;经免疫蛋白组学检测的资料与公共数据库进行对比分析,以有助于寻找更具免疫原性的蛋白质标记物用于诊断分析和疫苗设计。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 外膜蛋白质组 二维凝胶电泳 免疫印迹
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幽门螺杆菌外膜蛋白质组二维凝胶电脉和图像分析
3
作者 庞智 萧树东 《胃肠病学》 2004年第5期261-265,共5页
背景幽门螺杆菌(H.pylori)对胃黏膜的致病免疫机制十分复杂,人们迫切需要了解不同H.pylori蛋白分子对机体的作用,目前有关H.pylori外膜蛋白质的研究尚不多。目的建立针对H.pylori外膜蛋白质组学研究的二维凝胶电泳(2鄄DE)及其相关技术体... 背景幽门螺杆菌(H.pylori)对胃黏膜的致病免疫机制十分复杂,人们迫切需要了解不同H.pylori蛋白分子对机体的作用,目前有关H.pylori外膜蛋白质的研究尚不多。目的建立针对H.pylori外膜蛋白质组学研究的二维凝胶电泳(2鄄DE)及其相关技术体系,比较不同胃病相关H.pylori菌株外膜蛋白质组2鄄DE图谱的差异,为研究H.pylori外膜蛋白质的免疫蛋白质组学提供技术基础。方法分别选用分离自2例不同胃病患者胃黏膜的H.pylori菌株(H.pylori185和H.pylori161),采用2鄄DE分离此两种H.pylori菌株的外膜蛋白质,通过图像分析软件进行蛋白斑点检测和匹配分析。结果对H.pylori外膜蛋白质重复进行2鄄DE和图像分析,发现蛋白斑点匹配率约为98%,绝大部分蛋白能较好地重叠,重复性好,分辨率较高。H.pylori185菌株和H.pylori161菌株分别有蛋白斑点116个(主蛋白斑点39个)和129个(主蛋白斑点48个),两者有35个相同的主蛋白斑点,但其蛋白含量略有差异。结论不同胃病相关H.pylori的菌株外膜蛋白质存在许多共同的蛋白斑点,且各有特异的蛋白斑点,有些蛋白含量略有差异。2鄄DE分离H.pylori外膜蛋白质是研究H.pylori外膜蛋白质组学的重要途径之一。对不同胃病相关H.pylori菌株的外膜蛋白质进行分析,可为临床诊治H.pylori相关疾病提供理论基础? 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 外膜蛋白质 二维凝胶电脉 图像分析
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耶尔森菌属外膜蛋白质研究进展
4
作者 史书文 《中国地方病防治》 北大核心 1990年第5期297-299,共3页
耶尔森菌属包括有鼠疫菌,假结核菌、小肠结肠炎菌以及最近分类学研究确定的Y.kristensenii、Y.frederiksenii、Y.entermedia、Y.aldovae和Y.ruckeri。
关键词 耶尔森菌属 外膜蛋白质
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细菌外膜蛋白质生成途径中膜间质运输的两个模型及思考
5
作者 王妍 张淼 《读与写（中旬）》 2021年第4期0014-0015,共2页
革兰氏阴性菌的细胞外膜系统对于细菌的入侵、生存以及抵抗不同恶劣环境起到非常重要的作用。β-桶外膜蛋白质作为革兰氏阴性菌外膜系统上的主要蛋白质,除了能够构成稳定的外膜系统结构之外,还具有很多重要的功能,因此β-桶外膜蛋白质... 革兰氏阴性菌的细胞外膜系统对于细菌的入侵、生存以及抵抗不同恶劣环境起到非常重要的作用。β-桶外膜蛋白质作为革兰氏阴性菌外膜系统上的主要蛋白质,除了能够构成稳定的外膜系统结构之外,还具有很多重要的功能,因此β-桶外膜蛋白质的合成对于细菌来说,也是生存至关重要的。本文总结了目前对细菌外膜蛋白质生成途径中关键步骤,即膜间质运输的两个模型,并针对目前研究结果进行深入剖析及思考。 展开更多
关键词 细菌外膜蛋白质生成 膜间质质量控制因子 SurASkpDegP
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外膜蛋白疫苗对幽门螺杆菌感染的免疫保护作用 被引量：10
6
作者 陈洁 陈旻湖 +1 位作者 朱森林 陈为 《胃肠病学》 2001年第2期75-77,共3页
目的：研究幽门螺杆菌（Ｈ． ｐｙｌｏｒｉ）外膜蛋白（ＯＭＰ）加大肠杆菌不耐热内毒素（ＬＴ）经口免疫对小鼠Ｈ． ｐｙｌｏｒｉ感染的保护作用。探讨定量细菌培养在疫苗免疫效果评价中的应用。方法：从Ｈ． Ｐｙｌｏｒｉ ＮＣＴＣ１... 目的：研究幽门螺杆菌（Ｈ． ｐｙｌｏｒｉ）外膜蛋白（ＯＭＰ）加大肠杆菌不耐热内毒素（ＬＴ）经口免疫对小鼠Ｈ． ｐｙｌｏｒｉ感染的保护作用。探讨定量细菌培养在疫苗免疫效果评价中的应用。方法：从Ｈ． Ｐｙｌｏｒｉ ＮＣＴＣ１１６３７菌株制备ＯＭＰ和全菌超声粉碎抗原，ＬＴ作为粘膜免疫佐剂。通过灌胃分别以Ｈ． Ｐｙｌｏｒｉ全菌超声粉碎抗原１ｍｇ加ＬＴ １０μｇ（Ａ组）、Ｈ． Ｐｙｌｏｒｉ ＯＭＰ ０．５ ｍｇ加ＬＴ １０μｇ（Ｂ组）和生理盐水（Ｃ组）免疫小鼠（ｎ＝３０），每周１次，共４次。免疫完成后４周以Ｈ． ｐｙｌｏｒｉ Ｓｙｄｎｅｙ Ｓｔｒａｉｎ１菌株攻击小鼠１次（１×１０７ ＣＦＵ／只），攻击后４周处死小鼠，取胃分别作快速尿素酶试验、病理检查及定量细菌培养，观察Ｈ．Ｐｙｌｏｒｉ定植情况。结果： Ｃ组小鼠Ｈ．Ｐｙｌｏｒｉ定植密度为２．４０×１０７ＣＦＵ／ｇ胃组织，Ａ组和Ｂ组小鼠分别为２．０３×１０５ ＣＦＵ／ｇ和６．７６×１０５ＣＦＵ／ｇ胃组织，免疫组的定植密度明显降低。结论：口服Ｈ． ｐｙｌｏｒｉ ＯＭＰ加ＬＴ对小鼠Ｈ． Ｐｙｌｏｒｉ感染具有一定免疫保护作用，但不能完全预防感染，需进一步筛选更为有效的抗原和佐剂。定量细菌培养可以? 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 细菌外膜蛋白质炎 肠毒素炎 免疫法 定量培养
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淋球菌外膜Porin Ⅰ蛋白多价抗血清的制备及其临床应用初探 被引量：2
7
作者 岑建萍 程浩 +2 位作者 曾凤英 郑磊 卢忠明 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2007年第9期531-533,共3页
目的制备淋球菌外膜GST-PⅠ融合蛋白多价抗血清,并探讨该多价抗血清与临床泌尿生殖道分泌物标本的结合情况。方法重组的淋球菌外膜GST-PⅠ融合蛋白免疫家兔,获得多价抗血清;并用双向免疫扩散法鉴定家兔多价抗血清的效价。家兔多价抗血... 目的制备淋球菌外膜GST-PⅠ融合蛋白多价抗血清,并探讨该多价抗血清与临床泌尿生殖道分泌物标本的结合情况。方法重组的淋球菌外膜GST-PⅠ融合蛋白免疫家兔,获得多价抗血清;并用双向免疫扩散法鉴定家兔多价抗血清的效价。家兔多价抗血清与临床泌尿生殖道分泌物标本的结合采用试管凝集法,出现棉絮状沉淀则为阳性;并把同一标本的试管凝集法结果与淋球菌培养结果相比较,观察两者的阳性符合率。同时以生理盐水和非淋菌性尿道炎患者的泌尿生殖道分泌物标本作为对照。结果成功免疫家兔并获得了PI蛋白多价抗血清,经鉴定多价抗血清的效价达1:8;淋球菌培养阳性的35例分泌物标本中,试管凝集法阳性23例,两方法结果符合率为65.71%。而对照组试管凝集法结果均为阴性。结论淋球菌外膜PI蛋白不仅具有一定的免疫原性,而且其免疫家兔产生的多价抗血清与淋病患者的分泌物标本有良好的结合率,特异性高。有望经纯化、标记后得到一种新的简单快速的淋病诊断试剂盒。 展开更多
关键词 奈瑟氏球菌 细茵外膜蛋白质类 抗血清
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问号钩端螺旋体属特异性外膜蛋白LipL41抗原表位预测及免疫学鉴定 被引量：3
8
作者 姜久昆 林旭瑷 +1 位作者 严杰 薛峰 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2008年第6期585-591,621,共8页
目的:预测及筛选问号钩端螺旋体(简称钩体)属特异性外膜蛋白LipL41有效T和B细胞(T/B)联合表位,了解不同基因型LipL41s差异T/B联合表位的免疫反应性差别。方法:采用生物信息学方法预测LipL41/1和LipL41/2分子中T/B联合表位。采用PCR扩增... 目的:预测及筛选问号钩端螺旋体(简称钩体)属特异性外膜蛋白LipL41有效T和B细胞(T/B)联合表位,了解不同基因型LipL41s差异T/B联合表位的免疫反应性差别。方法:采用生物信息学方法预测LipL41/1和LipL41/2分子中T/B联合表位。采用PCR扩增候选T/B联合表位片段,采用噬菌体展示及SDS-PAGE等技术获得含不同T/B联合表位的重组P。分别以rLipL41/1和rLipL41/2抗血清、黄疸出血群赖型赖株全菌抗血清和钩体患者血清为一抗,采用Western Blot检测各抗血清与各重组P免疫杂交反应性。结果:根据预测结果选择了LipL41s中8个共有或差异T/B联合表位。经PCR扩增获得了上述T/B联合表位片段。各T/B联合表位片段均准确插入噬菌体P蛋白N端并有效表达。各抗血清均能识别上述8个T/B联合表位,但其WesternBlot杂交信号强度存在差异,其中共有T/B联合表位LipL41/1-30和LipL41/1-233与不同抗血清的信号较强且稳定。结论:所选择的8个T/B联合表位均为LipL41的有效抗原表位。共有T/B联合表位LipL41/1-30和LipL41/1-233可作为钩体MAP疫苗的首选抗原表位。差异T/B联合表位LipL41s-89和LipL41s-299与不同抗血清有免疫交叉现象。 展开更多
关键词 钩端螺旋体 问号/免疫学 细菌外膜蛋白质类/生物合成 细菌外膜蛋白质类/分离 外膜脂蛋白/属特异性抗原 LipL41/1/LipL41/2 抗原表位/预测 噬菌体展示 免疫学鉴定
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外膜蛋白OprD2缺失和金属酶产生在铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药中的作用 被引量：3
9
作者 郭丽 张杰 +1 位作者 顾怡明 唐明忠 《山东医药》 CAS 北大核心 2008年第9期96-97,共2页
采用K-B法测定10种抗菌药物对44株铜绿假单胞菌的体外抗菌活性,使用双纸片协同试验进行金属酶筛选,用PCR方法对耐药基因OprD2、IMP和VIM基因进行检测和分析。结果44株耐亚胺培南铜绿假单胞菌中,11株耐药菌经OprD2基因扩增呈阴性,扩增出... 采用K-B法测定10种抗菌药物对44株铜绿假单胞菌的体外抗菌活性,使用双纸片协同试验进行金属酶筛选,用PCR方法对耐药基因OprD2、IMP和VIM基因进行检测和分析。结果44株耐亚胺培南铜绿假单胞菌中,11株耐药菌经OprD2基因扩增呈阴性,扩增出IMP型阳性株4株,未检测到VIM型金属酶基因。认为北京天坛医院临床分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌,外膜蛋白OprD2缺失和产IMP型金属酶两种机制均起着重要作用。 展开更多
关键词 假单胞菌 铜绿 细菌外膜蛋白质类 Β-内酰胺酶类 亚胺培南
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布鲁杆菌外膜蛋白OMP31和bp26基因的克隆、表达及鉴定 被引量：1
10
作者 陈瑶 李明 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期277-280,共4页
目的克隆并测序中国布鲁杆菌外膜蛋白基因OMP31和bp26,重组表达OMP31和bp26蛋白, 并对其进行初步的血清学鉴定。方法从布鲁杆菌基因组中获得OMP31和bp26基因,连接入PMD18-T克隆质粒并测序。测序后分别克隆入融合表达载体PGEX-4T-1,在大... 目的克隆并测序中国布鲁杆菌外膜蛋白基因OMP31和bp26,重组表达OMP31和bp26蛋白, 并对其进行初步的血清学鉴定。方法从布鲁杆菌基因组中获得OMP31和bp26基因,连接入PMD18-T克隆质粒并测序。测序后分别克隆入融合表达载体PGEX-4T-1,在大肠埃希菌中表达融合蛋白。用Western-blot技术分析重组表达的GST-OMP31和GST-bp26的免疫学特性。结果 OMP31和bp26基因的测序结果与 GeneBank中已报道的布鲁杆菌株完全一致,并在大肠埃希菌中成功表达了GST-OMP31和GST-bp26融合蛋白。布鲁杆菌免疫兔血清能特异性识别所表达的蛋白而不与载体蛋白发生反应。结论成功表达了布鲁杆菌外膜蛋白OMP31和bp26,它可以被布鲁杆菌免疫血清特异性识别,表现出良好的抗原性,为之后的实验室诊断和亚单位疫苗的研究打下良好的物质基础。 展开更多
关键词 布鲁杆菌属 细菌外膜蛋白质类 免疫活性 诊断
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幽门螺杆菌低分子质量外膜蛋白的基因克隆和重组载体构建
11
作者 姜政 黄爱龙 +2 位作者 王丕龙 陶小红 蒲丹 《世界华人消化杂志》 CAS 2001年第11期1316-1318,共3页
目的构建幽门螺杆菌26000u外膜蛋白的基因重组载体,为Hp的疫苗开发、快速诊断试剂盒的研究奠定基础。方法用PCR方法从Hp染色体DNA基因组扩增26000u外膜蛋白的基因片段,将目的基因、pQE30质粒同时经BamHI、Hind Ⅲ双酶切、纯化、连接、... 目的构建幽门螺杆菌26000u外膜蛋白的基因重组载体,为Hp的疫苗开发、快速诊断试剂盒的研究奠定基础。方法用PCR方法从Hp染色体DNA基因组扩增26000u外膜蛋白的基因片段,将目的基因、pQE30质粒同时经BamHI、Hind Ⅲ双酶切、纯化、连接、转染以及筛选含插入片段的重组载体。结果经酶切、测序分析插入的基因片段为表达Hp26000u外膜蛋白基因,有1.1％碱基发生变异,以及1.51％氨基酸残基改变。与文献相比,其同源性高达98％。结论 Hp外膜蛋白基因克隆、重组载体的构建将有可能为一种有效蛋白质疫苗以及快速诊断试剂盒的开发打下基础。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 遗传学 细菌外膜蛋白质类 遗传学 遗传载体 分子克隆
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感染过程中钩端螺旋体外膜蛋白抗原表达水平变化及其调控机制 被引量：2
12
作者 郑林立 葛玉梅 +1 位作者 胡玮琳 严杰 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期156-163,共8页
目的:了解感染人巨噬细胞过程中问号钩端螺旋体(简称钩体)黄疸出血群赖型赖株主要外膜蛋白(OMP)抗原表达水平变化及其OmpR相关基因调控机制。方法:采用生物信息学技术预测问号钩体赖株OmpR及其组氨酸激酶(HK)基因和结构功能域。采用实... 目的:了解感染人巨噬细胞过程中问号钩端螺旋体(简称钩体)黄疸出血群赖型赖株主要外膜蛋白(OMP)抗原表达水平变化及其OmpR相关基因调控机制。方法:采用生物信息学技术预测问号钩体赖株OmpR及其组氨酸激酶(HK)基因和结构功能域。采用实时荧光定量RT-PCR检测钩体感染人THP-1巨噬细胞前后钩体主要OMP编码基因mRNA水平的变化。采用HK胞外区多肽抗血清封闭试验及氯氰碘柳胺阻断试验,检测OmpR及其HK对感染过程中问号钩体OMP编码基因mRNA水平变化的影响。结果:生物信息学分析结果显示,LB015和LB333可能是问号钩体赖株OmpR编码基因,LB014可能是其HK编码基因。问号钩体赖株感染THP-1细胞后,lipL21、lipL32、lipL41基因mRNA水平迅速并持续下降(P<0.01),groEL、mce、loa22、ligB基因mRNA水平瞬时迅速升高(P<0.01)。氯氰碘柳胺或HK抗血清处理可使感染THP-1细胞而显著下降的问号钩体lipL21和lipL48基因mRNA水平明显回升(P<0.01),氯氰碘柳胺处理可使感染THP-1细胞而显著升高的groEL、mce、loa22、ligB基因mRNA水平明显下降(P<0.01)。结论:问号钩体赖株感染人巨噬细胞后主要OMP抗原表达水平发生明显变化。问号钩体赖株染色体中存在一组编码OmpR及其HK的基因,其主要功能可能是下调感染过程中部分OMP抗原表达水平。 展开更多
关键词 问号钩端螺旋体 细菌外膜蛋白质类 基因表达 逆转录聚合酶链反应 感染 外膜蛋白 表达 OMPR 氯氰碘柳胺
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外膜蛋白与鲍曼不动杆菌多重耐药的相关性研究 被引量：3
13
作者 李一柯 邓俊 《现代医药卫生》 2013年第17期2595-2596,共2页
目的分析外膜蛋白(OMP)与鲍曼不动杆菌多重耐药的相关性,更好地了解OMP在鲍曼不动杆菌多重耐药中的重要性。方法选取从重症监护病房(ICU)患者痰标本中分离的鲍曼不动杆菌50株,用Whonet5.4软件统计50株鲍曼不动杆菌对环丙沙星(CIP)和亚... 目的分析外膜蛋白(OMP)与鲍曼不动杆菌多重耐药的相关性,更好地了解OMP在鲍曼不动杆菌多重耐药中的重要性。方法选取从重症监护病房(ICU)患者痰标本中分离的鲍曼不动杆菌50株,用Whonet5.4软件统计50株鲍曼不动杆菌对环丙沙星(CIP)和亚胺培南(IMP)的耐药情况,用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析8株多重耐药鲍曼不动杆菌OMP表达情况,研究OMP的表达在鲍曼不动杆菌多重耐药中的重要性。结果 ICU患者分离出的鲍曼不动杆菌对CIP的耐药率达到88%,对IMP的耐药率达16%,耐药形势非常严峻;多重耐药的鲍曼不动杆菌均存在一种或多种OMP表达的下降或缺失。结论 OMP在鲍曼不动杆菌多重耐药中起着重要作用。 展开更多
关键词 细菌外膜蛋白质类 鲍氏不动杆菌 药物耐受性 环丙沙星 亚胺培南
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人苍白杆菌外膜蛋白的抗原性及其对羊布鲁菌交叉保护性的初步研究
14
作者 黄华 彭常军 +1 位作者 徐传彬 陆淼泉 《国际检验医学杂志》 CAS 2008年第8期685-686,共2页
目的对脑膜炎患者脑脊液中分离鉴定的人苍白杆菌进行外膜蛋白的抗原性及其对羊布鲁菌交叉保护性进行初步研究。方法以三氯醋酸法提取人苍白杆菌和羊布鲁菌外膜蛋白组分(OMP),并对小鼠进行免疫学试验。结果以羊布鲁菌OMP免疫和攻击后的1... 目的对脑膜炎患者脑脊液中分离鉴定的人苍白杆菌进行外膜蛋白的抗原性及其对羊布鲁菌交叉保护性进行初步研究。方法以三氯醋酸法提取人苍白杆菌和羊布鲁菌外膜蛋白组分(OMP),并对小鼠进行免疫学试验。结果以羊布鲁菌OMP免疫和攻击后的10只小鼠,10 d内死亡4/10,脾脏检出菌3/10;而以人苍白杆菌OMP免疫的小鼠,在羊布鲁菌攻击后全部死亡,脾脏检出菌8/10。结论分离的人苍白杆菌OMP对羊布鲁菌并没有交叉保护作用,不能用作预防布鲁菌感染的候选疫苗抗原。至于人苍白杆菌的其他组分是否有效,有待于进一步分析探讨。 展开更多
关键词 人苍白杆菌 细菌外膜蛋白质 布鲁杆菌 羊
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甲型副伤寒沙门菌外膜蛋白质组学参考图谱的建立 被引量：1
15
作者 王斌 朱力 +4 位作者 李娜 梁昊宇 王恒樑 陈薇 曾明 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期652-657,共6页
目的建立甲型副伤寒沙门菌外膜蛋白的蛋白质组学参考图谱。方法甲型副伤寒沙门菌CMCC 50973培养至对数生长末期,收集菌体并破碎提取细菌的外膜蛋白,然后利用双向电泳(2-DE)将蛋白分离。分离后取蛋白点做MALDI-TOF-MS鉴定,根据质谱得到... 目的建立甲型副伤寒沙门菌外膜蛋白的蛋白质组学参考图谱。方法甲型副伤寒沙门菌CMCC 50973培养至对数生长末期,收集菌体并破碎提取细菌的外膜蛋白,然后利用双向电泳(2-DE)将蛋白分离。分离后取蛋白点做MALDI-TOF-MS鉴定,根据质谱得到的肽指纹图谱在Mascot数据库中查询出匹配的蛋白。结果在2-DE考马斯亮蓝染色凝胶上取77个蛋白点,鉴定成功了54个点,对应29种蛋白。29种蛋白中定位于外膜为13种,定位未知的有11种,胞质中有5种。结论成功建立了甲型副伤寒沙门菌外膜蛋白的蛋白质组学参考图谱,为进一步筛选疫苗抗原打下了基础。 展开更多
关键词 沙门菌 甲型副伤寒 细菌外膜蛋白质类 双向电泳 蛋白质组学
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幽门螺杆菌OipA蛋白的研究进展
16
作者 周敏（综述） 徐雷鸣（审校） 《胃肠病学》 2009年第2期122-124,共3页
幽门螺杆菌（H.pylori）是人类重要的致病菌之一,近年其致病因子与胃肠疾病的关系已成为研究的热点,新的H.pylori致病因子逐渐被发现。外膜炎性蛋白A（OipA）是H.pylori外膜蛋白之一,研究发现OipA为H.pylori致病因子之一,与H.pylori相... 幽门螺杆菌（H.pylori）是人类重要的致病菌之一,近年其致病因子与胃肠疾病的关系已成为研究的热点,新的H.pylori致病因子逐渐被发现。外膜炎性蛋白A（OipA）是H.pylori外膜蛋白之一,研究发现OipA为H.pylori致病因子之一,与H.pylori相关疾病的发展密切相关,但不同地区研究结果不尽相同。本文旨在对H.pylori的致病因子OipA蛋白及其研究进展作一综述。 展开更多
关键词 螺杆菌 幽门 细菌外膜蛋白质类 毒力因子类
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细菌外膜囊泡纳米载体的制备及其免疫调节作用 被引量：5
17
作者 陈琪 吴敏 +4 位作者 白宏震 郭则灵 周峻 王青青 汤谷平 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期118-124,共7页
目的:以细菌外膜囊泡(OMV)结合三嵌段聚合物普朗尼克F127(PEO_(100)-PPO_(65)-PEO_(100)),构建能够有效促进巨噬细胞分泌抗肿瘤细胞因子的纳米载药体系OMV-F127。方法:培养减毒沙门菌,用超滤离心法与超声破碎法提取OMV,机械挤压法制得OM... 目的:以细菌外膜囊泡(OMV)结合三嵌段聚合物普朗尼克F127(PEO_(100)-PPO_(65)-PEO_(100)),构建能够有效促进巨噬细胞分泌抗肿瘤细胞因子的纳米载药体系OMV-F127。方法:培养减毒沙门菌,用超滤离心法与超声破碎法提取OMV,机械挤压法制得OMV-F127;蛋白质定量试剂盒和SDS-PAGE法检测OMV的蛋白含量和成分;荧光显微镜、透射电镜、动态光散射法检测OMV-F127形态学特征、粒径、电位及其稳定性;以小鼠巨噬细胞RAW246.7为细胞模型,ELISA检测OMV-F127对抗肿瘤细胞因子的分泌作用。结果:两种方法成功提取到减毒沙门菌的OMV,其蛋白质总量分别为2.8 mg/mL和2.7 mg/mL。成功制备OMV-F127且含有OMV的标志蛋白OmpF/C。OMV为纳米级囊泡结构,F127以及OMV-F127为球形纳米颗粒。OMV、F127、OMV-F127颗粒平均直径分别为(72±2)nm、(90±3)nm、(92±2)nm。OMV-F127能促进抗肿瘤细胞因子IL-12、α-TNF、γ干扰素的分泌。结论:基于细菌OMV的纳米载体OMV-F127能够有效促进巨噬细胞分泌抗肿瘤细胞因子,具有免疫调节作用。 展开更多
关键词 沙门氏菌菌苗 佐剂 免疫 细菌外膜蛋白质类 纳米结构 聚合物/ 药理学 巨噬细胞 细胞因子类 细胞 培养的
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外排泵高表达和外膜蛋白缺失在铜绿假单胞菌对碳青霉烯耐药中的作用 被引量：31
18
作者 衣美英 王鹏远 +1 位作者 黄汉菊 刘玉村 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期457-462,共6页
目的探讨铜绿假单胞菌(PA)外科监护室(SICU)分离株对碳青霉烯的耐药机制。方法用W estern印迹和逆转录PCR测定外膜蛋白OprD、OprN表达水平和基因m exA的mRNA水平;用PCR扩增IMP、VIM金属酶基因和主动外排系统M exAB-OprM调控基因m exR,... 目的探讨铜绿假单胞菌(PA)外科监护室(SICU)分离株对碳青霉烯的耐药机制。方法用W estern印迹和逆转录PCR测定外膜蛋白OprD、OprN表达水平和基因m exA的mRNA水平;用PCR扩增IMP、VIM金属酶基因和主动外排系统M exAB-OprM调控基因m exR,并测序。结果从SICU分离的49株PA,42株对碳青霉烯耐药,其OprD表达除PA42外均有不同程度的降低或缺失,而正常表达OprD的7株菌,均对2种碳青霉烯敏感。27株菌高表达主动外排系统M exAB-OprM,高表达组对亚胺培南耐药率81.5%(22/27)与低表达组耐药率86.4%(19/22)比较差异无统计学意义(χ2=0.005,P=0.943);而高表达组对美罗培南耐药率44.4%(12/27)与低表达组耐药率13.6%(3/22)比较差异有统计学意义(χ2=5.417,P=0.020)。14株表达了M exEF-OprN,但表达组对亚胺培南和美罗培南耐药率与未表达组耐药率比较差异均无统计学意义(χ2=0.000,P=1.000)。8株高表达M exAB-OprM主动外排系统的调控基因m exR发生变异,其中7株出现氨基酸替换,1株提前出现终止密码子。未发现产IMP、VIM金属酶菌株。结论本院SICU分离的PA,对碳青霉烯耐药主要是由外膜蛋白OprD表达降低或缺失引起,与IMP、VIM金属酶无关;主动外排系统M exAB-OprM的高表达对美罗培南的耐药起重要作用;其高表达与调控基因m exR变异有关。 展开更多
关键词 假单胞菌 铜绿 卡巴配能类 细菌外膜蛋白质类 主动外排系统
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阴沟肠杆菌外膜蛋白缺失与头孢西丁耐药的关系 被引量：19
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作者 李向阳 杨锦红 +1 位作者 陶洪群 缪汉强 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期339-341,共3页
目的　了解阴沟肠杆菌外膜上的外膜蛋白与头孢西丁耐药的关系。方法　参照美国临床实验室标准化委员会M1 0 0 S9文件的确认试验测定超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs) ;超声破碎法提取ESBLs和外膜蛋白 (OMP) ,紫外分光光度法测定ESBLs活性 ,... 目的　了解阴沟肠杆菌外膜上的外膜蛋白与头孢西丁耐药的关系。方法　参照美国临床实验室标准化委员会M1 0 0 S9文件的确认试验测定超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs) ;超声破碎法提取ESBLs和外膜蛋白 (OMP) ,紫外分光光度法测定ESBLs活性 ,聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)分析OMP的成分。结果　头孢西丁耐药的 9株阴沟肠杆菌菌株中 ,有 6株菌株缺少分子量为 1 80 0 0蛋白区带 ,不产生头孢西丁水解酶 ,其中有 5株产生ESBLs;2株菌株有 1 80 0 0蛋白区带 ,产生头孢西丁水解酶 ;1株菌株不缺少外膜蛋白 ,产生ESBLs,但不产生头孢西丁水解酶。对头孢西丁敏感的产ESBLs菌株 ,不产生头孢西丁水解酶 ,也不缺少外膜蛋白。结论　 1 80 0 展开更多
关键词 阴沟肠杆菌 细菌外膜蛋白质 耐药性 Β内酰胺酶 头孢西丁
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E型沙眼衣原体重组主要外膜蛋白诱导出的小鼠免疫效应 被引量：5
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作者 盛彩虹 刘原君 +4 位作者 李艳飞 侯淑萍 姚卫锋 齐蔓莉 刘全忠 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期817-820,共4页
目的检验自行研制的E型沙眼衣原体重组主要外膜蛋白（rMOMP）诱导小鼠产生的特异性免疫应答效应。方法3～4周清洁级BALB／C雌鼠36只，分为佐剂组、单独组和对照组，每组12只。佐剂组采用纯化的rMOMP50μg和等体积的弗氏佐剂、单独组单... 目的检验自行研制的E型沙眼衣原体重组主要外膜蛋白（rMOMP）诱导小鼠产生的特异性免疫应答效应。方法3～4周清洁级BALB／C雌鼠36只，分为佐剂组、单独组和对照组，每组12只。佐剂组采用纯化的rMOMP50μg和等体积的弗氏佐剂、单独组单用纯化的rMOMP50肛趴对照组单用PBS200μL，于第0、2、4周分别双侧股四头肌进行免疫。ELISA法检测小鼠血清中沙眼衣原体特异性IgG抗体以及阴道冲洗液中沙眼衣原体特异性sIgA抗体，ELISA法检测细胞因子IFN-γ，MTT法检测小鼠脾淋巴细胞特异性增殖反应；同源攻击后阴道宫颈脱落细胞沙眼衣原体培养，观察小鼠的迟发型超敏反应以及小鼠的血清抗体中和试验。结果佐剂组小鼠血清沙眼衣原体特异性IgG抗体A405值为0．641±0．059，淋巴细胞增殖指数5．085±1．291，迟发型超敏反应右足足垫增厚0．324±0．054mm。单独组小鼠血清特异性IgG抗体A405值为0．424±0．015，淋巴细胞增殖指数3．123±0．840，迟发型超敏反应右足足垫增厚0．272±0．064mm。佐剂组各项指标的检测结果都高于单独组（P〈0．05）和对照组（P〈0．01）。结论沙眼衣原体rMOMP能刺激机体产生有效的特异性体液和细胞免疫。 展开更多
关键词 衣原体 沙眼 细菌外膜蛋白质类 疫苗 免疫
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