目的:基于肿瘤蛋白53(tumor protein 53,p53)/溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11/xCT)/谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)通路探讨疏肝祛瘀解毒方(SGQYJDF)诱导铁死亡抑制裸鼠肝癌增殖...目的:基于肿瘤蛋白53(tumor protein 53,p53)/溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11/xCT)/谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)通路探讨疏肝祛瘀解毒方(SGQYJDF)诱导铁死亡抑制裸鼠肝癌增殖。方法:通过将人肝癌细胞株SK-Hep-1注射于裸鼠右腋皮下,建立异种皮下移植瘤模型,成模后分为模型对照组、SGQYJDF低、中、高剂量组和SGQYJDF中剂量联合Sorafenib组,按分组连续灌胃14 d,期间观察裸鼠肿瘤体积;灌胃14 d后,测量肿瘤质量并计算生长抑制率,采用HE染色观察各组肿瘤组织病理学变化;比色法检测各组肿瘤组织内丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)和亚铁离子(ferrous ions,Fe^(2+))水平;免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)检测各组肿瘤组织内增殖标志物(Kiel 67 antigen,Ki-67)及GPX4表达;免疫荧光法(immunofluorescence,IF)检测肿瘤组织内p53和xCT的表达;Western blot法检测p53、xCT和GPX4的表达水平。结果:(1)在肿瘤增殖方面,通过观察裸鼠肿瘤体积及质量并计算生长抑制率,与模型对照组比较,SGQYJDF能够呈剂量相关性的降低肿瘤体积(P<0.01),抑制肿瘤质量增长(P<0.01),各组肿瘤组织均未见明显浸润,同时通过IHC观察计算肿瘤组织内Ki-67阳性细胞率可知,与模型对照组比较,SGQYJDF能够呈剂量相关性降低肿瘤组织Ki-67阳性细胞率(P<0.01),抑制其增殖能力;(2)在铁死亡生化指标方面,通过检测计算相对含量,与模型对照组比较,SGQYJDF能够呈剂量依赖性提高肿瘤组织内Fe^(2+)含量和MDA含量,同时降低GSH的含量(P<0.01);(3)在蛋白表达方面,通过IHC、IF与Western blot实验,与模型对照组比较,SGQYJDF能够呈剂量相关性地上调p53(P<0.05)的表达,同时抑制xCT(P<0.05)和GPX4(P<0.01)的表达。此外,在实验结果中,我们发现人体等效量的SGQYJDF与Sorafenib联用,其效应高于两倍人体等效量的SGQYJDF。结论:提示SGQYJDF可能通过上调裸鼠皮下移植瘤p53的表达、抑制xCT和GPX4的表达从而诱导其发生铁死亡,抑制其增殖。展开更多
目的探究细胞有丝分裂前期检查点(checkpoint with forkhead-associated and ring finge,CHFR)对鼻咽癌(NPC)5-8F细胞裸鼠移植瘤生长抑制作用,并探究可能的机制。方法将重组慢病毒LV-CHFR及空载体慢病毒-绿色荧光蛋白质粒(LV-GFP)作为...目的探究细胞有丝分裂前期检查点(checkpoint with forkhead-associated and ring finge,CHFR)对鼻咽癌(NPC)5-8F细胞裸鼠移植瘤生长抑制作用,并探究可能的机制。方法将重组慢病毒LV-CHFR及空载体慢病毒-绿色荧光蛋白质粒(LV-GFP)作为阴性对照导入5-8F细胞中,构建LV-CHFR/5-8F重组细胞,激光共聚焦显微镜观察细胞感染效率;将裸鼠随机分为3组(每组5只):空白对照组(接种0.2 ml未感染病毒的5-8F细胞悬液)、阴性对照组(接种0.2 ml稳转株LV-GFP/5-8F细胞悬液)、过表达CHFR组(接种0.2 ml稳转株LV-CHFR/5-8F细胞悬液),并绘制肿瘤生长曲线图;免疫组化法检测瘤体组织中丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Polo样激酶1(polo like kinase 1,PLK1)蛋白表达情况;原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测各组瘤体组织中细胞凋亡情况;免疫印迹法检测各组瘤体组织中PLK1、CHFR、细胞周期素B(CyclinB1)、细胞周期蛋白(CyclinB1)、周期蛋白依赖性激酶2(CDC2)蛋白表达。结果随处理时间(9、12、15、18、21 d)延长,过表达CHFR组各时间点裸鼠瘤体体积均小于空白对照组、阴性对照组(F=7.872、5.778、6.717、70.020、11.782,P=0.007、0.011、0.010、0.001)。免疫组化检测显示,在空白对照组、阴性对照组裸鼠移植瘤组织中PLK1呈强阳性,在过表达CHFR组中,裸鼠移植瘤组织中PLK1表达呈弱阳性。与空白对照组、阴性对照组比较,过表达CHFR组移植瘤细胞凋亡率升高(P<0.005)。与空白对照组、阴性对照组比较,过表达CHFR组移植瘤细胞凋亡率升高(F=355.256,P=0.000)。与空白对照组、阴性对照组比较,过表达CHFR组移植瘤组织中PLK1、Cyclin B1、CDC2蛋白水平均降低(F=5.201、2.0304、129.946,P=0.024、0.142、0.000),CHFR蛋白水平升高(F=38.919,P=0.000)。结论过表达CHFR对NPC 5-8F细胞裸鼠移植瘤生长有一定抑制作用,可能与抑制PLK1通路活化有关。展开更多
文摘目的探究细胞有丝分裂前期检查点(checkpoint with forkhead-associated and ring finge,CHFR)对鼻咽癌(NPC)5-8F细胞裸鼠移植瘤生长抑制作用,并探究可能的机制。方法将重组慢病毒LV-CHFR及空载体慢病毒-绿色荧光蛋白质粒(LV-GFP)作为阴性对照导入5-8F细胞中,构建LV-CHFR/5-8F重组细胞,激光共聚焦显微镜观察细胞感染效率;将裸鼠随机分为3组(每组5只):空白对照组(接种0.2 ml未感染病毒的5-8F细胞悬液)、阴性对照组(接种0.2 ml稳转株LV-GFP/5-8F细胞悬液)、过表达CHFR组(接种0.2 ml稳转株LV-CHFR/5-8F细胞悬液),并绘制肿瘤生长曲线图;免疫组化法检测瘤体组织中丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Polo样激酶1(polo like kinase 1,PLK1)蛋白表达情况;原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测各组瘤体组织中细胞凋亡情况;免疫印迹法检测各组瘤体组织中PLK1、CHFR、细胞周期素B(CyclinB1)、细胞周期蛋白(CyclinB1)、周期蛋白依赖性激酶2(CDC2)蛋白表达。结果随处理时间(9、12、15、18、21 d)延长,过表达CHFR组各时间点裸鼠瘤体体积均小于空白对照组、阴性对照组(F=7.872、5.778、6.717、70.020、11.782,P=0.007、0.011、0.010、0.001)。免疫组化检测显示,在空白对照组、阴性对照组裸鼠移植瘤组织中PLK1呈强阳性,在过表达CHFR组中,裸鼠移植瘤组织中PLK1表达呈弱阳性。与空白对照组、阴性对照组比较,过表达CHFR组移植瘤细胞凋亡率升高(P<0.005)。与空白对照组、阴性对照组比较,过表达CHFR组移植瘤细胞凋亡率升高(F=355.256,P=0.000)。与空白对照组、阴性对照组比较,过表达CHFR组移植瘤组织中PLK1、Cyclin B1、CDC2蛋白水平均降低(F=5.201、2.0304、129.946,P=0.024、0.142、0.000),CHFR蛋白水平升高(F=38.919,P=0.000)。结论过表达CHFR对NPC 5-8F细胞裸鼠移植瘤生长有一定抑制作用,可能与抑制PLK1通路活化有关。
