p30蛋白是非洲猪瘟病毒(ASFV)免疫原性最强的结构蛋白之一,由CP204L基因编码。本研究利用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒真核表达系统将ASFV中CP204L插入p Fast Bac1载体下游,将形成的重组质粒p Fast Bac-p30以转座子的形式插入到DH10Bac中的...p30蛋白是非洲猪瘟病毒(ASFV)免疫原性最强的结构蛋白之一,由CP204L基因编码。本研究利用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒真核表达系统将ASFV中CP204L插入p Fast Bac1载体下游,将形成的重组质粒p Fast Bac-p30以转座子的形式插入到DH10Bac中的杆状病毒穿梭质粒(Bacmid)中,筛选出重组Bacmid-p30后,将Bacmid-p30转染Sf9细胞,并继续传代3次,获得重组杆状病毒,命名为r Bac-p30。分别通过间接免疫荧光(IFA)和免疫印迹(Western blot)鉴定了ASFV阳性血清可特异性识别Sf9细胞中表达的p30。以此真核表达p30蛋白包被ELISA板,可区分ASFV阴阳性血清。以上结果表明,本研究初步建立了检测ASFV血清抗体的间接ELISA方法,为后续建立非洲猪瘟抗体检测方法和p30亚单位疫苗研究奠定基础。展开更多
文摘p30蛋白是非洲猪瘟病毒(ASFV)免疫原性最强的结构蛋白之一,由CP204L基因编码。本研究利用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒真核表达系统将ASFV中CP204L插入p Fast Bac1载体下游,将形成的重组质粒p Fast Bac-p30以转座子的形式插入到DH10Bac中的杆状病毒穿梭质粒(Bacmid)中,筛选出重组Bacmid-p30后,将Bacmid-p30转染Sf9细胞,并继续传代3次,获得重组杆状病毒,命名为r Bac-p30。分别通过间接免疫荧光(IFA)和免疫印迹(Western blot)鉴定了ASFV阳性血清可特异性识别Sf9细胞中表达的p30。以此真核表达p30蛋白包被ELISA板,可区分ASFV阴阳性血清。以上结果表明,本研究初步建立了检测ASFV血清抗体的间接ELISA方法,为后续建立非洲猪瘟抗体检测方法和p30亚单位疫苗研究奠定基础。
