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解旋酶依赖性等温扩增快速检测O157:H7及其毒力基因的研究
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作者 雷飏 刘爱平 +5 位作者 谢群 陈柏塘 郑文 李征莉 朱韩武 谭徽 《实用预防医学》 CAS 2014年第3期288-290,共3页
目的建立一种快速、特异的检测大肠杆菌O157:H7及其毒力基因的解旋酶依赖性等温扩增法(HDA)。方法以大肠杆菌O157:H7的溶血素基因(hly)、粘附抹平因子(eae)和O抗原编码基因(rfb)为扩增对象,设计3对特异性HDA引物,通过优化条件后进行灵... 目的建立一种快速、特异的检测大肠杆菌O157:H7及其毒力基因的解旋酶依赖性等温扩增法(HDA)。方法以大肠杆菌O157:H7的溶血素基因(hly)、粘附抹平因子(eae)和O抗原编码基因(rfb)为扩增对象,设计3对特异性HDA引物,通过优化条件后进行灵敏度和特异度试验,并与普通PCR法比较。结果 HDA法从标准菌株和实验室分离株中均扩增出hlyA、eaeA和rfb基因片段,产物大小分别为100、93和109 bp,而其他非大肠杆菌O157:H7的扩增结果均为阴性。通过对各梯度大肠杆菌O157:H7菌悬液的检测表明HDA法可以检测的最低菌液浓度为3.0×101cfu/ml,该法与普通PCR法灵敏度相当。结论本HDA法具有较高的灵敏度和特异度,可快速、高效地检出大肠杆菌O157:H7菌和其毒力基因,而且对试验仪器要求低,特别适合应急处置现场和基层检验机构作为临床大肠杆菌O157:H7感染的辅助诊断。 展开更多
关键词 解旋酶依赖性等温扩增 大肠杆菌O157∶H7 hlyA基因 eaeA基因 rfb基因
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基于RT-HDA等温扩增技术快捷检测H7N9禽流感病毒的方法研究 被引量：6
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作者 方斌 刘琳琳 +3 位作者 李翔 余晓 叶国军 江永忠 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期482-488,共7页
常规PCR方法不适宜于实验条件不足的基层现场检测H7N9禽流感病毒,不利于疑似病例的及时诊治。本研究旨在建立一种快速简便、高灵敏度、低成本的H7N9禽流感病毒快速核酸检测技术。选用H7N9禽流感病毒血凝素(Hemagglutinin,HA)基因作为靶... 常规PCR方法不适宜于实验条件不足的基层现场检测H7N9禽流感病毒,不利于疑似病例的及时诊治。本研究旨在建立一种快速简便、高灵敏度、低成本的H7N9禽流感病毒快速核酸检测技术。选用H7N9禽流感病毒血凝素(Hemagglutinin,HA)基因作为靶标区域设计引物,采用FITC和Biotin标记上下游引物,通过逆转录解旋酶依赖性等温扩增(Reverse transcription helicase-dependent isothermal amplification,RT-HDA)技术扩增病毒RNA,辅以胶体金免疫层析试纸检测核酸扩增产物,建立H7N9禽流感病毒等温扩增检测方法。采用H7N9禽流感病毒质粒和病毒培养物对该方法的灵敏性、特异性和重复性进行评价,结果显示:病毒最低检测限20个拷贝数/μL,与常规PCR方法相比较无明显差异,重复性试验一致,与其他型别的禽流感、流感病毒无交叉反应。本研究建立的RT-HDA联合胶体金免疫层析试纸检测H7N9禽病毒检测方法具有较好的灵敏度、特异性和重复性,特别适用于现场条件下检测H7N9禽流感病毒快速简便的检测。 展开更多
关键词 H7N9禽流感病毒 逆转录解旋酶依赖性等温扩增(RT-HDA) 胶体金免疫层析法
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