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用表达性差异显示分析技术分离人胎肝组织选择性表达基因 被引量：2
1
作者 许望翔 魏汉东 +1 位作者 汪思应 杨晓明 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期192-194,共3页
目的 :建立 4月龄人胎肝组织选择性表达基因EST库 ,为研究胚胎肝组织特异表达基因提供有力的工具。方法 :采用表达性差异显示分析 (representationaldifferenceanalysis,RDA)技术建立 4月龄人胎肝组织选择性表达基因EST库 ,并测定部分... 目的 :建立 4月龄人胎肝组织选择性表达基因EST库 ,为研究胚胎肝组织特异表达基因提供有力的工具。方法 :采用表达性差异显示分析 (representationaldifferenceanalysis,RDA)技术建立 4月龄人胎肝组织选择性表达基因EST库 ,并测定部分克隆核苷酸序列 ,以竞争PCR检测代表性基因的差异表达。结果与结论 :以珠蛋白家族基因为标志 ,所建差减cDNA文库中α 珠蛋白家族基因的表达频率较未差减cDNA文库增高 7倍 ,同时该文库也含有多种与肝生长密切相关的基因 ,表明RDA技术确是研究差异表达基因的有效手段 ,所建EST库富集胎肝特异表达基因 .部分克隆序列分析获得 2种未报道序列 ,其中一株含有丝 /苏氨酸激酶结构域 。 展开更多
关键词 人胎肝 基因表达 基因分离 表达性差异显示分析技术
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中国技术转移的演化特征、区域差异及空间收敛性分析
2
作者 崔静静 石鑫雨 《科学与管理》 2025年第1期82-91,共10页
技术转移是促进区域协调发展和创新资源高效配置的重要手段。利用中国城市间专利转让数据,运用核密度估计、全局空间自相关与Dagum基尼系数法,揭示中国技术转移的分布动态演进规律与区域差异和来源,并运用收敛分析分区域检验其空间收敛... 技术转移是促进区域协调发展和创新资源高效配置的重要手段。利用中国城市间专利转让数据,运用核密度估计、全局空间自相关与Dagum基尼系数法,揭示中国技术转移的分布动态演进规律与区域差异和来源,并运用收敛分析分区域检验其空间收敛机制。研究发现:①中国城市总体专利转让呈逐渐上升趋势,并逐渐从以实用新型专利转让为主转变为以发明专利转让为主,京津冀、长三角与珠三角地区呈现较高水平的技术转移;②城市间技术转移的总体差异主要来源于区域间差异,分地区结果表示西部地区的区域内与东西部之间的区域间差异最大;③总体及三大区域技术转移呈σ收敛特征与时空β收敛特征,中部地区的收敛速度高于总体的收敛速度,各区域技术转移差异随着时间推移而逐渐缩小。本研究为加深对技术转移的空间发展格局认知提供了支撑,为缩小区域间技术创新差距提供了新思路。 展开更多
关键词 技术转移 分布动态 区域差异 收敛性分析
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差异显示反转录-PCR及抑制性扣除杂交在基因表达差异分析中的应用 被引量：2
3
作者 黄升谋 邹应斌 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 2002年第2期183-185,共3页
差异显示反转录 -PCR和抑制性扣除杂交是目前广泛应用于基因表达差异分析的方法 ,它们分别具有灵敏度高假阳性率低等特点 ,对其原理、技术。
关键词 差异显示反转录-PCR 抑制性扣除杂交 基因表达差异分析 应用
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一种优化的mRNA差异显示技术分析白刺盐碱胁迫表达相关基因研究 被引量：5
4
作者 陆海 张建秋 +1 位作者 张玉玲 苟小军 《成都大学学报（自然科学版）》 2004年第2期1-6,共6页
mRNA差别显示PCR技术是分离、检测差异基因表达的有力工具 我们研究了存在的可能影响DDRT-PCR研究结果的因素 通过改变DDRT-PCR方法中的引物、PCR反应中的退火温度等条件,得到了一种优化的DDRT-PCR技术,运用该项技术研究了白刺盐碱胁迫... mRNA差别显示PCR技术是分离、检测差异基因表达的有力工具 我们研究了存在的可能影响DDRT-PCR研究结果的因素 通过改变DDRT-PCR方法中的引物、PCR反应中的退火温度等条件,得到了一种优化的DDRT-PCR技术,运用该项技术研究了白刺盐碱胁迫相关基因的差异表达 结果发现,运用这种方法得到的差异表达基因片段假阳性率较低,且差别条带较长,多为800bp以上,克服了DDRT-PCR技术中的主要问题。 展开更多
关键词 MRNA差异显示技术 DDRT-PCR 白刺 盐碱胁迫 基因表达 假阳性率
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中国制造业升级的区域差异及收敛性分析——基于出口技术复杂度视角
5
作者 马永军 谢松洪 黄睿轩 《湖南工业大学学报》 2024年第4期58-66,共9页
利用14个类别的制造业数据,测算2002—2021年中国31个省市自治区制造业出口技术复杂度,考察制造业升级程度,并运用δ收敛、绝对β收敛与条件β收敛探究制造业升级的收敛特征。研究发现:样本期内各省制造业出口技术复杂度皆有大幅提升;... 利用14个类别的制造业数据,测算2002—2021年中国31个省市自治区制造业出口技术复杂度,考察制造业升级程度,并运用δ收敛、绝对β收敛与条件β收敛探究制造业升级的收敛特征。研究发现:样本期内各省制造业出口技术复杂度皆有大幅提升;全国及四大区域存在δ收敛特征;东部和东北地区不存在绝对β收敛特征,全国、中部与西部存在绝对β收敛特征。分阶段分析结果表明:2002—2004年,全国及四大区域仅西部地区存在绝对β收敛;2005—2012年,除东部地区外,全国及其他区域均存在绝对β收敛;2013—2021年,全国及四大区域皆呈现显著的绝对β收敛态势,且存在着显著的条件β收敛特征。据此,提出协调制造业区域内均衡发展新方式和实行省域差异化发展新战略等对策建议。 展开更多
关键词 制造业升级 出口技术复杂度 区域差异 收敛性分析
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基因表达差异显示分析技术在创伤研究中的应用
6
作者 徐发良 李磊 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期322-326,共5页
基因是细胞增殖、分化、成熟等各项生命活动的调控中心,也是许多疾病发生、发展和转归的决定性因素。基因表达的变化必然导致细胞、组织、器官乃至整个机体的各种异常。包括创伤在内的各种内外刺激,都可不同程度地引起基因表达的变化,... 基因是细胞增殖、分化、成熟等各项生命活动的调控中心,也是许多疾病发生、发展和转归的决定性因素。基因表达的变化必然导致细胞、组织、器官乃至整个机体的各种异常。包括创伤在内的各种内外刺激,都可不同程度地引起基因表达的变化,最终妨碍机体健康。随着生物信息学的逐渐兴起和分子生物学的不断发展并向其他学科的逐渐渗透,业已建立起一系列研究基因表达变化的切实可行的技术手段(即“基因表达差异分析技术”,如DNA微阵列),对捕获基因表达的种种变化具有重要价值。这些技术已经在肿瘤及其他疾病的研究中得到了广泛应用;近几年也逐渐进入创伤研究领域,在一定程度上推动了创伤研究的发展。 展开更多
关键词 基因表达差异显示分析 创伤研究 应用
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乳腺癌细胞与乳腺上皮细胞MicroRNAs表达谱的差异性分析 被引量：8
7
作者 张辉 苏式兵 +1 位作者 周钱梅 陆亦宇 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第5期493-499,共7页
背景与目的:已有研究表明,MicroRNAs(miRNAs)的异常表达参与了乳腺癌的发生和发展,常起到抑癌基因或癌基因作用。本研究旨在探讨乳腺癌细胞与乳腺上皮细胞miRNAs的差异性表达,并预测异常表达的miRNAs可能调控的靶基因。方法:培养乳腺癌... 背景与目的:已有研究表明,MicroRNAs(miRNAs)的异常表达参与了乳腺癌的发生和发展,常起到抑癌基因或癌基因作用。本研究旨在探讨乳腺癌细胞与乳腺上皮细胞miRNAs的差异性表达,并预测异常表达的miRNAs可能调控的靶基因。方法:培养乳腺癌细胞株MCF-7和正常乳腺上皮细胞株HBL-100,分别提取细胞总RNA,并进行质检;利用miRNAs芯片技术,检测乳腺癌细胞和正常乳腺上皮细胞miRNAs的表达,对其表达谱进行差异性分析;采用实时定量RT-PCR进行验证;运用MiRanda、TargetScan、PicTar、DIANA-microT软件预测miRNAs可能调控的靶基因。结果:从MCF-7细胞与HBL-100细胞提取到的总RNA纯度较高,其A260/A280为1.90,A260/A230为2.0;琼脂糖凝胶实验结果显示总RNA完整性好。通过miRNAs表达谱的差异性分析,获得173个与乳腺癌相关的miRNAs,其中113个表达上调,60个表达下调;实时定量PCR检测到mir-18a和mir-195在MCF-7细胞中高表达;对乳腺癌细胞显著异常表达的mir-200b进行信息学分析,共筛选出68个靶基因。结论:获得了乳腺癌细胞与乳腺上皮细胞miRNAs的差异表达谱,其中部分miRNAs可能通过调控其靶基因而参与乳腺癌的发病机制。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 MCF-7细胞 MIRNA 表达谱 差异 性分析
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差异显示技术研究NaHCO_3胁迫下星星草基因表达 被引量：9
8
作者 王玉成 杨传平 +1 位作者 刘桂丰 姜静 《植物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期307-312,共6页
用差异显示技术研究NaHCO3胁迫下星星草(Puccinelliatenuiflora)基因的表达。经ReverseNorth-ern检测,获得了7个差异表达的基因片段。其中,6个为胁迫后诱导表达,1个为胁迫后抑制表达。序列同源性分析表明,胁迫诱导表达的6个基因片段中,... 用差异显示技术研究NaHCO3胁迫下星星草(Puccinelliatenuiflora)基因的表达。经ReverseNorth-ern检测,获得了7个差异表达的基因片段。其中,6个为胁迫后诱导表达,1个为胁迫后抑制表达。序列同源性分析表明,胁迫诱导表达的6个基因片段中,1个与钙依赖性蛋白激酶(CDPKs)基因同源性较高,其余5个可能为新序列,胁迫后抑制表达的基因片段与假定的adaptor蛋白基因同源性较高。本研究为进一步研究星星草的抗盐机理奠定了基础。 展开更多
关键词 NaHCO3 差异显示技术 星星草 胁迫 基因表达 Northern 基因同源性 基因片段 诱导表达 序列同源性 差异表达 蛋白激酶 钙依赖性 抗盐机理 分析表 r蛋白 抑制
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应用基因表达系列分析(SAGE)技术研究高温处理前后家蚕的基因表达差异 被引量：4
9
作者 鲍忠赞 张彩霞 +6 位作者 徐世清 周前凯 魏广兵 王华 刘腾 金鑫 司马杨虎 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期456-467,共12页
高温对家蚕的生理和免疫能力有明显影响。为从分子水平上探究家蚕抗高温机制,应用基因表达系列分析(SAGE)技术获得家蚕5龄雌蚕高温处理前后中肠、丝腺和脂肪体组织的基因表达谱,构建高温组(34℃)和常温组(26℃)2个家蚕SAGE文库。2个家蚕... 高温对家蚕的生理和免疫能力有明显影响。为从分子水平上探究家蚕抗高温机制,应用基因表达系列分析(SAGE)技术获得家蚕5龄雌蚕高温处理前后中肠、丝腺和脂肪体组织的基因表达谱,构建高温组(34℃)和常温组(26℃)2个家蚕SAGE文库。2个家蚕SAGE文库分别包含3555107和3580976个原始标签,其中的标签种类分别为113684和131 296个,清洁标签的种类分别为45972和49467。比较2个文库清洁标签获得65 535种差异标签,共注释4249个基因,其中有1 062个差异表达的基因(P<0.05,错误检测率FDR≤0.001并且拷贝数的差异在2倍以上)。经GO分析发现2个文库中基因的分布极其相似,表明这些基因在不同的环境温度下有类似的生物学功能并参与类似的生理代谢过程。KEGG pathway分析显示有732个基因涉及176个KEGG路径,其中有40个为差异表达基因显著富集的路径(P<0.05),超过一半的路径与代谢、生物合成和信号传导有关。上述结果有助于对家蚕抗高温基因的鉴定以及探究基因调控的网络关系。 展开更多
关键词 家蚕 高温 基因表达系列分析技术 差异表达基因
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表达序列标签数据库搜索克隆斑马鱼QM基因及其数字化差异显示分析 被引量：3
10
作者 金红建 邵健忠 项黎新 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期599-605,共7页
QM基因是一种与肿瘤抑制、细胞生长、分化、发育和凋亡等有关的重要基因,已在人类及许多物种中得到了克隆,但鱼类中尚无报道.我们利用表达序列标签数据库和电子克隆等技术,成功克隆了斑马鱼QM基因,并对该基因的结构进行了系统分析.结果... QM基因是一种与肿瘤抑制、细胞生长、分化、发育和凋亡等有关的重要基因,已在人类及许多物种中得到了克隆,但鱼类中尚无报道.我们利用表达序列标签数据库和电子克隆等技术,成功克隆了斑马鱼QM基因,并对该基因的结构进行了系统分析.结果显示,斑马鱼QM基因cDNA全长769 bp,含648 bp开放阅读框架,编码215个氨基酸,5'UTR 25 bp,3'UTR122 bp,所编码的QM多肽分子量24.6 kDa,等电点(pI)10.6,含潜在的蛋白酶C磷酸化位点、N-酰基化位点和酰胺化位点.比较斑马鱼QM和人等13个物种QM的同源性,发现其氨基酸序列相似性为66%～92%.数字化差异显示分析结果表明,QM基因在斑马鱼胚胎及成体多种组织中均有广泛表达.研究结果为今后利用生物信息学快速克隆新的鱼类功能基因打下了方法学基础,也为进一步研究鱼类QM基因功能提供了依据. 展开更多
关键词 斑马鱼 QM基因 表达序列标签 电子克隆 数字化差异显示分析
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芸芥自交亲和性的遗传及自交亲和基因mRNA差异显示分析 被引量：2
11
作者 范惠玲 白生文 +3 位作者 张芬琴 肖占文 陈修斌 孙万仓 《干旱地区农业研究》 CSCD 北大核心 2012年第6期23-31,共9页
以8份芸芥自交亲和系与4份芸芥自交不亲和系为试验材料,通过正交和反交方式共组配了18个不同的杂交组合,调查了F1群体的自交亲和性与否,及1 424株F2群体和626株BC1群体的性状分离情况。同时,还采用mRNA差异显示技术研究了芸芥自交亲和... 以8份芸芥自交亲和系与4份芸芥自交不亲和系为试验材料,通过正交和反交方式共组配了18个不同的杂交组合,调查了F1群体的自交亲和性与否,及1 424株F2群体和626株BC1群体的性状分离情况。同时,还采用mRNA差异显示技术研究了芸芥自交亲和基因的表达器官,分离、筛选了与自交亲和性相关的特异基因片段。结果表明:芸芥自交亲和性与细胞质遗传无关,而是由一对核基因控制的简单隐性遗传性状;芸芥自交亲和基因的表达不属于组成性表达,而属于组织特异性表达;在芸芥自交亲和系的柱头cDNA扩增中共得到3条差异cDNA片段,其与芸芥自交亲和基因有密切关系。 展开更多
关键词 芸芥 自交亲和性的遗传 自交亲和基因 MRNA差异显示技术
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用银染mRNA差异显示技术寻找不同生长阶段绵羊皮肤中差异表达基因 被引量：3
12
作者 崔建东 赵宗胜 +3 位作者 李大全 王建华 王宏伟 毛录山 《中国草食动物》 2004年第3期11-14,共4页
利用优化了的银染mRNA差异显示技术 (DD PCR) ,比较了出生后 40日龄、60日龄和 12 0日龄三个不同生长阶段的绵羊相同部位的皮肤中总RNA的差异表达。结果表明 :同一个体不同日龄的绵羊存在着表达量不同的差异表达基因 ,并初步筛选出了 8... 利用优化了的银染mRNA差异显示技术 (DD PCR) ,比较了出生后 40日龄、60日龄和 12 0日龄三个不同生长阶段的绵羊相同部位的皮肤中总RNA的差异表达。结果表明 :同一个体不同日龄的绵羊存在着表达量不同的差异表达基因 ,并初步筛选出了 8条重复性好的差异cDNA片段 ,其中 1条表达量不同的差异片段存在于 40日龄 ,5条存在于 60日龄 ,2条为 12 0日龄所特有。 展开更多
关键词 绵羊 皮肤 基因表达 差异表达 银染mRNA差异显示技术 羊毛性状 生长阶段
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研究基因差异表达的新方法:mRNA差异显示技术 被引量：3
13
作者 王兰芳 乐国伟 《饲料研究》 CAS 2001年第6期1-3,共3页
关键词 基因表达 基因差异表达 MRNA差异显示技术 原理 应用研究
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用mRNA RT-PCR差异显示技术克隆拟除虫菊酯抗性家蝇细胞色素P450基因片段 被引量：1
14
作者 马彩霞 李梅 +2 位作者 邱星辉 何凤琴 刘惠霞 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2005年第4期210-215,共6页
细胞色素P450单加氧酶系是一类广泛分布在生物有机体中的重要酶系,具有多样的功能。细胞色素P450介导的杀虫剂代谢解毒作用的增强是昆虫对杀虫剂产生抗性的普遍机制。为揭示家蝇对拟除虫菊酯类杀虫剂的分子基础,我们利用mRNA差异显示技... 细胞色素P450单加氧酶系是一类广泛分布在生物有机体中的重要酶系,具有多样的功能。细胞色素P450介导的杀虫剂代谢解毒作用的增强是昆虫对杀虫剂产生抗性的普遍机制。为揭示家蝇对拟除虫菊酯类杀虫剂的分子基础,我们利用mRNA差异显示技术(DDRTPCR)从溴氰菊酯抗性品系家蝇Muscadomestica中分离出2个新的基因片段(M1,M2)。序列比对(BlastP)结果表明,M1与黑腹果蝇Drosophilamelanogaster中的Cyp6A9在氨基酸水平上具有54%的相似性,M2分别与果蝇Drosophilasimulans中的Cyp6g1有65%的相似性。M1和M2包含P450的特征序列,并与细胞色素P450具有最高程度的序列相似性,是为细胞色素P450基因片段。 展开更多
关键词 家蝇 抗性 细胞色素P450 MRNA差异显示技术 基因片段
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限制片段差异显示PCR分析金属基质蛋白酶家族在乳腺癌表达的差异 被引量：1
15
作者 周鸿鹰 梅妍 +3 位作者 卢友光 蒋吉英 李爱冬 羊惠君 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期267-269,共3页
目的:建立乳腺癌差异表达谱,以筛选乳腺癌相关候选基因;比较金属基质蛋白酶家族(matrixmetalloproteinases,MMPs)在乳腺癌中的表达差异。方法:采集乳腺癌组织、转移淋巴结及正常乳腺组织,用限制片段差异显示PCR技术(Restrictionfragment... 目的:建立乳腺癌差异表达谱,以筛选乳腺癌相关候选基因;比较金属基质蛋白酶家族(matrixmetalloproteinases,MMPs)在乳腺癌中的表达差异。方法:采集乳腺癌组织、转移淋巴结及正常乳腺组织,用限制片段差异显示PCR技术(RestrictionfragmentsdifferentialdisplayPCR,RFDD-PCR)建立表达谱。以电泳和荧光扫描成像对表达谱片段进行分离、显示。筛选分析MMPs及其相关基因的表达差异。结果:共获得5407个基因片段,差异片段占30%以上;共显示13个MMPs基因及其相关基因金属蛋白酶组织抑制因子和转化生长因子β。其中除MMP20外,其余均有量或质的差异。结论:有多个MMPs基因参与了乳腺癌的发生、发展过程,其中MMP2、MMP10、MMP11、MMP14、MMP15、MMP28基因的开启可能为肿瘤进程的早期事件。 展开更多
关键词 金属基质蛋白酶 差异显示 PCR分析 金属蛋白酶组织抑制因子 家族 限制 display 转化生长因子β 相关候选基因 正常乳腺组织 表达差异 相关基因 Ps基因 乳腺癌组织 转移淋巴结 PCR技术 MMP20 表达谱 扫描成像 MMPS 筛选分析
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应用抑制性消减杂交技术筛选三氧化二砷对肝细胞调节的差异表达基因 被引量：5
16
作者 吴顺华 成军 +5 位作者 郑玉建 张跃新 刘妍 郭江 张黎颍 王国荃 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第13期1535-1539,共5页
目的:应用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术构建As2O3处理的人肝癌细胞系HepG2差异表达基因的cDNA消减文库,筛选并克隆As2O3调节相关基因,阐明As2O3对肝细胞调节作用的分子生物学机制. 方法:以As2O3处理H... 目的:应用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术构建As2O3处理的人肝癌细胞系HepG2差异表达基因的cDNA消减文库,筛选并克隆As2O3调节相关基因,阐明As2O3对肝细胞调节作用的分子生物学机制. 方法:以As2O3处理HepG2细胞,同时以PBS处理的相同细胞系作为对照;24 h后制备细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaI酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性多聚酶链反应(PCR),将产物与T/A载体连接,构建cDNA 消减文库,并转染大肠杆菌J109进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析. 结果:成功构建三As2O3处理HepG2细胞差异表达基因的cDNA消减文库.文库扩增后得到109个白色克隆,进行菌落PCR分析,均得到200-1000bp插入片段.挑取含有插入片段的36个克隆进行测序,并通过生物信息学分析获得15种已知基因序列和6个未知功能的新基因. 结论:应用SSH技术成功构建了As2O3处理HepG2细胞差异表达基因的cDNA消减文库. 展开更多
关键词 差异表达基因 抑制性消减杂交技术 三氧化二砷 CDNA消减文库 细胞调节 人肝癌细胞系HEPG2 筛选 HepG2细胞 As2O3 分子生物学机制 生物信息学分析 多聚酶链反应 文库扩增 插入片段 细胞裂解液 同源性分析 PCR扩增 PCR分析
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基因差异表达分析技术在寄生虫学中的应用研究进展
17
作者 夏艳勋 李国清 +2 位作者 苑纯秀 赵传璧 林矫矫 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第3期63-68,共6页
生物体表现出的各种生物学特性,主要是由于基因在不同细胞间及不同生长阶段的选择性差异表达引起的。这些基因的差异表达按特定的时间和空间顺序有序地进行着,决定了生命活动的多样性。而基因差异表达研究的各种分析技术正是在此基础上... 生物体表现出的各种生物学特性,主要是由于基因在不同细胞间及不同生长阶段的选择性差异表达引起的。这些基因的差异表达按特定的时间和空间顺序有序地进行着,决定了生命活动的多样性。而基因差异表达研究的各种分析技术正是在此基础上发展起来并在兽医寄生虫学中得到广泛应用。以mR-NA差异显示、抑制消减杂交法和DNA微列阵分析等为代表的基因差异表达分析技术,在基因表达谱的分析及基因生物学功能研究,阐述寄生虫的发病机制,寄生虫疾病诊断,筛选合适的药物靶标和疫苗候选分子有效地防病治病方面发挥着重要作用。 展开更多
关键词 基因差异表达分析技术 寄生虫学 应用
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差异显示PCR技术在念珠菌基因表达研究中的应用
18
作者 朱宇宁 吕时铭 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2005年第2期157-162,共6页
目的探讨差异显示PCR技术(DD-PCR)在念珠菌基因表达研究中的方法学要点。方法将临床阴道来源的白色念珠菌氟康唑敏感菌株435体外诱导氟康唑耐药性,于诱导80d得到耐药子代435-2,采用长引物差异扩增、银染显示差异条带、反式点杂交预筛选... 目的探讨差异显示PCR技术(DD-PCR)在念珠菌基因表达研究中的方法学要点。方法将临床阴道来源的白色念珠菌氟康唑敏感菌株435体外诱导氟康唑耐药性,于诱导80d得到耐药子代435-2,采用长引物差异扩增、银染显示差异条带、反式点杂交预筛选及非放射性法标记探针的改良的DD-PCR,比较435与435-2在有药及无药培养基中的表达差异。结果在435-2含药培养组中得到较435-2、435无药培养组表达明显增强的片段N2、N3、N12,分别与数据库中白色念珠菌的醇脱氢酶基因ADH1、拓扑异构酶基因TOP2及多药耐药基因CDR1基因有高度同源性;半定量RT-PCR中证实了ADH1、CDR1基因在耐药株中的高表达。结论ADH1、CDR1基因的高表达与白色念珠菌氟康唑耐药性形成相关,ADH1可能是新的耐药基因;改良的DD-PCR技术降低了假阳性率的产生,使确证步骤更加便捷,在念珠菌研究领域有很好的应用前景。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 差异显示PCR技术 念珠菌 白色/遗传学 基因表达 方法学
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基因差异表达分析技术及其在糖尿病研究中的应用
19
作者 罗洁 许辉 《实用预防医学》 CAS 2005年第6期1482-1485,共4页
随着差异表达基因检测技术的不断发展,建立了很多新的检测方法,本文对差异显示反转录PCR技术(DDRT-PCR)、代表性差异分析技术(RDA)、抑制消减杂交技术(SSH)、获得全长基因的消减杂交法、基因表达系列分析(SAGE)、限制性显示技术(RD-PCR... 随着差异表达基因检测技术的不断发展,建立了很多新的检测方法,本文对差异显示反转录PCR技术(DDRT-PCR)、代表性差异分析技术(RDA)、抑制消减杂交技术(SSH)、获得全长基因的消减杂交法、基因表达系列分析(SAGE)、限制性显示技术(RD-PCR)和基因芯片技术的基本原理作了综述,介绍了它们的应用状况和优缺点,并对基因差异表达分析技术在糖尿病研究中的近期应用及其前景作了简要介绍。随着研究的进一步深入,基因差异表达分析技术和方法将在糖尿病及其他疾病的分子机制、临床诊断、治疗和预防等领域中具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 基因差异表达分析技术 糖尿病 研究
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昆明犬IGF1基因在肝脏中的表达特征及遗传多样性分析 被引量：2
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作者 韦云芳 李飞翔 +2 位作者 汪斌 陈方良 魏红江 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第4期108-114,共7页
为了探究IGF1基因在不同生长发育阶段昆明犬肝脏中的表达特征,并筛选与昆明犬体重和体尺性状相关的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点,试验首先采用实时荧光定量PCR方法检测IGF1基因在不同年龄段昆明犬肝脏中的m... 为了探究IGF1基因在不同生长发育阶段昆明犬肝脏中的表达特征,并筛选与昆明犬体重和体尺性状相关的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点,试验首先采用实时荧光定量PCR方法检测IGF1基因在不同年龄段昆明犬肝脏中的mRNA表达水平,然后分别针对IGF1基因5′和3′侧翼序列、外显子1~4和内含子1设计引物,采用PCR-单链构象多态性(SSCP)技术对昆明犬IGF1基因单核苷酸多态性(SNP)位点进行筛查,通过测序分析其突变情况,统计该SNP位点的基因型频率和基因频率及遗传多样性指标[纯合度(homozygosity,Ho)、杂合度(heterozygosity,He)和有效等位基因数(number of effective alleles,Ne)],最后分析该SNP位点与昆明犬体重和体尺性状的关联性。结果表明:IGF1基因在5个年龄段的昆明犬肝脏中均有表达,且表达量随着月龄的增大呈现逐渐下降的趋势;与2月龄比较,6,12,20,30月龄昆明犬肝脏中IGF1基因的相对表达量均极显著降低(P<0.001)。昆明犬IGF1基因仅外显子3中识别到1个SNP位点,其他区域未识别到SNP位点。该位点位于外显子3第464位核苷酸处,发生了T→C的点突变,但氨基酸未变,命名为T464C位点。T464C位点在昆明犬群体中共存在两种基因型,分别为TT纯合型和TC杂合型,其中优势基因型为TT纯合型,优势等位基因为T,表现为低度多态(PIC<0.25),Ho为0.97,He为0.03,Ne为1.03,在昆明犬群体中处于Hardy-Weinberg平衡状态。昆明犬IGF1基因T464C位点TT纯合型个体胸深、头长显著高于TC杂合型个体(P<0.05)。说明IGF1基因在昆明犬生长发育过程中具有重要作用,T464C位点可作为昆明犬品种培育的潜在辅助选择标记。 展开更多
关键词 昆明犬 胰岛素样生长因子1(IGF1) 差异表达 单核苷酸多态性(SNP) 遗传多样性 关联性分析
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