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热打击诱导血管内皮细胞组织因子早期表达分泌的初步研究
1
作者 钱晶 王凡凡 +4 位作者 万露露 杨加乐 施学智 童华生 周伟梁 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1412-1419,共8页
目的探讨热打击诱导血管内皮细胞组织因子(TF)早期表达分泌的规律。方法将30只SPF级C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组与热打击后复温0、3、6、9h组(n=6)。热打击组小鼠暴露于动物孵箱热环境,核心温度达42.5℃时即为发生重症中暑。采用HE... 目的探讨热打击诱导血管内皮细胞组织因子(TF)早期表达分泌的规律。方法将30只SPF级C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组与热打击后复温0、3、6、9h组(n=6)。热打击组小鼠暴露于动物孵箱热环境,核心温度达42.5℃时即为发生重症中暑。采用HE染色观察小鼠肝脏、肺脏及肾脏组织病理学变化;RT-qPCR检测小鼠组织TFmRNA表达水平;ELISA法检测小鼠血浆TF浓度。体外建立人脐静脉内皮细胞(HUVECs)热打击模型,分为对照组与热打击后复温0、3、6、9 h组。采用RT-qPCR、Western blotting及细胞免疫荧光化学技术分别检测HUVECs中TF mRNA及蛋白表达水平;采用ELISA法检测HUVECs培养上清中TF水平。结果对照组小鼠各组织未见明显病理损伤,热打击复温小鼠存在不同程度组织细胞结构性损伤及出血性、炎症性损伤。与对照组小鼠比较,热打击复温0、3 h组肾脏(1.719±0.018、1.241±0.178 vs.1.000±0.063)、复温3 h组肺脏(2.444±0.511 vs.1.000±0.106)及复温6 h组肝脏(7.312±0.618 vs.1.000±0.147)中TF mRNA表达量均明显升高(P<0.05)。热打击小鼠复温0、3、6、9h组血浆TF水平均较对照组小鼠升高[(132.426±17.920)pg/ml、(119.400±10.267)pg/ml、(107.374±13.495)pg/ml、(163.767±22.810)pg/ml vs.(75.479±13.831)pg/ml,P<0.01]。与对照组比较,热打击后复温6、9h组HUVECs的TFmRNA表达水平明显升高(1.905±0.354、2.564±0.297vs.1.000±0.097,P<0.01);热打击复温0、3、6、9 h组HUVECs培养上清TF水平均明显高于对照组[(36.309±4.101)pg/ml、(38.425±5.484)pg/ml、(41.655±4.380)pg/ml、(43.586±4.718)pg/ml vs.(14.996±0.254)pg/ml,P<0.01]。结论热打击血管内皮细胞中TF的早期表达分泌增加,可能是重症中暑循环TF的主要来源之一。 展开更多
关键词 热打击 血管内皮细胞 组织因子 表达分泌
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双功能枯草杆菌诱导型高效表达分泌载体的构建与鉴定 被引量：7
2
作者 李瑞芳 张添元 罗进贤 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期714-719,共6页
利用大肠杆菌质粒pSP72和枯草杆菌质粒pUB18共整合得到双功能克隆载体pSB。在pSB多克隆位点依次引入枯草杆菌果聚糖蔗糖酶基因启动子-信号肽序列sacBp.s.、地衣芽孢杆菌淀粉酶基因终止子序列α-amyT和短小芽孢杆菌增强子基因degQ,最终... 利用大肠杆菌质粒pSP72和枯草杆菌质粒pUB18共整合得到双功能克隆载体pSB。在pSB多克隆位点依次引入枯草杆菌果聚糖蔗糖酶基因启动子-信号肽序列sacBp.s.、地衣芽孢杆菌淀粉酶基因终止子序列α-amyT和短小芽孢杆菌增强子基因degQ,最终构建了双功能枯草杆菌诱导型高效表达分泌载体pSBPTQ。将VasostatinⅠ基因作为靶基因检测sacBp.s.、α-amyT和degQ在pSBPTQ进行外源基因表达时的功能,结果表明,在蔗糖诱导下,sacB启动子有效启动了Vasostatin I基因的表达和分泌,α-amy T提高了VasostatinⅠ基因的转录效率,而degQ明显增强了VasostatinⅠ基因的表达水平。VasostatinⅠ基因在蔗糖诱导下成功表达并分泌到枯草杆菌细胞外,蛋白质分泌效率达到90%左右。质粒稳定性试验结果表明,经过40个世代之后,质粒pSBPTQ在枯草杆菌DB1342中仍旧保持在83%以上。 展开更多
关键词 枯草杆菌 双功能载体 诱导型 表达分泌 构建
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丝状真菌表达分泌系统中受体菌的构建 被引量：12
3
作者 刘丽 刘谨 +2 位作者 仇润祥 朱兴国 唐国敏 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期667-670,共4页
黑曲霉糖化酶高产菌株T2 1经紫外诱变后 ,通过酪蛋白平板和蛋白酶活性测定筛选出胞外酸性蛋白酶活力仅为原株 0 76 %的菌株A .nigerT2 1 2 0 1,其生长特性和产糖化酶活力与原株基本一致。利用原生质体 PEG法将含有报告基因vhb的表达... 黑曲霉糖化酶高产菌株T2 1经紫外诱变后 ,通过酪蛋白平板和蛋白酶活性测定筛选出胞外酸性蛋白酶活力仅为原株 0 76 %的菌株A .nigerT2 1 2 0 1,其生长特性和产糖化酶活力与原株基本一致。利用原生质体 PEG法将含有报告基因vhb的表达分泌质粒pGT10 vhb通过与选择标记质粒的共转化导入此蛋白酶部分缺陷株及其原株T2 1,检测在蛋白酶缺陷株AspergillusnigerT2 1 2 0 1和原株T2 1中VHb的分泌表达 ,结果表明在A .nigerT2 1 2 0 1中VHb表达水平显著高于原株 ,但Northernblot却显示在两菌株中vnb基因的转录水平近似 。 展开更多
关键词 丝状真菌 表达分泌系统 受体菌 构建 黑曲霉T21 蛋白酶缺陷株 VHB
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胎盘细胞嗜酸性粒细胞趋化因子和T淋巴细胞激活上调性表达分泌因子S表达与自然流产的相关性 被引量：4
4
作者 肖世金 赵爱民 +2 位作者 鲍世民 姜培娟 林其德 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期906-909,I0002,共5页
目的探讨嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)、T淋巴细胞激活上调性表达分泌因子(RANTES)在正常妊娠免疫耐受及反复性自然流产中的作用。方法构建正常妊娠小鼠模型CBA/J×BALB/c(正常妊娠组)和反复性自然流产小鼠模型CBA/J×DBA/2J... 目的探讨嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)、T淋巴细胞激活上调性表达分泌因子(RANTES)在正常妊娠免疫耐受及反复性自然流产中的作用。方法构建正常妊娠小鼠模型CBA/J×BALB/c(正常妊娠组)和反复性自然流产小鼠模型CBA/J×DBA/2J(自然流产组);采用免疫组织化学方法检测胎盘细胞趋化因子Eotaxin、RANTES的表达;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测胎盘细胞培养上清液的白细胞介素(IL)-4、干扰素(IFN)-γ水平,分析胎盘细胞趋化因子Eotaxin、RANTES与细胞因子IL-4、IFN-γ水平的相关性。结果自然流产组的胚胎丢失率为18.3%,显著高于正常妊娠组的3.6%(P<0.05)。正常妊娠组的胎盘细胞Eotaxin的表达阳性率为53.6%,显著高于自然流产组的40.8%(P<0.05);而正常妊娠组的胎盘细胞RANTES的表达阳性率为44.3%,显著低于自然流产组的62.3%(P<0.05)。正常妊娠组的IL-4水平为(1.33±0.43)ng/L,显著高于自然流产组的(0.78±0.41)ng/L(P=0.002);正常妊娠组的IFN-γ水平为(1.24±0.57)ng/L,显著低于自然流产组的(1.67±0.44)ng/L(P=0.038)。自然流产组中,胎盘细胞Eotaxin的表达与IL-4水平呈正相关(r=0.752,P=0.003),RANTES的表达与IFN-γ水平亦呈正相关(r=0.658,P=0.014);正常妊娠组中,RANTES的表达与IFN-γ水平呈正相关(r=0.649,P=0.012),IL-4水平随Eotaxin表达阳性率的上升而显示出增加趋势。结论Eotaxin、RANTES在妊娠免疫耐受形成和自然流产的发病机制中可能发挥重要作用。 展开更多
关键词 趋化因子 嗜酸性粒细胞趋化因子 T淋巴细胞激活上调性表达分泌因子 自然流产
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单核细胞趋化蛋白-1和调节活化正常T细胞表达分泌因子与实验性变态反应性神经炎的关系 被引量：4
5
作者 周颖 肖波 +3 位作者 周文斌 许念桂 吴治国 梁静慧 《临床神经病学杂志》 CAS 北大核心 2005年第5期360-362,共3页
目的研究趋化因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和调节活化正常T细胞表达分泌因子(RANTES)与实验性变态反应性神经炎(EAN)发病的关系,探讨EAN的免疫发病机制.方法给Wistar大鼠足垫皮下注射兔坐骨神经匀浆建立EAN模型,用免疫组化技术检测EA... 目的研究趋化因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和调节活化正常T细胞表达分泌因子(RANTES)与实验性变态反应性神经炎(EAN)发病的关系,探讨EAN的免疫发病机制.方法给Wistar大鼠足垫皮下注射兔坐骨神经匀浆建立EAN模型,用免疫组化技术检测EAN大鼠发病不同时间坐骨神经MCP-1和RANTES的表达.结果EAN组的MCP-1表达第9 d达高峰,随后逐渐下降,第15 d、21 d、28 dMCP-1的表达与前一时间点比较差异均有显著性(均P＜0.01);第9 d、15 d、21 d MCP-1表达均显著高于对照组(均P＜0.001).EAN组第9 d、15 d、21d RANTES表达均显著高于对照组(P＜0.01～0.001),第15 d表达最高.结论MCP-1和RANTES在EAN的发病过程中发挥了重要作用,MCP-1可能起始动作用,RANTES可能与EAN的病情进展有关. 展开更多
关键词 实验性变态反应性神经炎 单核细胞趋化蛋白-1 调节活化正常T细胞表达分泌因子
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自然流产母胎界面嗜酸粒细胞趋化因子、T淋巴细胞激活上调性表达分泌因子S及其受体的表达 被引量：1
6
作者 肖世金 董倩 赵爱民 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1170-1174,共5页
目的探讨嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)/CCR3、T淋巴细胞激活上调性表达分泌因子S(RANTES)/CCR5在正常妊娠免疫耐受及自然流产中的作用。方法采集20例自然流产患者(AP组)和20例正常早孕妇女(NP组)的蜕膜和绒毛组织;采用免疫组织化学方... 目的探讨嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)/CCR3、T淋巴细胞激活上调性表达分泌因子S(RANTES)/CCR5在正常妊娠免疫耐受及自然流产中的作用。方法采集20例自然流产患者(AP组)和20例正常早孕妇女(NP组)的蜕膜和绒毛组织;采用免疫组织化学方法检测蜕膜和绒毛组织Eotaxin/CCR3、RANTES/CCR5的表达,并进行线性相关分析。结果 NP组蜕膜、绒毛组织Eotaxin的表达阳性率分别为75%和80%,显著高于AP组的35%和30%(P=0.011,P=0.001);NP组阳性表达强度亦显著高于AP组(P=0.003,P=0.002)。NP组蜕膜、绒毛组织RANTES的表达阳性率分别为40%和45%,显著低于AP组的80%和85%(P=0.01,P=0.008),NP组阳性表达强度亦显著低于AP组(P=0.002,P=0.002)。两组蜕膜、绒毛组织CCR5的表达阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);但AP组阳性表达强度显著高于NP组(P=0.018,P=0.029)。两组CCR3的表达阳性率及阳性表达强度比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。在NP组中,蜕膜、绒毛RANTES的表达与CCR5的表达均呈正相关(r=0.679,P=0.001;r=0.478,P=0.033);在AP组中,蜕膜、绒毛RANTES的表达与CCR5的表达均为正相关(r=0.610,P=0.004;r=0.620,P=0.004);两组蜕膜、绒毛Eotaxin和CCR3的表达均不存在相关性(P>0.05)。结论趋化因子及其受体Eotaxin/CCR3、RANTES/CCR5在妊娠免疫耐受形成和自然流产的发病机制中可能发挥重要作用。 展开更多
关键词 趋化因子 嗜酸性粒细胞趋化因子 CCR3 T淋巴细胞激活上调性表达分泌因子S CCR5 自然流产
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枯草芽胞杆菌蛋白质表达分泌系统发展及展望 被引量：6
7
作者 张大伟 康倩 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2019年第1期1-10,共10页
枯草芽胞杆菌作为革兰阳性模式菌株是基础研究和工业应用的常用宿主细胞。介绍了枯草芽胞杆菌中蛋白合成和分泌过程中的重要步骤及重要调控位点。在枯草芽胞杆菌蛋白表达及分泌系统中,可以针对目标基因在体内的转录、翻译、折叠、转运... 枯草芽胞杆菌作为革兰阳性模式菌株是基础研究和工业应用的常用宿主细胞。介绍了枯草芽胞杆菌中蛋白合成和分泌过程中的重要步骤及重要调控位点。在枯草芽胞杆菌蛋白表达及分泌系统中,可以针对目标基因在体内的转录、翻译、折叠、转运和菌株改造等方面对表达分泌系统进行优化改良,针对不同的目标蛋白,可进行不同优化模块的组装和拼搭,以达到针对目标蛋白产物定制化地提高产量和分泌量的目的。在未来,随着基因编辑和合成生物技术的发展,菌株改良策略的不断优化,枯草芽胞杆菌将会在工业生产蛋白质制品领域发挥更大的应用价值。 展开更多
关键词 枯草芽胞杆菌 蛋白质表达和分泌 微生物应用 表达分泌系统调控 菌株改造策略
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共染ANP对GH_4和AtT_（20）细胞肾素基因表达分泌的影响
8
作者 苏永新 付爱芬 +1 位作者 张梅 王莉 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1994年第4期304-307,共4页
本文应用现代基因共同转染技术，首次对ＧＨ４和ＡｔＴ２０细胞进行了重组大鼠ＡＮＰ和人肾素基因的共同转染，建立了表达细胞模型。并对其表达产物进行分析研究。文章着重分析研究了ＡＮＰ对肾素基因的表达产物的形成与分泌的调节作用... 本文应用现代基因共同转染技术，首次对ＧＨ４和ＡｔＴ２０细胞进行了重组大鼠ＡＮＰ和人肾素基因的共同转染，建立了表达细胞模型。并对其表达产物进行分析研究。文章着重分析研究了ＡＮＰ对肾素基因的表达产物的形成与分泌的调节作用。ＡＩ形成放免检测结果表明：转染细胞的表达是有效的。转染的ＧＨ４能有效地表达分泌肾素原；转染的ＡｔＴ２０细胞则不仅能形成肾素原，而且能分泌具有活性的肾素。ＡＮＰ转染的实验组不仅显示有明显的拮抗Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ的刺激作用，而且ＡＮＰ对肾素与肾素原的形成分泌有抑制作用，其中抑制肾素分泌的效能大于肾素原的分泌。实验证明，转染基因的表达细胞是有效研究肾素基因表达、分泌等调节的细胞模型。 展开更多
关键词 肾素 ANP 基因转染细胞 表达分泌调节 病理生理
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碳及氮源在提高重组酵母表达分泌水平中的作用 被引量：1
9
作者 刘颖 张小里 +2 位作者 熊朝晖 赵彬侠 夏诏杰 《西北大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期127-130,共4页
通过摇瓶批式发酵方法和 2 L发酵罐补料分批发酵方法研究了碳及氮源在提高重组酵母 S.cerevisiae2 0 B- 1 2 ( p NA3)表达分泌水平中的作用 ,得出采用分段发酵方法 ,在诱导期补充替代碳源(乳糖或甘油 )并以营养丰富的天然氮源 (酵母膏 ... 通过摇瓶批式发酵方法和 2 L发酵罐补料分批发酵方法研究了碳及氮源在提高重组酵母 S.cerevisiae2 0 B- 1 2 ( p NA3)表达分泌水平中的作用 ,得出采用分段发酵方法 ,在诱导期补充替代碳源(乳糖或甘油 )并以营养丰富的天然氮源 (酵母膏 )诱导产物分泌可使重组酵母表达、分泌水平有较大提高。在补料分批培养中通过生长阶段加速补充碳源 ,产酶阶段补充替代碳源和分次补加酵母膏的方法使重组酵母表达、分泌水平进一步提高 ,从而为流加培养和工业化放大提供了依据。 展开更多
关键词 基因重组酵母 表达分泌水平 分段培养 补料分批发酵 碳源 氮源 基因工程 酿酒酵母
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N端9个谷氨酸或7个天冬氨酸显著增强普鲁兰酶在大肠杆菌中表达分泌
10
作者 栗亚美 安展飞 +2 位作者 陈阿娜 杨艳坤 白仲虎 《生物学杂志》 CAS CSCD 2017年第3期11-17,共7页
各种标签被广泛应用于大肠杆菌分泌表达异源蛋白,其中最简单有效地便是氨基酸标签,尤其是带电荷氨基酸标签。为了研究N端添加不同种类和数目的带电荷氨基酸标签对普鲁兰酶(pullulanase,Ba Pul13A)在大肠杆菌中表达分泌水平的影响,构建... 各种标签被广泛应用于大肠杆菌分泌表达异源蛋白,其中最简单有效地便是氨基酸标签,尤其是带电荷氨基酸标签。为了研究N端添加不同种类和数目的带电荷氨基酸标签对普鲁兰酶(pullulanase,Ba Pul13A)在大肠杆菌中表达分泌水平的影响,构建了25株Ba Pul13A变体。实验结果表明:N端添加9个连续的谷氨酸标签,降低了mRNA的转录水平,增加了N端mRNA的稳定性,使得普鲁兰酶总酶活达到179.60 U/m L,比不添加氨基酸标签的对照菌高278.28%。N端添加7个连续的天冬氨酸标签,增强了大肠杆菌细胞内膜通透性,大量的普鲁兰酶,48.18U/m L,分泌到培养基中。通过蛋白质结构预测软件I-TASSER分析得知,N端添加不同带电荷氨基酸标签引起CBM41结构域发生变化,猜测该变化是导致Ba Pul13A变体表达分泌水平差异的主要原因。 展开更多
关键词 带电荷氨基酸标签 表达分泌 mRNA 膜通透性 蛋白结构预测
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共表达分子伴侣蛋白提高III型普鲁兰水解酶在短小芽孢杆菌中的分泌表达及发酵优化 被引量：1
11
作者 曾静 郭建军 +1 位作者 王通 袁林 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2024年第10期149-157,共9页
本研究旨在通过共表达分子伴侣蛋白以及优化发酵条件来提高III型普鲁兰水解酶(TK-PUL)在短小芽孢杆菌中的分泌表达水平。通过构建共表达TK-PUL和分子伴侣蛋白的多种重组短小芽孢杆菌,并以胞外酶活为指标对其进行筛选,确定最有利于TK-PU... 本研究旨在通过共表达分子伴侣蛋白以及优化发酵条件来提高III型普鲁兰水解酶(TK-PUL)在短小芽孢杆菌中的分泌表达水平。通过构建共表达TK-PUL和分子伴侣蛋白的多种重组短小芽孢杆菌,并以胞外酶活为指标对其进行筛选,确定最有利于TK-PUL分泌表达的分子伴侣蛋白及对应的重组短小芽孢杆菌。在此基础上采用单因素实验和响应面法优化重组短小芽孢杆菌的发酵条件。结果表明,共表达分子伴侣蛋白PrsA^(Ba)的重组短小芽孢杆菌的胞外酶活达到98.79 U/mL,提高了0.31倍。该重组短小芽孢杆菌的最佳培养基包括19.65 g/L葡萄糖、21.46 g/L酵母提取物、12.01 g/L MgCl_(2)·6H_(2)O、9.02 g/L脯氨酸、0.01 g/L FeSO4·7H_(2)O、0.01 g/L MnSO4·4H_(2)O、0.001 g/L ZnSO4·7H_(2)O。在发酵温度为35℃、起始发酵pH为7.0的条件下,该重组短小芽孢杆菌于最佳培养基中培养66 h时,其胞外酶活达到192.68 U/mL,提高了1.56倍。本研究通过共表达分子伴侣蛋白和发酵优化实现了TK-PUL在短小芽孢杆菌的高效分泌表达,为TK-PUL的应用提供了基础。 展开更多
关键词 III型普鲁兰水解酶 短小芽孢杆菌 胞外分子伴侣蛋白 发酵优化 分泌表达
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分泌表达柔嫩艾美耳球虫EtMIC2重组枯草芽孢杆菌的构建与抗体检测
12
作者 邓瑞鹏 龚海燕 +2 位作者 兰卓 陈兆国 王春仁 《黑龙江八一农垦大学学报》 2024年第6期72-78,133,共8页
鸡球虫病是一种严重危害养鸡业生产的流行性肠道寄生原虫病,可造成严重的经济损失。目前,应用抗球虫药是防治球虫病的主要手段,但随着抗药性和环境污染等问题的出现,抗球虫疫苗的研究成为防控球虫病的热点。柔嫩艾美耳球虫是鸡球虫病的... 鸡球虫病是一种严重危害养鸡业生产的流行性肠道寄生原虫病,可造成严重的经济损失。目前,应用抗球虫药是防治球虫病的主要手段,但随着抗药性和环境污染等问题的出现,抗球虫疫苗的研究成为防控球虫病的热点。柔嫩艾美耳球虫是鸡球虫病的主要病原,因此,研究旨在通过芽孢杆菌表达系统,构建能够分泌表达柔嫩艾美耳球虫微线体蛋白2(Eimeria tenella isolate microneme protein 2,EtMIC2)重组枯草芽孢杆菌菌株,为研发新型鸡球虫疫苗奠定基础。首先,采用PCR及质谱分析方法鉴定食用性及饲用性菌株,然后从柔嫩艾美耳球虫基因组中扩增EtMIC2基因,通过无缝克隆技术将其克隆至pBE2-R质粒中,构建重组质粒pBE2-R-EtMIC2,并采用冰浴转化将重组质粒分别整合至两株枯草芽孢杆菌中,最后采用PCR、SDS-PAGE、Western blot进行鉴定。将重组菌株饲喂雏鸡,免疫7 d后初步检测抗体效价。结果表明:EtMIC2基因克隆成功,且成功整合于饲用性枯草芽孢杆菌基因组,目的蛋白正确表达,并分泌至胞外,将重组菌株饲喂给雏鸡后,血液中检测出EtMIC2抗体。研究成功构建了分泌表达柔嫩艾美耳球虫EtMIC2蛋白的重组枯草芽孢杆菌,且重组菌株能刺激动物产生抗体,可用于后续的抗球虫免疫保护性试验。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 枯草芽孢杆菌 EtMIC2 分泌表达 抗体检测
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异源果聚糖蔗糖酶在乳酸乳球菌中的分泌表达
13
作者 包书健 李兴江 +1 位作者 吴学凤 穆冬冬 《合肥工业大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2024年第4期527-532,共6页
为了实现果聚糖蔗糖酶简便有效的纯化,文章将来源于解淀粉芽孢杆菌的基因sacB添加组氨酸标签后与信号肽基因usp45融合形成基因片段usp45-sacB,然后插入质粒pNZ8048中,导入乳酸乳球菌(L.lactis)NZ9000构建重组菌株L.lactis(pNZ8048-usp45... 为了实现果聚糖蔗糖酶简便有效的纯化,文章将来源于解淀粉芽孢杆菌的基因sacB添加组氨酸标签后与信号肽基因usp45融合形成基因片段usp45-sacB,然后插入质粒pNZ8048中,导入乳酸乳球菌(L.lactis)NZ9000构建重组菌株L.lactis(pNZ8048-usp45-sacB)。通过电泳验证纯化蛋白的分子量为51 kDa,符合预期大小,确定果聚糖蔗糖酶成功表达。为了进一步提高果聚糖蔗糖酶的产量,该研究对诱导时间和诱导剂的质量浓度进行优化,得出最优的表达条件为:诱导时间48 h,诱导剂nisin质量浓度2μg/L。 展开更多
关键词 sacB基因 果聚糖蔗糖酶 质粒 分泌表达 乳酸乳球菌
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白血病抑制因子及受激活调节正常T细胞表达和分泌因子对血流感染脓毒症患者的诊断及预后评估价值 被引量：7
14
作者 张志斌 王楚 +5 位作者 韩英 王佳 吕骏卿 林雪容 苑萌 韩树池 《中国急救医学》 CAS CSCD 2023年第4期296-300,共5页
目的研究血清白血病抑制因子(LIF)及受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)对血流感染(BSI)脓毒症患者的诊断及预后评估价值。方法选择2021年1月~2022年7月期间我科收治的脓毒症患者,检测抗生素治疗前的血清LIF、RANTES水平;根据... 目的研究血清白血病抑制因子(LIF)及受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)对血流感染(BSI)脓毒症患者的诊断及预后评估价值。方法选择2021年1月~2022年7月期间我科收治的脓毒症患者,检测抗生素治疗前的血清LIF、RANTES水平;根据血培养结果分为BSI组和非BSI组,BSI组包括革兰阳性(G^(+))菌感染和革兰阴性(G^(-))菌感染患者,评估患者的28 d预后。结果BSI组血清LIF和RANTES水平高于非BSI组(P<0.05);BSI组中G^(-)患者血清LIF和RANTES水平高于G^(+)患者(P<0.05);BSI组中死亡的G^(-)患者血清LIF和RANTES水平高于存活的G^(-)患者(P<0.05),BSI组中死亡的G^(+)患者血清LIF和RANTES水平与存活的G^(+)患者比较差异无统计学意义(P>0.05);血清LIF和RANTES对脓毒症患者BSI、BSI脓毒症患者G^(-)菌感染具有诊断价值,对G^(-)菌感染导致BSI脓毒症的预后具有评估价值。结论血清LIF和RANTES是诊断BSI脓毒症、评估细菌感染类型以及G^(-)菌感染导致BSI脓毒症预后的潜在标志物。 展开更多
关键词 脓毒症 血流感染 诊断 白血病抑制因子 受激活调节正常T细胞表达和分泌因子
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尖孢镰刀菌Six1d启动子的克隆及其在真菌分泌表达载体构建中的应用
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作者 彭存智 常丽丽 +3 位作者 王丹 黄超 徐兵强 仝征 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2023年第6期1203-1213,共11页
前期研究中构建的真菌分泌表达载体p74HSP-EGFP可在真菌中表达目标蛋白,在真菌侵染并定殖植物的过程中分泌目标蛋白到植物中,从而验证目的基因的功能,但p74HSP-EGFP载体中驱动目的基因表达的毒素基因(toxin A,ToxA)启动子不是尖孢镰刀... 前期研究中构建的真菌分泌表达载体p74HSP-EGFP可在真菌中表达目标蛋白,在真菌侵染并定殖植物的过程中分泌目标蛋白到植物中,从而验证目的基因的功能,但p74HSP-EGFP载体中驱动目的基因表达的毒素基因(toxin A,ToxA)启动子不是尖孢镰刀菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f. sp. cubense, Foc)自身的启动子。为能在Foc中更有效地表达其自身基因,本研究从尖孢镰刀菌1号生理小种(Foc1)中克隆到高丰度表达的木质部分泌蛋白基因(secreted in xylem 1d, Six1d)的启动子,来替换p74HSP-EGFP载体中的ToxA启动子,并将新构建的真菌分泌表达载体命名为pSix1d74HSPG。为比较2个分泌载体的表达效率,本研究进一步将p74HSP-EGFP和pSix1d74HSPG载体转化尖孢镰刀菌热带4号生理小种(Foc TR4),获得的转化菌株分别在钾盐液体培养基(KK)中振荡培养5 d后,检测分泌到胞外的EGFP荧光强度和EGFP蛋白的表达量。结果显示,pSix1d74HSPG中Six1d启动子驱动的EGFP表达强度能够达到p74HSP-EGFP中ToxA启动子驱动的1.6~1.7倍,说明pSix1d74HSPG载体可代替p74HSP-EGFP载体在Foc中更高效分泌表达目的蛋白,为香蕉枯萎病抗感病分子机理研究提供重要的实验工具。 展开更多
关键词 香蕉枯萎病 内源启动子 分泌表达载体 Six1d蛋白
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人促甲状腺激素受体A亚单位蛋白在昆虫细胞体系中的分泌性表达
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作者 张萌 张恺宁 +5 位作者 陈子怡 王玲 伍丽萍 王悦 刘冰 施秉银 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期409-414,共6页
目的拟构建昆虫细胞分泌表达体系,在草地夜蛾卵巢细胞分泌性促甲状腺激素受体(thyroid stimulating hormone receptor,TSHR)A亚单位蛋白。方法将TSHR A亚单位蛋白(22-289)和绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因连接到质粒... 目的拟构建昆虫细胞分泌表达体系,在草地夜蛾卵巢细胞分泌性促甲状腺激素受体(thyroid stimulating hormone receptor,TSHR)A亚单位蛋白。方法将TSHR A亚单位蛋白(22-289)和绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因连接到质粒,并通过转化、蓝白斑筛选获得重组杆粒,将其转染入sf9昆虫细胞收获重组杆状病毒,扩增并测定滴度。最终通过蛋白印迹实验鉴定重组蛋白的表达并优化表达条件。结果在蛋白表达体系的构建过程中,PCR鉴定和测序均证实了重组质粒和重组杆粒序列的正确性。将重组杆粒转染入细胞后观察到病毒出芽迹象,空斑实验鉴定P1代病毒的滴度为2×10^(7) pfu/m。蛋白印迹显示重组蛋白分子质量为55 ku,主要在培养基中。蛋白表达的最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)为1,最佳感染时程为72 h。结论本研究构建了TSHR A亚单位的昆虫细胞杆状病毒表达体系,该体系能够外泌性表达分子质量为55 ku左右的蛋白TSHR 22-289,且蛋白能够成功的糖基化修饰。该系统为其工业化平台的建设及生产提供前期基础,也针对日后TSHR蛋白的研究和Graves病的病因预防提供了有用的工具。 展开更多
关键词 人促甲状腺激素受体A亚单位 昆虫细胞体系 分泌型表达 SF9细胞 GRAVES病
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大肠杆菌分泌表达烟酰胺单核苷酸合成途径酶及催化体系优化 被引量：2
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作者 吴旻晖 梁书利 林影 《现代食品科技》 CAS 北大核心 2023年第3期75-86,共12页
烟酰胺单核苷酸(NMN)是具有重要医用价值的NAD+前体,通过信号肽PelB实现大肠杆菌BL21(DE3)分泌表达催化NMN合成的烟酰胺磷酸核糖转移酶(Sfnampt)、磷酸核糖焦磷酸激酶(Tkprs)和核糖激酶(Erbks)。对三酶的酶学特性分析显示,Sfnampt、Tkpr... 烟酰胺单核苷酸(NMN)是具有重要医用价值的NAD+前体,通过信号肽PelB实现大肠杆菌BL21(DE3)分泌表达催化NMN合成的烟酰胺磷酸核糖转移酶(Sfnampt)、磷酸核糖焦磷酸激酶(Tkprs)和核糖激酶(Erbks)。对三酶的酶学特性分析显示,Sfnampt、Tkprs和Erbks的最适反应温度分别为45、50和37℃,最适pH值分别为7.5、8.5和5.5。热稳定性分析发现,Sfnampt在35℃热稳定性良好而在40~55℃较差;Tkprs在40~60℃热稳定性良好;Erbks在25~40℃热稳定性良好而在45℃较差。酶动力学分析可知,Sfnampt、Tkprs和Erbks的Vmax分别为0.65μmol/(L·min)、2.37μmol/(L·min)、12.58μmol/(L·min),Km分别为2.87μmol/L、25.48μmol/L和74.13μmol/L,Tkprs、Erbks与已表征的Prs、Rbks相比底物亲和力好。将分泌表达的三酶用于催化合成NMN,温度37℃、pH值8.0为较优催化条件。底物ATP以及酶Sfnampt在反应体系中为关键因素,经底物和酶配比优化后,使用三酶经过7 h催化可获得5.50μmol/L的NMN。该研究在大肠杆菌系统成功实现了NMN合成途径酶的分泌表达,为NMN合成提供了新思路。 展开更多
关键词 烟酰胺单核苷酸 分泌表达 信号肽 大肠杆菌
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老年2型糖尿病周围神经病变与血清趋化因子调节激活正常T细胞表达和分泌因子、C-X-C基序趋化因子配体12、C-C基序趋化因子配体2水平的相关性 被引量：2
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作者 高娟梅 柴小磊 +1 位作者 崔茜 赵利波 《临床内科杂志》 CAS 2023年第8期525-528,共4页
目的探讨老年2型糖尿病(T2DM)周围神经病变(DPN)与血清趋化因子调节激活正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)、C-X-C基序趋化因子配体12(CXCL12)、C-C基序趋化因子配体2(CCL2)的关系。方法选取2019年3月~2021年10月河北省邯郸市人民医院确... 目的探讨老年2型糖尿病(T2DM)周围神经病变(DPN)与血清趋化因子调节激活正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)、C-X-C基序趋化因子配体12(CXCL12)、C-C基序趋化因子配体2(CCL2)的关系。方法选取2019年3月~2021年10月河北省邯郸市人民医院确诊的老年T2DM患者181例,根据是否并发DPN将其分为单纯T2DM组(89例)和DPN组(92例)。收集所有患者一般临床资料、实验室检查指标、血清趋化因子RANTES、CXCL12、CCL2水平及感觉神经传导速度和运动神经传导速度并分组进行比较。采用Pearson相关分析评估DPN患者血清趋化因子RANTES、CXCL12、CCL2水平与一般临床指标及神经传导速度的相关性;采用多因素logistic回归分析评估DPN发病的影响因素。结果DPN组血清趋化因子RANTES、CXCL12、CCL2、糖化血红蛋白(HbA1c)、总胆固醇(TC)水平及T2DM病程、高血压病、高脂血症、视网膜病变患者比例均显著高于单纯T2DM组,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、感觉神经传导速度、运动神经传导速度均显著低于单纯T2DM组(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,DPN患者血清趋化因子RANTES、CXCL12、CCL2水平与T2DM病程、高血压病、高脂血症、视网膜病变、HbA1c、TC均呈正相关,与HDL-C、感觉神经传导速度、运动神经传导速度均呈负相关(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,RANTES、CXCL12、CCL2水平高、T2DM病程长是T2DM患者并发DPN的独立危险因素(P<0.05)。结论DPN患者血清趋化因子RANTES、CXCL12、CCL2水平升高,且与神经传导速度呈负相关。 展开更多
关键词 2型糖尿病 周围神经病变 调节激活正常T细胞表达和分泌因子 C-X-C基序趋化因子配体12 C-C基序趋化因子配体2
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基于非靶向代谢组学分析谷氨酸棒杆菌分泌表达外源蛋白代谢差异
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作者 黄丹妮 邹宇 +2 位作者 刘秀霞 杨艳坤 白仲虎 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第20期1-8,I0001,I0002,共10页
谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)由于其无内毒素以及有完善的分泌系统可用于分泌生产重组医药蛋白,被认为是很有潜力的外源蛋白表达宿主。外源蛋白分泌表达涉及蛋白合成、运输以及分泌等多个耗能过程,能量代谢的扰动引起宿主... 谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)由于其无内毒素以及有完善的分泌系统可用于分泌生产重组医药蛋白,被认为是很有潜力的外源蛋白表达宿主。外源蛋白分泌表达涉及蛋白合成、运输以及分泌等多个耗能过程,能量代谢的扰动引起宿主细胞整体代谢水平的变化。该研究以C.glutamicum CGMCC1.15647菌株为研究对象,利用非靶向代谢组学比较分泌表达外源蛋白对菌株自身代谢的影响,发现在分泌表达外源蛋白组中共有176个差异代谢物,其中79个代谢物显著上调表达,97个代谢物显著下调表达,关键代谢物为D-甘露糖-6-磷酸、叶酸、肌苷、L-色氨酸、L-苯丙氨酸等。差异代谢物通路分析表示,分泌表达外源蛋白会导致中心代谢加剧和多种氨基酸特别是芳香族氨基酸代谢的变化,以满足蛋白合成和分泌对能量的需求,同时保护胞内蛋白以维持菌体正常生长。该文从代谢水平上探究C.glutamicum CGMCC1.15647分泌外源蛋白过程中的关键代谢物及代谢调控网络,对于优化C.glutamicum细胞中代谢流使之趋向于有利于蛋白分泌表达有重要的研究意义。 展开更多
关键词 谷氨酸棒杆菌 分泌表达 代谢组学 表达宿主 外源蛋白
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毕赤酵母分泌型遗传操作工具的构建与优化
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作者 张梦宇 王祎涵 +2 位作者 李涵 李天明 冯惠勇 《河北科技大学学报》 CAS 北大核心 2024年第4期415-424,共10页
为了解决毕赤酵母遗传操作效率低且流程繁琐的问题,提高其应用价值,构建并优化了分泌型遗传操作工具。首先,以α-淀粉酶为报告蛋白,通过融合自主复制序列构建非整合型表达质粒;其次,借助通用引物和POE-PCR,快速筛选评估与目的蛋白最匹... 为了解决毕赤酵母遗传操作效率低且流程繁琐的问题,提高其应用价值,构建并优化了分泌型遗传操作工具。首先,以α-淀粉酶为报告蛋白,通过融合自主复制序列构建非整合型表达质粒;其次,借助通用引物和POE-PCR,快速筛选评估与目的蛋白最匹配的内源信号肽;最后,构建以亚磷酸盐为唯一磷源的营养依赖型筛选标记。结果表明:2种非整合型质粒表达α-淀粉酶的酶活分别是整合型质粒的2倍和1.6倍;以FLO10、EXG1和MSB 2为信号肽引导的α-淀粉酶酶活分别是常规信号肽α-MF的2.5倍、1.94倍和1.75倍;亚磷酸脱氢酶基因(ptxD)成功筛选出异源表达α-淀粉酶的重组菌株。研究简化了基因操作流程,改进了遗传操作工具,开发的绿色安全且低成本的营养依赖型筛选标记,有助于毕赤酵母分泌表达系统的应用和推广。 展开更多
关键词 合成生物学 毕赤酵母 分泌表达 复制子 信号肽 筛选标记
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