目的实现人补体受体1型(complement receptor type 1,CR1)活性片段SCR15-18在毕赤酵母中的分泌表达。方法用PCR从原核表达质粒pET32a-sCR1-SCR15-18上扩增CR1-SCR15-18的编码基因,并克隆到毕赤酵母分泌表达质粒pPIC9,构建重组质粒pPIC9-...目的实现人补体受体1型(complement receptor type 1,CR1)活性片段SCR15-18在毕赤酵母中的分泌表达。方法用PCR从原核表达质粒pET32a-sCR1-SCR15-18上扩增CR1-SCR15-18的编码基因,并克隆到毕赤酵母分泌表达质粒pPIC9,构建重组质粒pPIC9-CR1-SCR15-18,鉴定后测序;重组质粒电转化整合到毕赤酵母GS115基因组中,菌落PCR技术筛选阳性转化株;经摇瓶发酵和甲醇诱导,SDS-PAGE和Western blot鉴定目的蛋白的表达;Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化目的蛋白,并用体外抑制补体溶血反应实验测定目的蛋白的生物活性。结果成功构建重组表达质粒pPIC9-CR1-SCR15-18;SDS-PAGE和Western blot证实目的基因在毕赤酵母中成功分泌表达;表达产物经镍柱快速纯化后,能够明显抑制补体的体外溶血。结论在毕赤酵母中成功实现了CR1-SCR15-18蛋白的分泌表达,该蛋白具有较高的抑制补体溶血的生物活性。展开更多
目的观察心肾综合征(CRS)患者服用小剂量辛伐他汀后血清补体C3、C4水平及外周血单核细胞Ⅰ型(CR1)、Ⅱ型(CR2)补体受体m RNA表达的变化。方法随机入选2012年1~12月在南京市胸科医院门诊和病房住院的CRS患者56例,根据NYHA心功能分级进行...目的观察心肾综合征(CRS)患者服用小剂量辛伐他汀后血清补体C3、C4水平及外周血单核细胞Ⅰ型(CR1)、Ⅱ型(CR2)补体受体m RNA表达的变化。方法随机入选2012年1~12月在南京市胸科医院门诊和病房住院的CRS患者56例,根据NYHA心功能分级进行心功能分级,根据简化的MDRD公式计算估计的肾小球滤过率。入选对象每晚睡前服用辛伐他汀10 mg,连续服用8周。入选后次日清晨及治疗第8周清晨抽取空腹静脉血,全自动生化分析仪测定血清C3、C4水平;采集外周静脉血提取外周血单个核细胞,提取总RNA并行RT-PCR检测CR1及CR2 m RNA的表达。结果 CRS患者血清C3水平治疗后较治疗前降低[(1.14±0.35)和(1.22±0.31)g/L,P<0.05],外周血单核细胞CR1 m RNA治疗后较治疗前表达增强(0.76±0.10和0.70±0.11,P<0.05)。结论 CRS患者服用小剂量辛伐他汀后,血清C3水平降低及外周血单核细胞CR1核酸表达上调可能共同参与患者心肾功能的改善。展开更多
文摘目的观察心肾综合征(CRS)患者服用小剂量辛伐他汀后血清补体C3、C4水平及外周血单核细胞Ⅰ型(CR1)、Ⅱ型(CR2)补体受体m RNA表达的变化。方法随机入选2012年1~12月在南京市胸科医院门诊和病房住院的CRS患者56例,根据NYHA心功能分级进行心功能分级,根据简化的MDRD公式计算估计的肾小球滤过率。入选对象每晚睡前服用辛伐他汀10 mg,连续服用8周。入选后次日清晨及治疗第8周清晨抽取空腹静脉血,全自动生化分析仪测定血清C3、C4水平;采集外周静脉血提取外周血单个核细胞,提取总RNA并行RT-PCR检测CR1及CR2 m RNA的表达。结果 CRS患者血清C3水平治疗后较治疗前降低[(1.14±0.35)和(1.22±0.31)g/L,P<0.05],外周血单核细胞CR1 m RNA治疗后较治疗前表达增强(0.76±0.10和0.70±0.11,P<0.05)。结论 CRS患者服用小剂量辛伐他汀后,血清C3水平降低及外周血单核细胞CR1核酸表达上调可能共同参与患者心肾功能的改善。
