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骨髓间充质干细胞向光感受器样细胞和视网膜神经样细胞的分化 被引量：4
1
作者 徐志刚 穆敬中 +2 位作者 吕淑慧 李宏 刘远光 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2013年第2期126-129,134,共5页
目的探讨与新生鼠视网膜神经细胞共培养诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSC)的分化情况。方法体外贴壁培养法分离培养Lewis大鼠BMSC,记录BMSC的增殖情况并进行鉴定;制备细胞爬片并在双层培养板内与新生鼠视网膜神经... 目的探讨与新生鼠视网膜神经细胞共培养诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSC)的分化情况。方法体外贴壁培养法分离培养Lewis大鼠BMSC,记录BMSC的增殖情况并进行鉴定;制备细胞爬片并在双层培养板内与新生鼠视网膜神经细胞共培养,观察BMSC的神经存活和分化情况,并行免疫荧光染色鉴定。结果早期的BMSC分裂较缓慢,第2天进入快速增殖期,细胞生长活跃,大约持续至第5天,细胞分裂进入平台期,增殖缓慢或轻微下降。流式细胞仪显示,90.27%的3代BMSC处于G0-G1期,其余9.73%的细胞处于G2期、S期和M期;93.28%的4代BMSC处于G0-G1期,其余6.72%的细胞处于G2期、S期和M期。流式细胞仪检测示3代和4代BMSC抗原CD90+/CD45-分别为92%、90%,体外获得了较高纯度的BMSC。MTT法检测共培养后3d、5d、7d的细胞存活率分别为(65.48±9.95)%、(73.56±8.68)%、(76.84±8.65)%,与对照组[(66.14±10.45)%、(70.11±9.60)%、(73.21±6.98)%]比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。免疫荧光染色显示,共培养组诱导后部分BMSC视蛋白、巢蛋白于3d后、微管蛋白于5d后出现阳性反应,对照组均为阴性。结论 BMSC具有向光感受器样细胞和视网膜神经样细胞分化的潜能。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 共培养 视网膜神经样细胞 光感受器样细胞
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骨髓间充质干细胞向光感受器样细胞和视网膜神经样细胞的分化及移植后的分布情况 被引量：7
2
作者 徐志刚 吕淑慧 +2 位作者 刘远光 王玉清 李宏 《黑龙江医药科学》 2013年第1期58-60,共3页
目的:探讨与新生鼠视网膜神经细胞共培养诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)的分化情况及移植后的分布情况。方法:体外贴壁培养法分离培养Lewis大鼠新生鼠BMSCs,记录BMSCs的增殖情况并进行鉴定;将分离的BM SCs悬液经玻璃体腔注入大鼠视网膜下... 目的:探讨与新生鼠视网膜神经细胞共培养诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)的分化情况及移植后的分布情况。方法:体外贴壁培养法分离培养Lewis大鼠新生鼠BMSCs,记录BMSCs的增殖情况并进行鉴定;将分离的BM SCs悬液经玻璃体腔注入大鼠视网膜下腔。术后15d处死大鼠,取新鲜眼球,连续冰冻切片,经B rdU单抗、FITC标记二抗和Rhodops in单抗、Cy3标记二抗免疫荧光双重标记后,荧光显微镜下观察。结果:体外培养获得了较纯的BMSCs,荧光显微镜下可见移植后的MSCs主要分布于视网膜色素上皮层和视锥、视杆细胞层。结论:移植15d后BMSCs可在视网膜下腔存活,主要分布于视网膜色素上皮层和视锥、视杆细胞层。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 共培养 视网膜神经样细胞 光感受器样细胞 移植
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诱导MSCs转分化为视网膜神经样细胞的应用 被引量：1
3
作者 白月 徐国兴 +3 位作者 庄华 谢茂松 郭健 王婷婷 《海峡科学》 2010年第5期56-58,90,共4页
近年来,人们研究发现骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在体外可经生长因子诱导,抗氧化剂诱导,中药诱导,增加细胞内cAMP等不同途径的诱导方法,分化为神经外胚层来源的神经元及神经胶质细胞,因此一些研究者尝试以上诱导途径... 近年来,人们研究发现骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在体外可经生长因子诱导,抗氧化剂诱导,中药诱导,增加细胞内cAMP等不同途径的诱导方法,分化为神经外胚层来源的神经元及神经胶质细胞,因此一些研究者尝试以上诱导途径使MSCs分化为视网膜神经样细胞,用于体内相关疾病的细胞替代治疗,为多种疾病带来了新的治疗思路。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 体外诱导 视网膜神经样细胞
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骨髓间充质干细胞向视网膜神经样细胞的靶向分化
4
作者 何媛 张纯涛 《中国伤残医学》 2013年第3期44-46,共3页
目的:探索分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞,并诱导其向视网膜神经样细胞分化的实验方案。方法:分离原代SD大鼠BMSCs,培养并鉴定。用含hEGF、bFGF、dbcAMP和IBMX的培养基诱导BMSCs向视网膜神经样细胞分化。进一步用视网膜神经干细胞标签T... 目的:探索分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞,并诱导其向视网膜神经样细胞分化的实验方案。方法:分离原代SD大鼠BMSCs,培养并鉴定。用含hEGF、bFGF、dbcAMP和IBMX的培养基诱导BMSCs向视网膜神经样细胞分化。进一步用视网膜神经干细胞标签Thy1.1和神经节细胞标签MAP2对分化细胞进行检测。结果:本方法所分离培养的细胞经鉴定表达BMSCs表面标记,加入特定诱导剂后向神经样细胞分化,并表达视网膜神经干细胞特异标记。结论:我们培养的确实是骨髓间充质干细胞,用该诱导剂能够将BMSCs诱导分化为视网膜神经样细胞。这种分离培养和诱导方案对不可逆性视网膜视神经病变具有广泛的临床应用前景。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 视网膜神经样细胞 靶向分化
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乳鼠视网膜细胞诱导骨髓间充质干细胞分化为视网膜神经节样细胞 被引量：8
5
作者 徐春玲 苏冠方 牟大鹏 《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期174-178,共5页
目的探讨乳鼠视网膜细胞对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的诱导分化作用。方法从出生8d的大鼠骨髓中分离培养BMSCs,同时培养乳鼠视网膜神经细胞。在Transwell双层培养体系下,利用乳鼠视网膜细胞诱导BMSCs,诱导后细胞经RT-PCR及免疫荧光... 目的探讨乳鼠视网膜细胞对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的诱导分化作用。方法从出生8d的大鼠骨髓中分离培养BMSCs,同时培养乳鼠视网膜神经细胞。在Transwell双层培养体系下,利用乳鼠视网膜细胞诱导BMSCs,诱导后细胞经RT-PCR及免疫荧光鉴定。结果加入乳鼠视网膜细胞共培养第7d有神经元样细胞形成,经nestin、NF、β-IIITubulin、Thy1.1行免疫组织化学、RT-PCR、免疫荧光鉴定,细胞呈阳性反应。结论BMSCs在体外培养条件下,经过新生乳鼠视网膜细胞诱导,可以分化为视网膜神经节样细胞。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 诱导分化 视网膜神经节样细胞 视网膜细胞
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骨髓间充质干细胞向视网膜神经节样细胞分化过程中的电生理特性 被引量：3
6
作者 徐春玲 苏冠方 +1 位作者 张文杰 牟大鹏 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期773-778,F0002,共7页
目的:利用乳鼠视网膜细胞条件分化液将骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为视网膜神经节样细胞,比较BMSCs、诱导后的视网膜神经节样细胞以及原代培养的视网膜神经节细胞(RGCs)的电生理特性。方法:取传至第3代的大鼠BMSCs,利用乳鼠视网膜细胞... 目的:利用乳鼠视网膜细胞条件分化液将骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为视网膜神经节样细胞,比较BMSCs、诱导后的视网膜神经节样细胞以及原代培养的视网膜神经节细胞(RGCs)的电生理特性。方法:取传至第3代的大鼠BMSCs,利用乳鼠视网膜细胞条件分化液作为诱导剂,进行增殖培养、分化诱导;免疫组织化学法观察NF、MAP2和Nestin的表达,免疫荧光法检测Thy1.1的表达,膜片钳技术检测BMSCs、诱导后的视网膜神经节样细胞以及原代培养的RGCs的电生理特性。结果:加入乳鼠视网膜细胞条件分化液第7天有神经元样细胞形成,经Nestin、NF、MAP2和Thy1.1免疫组织化学鉴定,细胞呈阳性反应。在大鼠BMSCs上记录到对TTX敏感的钠电流、延迟整流钾电流和L-型电压依赖型钙电流。诱导后的视网膜神经节样细胞中,离子电流幅值均有所增加,接近于原代培养的RGCs,但均未达到其电流幅值。结论:BMSCs在体外培养条件下,经过新生乳鼠视网膜细胞条件分化液诱导,可以分化为视网膜神经节样细胞,且分化后的视网膜神经节样细胞具有类似原代培养的RGCs的电生理特性。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 视网膜神经节样细胞 视网膜神经节细胞 离子通道
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GAP-43在新生大鼠视网膜及其诱导的骨髓间充质干细胞向视网膜神经节样细胞分化过程中的表达 被引量：2
7
作者 齐首楠 苏冠方 +2 位作者 王晨光 王淑荣 刘早霞 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2010年第9期801-804,共4页
目的探讨生长相关蛋白-43(growth associated protein,GAP-43)在新生大鼠视网膜发育过程中及在以新生大鼠视网膜细胞诱导体外培养的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)向视网膜神经节样细胞定向分化中的作用。... 目的探讨生长相关蛋白-43(growth associated protein,GAP-43)在新生大鼠视网膜发育过程中及在以新生大鼠视网膜细胞诱导体外培养的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)向视网膜神经节样细胞定向分化中的作用。方法体外培养新生3d大乳鼠视网膜细胞,应用免疫细胞化学方法检测GAP-43的表达;提取新生大鼠视网膜细胞总RNA,应用RT-PCR方法检测GAP-43 mRNA的表达。体外培养大鼠BMSC至第3代,经流式细胞仪检测干细胞表面标志物进行鉴定,应用乳鼠视网膜细胞诱导BMSC分化,观察诱导后细胞的形态学变化,并应用免疫细胞化学方法对诱导后第5天的细胞进行神经元及视网膜神经节细胞标志物NSE、nestin、GAP-43、thy1.1鉴定,并应用RT-PCR的方法检测、分析GAP-43 mRNA的表达情况。结果体外培养的新生大乳鼠视网膜细胞应用免疫细胞化学方法可检测到GAP-43阳性表达;RT-PCR方法检测到新生大鼠的GAP-43 mRNA的表达;第3代BMSC经流式细胞仪检测CD71(+)、CD29(+)、CD34(-)、CD45(-),经与大乳鼠视网膜细胞共培养的方法可诱导BMSC分化为视网膜神经节样细胞,免疫细胞化学染色表明其表达特异性标志物NSE、nestin、GAP-43、thy1.1,分化后的神经节样细胞内可检测到GAP-43 mRNA阳性表达。结论本研究结果显示GAP-43不仅参与了大鼠视网膜发育过程,且GAP-43在以乳鼠视网膜细胞诱导BMSC定向分化为视网膜神经节样细胞这一过程中具有重要意义。 展开更多
关键词 生长相关蛋白-43 骨髓间充质干细胞 分化 视网膜神经节样细胞 免疫细胞化学
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抑制消减杂交技术筛选骨髓间充质干细胞与视网膜神经节样细胞差异表达基因
8
作者 牟大鹏 王世瑶 苏冠方 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2020年第6期524-526,532,共4页
目的抑制消减杂交技术筛选和克隆视网膜神经节(RGC)样细胞与骨髓间充质干细胞的差异表达基因。方法提取RGC样细胞总RNA为检测子,骨髓间充质干细胞的总RNA为驱动子,进而用抑制消减杂交技术方法获得消减杂交产物。结果本消减文库共挑取克... 目的抑制消减杂交技术筛选和克隆视网膜神经节(RGC)样细胞与骨髓间充质干细胞的差异表达基因。方法提取RGC样细胞总RNA为检测子,骨髓间充质干细胞的总RNA为驱动子,进而用抑制消减杂交技术方法获得消减杂交产物。结果本消减文库共挑取克隆120个,经聚合酶链式反应(PCR)鉴定,其中含有插入片段的阳性克隆有20个。在这些阳性克隆中,PCR扩增片段大小分布于250~1500 bp。共得到5个差异基因片段,这些差异表达基因与视觉信号转导、神经细胞再生等功能有关。结论抑制消减杂交技术有效地克隆了骨髓间充质干细胞诱导前后差异表达的基因。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 抑制消减杂交 视网膜神经节样细胞
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骨髓间充质干细胞在视网膜移植领域的研究进展 被引量：1
9
作者 徐志刚 吕淑慧 +3 位作者 穆敬中 张雪岩 齐艳秀 朱金玲 《国际眼科杂志》 CAS 2013年第1期79-81,共3页
临床上对于视网膜退行性疾病的治疗仍然只停留在改善循环、营养神经等支持治疗阶段,缺少特效的治疗方法,骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)是具有较强自我复制功能和多向分化潜能的一类细胞,人们开始通过尝试不同的... 临床上对于视网膜退行性疾病的治疗仍然只停留在改善循环、营养神经等支持治疗阶段,缺少特效的治疗方法,骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)是具有较强自我复制功能和多向分化潜能的一类细胞,人们开始通过尝试不同的分离、诱导、移植等手段,以实现其向视网膜细胞的转化,并最终实现体内的替代治疗。我们就BMSCs在视网膜移植领域的研究进展进行综述,以期为进一步的研究提供参考。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 视网膜神经样细胞 光感受器样细胞
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骨髓间充质干细胞向视网膜神经节样细胞的分化 被引量：7
10
作者 王海燕 苏冠方 +2 位作者 徐春玲 齐首楠 陈玉丙 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第2期161-164,共4页
目的探讨乳鼠视网膜细胞条件分化液诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)的神经分化情况,以期为视网膜退行性疾病提供治疗方案。方法体外分离培养Wistar大鼠乳鼠BMSCs,观察BMSCs的增殖情况并进行鉴定;制备乳鼠视网膜细胞条件分化液,以其诱导BMS... 目的探讨乳鼠视网膜细胞条件分化液诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)的神经分化情况,以期为视网膜退行性疾病提供治疗方案。方法体外分离培养Wistar大鼠乳鼠BMSCs,观察BMSCs的增殖情况并进行鉴定;制备乳鼠视网膜细胞条件分化液,以其诱导BMSCs,观察BMSCs的神经分化情况,并行免疫组化鉴定。结果体外培养获得了较纯的BMSCs;在乳鼠视网膜细胞条件分化液的环境中,诱导后72h,BMSCs胞体收缩成锥形或球形,细胞突起变细、变长,呈神经细胞的典型形态;免疫组化结果显示,部分细胞呈神经元特异性烯醇化酶(NSE)、巢蛋白(nestin)和Thy1.1阳性反应。结论乳鼠视网膜细胞条件分化液可诱导BMSCs分化成视网膜神经节样细胞。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 条件分化液 视网膜神经节样细胞
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