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苹果褪绿叶斑病毒和茎沟病毒的鉴定提纯和酶联法检测 被引量：29
1
作者 王小凤 李秋波 +3 位作者 王荣 洪霓 王国平 刘福昌 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1992年第2期137-144,共8页
苹果褪绿叶斑病毒(CLSV)和茎沟病毒(SGV)是感染苹果和其它果树的两种重要潜隐病毒。根据生物学特性和血清学反应,确定 W-55分离物属于 CLSV,W-29分离物属于 SGV。采用皂土澄清,PEG 6000沉淀及超离心等步骤,得到部分提纯的病毒。经电镜观... 苹果褪绿叶斑病毒(CLSV)和茎沟病毒(SGV)是感染苹果和其它果树的两种重要潜隐病毒。根据生物学特性和血清学反应,确定 W-55分离物属于 CLSV,W-29分离物属于 SGV。采用皂土澄清,PEG 6000沉淀及超离心等步骤,得到部分提纯的病毒。经电镜观察,W-55和W-29病毒颗粒长度分别为800 nm 和650nm。用 CLSV W-55分离物制备的兔抗血清效价为1/3200,用 SGV PV-71(ATCC)分离物制备小鼠腹水抗体效价为1/800,均用间接 ELISA 法测定。对感染 CLSV 和 SGV 的昆诺藜、苹果叶和花瓣检测结果表明,P/N 值具有显著性。本工作为苹果无毒苗木的生产提供了快速、灵敏的病毒检测手段。 展开更多
关键词 茎沟病毒 苹果 褪绿叶斑病毒
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梨组织中苹果褪绿叶斑病毒的原位RT-PCR检测 被引量：10
2
作者 牛建新 周民生 +2 位作者 马兵钢 赵英 刘宏 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期53-58,共6页
为了建立梨树苹果褪绿叶斑病毒原位RT-PCR检测技术，用已知带有苹果褪绿叶斑病毒的库尔勒香梨和无病毒实生苗叶片为材料，利用DIG标记，研究了香梨病毒的叶片石蜡切片IS-RT-PCR检测技术。包括AMV逆转录酶、dNTPs、RNasin及互补引物浓度... 为了建立梨树苹果褪绿叶斑病毒原位RT-PCR检测技术，用已知带有苹果褪绿叶斑病毒的库尔勒香梨和无病毒实生苗叶片为材料，利用DIG标记，研究了香梨病毒的叶片石蜡切片IS-RT-PCR检测技术。包括AMV逆转录酶、dNTPs、RNasin及互补引物浓度对cDNA合成的影响，退火温度、TaqDNA聚合酶、Mg^2＋、引物浓度及循环次数对原位PCR效果的影响。结果表明：RNasin的用量大于0．2U·μL^-1时，信号强度随着RNasin量的加大而增强；只有当dNTPs浓度达1．0mmol·L^-1时才能生成一定量的cDNA；AMV浓度在0．3-0．5U·μL^-1均可进行正常的逆转录，而且在该范围内产物的量随AMV浓度提高而增多；引物浓度达到0．9μmol·L^-1以上时才能进行有效的逆转录，并且生成的cDNA的量随引物浓度增大而增加。原位扩增ACLSV的cDNA适合退火温度为56℃。循环20-30次可出现较强的蓝色信号，引物浓度在0．8-1．2μmol·L^-1时显色较好；Taq酶浓度为20U·μL^-1以上，均显示较深的蓝色；Mg^2＋浓度为1．5mmol·L^-1就可满足原位PCR所需。获得了苹果褪绿叶斑病毒的原位PCR优化检测体系，利用建立的优化程序对香梨样品进行了检测验证，取得了很好效果。 展开更多
关键词 梨 库尔勒香梨 苹果褪绿叶斑病毒 原位PCR
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来源于桃和苹果的苹果褪绿叶斑病毒的部分分子生物学特性和cp基因的原核表达 被引量：5
3
作者 郑银英 王国平 +2 位作者 洪霓 宋艳苏 游红 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期356-361,共6页
从桃和苹果上分离得到苹果褪绿叶斑病毒ACLSV-HBP和ACLSV-C2个分离物,采用RT-PCR法进行扩增,所获扩增片段经序列测定,其全长分别为1768nt(ACLSV-HBP)和1751nt(ACLSV-C)。这2个分离物扩增片段全长的同源性为83%,mp基因片段核苷酸和推导... 从桃和苹果上分离得到苹果褪绿叶斑病毒ACLSV-HBP和ACLSV-C2个分离物,采用RT-PCR法进行扩增,所获扩增片段经序列测定,其全长分别为1768nt(ACLSV-HBP)和1751nt(ACLSV-C)。这2个分离物扩增片段全长的同源性为83%,mp基因片段核苷酸和推导编码氨基酸序列同源性分别为82.6%和87.1%;cp基因均由582nt组成,其核苷酸和推导编码氨基酸序列同源性分别为87.8%和95.9%。将2个分离物的cp基因与已报道ACLSV分离物进行序列同源性比较,结果显示ACLSV-HBP与SX/2的cp基因核苷酸序列及推导编码氨基酸序列同源性最高,分别为94.0%和96.4%。将ACLSV-HBP分离物的cp基因克隆到原核表达载体pGEX-KG,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE分析表明,融合蛋白大小约为46kDa。Western-blot分析表明,该基因在大肠杆菌内得到高效表达,融合蛋白具有抗原性。 展开更多
关键词 苹果褪绿叶斑病毒 原核表达载体 CP基因 分子生物学特性 SDS-PAGE分析 序列同源性 核苷酸序列 RT-PCR法
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侵染云南苹果的苹果褪绿叶斑病毒的RT-PCR检测和序列分析 被引量：5
4
作者 姬盼 王连春 +3 位作者 孔宝华 李晓鹏 曹克强 马钧 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期458-464,共7页
以云南昭通、昆明、曲靖等地采集的苹果病毒病样品为试材,对其是否携带苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)进行RT-PCR检测,将本试验获得3个云南ACLSV分离物(ZT,ML,TJX)和GenBank上已登录的24个分离物进行序列比对分析。所有的ACLSV分离物的核苷酸... 以云南昭通、昆明、曲靖等地采集的苹果病毒病样品为试材,对其是否携带苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)进行RT-PCR检测,将本试验获得3个云南ACLSV分离物(ZT,ML,TJX)和GenBank上已登录的24个分离物进行序列比对分析。所有的ACLSV分离物的核苷酸序列相似性为81.3%～99.7%,它们可以被分成两大组群,组群A,包括了大部分不同寄主、地理来源的分离物,所有的ACLSV苹果分离物位于组A;组群B,包括了ACLSV全部的寄主为桃的分离物。本研究获得的3个苹果云南分离物属于组群A,组群A可分成两个亚组,其中,分离物ML和TJX位于同一个亚组,而分离物ZT位于另一个亚组。结果表明ACLSV苹果分离物与寄主种类存在一定的相关性,该研究为株系划分、分子流行和寄主抗性分析提供依据。 展开更多
关键词 苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV) RT-PCR CP外壳蛋白 克隆 序列分析
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苹果褪绿叶斑病毒生物学及生化特性研究 被引量：18
5
作者 洪霓 王国平 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期77-81,共5页
对从苹果和扁桃上获得２个苹果褪绿叶斑病毒的分离物ＡＣＬＳＶ－Ｃ和ＡＣＬＳＶ－Ｂ的主要生物学和生化特性进行了比较。人工接种５科１９种草本植物，发现两者均能侵染苋色藜（Ｃｈｅｎｏｐｏｄｉｕｍａｍａｒａｎｔｉｃｏｌｏｒ）、... 对从苹果和扁桃上获得２个苹果褪绿叶斑病毒的分离物ＡＣＬＳＶ－Ｃ和ＡＣＬＳＶ－Ｂ的主要生物学和生化特性进行了比较。人工接种５科１９种草本植物，发现两者均能侵染苋色藜（Ｃｈｅｎｏｐｏｄｉｕｍａｍａｒａｎｔｉｃｏｌｏｒ）、昆诺藜（Ｃｈ．ｑｕｉｎｏａ）和西方烟（Ｎｉｃｏｔｉａｎａｏｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ），产生局部侵染斑和系统褪绿斑。但症状反应存在差异，后者在这３种植物上引起叶片反卷等较强症状反应，还可潜伏侵染笋瓜（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｍａｘｉｍａｃｖ．ＢｕｔｅｒｃｕｐＢｕｒｇｅｓｓ）。经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示，ＡＣＬＳＶ－Ｂ衣壳蛋白的迁移率较ＡＣＬＳＶ－Ｃ快。两者的ＲＮＡ分子量及双链ＲＮＡ数量无明显差异。根据已报道的核苷酸系列设计合成引物，采用ＰＣＲ法检测ＡＣＬＳＶ分离物，均获得特异性扩增产物。 展开更多
关键词 苹果 褪绿叶斑病毒 生物学 生化特性
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苹果褪绿叶斑病毒外壳蛋白基因的原核表达及抗血清制备 被引量：3
6
作者 耿超 牟安丽 +2 位作者 刘志强 李向东 周涛 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期755-758,I0002,共5页
【目的】为了制备苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)的抗血清,【方法】将ACLSV外壳蛋白(Coat protein,CP)基因克隆到原核表达载体pEHISTEV和pEHISEGFPTEV,转化大肠杆菌Rosetta,切胶回收诱导表达的CP融合蛋白免... 【目的】为了制备苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)的抗血清,【方法】将ACLSV外壳蛋白(Coat protein,CP)基因克隆到原核表达载体pEHISTEV和pEHISEGFPTEV,转化大肠杆菌Rosetta,切胶回收诱导表达的CP融合蛋白免疫新西兰长耳兔,制备ACLSV的抗血清。【结果】利用原核表达载体pEHISTEV和pE-HISEGFPTEV在Rosetta中分别表达出了分子质量为25 ku和55 ku的ACLSV CP融合蛋白。切胶回收25 ku的融合蛋白免疫新西兰长耳兔。经ELISA测定,所制备的抗血清效价为1∶1 024,Western blot及组织印迹分析表明抗血清能与ACLSV CP发生特异性的免疫反应。【结论】该血清特异性强,效价高,可用于苹果叶片、果实和枝条等样品中A-CLSV的检测。 展开更多
关键词 苹果褪绿叶斑病毒 外壳蛋白基因 原核表达 抗血清 组织印迹分析
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苹果褪绿叶斑病毒一步法RT-PCR检测 被引量：5
7
作者 张强 牛建新 李西萍 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期67-69,共3页
RT-PCR技术在植物病毒检测方面有着快速、灵敏、特异性强等优点。然而传统的RT-PCR是在两个酶(逆转录酶和Taq酶)分别催化下在两个体系中的两步反应,即由RNA逆转录为cDNA,再以模板cDNA进行PCR扩增,操作步骤比较繁琐,而且很容易造成交叉... RT-PCR技术在植物病毒检测方面有着快速、灵敏、特异性强等优点。然而传统的RT-PCR是在两个酶(逆转录酶和Taq酶)分别催化下在两个体系中的两步反应,即由RNA逆转录为cDNA,再以模板cDNA进行PCR扩增,操作步骤比较繁琐,而且很容易造成交叉污染。笔者建立的一步法RT-PCR是在逆转录酶(M-MLV)和Taq DNA聚合酶共同作用下,只需在一个反应管中就可以完成反转录和cDNA扩增的全过程,两个步骤一步完成,以达到对苹果褪绿叶斑病毒快速、简便、敏感的检测。 展开更多
关键词 一步法RT-PCR 检测 苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)
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苹果褪绿叶斑病毒的ELISA检测技术研究 被引量：7
8
作者 马书尚 阮小凤 杨勇 《西北农业大学学报》 CSCD 北大核心 2000年第2期27-30,共4页
比较了直接双抗体夹心法 ( DAS- ELISA)和间接双抗体夹心法 ( F( ab) 2 -ELISA)检测 CLSV的范围 (不同株系 ) ,并分析了在病毒提取介质中加入某些特殊成分后 ,对直接双抗体夹心法检测 CLSV效果的影响。结果表明 ,间接法可以检测较宽范... 比较了直接双抗体夹心法 ( DAS- ELISA)和间接双抗体夹心法 ( F( ab) 2 -ELISA)检测 CLSV的范围 (不同株系 ) ,并分析了在病毒提取介质中加入某些特殊成分后 ,对直接双抗体夹心法检测 CLSV效果的影响。结果表明 ,间接法可以检测较宽范围的病毒株系 ;当常规病毒提取介质中加入尼古丁、氯化镁和聚酰胺时 。 展开更多
关键词 苹果褪绿叶斑病毒 ELISA检测 病毒提取介质
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苹果褪绿叶斑病毒在苹果植株体内的分布 被引量：3
9
作者 李楠 王亚迪 +3 位作者 杨军玉 丁丽 王亚南 曹克强 《北方园艺》 CAS 北大核心 2018年第13期47-52,共6页
以采自河北农业大学苹果园的褪绿叶斑病毒(apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)样本为试材,采用实时荧光定量RT-PCR方法,研究了苹果不同组织部位、不同树体方位、不同生长发育时期和病毒相对含量之间的关系,以期为明确褪绿叶斑病毒... 以采自河北农业大学苹果园的褪绿叶斑病毒(apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)样本为试材,采用实时荧光定量RT-PCR方法,研究了苹果不同组织部位、不同树体方位、不同生长发育时期和病毒相对含量之间的关系,以期为明确褪绿叶斑病毒在苹果植株中的时空分布规律提供参考依据。结果表明:从组织部位角度分析,在苹果的盛花期,ACLSV在花中的相对含量最高,芽中最低,ACLSV相对含量由高到低依次为:花、二年生枝皮组织、叶、一年生枝皮组织和芽。从树体方位角度分析,在苹果一年生枝皮组织中,ACLSV在4个方位上的病毒相对含量差异显著,位于南向的病毒相对含量最高,西向最低。从生长发育时期角度进行分析,2015年9月至2016年4月,苹果一年生枝皮组织中,病毒相对含量从9月中旬至10月中旬大幅升高,10月中旬达到这8个月中的最高峰,此后病毒相对含量开始下降,3月起呈上升趋势。 展开更多
关键词 苹果褪绿叶斑病毒 实时荧光定量RT-PCR 分布规律
原文传递
苹果褪绿叶斑病毒库尔勒香梨分离物外壳蛋白基因的序列分析 被引量：2
10
作者 蔡瑜 向本春 +2 位作者 席德慧 都业娟 刘升学 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2004年第3期197-200,共4页
利用RT-PCR,获得苹果褪绿叶斑病毒库尔勒香梨分离物外壳蛋白基因的cDNA克隆。序列分析结果表明,库尔勒香梨分离物外壳蛋白基因由582个核苷酸组成,编码一个由193个氨基酸组成的蛋白质。与已报道的P863、P205、A-Ball分离物序列比较,核苷... 利用RT-PCR,获得苹果褪绿叶斑病毒库尔勒香梨分离物外壳蛋白基因的cDNA克隆。序列分析结果表明,库尔勒香梨分离物外壳蛋白基因由582个核苷酸组成,编码一个由193个氨基酸组成的蛋白质。与已报道的P863、P205、A-Ball分离物序列比较,核苷酸序列同源性为80.0％～86.1％,推导的氨基酸序列同源性为84.9％～89.6％。 展开更多
关键词 苹果褪绿叶斑病毒 库尔勒香梨分离物 外壳蛋白基因 CDNA克隆 序列分析 核苷酸 氨基酸
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褪绿叶斑病毒(CLSV)对苹果属植物过氧化物酶活性及同工酶的影响 被引量：7
11
作者 肖艳 成明昊 李育农 《西南农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 1992年第2期100-105,共6页
26个苹果属植物种类受苹果褪绿叶斑病毒(CLSV)侵染后,其过氧化物酶活性升高,嫁接后95天内出现1或2个增酶高峰.同工酶的谱带也增多,特别是B 区变化更为明显,但不同种类反应不一,楸子、酸苹果等对CLSV 抗性强的种类出现2个增酶高峰,且表... 26个苹果属植物种类受苹果褪绿叶斑病毒(CLSV)侵染后,其过氧化物酶活性升高,嫁接后95天内出现1或2个增酶高峰.同工酶的谱带也增多,特别是B 区变化更为明显,但不同种类反应不一,楸子、酸苹果等对CLSV 抗性强的种类出现2个增酶高峰,且表现时间早,峰值低,同工酶出现2次特异性谱带;冬白果等对CLSV 敏感的种类则只有1个增酶高峰,表现时间迟,峰值高,只出现一次特异性谱带。这种过氧化物酶活性及其同工酶谱的变化可作为鉴定苹果属植物对CLSV 的抗性的生化指标. 展开更多
关键词 苹果属 褪绿叶斑病毒 过氧化物酶
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苹果褪绿叶斑病毒检测:PCR技术与ELISA技术灵敏度比较 被引量：4
12
作者 侯义龙 张开春 +1 位作者 吴雅琴 李春敏 《大连大学学报》 2001年第6期19-22,共4页
苹果褪绿叶斑病毒（ＡＣＬＳＶ）是感染仁果类和核果类果树的重要病毒．作者应用ＲＴ－ＰＣＲ技术和ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ技术成功地检测了该病毒，并对指示植物中感染该病毒的检测结果进行了报道．试验结果表明，ＲＴ－ＰＣＲ技术的检测... 苹果褪绿叶斑病毒（ＡＣＬＳＶ）是感染仁果类和核果类果树的重要病毒．作者应用ＲＴ－ＰＣＲ技术和ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ技术成功地检测了该病毒，并对指示植物中感染该病毒的检测结果进行了报道．试验结果表明，ＲＴ－ＰＣＲ技术的检测灵敏度是ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ技术的８０００倍． 展开更多
关键词 苹果褪绿叶斑病毒 病毒检测 PCR技术 ELISA技术 ACLSV 灵敏度
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桃上苹果褪绿叶斑病毒的发生与检测 被引量：2
13
作者 王海荣 刘伟 +2 位作者 安淼 董晓民 余贤美 《山东农业科学》 2016年第4期109-110,128,共3页
对山东省果树研究所试验基地‘玉妃’、‘超红’、‘岱妃’三个桃品种的苹果褪绿叶斑病毒病的发生情况进行调查,采集22份样品,利用ACLSV特异性引物进行RT-PCR检测。结果表明,在‘玉妃’桃的叶片中扩增出与苹果褪绿叶斑病毒(Apple chloro... 对山东省果树研究所试验基地‘玉妃’、‘超红’、‘岱妃’三个桃品种的苹果褪绿叶斑病毒病的发生情况进行调查,采集22份样品,利用ACLSV特异性引物进行RT-PCR检测。结果表明,在‘玉妃’桃的叶片中扩增出与苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)预期大小一致的目的片段,并与GenBank登录的病毒核苷酸序列具有较高的一致性,而在‘超红’和‘岱妃’桃中均未检测到该病毒。 展开更多
关键词 桃 苹果褪绿叶斑病毒 病原检测
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苹果褪绿叶斑病毒库尔勒香梨分离物外壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达 被引量：1
14
作者 蔡瑜 向本春 +2 位作者 席德慧 都业娟 刘升学 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2004年第4期295-297,共3页
将ACLSVCP基因克隆到表达载体pET 28a(+)中,转化大肠杆菌BL21,筛选得到阳性克隆pET ACP,用IPTG诱导使其表达,SDS PAGE电泳分析表明,预期的22kD外壳蛋白在大肠杆菌中得到大量表达,并加以纯化,用于制备抗血清。
关键词 苹果褪绿叶斑病毒 库尔勒香梨 外壳蛋白 基因表达 大肠杆菌
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库尔勒香梨的苹果褪绿叶斑病毒cDNA探针检测技术研究 被引量：1
15
作者 牛建新 朱军 马兵钢 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期58-63,共6页
以库尔勒香梨叶片和皮层为材料,对两种植物总RNA提取方法进行了比较研究,从中筛选出了适合库尔勒香梨的提取方法;并利用RT-PCR反应体系成功合成了生物素标记的cDNA探针,在此基础上,对影响杂交灵敏度的主要因素进行了实验研究。结果表明... 以库尔勒香梨叶片和皮层为材料,对两种植物总RNA提取方法进行了比较研究,从中筛选出了适合库尔勒香梨的提取方法;并利用RT-PCR反应体系成功合成了生物素标记的cDNA探针,在此基础上,对影响杂交灵敏度的主要因素进行了实验研究。结果表明,当探针浓度为400ng/mL,甲酰胺浓度为45%,42℃杂交反应6h,可获得最高灵敏度。Tween20的封闭效果比牛血清白蛋白好。对不同组织和不同提取方法提取的总RNA进行了杂交检测,并对库尔勒地区香梨带毒情况进行了检测。结果表明,不论幼叶、老叶、皮层及冷冻叶片均可出现杂交信号,两种提取方法提取的总RNA也都出现了杂交信号,库尔勒香梨样品有45%的带苹果褪绿叶斑病毒。 展开更多
关键词 苹果褪绿叶斑病毒 CDNA探针 库尔勒香梨 检测技术 RNA提取方法 PCR反应体系 Tween20 牛血清白蛋白 总RNA 杂交信号 生物素标记 库尔勒地区 比较研究 实验研究 杂交反应 高灵敏度 杂交检测 甲酰胺 皮层 叶片 浓度 幼叶 老叶
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梨树苹果褪绿叶斑病毒在昆诺藜与梨树上的基因序列比较研究
16
作者 韩晓燕 牛建新 +2 位作者 刘宏 樊新民 戴志新 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2006年第1期83-86,共4页
以已知带苹果褪绿叶斑病毒的梨树叶片和皮层及昆诺藜为实验材料,对两种植物总RNA的提取、RT-PCR、目的片断的克隆及其酶切鉴定、基因序列进行了分析比较。结果表明,从两种植物中均可以获得高纯度的总RNA及RT-PCR特异性产物,序列分析结... 以已知带苹果褪绿叶斑病毒的梨树叶片和皮层及昆诺藜为实验材料,对两种植物总RNA的提取、RT-PCR、目的片断的克隆及其酶切鉴定、基因序列进行了分析比较。结果表明,从两种植物中均可以获得高纯度的总RNA及RT-PCR特异性产物,序列分析结果表明,从梨树中提取的病毒目的片断基因序列与从昆诺藜中提取的病毒基因序列之间存在着差异,但差异不大。 展开更多
关键词 苹果褪绿叶斑病毒 梨树 昆诺藜 序列比较
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苹果褪绿叶斑病毒RT-LAMP检测方法的建立 被引量：10
17
作者 张双纳 李正男 +4 位作者 范旭东 张尊平 任芳 胡国君 董雅凤 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1706-1716,共11页
【目的】建立一种利用反转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)技术简便、快速检测苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)的方法。【方法】在ACLSV基因组序列... 【目的】建立一种利用反转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)技术简便、快速检测苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)的方法。【方法】在ACLSV基因组序列的3个保守区域设计3组引物,每组引物包括一对外引物(F3/B3)和一对内引物(FIP/BIP),从3组引物中筛选出一组效果最好的引物。对RT-LAMP反应体系,即Mg^(2+)、d NTPs、Betaine、FIP/BIP、B3/F3浓度进行优化,Mg^(2+)浓度梯度设置为0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0 mmol·L^(-1),d NTPs浓度为0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8 mmol·L^(-1),Betaine浓度为0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mol·L^(-1),FIP/BIP浓度为0.8、1.2、1.6、2.0、2.4μmol·L^(-1),F3/B3浓度为0、0.1、0.2、0.3、0.4μmol·L^(-1);优化RT-LAMP反应条件,采用已优化的反应体系,设置65、63、61、59、57℃5个不同的反应温度,反应时间设定为90 min。在引物筛选和反应体系反应条件优化过程中,使用荧光定量PCR仪,在反应体系中加入荧光染料,利用荧光信号积累实时监测整个反应过程,根据扩增曲线判断反应结果。以携带苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)、苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus,ASPV)、苹果花叶病毒(Apple mosaic virus,Ap MV)的植株叶片中提取的总RNA为模板测试RT-LAMP检测方法的特异性。将含ACLSV的叶片总RNA原液进行10倍梯度稀释,以RNA原液和10^(-1)、10^(-2)、10^(-3)、10^(-4)、10^(-5)、10^(-6)稀释液作为模板,进行RT-LAMP反应,测试RT-LAMP检测方法的灵敏性。随机采集23株苹果树的叶片,同时进行RT-LAMP和RT-PCR检测,加入SYBR GreenⅠ进行可视化检测。【结果】建立了ACLSV RT-LAMP检测方法,优化的检测体系为:6.0 mmol·L^(-1) Mg^(2+)、1.2 mmol·L^(-1) d NTPs、0.2 mol·L^(-1) Betaine、1.6μmol·L^(-1) FIP/BIP和0.2μmol·L^(-1) F3/B3引物,最佳反应条件为59℃,60 min。特异性检测中,仅ACLSV检测结果为阳性,对照组均为阴性。灵敏性检测中,RT-LAMP方法最低可检测到10-3 RNA稀释液,灵敏度是RT-PCR方法的100倍。随机采取的23株苹果叶片样品RT-PCR阳性检出率为52.2%,RT-LAMP阳性检出率为65.2%,RT-LAMP的检出率高于RT-PCR。【结论】建立的ACLSV RT-LAMP检测方法具有简便、快速、灵敏性高、成本低等特点,可满足基层、科研部门在田间调查、种苗繁育和海关检疫中快速检测ACLSV。 展开更多
关键词 苹果 苹果褪绿叶斑病毒 反转录环介导等温扩增 REAL-TIME PCR 病毒检测
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苹果属植物对褪绿叶斑病毒(CLSV)的抗性鉴定
18
作者 肖艳 黄建昌 +1 位作者 成明昊 李育农 《落叶果树》 1998年第4期3-5,共3页
该文以变叶海棠为砧木研究了２６个种类的苹果属植物对褪绿叶斑病毒（ＣＬＳＶ）侵染后的反应。试验结果表明，受ＣＬＳＶ侵染后，２６个种类的苹果属植物嫁接成活率降低，生长量减少，嫁接相对成活率的变化与植物的带毒量有极显著的负... 该文以变叶海棠为砧木研究了２６个种类的苹果属植物对褪绿叶斑病毒（ＣＬＳＶ）侵染后的反应。试验结果表明，受ＣＬＳＶ侵染后，２６个种类的苹果属植物嫁接成活率降低，生长量减少，嫁接相对成活率的变化与植物的带毒量有极显著的负相关（ｒ＝－０．９３６１）。对砧木和接穗粗度影响不大，对株高影响明显，其变化与其植株的带毒量有显著的正相关（ｒ＝０．８０４８）。叶片叶绿素含量降低，叶绿素成份ａ／ｂ比值升高。根据上述指标，综合分析和评价了苹果属植物对ＣＬＳＶ的抗性。 展开更多
关键词 苹果 砧木 褪绿叶斑病毒 抗性
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苹果褪绿叶斑病毒的分子杂交检测
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作者 杨洪一 李昱莹 《安徽农业科学》 CAS 2013年第31期12324-12325,共2页
[目的]探索检测苹果褪绿叶斑病毒的技术体系。[方法]利用CTAB法提取感病苹果叶片总RNA,以总RNA为模板,利用特异性引物,建立利用cDNA探针检测苹果褪绿叶斑病毒的技术体系。[结果]扩增出了预期片段,经克隆、测序证明该片段为苹果褪绿叶斑... [目的]探索检测苹果褪绿叶斑病毒的技术体系。[方法]利用CTAB法提取感病苹果叶片总RNA,以总RNA为模板,利用特异性引物,建立利用cDNA探针检测苹果褪绿叶斑病毒的技术体系。[结果]扩增出了预期片段,经克隆、测序证明该片段为苹果褪绿叶斑病毒的特异性片段。以带有特异片段的质粒为模板,利用PCR技术制备出地高辛标记的cDNA探针。[结论]以质粒为模板可高效制备大量探针。地高辛标记探针为非放射性标记探针,安全性较好,灵敏度较高,具有重要的应用价值。 展开更多
关键词 苹果褪绿叶斑病毒 CDNA探针 检测
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褪绿叶斑病毒对苹果树生长结果性状的影响
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作者 辛玉成 秦淑莲 +2 位作者 张金政 刘光亮 刘鹏起 《莱阳农学院学报》 1996年第2期138-141,共4页
通过对乔纳金等３个苹果品种的１～３年生潜带褪绿叶斑病毒的树体与同品种无毒对照树的对比观测表明：苹果褪绿叶斑病毒对苹果树生长、开花结果及果实性状等，均有一定程度的危害。其中前者的干周、株高、枝类比、成花数量、产量和果实... 通过对乔纳金等３个苹果品种的１～３年生潜带褪绿叶斑病毒的树体与同品种无毒对照树的对比观测表明：苹果褪绿叶斑病毒对苹果树生长、开花结果及果实性状等，均有一定程度的危害。其中前者的干周、株高、枝类比、成花数量、产量和果实单果重等指标比后者的均低，其差异显著； 展开更多
关键词 褪绿叶斑病毒 苹果 无毒树 生长 结果
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