茂源链霉菌L-谷氨酸氧化酶的异源表达以及诱导条件优化

1

作者 林怡颖 刘凯文 +5 位作者 马小倩 连惠勇 李莹 王芳 张泽生 刘清岱 《中国食品添加剂》 CAS 北大核心 2023年第4期52-59,共8页

L-谷氨酸氧化酶(L-glutamate oxidase,LGOX)能够专一性氧化L-谷氨酸生成α-酮戊二酸(α-ketoglutaric acid,α-KG),在食品领域以及临床生化检验中具有重要的价值。为了提高LGOX的活性,本文结合生物信息学方法和显色法,筛选得到一种新型... L-谷氨酸氧化酶(L-glutamate oxidase,LGOX)能够专一性氧化L-谷氨酸生成α-酮戊二酸(α-ketoglutaric acid,α-KG),在食品领域以及临床生化检验中具有重要的价值。为了提高LGOX的活性,本文结合生物信息学方法和显色法,筛选得到一种新型的含有LGOX基因的茂源链霉菌株(Streptomyces mobaraensis CGMCC 4.1719),以其基因组序列为模板,通过PCR技术扩增LGOX基因,与pET21b质粒连接,构建表达载体pET21b-SmLGOX,化转至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达,并对诱导条件加以优选。通过电泳分析结果可知,SmLGOX基因在大肠杆菌中成功表达。确定了最佳诱导条件为:IPTG终浓度0.4 mmol/L,30℃下诱导6 h。纯化后在不同pH条件下测定酶活,该重组菌最适pH为6.0,且在pH=4.0~6.0时相对酶活保持在80%以上,稳定性好,适于LGOX的工业化应用。 展开更多

关键词 茂源链霉菌 L-谷氨酸氧化酶 诱导表达 条件优化 酶活性

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谷氨酸酶促反应中光替代谷氨酸氧化酶的研究 被引量：2

2

作者 王细生 王志红 +2 位作者 郑翔鹏 蔡维平 许金钩 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期637-641,共5页

在弱碱性 (p H=10 .6 )介质中 ,紫外光的照射引起谷氨酸的光化学反应 ,产生 H2 O2 和 NH3 ,与谷氨酸氧化酶存在下的酶促反应等效 .以萘斯勒试剂使产物中的 NH3 显色并用分光光度法测定 ,以及以氯化血红素 (hemin)作为过氧化物酶的替代... 在弱碱性 (p H=10 .6 )介质中 ,紫外光的照射引起谷氨酸的光化学反应 ,产生 H2 O2 和 NH3 ,与谷氨酸氧化酶存在下的酶促反应等效 .以萘斯勒试剂使产物中的 NH3 显色并用分光光度法测定 ,以及以氯化血红素 (hemin)作为过氧化物酶的替代物 ,催化产物中的 H2 O2 氧化、偶联对羟基苯乙酸(HPA)的荧光反应并进行荧光检测 .据此分别建立了间接测定谷氨酸的新方法 . 展开更多

关键词 光化学反应 测定 谷氨酸 光替代酶 谷氨酸氧化酶

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L-谷氨酸氧化酶的分离纯化及酶学性质的研究 被引量：3

3

作者 李玲 毕春元 李敬龙 《中国酿造》 CAS 2012年第1期140-143,共4页

采用硫酸铵分级沉淀、HPLC脱盐、离子交换、Superdex G-200凝胶层析等步骤从华美链霉菌(Streptomyces sp.)发酵液中分离纯化L-谷氨酸氧化酶(GLOD),经过SDS-PAGE电泳检测,样品达到电泳级纯,分子量为140ku。对纯化的GLOD研究发现,该酶的... 采用硫酸铵分级沉淀、HPLC脱盐、离子交换、Superdex G-200凝胶层析等步骤从华美链霉菌(Streptomyces sp.)发酵液中分离纯化L-谷氨酸氧化酶(GLOD),经过SDS-PAGE电泳检测,样品达到电泳级纯,分子量为140ku。对纯化的GLOD研究发现,该酶的最适反应温度为50℃,最适pH值为7.0,温度稳定范围为0℃～50℃,pH稳定范围在6.0～9.0,GLOD催化L-谷氨酸的米氏常数Km为2.1×10-4mol/L,Na+、K+、Mg2+对酶活几乎没有影响,而Hg2+、Cu2+、Ag+均不同程度的抑制酶的活性。 展开更多

关键词 L-谷氨酸氧化酶 分离 纯化 酶学性质

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L-谷氨酸氧化酶的研究进展 被引量：2

4

作者 于爽 迟乃玉 张庆芳 《中国酿造》 CAS 北大核心 2017年第10期9-12,共4页

L-谷氨酸氧化酶是一种潜在的十分有用的工具酶,其辅酶是黄素腺嘌呤二核苷酸,是一种黄素蛋白酶类。以L-谷氨酸为底物,将其降解为过氧化氢、氨和α-酮戊二酸,具有高度底物特异性。该文从L-谷氨酸氧化酶的来源、应用、克隆表达与分离纯化... L-谷氨酸氧化酶是一种潜在的十分有用的工具酶,其辅酶是黄素腺嘌呤二核苷酸,是一种黄素蛋白酶类。以L-谷氨酸为底物,将其降解为过氧化氢、氨和α-酮戊二酸,具有高度底物特异性。该文从L-谷氨酸氧化酶的来源、应用、克隆表达与分离纯化进行了阐述,并对其研究前景进行了展望。 展开更多

关键词 L-谷氨酸氧化酶 来源 应用 克隆表达 纯化 研究前景

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谷氨酸氧化酶电极的研究 被引量：4

5

作者 杨庆玲 毕可万 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第3期277-281,共5页

用戊二醛作交联剂将谷氨酸氧化酶和牛血清白蛋白共交联,置于内层醋酸纤维素抗干扰膜和外层聚碳酸酯扩散控制膜之间,制成酶膜,将其与过氧化氢探头复合制成了扩散控制型谷氨酸氧化酶电极,并构建了采用该电极的流动注射分析系统。酶电极线... 用戊二醛作交联剂将谷氨酸氧化酶和牛血清白蛋白共交联,置于内层醋酸纤维素抗干扰膜和外层聚碳酸酯扩散控制膜之间,制成酶膜,将其与过氧化氢探头复合制成了扩散控制型谷氨酸氧化酶电极,并构建了采用该电极的流动注射分析系统。酶电极线性范围0—1000mg/L。50s响应电流达稳态值的95%。流动注射分析系统响应时间20s,检测速度60次/h,线性范围5—8000mg/L,酶膜使用寿命两周以上。系统选择性好,仅对干扰物L-谷氨酰胺和L-天冬氨酸有微弱响应。对同一样品连续测定41次的变异系数2.8%。测量味精发酵液和瓦勃呼吸计的结果相吻合。可望应用于味精发酵及食品工业中。 展开更多

关键词 味精 L-谷氨酸 谷氨酸氧化酶 酶电极

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谷氨酸氧化酶高产菌株的筛选鉴定及催化生产α-酮戊二酸 被引量：1

6

作者 刘佳 徐继嗣 +2 位作者 罗秋玲 陈修来 刘立明 《生物加工过程》 CAS 2017年第3期18-24,共7页

采用简易的偶联终点显色反应(Trinder显色反应),从土壤中分离出高产谷氨酸氧化酶(LGOX)的菌株不透明红球菌Rhodococcus opacus FMME1-41,并对此菌株的产酶特性进行研究。结果表明:该菌株所产LGOX主要分泌在发酵液中,对L-谷氨酸具有较强... 采用简易的偶联终点显色反应(Trinder显色反应),从土壤中分离出高产谷氨酸氧化酶(LGOX)的菌株不透明红球菌Rhodococcus opacus FMME1-41,并对此菌株的产酶特性进行研究。结果表明:该菌株所产LGOX主要分泌在发酵液中,对L-谷氨酸具有较强的底物专一性,最适pH 6.5,最适温度为35℃,Mn^(2+)是该酶的激活剂。通过发酵培养基优化,培养30 h时LGOX活力达到6.4 U/m L。利用该酶转化L-谷氨酸生产α-酮戊二酸,在最佳转化条件下转化20 h,α-酮戊二酸产量达到91.2 g/L,转化率为91.8%,α-KG生产强度为4.56 g/(L·h)。 展开更多

关键词 L-谷氨酸氧化酶 不透明红球菌 Α-酮戊二酸 酶法转化

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L—谷氨酸氧化酶的来源和特性及其在生化检验中的应用 被引量：6

7

作者 郑强 严卫民 +3 位作者 徐东 王绪明 罗侃 崔有宏 《检验医学教育》 2003年第2期32-35,共4页

L—谷氨酸氧化酶的发现是近20年的事情。它是一种十分有用的工具酶,在临床生化检验上,可以用于测定丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转酶和γ—谷氨酰基转移酶等的活性以及肌酐等的浓度。此外,在医药工业和食品工业上也有重要的应用。本... L—谷氨酸氧化酶的发现是近20年的事情。它是一种十分有用的工具酶,在临床生化检验上,可以用于测定丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转酶和γ—谷氨酰基转移酶等的活性以及肌酐等的浓度。此外,在医药工业和食品工业上也有重要的应用。本文对该酶的来源、特性和应用等有关的文献作了系统回顾和综述。 展开更多

关键词 L-谷氨酸氧化酶 生化检验 转氨酶 Γ-谷氨酰基转移酶 肌酐 尿素

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一株产L-谷氨酸氧化酶的链霉菌分离鉴定及酶学性质分析 被引量：4

8

作者 卢婵 郑璞 孙志浩 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期144-149,共6页

采用4-氨基安替吡啉/苯酚显色反应,从土壤中分离出产酶菌株Str-6。通过菌株形态、培养特征和生理生化试验、16S rDNA序列分析,初步将其鉴定为山丘链霉菌。其初步酶学性质研究表明,该菌株所产L-谷氨酸氧化酶为胞外酶,28℃培养36 h时产酶... 采用4-氨基安替吡啉/苯酚显色反应,从土壤中分离出产酶菌株Str-6。通过菌株形态、培养特征和生理生化试验、16S rDNA序列分析,初步将其鉴定为山丘链霉菌。其初步酶学性质研究表明,该菌株所产L-谷氨酸氧化酶为胞外酶,28℃培养36 h时产酶酶活达到0.023 1 U/mg蛋白,对L-谷氨酸具有较强的底物专一性。酶作用最佳反应pH为6.0,反应温度为35℃。在pH6.0-7.0和温度35-40℃下具有较好的稳定性。 展开更多

关键词 L-谷氨酸氧化酶 筛选 鉴定 山丘链霉菌 酶学性质

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用静息细胞培养法研究L－谷氨酸氧化酶的生物合成 被引量：8

9

作者 李青山 李晓波 +1 位作者 李友荣 谢幸珠 《华东理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 1994年第2期168-172,共5页

建立了静息细胞培养系统，并以此研究了Ｌ－谷氨酸氧化酶生物合成的影响因素。结果表明，发酵１６ｈ的菌体在有诱导物情况下有酶的合成，无诱导物则无酶的合成，发酵４０ｈ的菌体在有、无诱导物的条件下均有酶的合成。对发酵１６ｈ的菌... 建立了静息细胞培养系统，并以此研究了Ｌ－谷氨酸氧化酶生物合成的影响因素。结果表明，发酵１６ｈ的菌体在有诱导物情况下有酶的合成，无诱导物则无酶的合成，发酵４０ｈ的菌体在有、无诱导物的条件下均有酶的合成。对发酵１６ｈ的菌体研究表明：β－丙氨酸（Ⅰ）、α－酮戊二酸（Ⅱ）、丙酮酸钠（Ⅲ）是酶合成的诱导物，谷氨酸（Ⅳ）则不是。而对发酵４０ｈ菌体而言：ＭｇＣｌ＿２，ＣａＣｌ＿２能促进酶的合成；Ⅰ不能作氮源利用；Ⅰ～Ⅳ均具有高浓度抑制产酶、低浓度促进产酶的双重作用。 展开更多

关键词 谷氨酸氧化酶 静息细胞培养 发酵

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固定化谷氨酸氧化酶管流动注射测定谷氨酸的研究 被引量：1

10

作者 李青山 叶邦策 +1 位作者 张嗣良 俞俊棠 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第4期351-355,共5页

用多孔玻璃珠固定谷氨酸氧化酶与过氧化氢酶分别制成相应的固定化酶管,结合流动注射分析系统测定谷氨酸的含量。测定线性范围在0.1—2.0mmol/L,精度(C.V)0.7％,测定速率每小时80样以上,使用寿命至少4个月。在谷氨酸浓度低于2.5mmol/L时... 用多孔玻璃珠固定谷氨酸氧化酶与过氧化氢酶分别制成相应的固定化酶管,结合流动注射分析系统测定谷氨酸的含量。测定线性范围在0.1—2.0mmol/L,精度(C.V)0.7％,测定速率每小时80样以上,使用寿命至少4个月。在谷氨酸浓度低于2.5mmol/L时,pH在6.5—8.0,温度20—35℃,磷酸盐浓度在0.05—0.25mol/L范围内对测定几乎无影响,对不同发酵时间的谷氨酸发酵液测定,测定的结果与酶试剂盒及瓦氏法比较,结果一致,说明该方法已具有实际应用价值。 展开更多

关键词 谷氨酸 谷氨酸氧化酶 固定化酶

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L-谷氨酸氧化酶产生菌的筛选与产酶条件 被引量：6

11

作者 徐水清 李友荣 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第4期309-312,共4页

L-氨基酸氧化酶早就从鼠肾、蛇毒液、无脊椎动物和微生物等不同来源中分离得到,能够使多种氨基酸氧化脱氨却几乎不作用于 L-谷氨酸。最近从微生物中发现了一种新酶——L-谷氨酸氧化酶(E.C.1.4.3.11),能专一地催化下述反应:L-谷氨酸+O_2+... L-氨基酸氧化酶早就从鼠肾、蛇毒液、无脊椎动物和微生物等不同来源中分离得到,能够使多种氨基酸氧化脱氨却几乎不作用于 L-谷氨酸。最近从微生物中发现了一种新酶——L-谷氨酸氧化酶(E.C.1.4.3.11),能专一地催化下述反应:L-谷氨酸+O_2+H_2O→α-酮戊二酸+NH_3+H_2O_2 虽然还不清楚有较高底物专一性的 L-氨基酸氧化酶的生物学意义,但该酶是一种有价值的工具酶,可以用于分析 L-谷氨酸及与之偶联的许多化合物,因而受到重视。在临床上可用于测定血液中谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)和γ-谷氨酰转移酶(γ-GTP)等。此外还可用于评价食品的质量、监测谷氨酸发酵等生产过程.本文报道了从土样中筛选到 L-谷氨酸氧化酶产生菌和诱导产酶条件的研究结果。 展开更多

关键词 谷氨酸氧化酶 产生菌 筛选

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重组L-谷氨酸氧化酶固定化细胞的制备 被引量：2

12

作者 李力 王亚平 +1 位作者 饶犇 马立新 《湖北农业科学》 2019年第17期132-135,共4页

为了提高表达L-谷氨酸氧化酶(LGOX)的重组大肠杆菌(pET-23a-lgox)的底物催化耐受性,尝试了对重组菌进行固定化的研究。结果表明,产LGOX的重组大肠杆菌工程菌种的最佳固定化条件为:海藻酸钠浓度2.5%,CaCl2溶液浓度13g/L,pH6.5,OD600nm为1... 为了提高表达L-谷氨酸氧化酶(LGOX)的重组大肠杆菌(pET-23a-lgox)的底物催化耐受性,尝试了对重组菌进行固定化的研究。结果表明,产LGOX的重组大肠杆菌工程菌种的最佳固定化条件为:海藻酸钠浓度2.5%,CaCl2溶液浓度13g/L,pH6.5,OD600nm为14的工程菌与海藻酸钠的最佳体积比1∶40,此时得到的固定化工程菌机械强度最好。通过酶学性质比较发现,固定化的细胞与游离细胞在底物催化过程中相比,同等条件下前者温度耐受性、pH耐受性、使用频次等均高于后者。 展开更多

关键词 固定化细胞 海藻酸钠 L-谷氨酸氧化酶

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环氧树脂固定化L-谷氨酸氧化酶 被引量：3

13

作者 张利坤 肖延铭 +1 位作者 杨卫华 李敬亚 《生物加工过程》 CAS 2018年第4期30-35,共6页

通过环氧树脂作为载体对经(NH4)2SO4盐析处理后的L-谷氨酸氧化酶(LGOX)进行固定化,优化固定化工艺条件,并利用固定化LGOX转化产α-酮戊二酸(α-KG)。结果表明:饱和度45%的(NH4)2SO4为最佳盐析浓度;当选用环氧树脂ES-105作为固定化载体... 通过环氧树脂作为载体对经(NH4)2SO4盐析处理后的L-谷氨酸氧化酶(LGOX)进行固定化,优化固定化工艺条件,并利用固定化LGOX转化产α-酮戊二酸(α-KG)。结果表明:饱和度45%的(NH4)2SO4为最佳盐析浓度;当选用环氧树脂ES-105作为固定化载体、树脂加量为20 m L酶液(14 U/m L)加入3.5 g载体、固定化K3PO4缓冲液浓度为0.2 mol/L(p H 7.0)、固定化温度25℃、固定化时间24 h时,固定化LGOX酶活力最高,其酶活回收率为85.9%,比酶活55.7 U/g。利用该固定化酶转化L-谷氨酸产α-KG,当谷氨酸钠质量浓度为100 g/L,反应20 h,产物收率达98.2%。固定化酶重复使用14批次后,产物收率仍有90%以上;重复使用20批,收率有83.2%。因此,该固定化酶具有具良好的操作稳定性。 展开更多

关键词 环氧树脂 L-谷氨酸氧化酶 固定化 Α-酮戊二酸 生物转化

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谷氨酸氧化酶粗品的制备、性质及应用 被引量：1

14

作者 李青山 王立军 +1 位作者 叶邦策 李友荣 《华东理工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1994年第5期611-614,共4页

谷氨酸氧化酶（ＧＯ）发酵液经（ＮＨ＿４）２ＳＯ＿４沉淀后用透析法获得酶粗品。利用ＧＯ测定谷氨酸发酵液中谷氨酸（ＧＬｕ）的含量与传统的瓦氏法结果一致，相关系数为０．９８６，相关方程为：ｙ＝０．９２８ｘ＋０．１２７（其中... 谷氨酸氧化酶（ＧＯ）发酵液经（ＮＨ＿４）２ＳＯ＿４沉淀后用透析法获得酶粗品。利用ＧＯ测定谷氨酸发酵液中谷氨酸（ＧＬｕ）的含量与传统的瓦氏法结果一致，相关系数为０．９８６，相关方程为：ｙ＝０．９２８ｘ＋０．１２７（其中ｙ，ｘ分别表示氧化酶法与瓦氏法测定的值）。且这种方法比瓦氏法方便、简单、分析成本低、耗时少。利用ＧＯ法测定血清中谷草转氨酶（ＧＯＴ）和谷丙转氨酶（ＧＰＴ）的含量，与传统的试剂盒法比较，相关系数分别为０．９７８、０．９８４，相关方程为：ｙ＝０．９９８ｘ－０．１１０７，ｙ＝０．９５９ｘ＋０．０１３，其中ｙ为新方法测定值，ｘ是传统方法测定值。 展开更多

关键词 谷氨酸 谷氨酸氧化酶 谷草转氨酶

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白丝北里孢菌L-谷氨酸氧化酶的异源表达及酶学性质分析 被引量：5

15

作者 陈稳 李由然 +3 位作者 顾正华 丁重阳 张梁 石贵阳 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第2期58-65,共8页

为实现从L-谷氨酸到α-酮戊二酸(α-ketoglutaric acid,α-KG)的高效生物转化,将来源于白丝北里孢菌(Kitasatospora setae KM-6054)的L-谷氨酸氧化酶(L-glutamate oxidase,LGOX)在大肠杆菌(Escherichia coli)中实现异源表达,并研究其酶... 为实现从L-谷氨酸到α-酮戊二酸(α-ketoglutaric acid,α-KG)的高效生物转化,将来源于白丝北里孢菌(Kitasatospora setae KM-6054)的L-谷氨酸氧化酶(L-glutamate oxidase,LGOX)在大肠杆菌(Escherichia coli)中实现异源表达,并研究其酶学特性。根据LGOX的氨基酸序列和大肠杆菌系统偏好性合成LGOX全基因序列,并通过pET28a(+)/DE3系统在大肠杆菌中实现了功能表达。诱导剂异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)终浓度为0.1 mmol/L,20℃诱导18 h,重组大肠杆菌粗酶液酶活力可达49.10 U/m L。亲和层析获得酶比活力为45.98 U/mg纯酶,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳条带显示蛋白分子质量大小约为70 kDa。酶学性质研究表明:其最适反应温度和pH值分别为40℃和6.0;K_m值为1.23 mmol/L,V_(max)值为76.24μmol/(min·mg),L-谷氨酸为该酶的最适底物。本研究确定了LGOX在E.coli BL21中的异源表达及酶学特性,为生物转化合成α-KG提供了新的参考途径。 展开更多

关键词 白丝北里孢菌 L-谷氨酸氧化酶 Α-酮戊二酸 异源表达 酶学性质

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L-谷氨酸氧化酶生物合成α-酮戊二酸的工艺优化

16

作者 林金新 《当代化工研究》 2019年第3期146-148,共3页

利用表达L-谷氨酸氧化酶(LGOX)的工程菌进行全细胞催化L-谷氨酸钠合成α-酮戊二酸,考察了各无机离子对酶活的影响,结果表明1mM Mn2+和Mg2+分别对酶活有22%和15%的提高,而Fe2+、Cu2+和Ba2+对酶活有不同程度的抑制。正交实验设计考察催化... 利用表达L-谷氨酸氧化酶(LGOX)的工程菌进行全细胞催化L-谷氨酸钠合成α-酮戊二酸,考察了各无机离子对酶活的影响,结果表明1mM Mn2+和Mg2+分别对酶活有22%和15%的提高,而Fe2+、Cu2+和Ba2+对酶活有不同程度的抑制。正交实验设计考察催化反应中的影响因素,包括温度、pH、投菌量(固定底物浓度为100g/L)、过氧化氢酶添加量,结果表明最优工艺为温度为30℃、pH值为6.5、投菌量2%、过氧化氢添加量为2%,反应15h,摩尔转化率为99%,该工艺结果对α-酮戊二酸的酶催化工艺有很强的指导作用。 展开更多

关键词 L-谷氨酸氧化酶 Α-酮戊二酸 合成工艺

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L-谷氨酸氧化酶的研究进展 被引量：9

17

作者 毕春元 李玲 李敬龙 《生命科学》 CSCD 2012年第2期169-173,共5页

L-谷氨酸氧化酶(L-glutamate oxidase,GLOD)是一种以FAD为辅基的黄素蛋白酶类,可以专一性地氧化谷氨酸生成过氧化氢、氨和α-酮戊二酸,广泛应用于食品、医药、发酵等领域。从谷氨酸氧化酶的微生物来源、酶学性质、发酵条件、分离纯化及... L-谷氨酸氧化酶(L-glutamate oxidase,GLOD)是一种以FAD为辅基的黄素蛋白酶类,可以专一性地氧化谷氨酸生成过氧化氢、氨和α-酮戊二酸,广泛应用于食品、医药、发酵等领域。从谷氨酸氧化酶的微生物来源、酶学性质、发酵条件、分离纯化及分析应用等方面进行阐述,并对其研究前景进行展望。 展开更多

关键词 谷氨酸氧化酶 酶学特性 表达条件 分离纯化 应用 研究前景

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不透明红球菌生产谷氨酸氧化酶发酵过程优化 被引量：4

18

作者 刘佳 徐继嗣 +2 位作者 罗秋玲 陈修来 刘立明 《过程工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期814-820,共7页

优化了用不透明红球菌FMME1-41所产谷氨酸氧化酶(LGOX)转化L-谷氨酸产α-酮戊二酸(α-KG)的工艺条件.结果表明,最佳发酵培养基为酵母粉6 g/L,大豆蛋白胨2 g/L,(NH_4)_2SO_4 0.8 g/L,葡萄糖25 g/L,KH_2PO_4 3 g/L,MgSO_4 0.6 g/L,MnSO_4 ... 优化了用不透明红球菌FMME1-41所产谷氨酸氧化酶(LGOX)转化L-谷氨酸产α-酮戊二酸(α-KG)的工艺条件.结果表明,最佳发酵培养基为酵母粉6 g/L,大豆蛋白胨2 g/L,(NH_4)_2SO_4 0.8 g/L,葡萄糖25 g/L,KH_2PO_4 3 g/L,MgSO_4 0.6 g/L,MnSO_4 0.3g/L,L-谷氨酸2.5 g/L,在其中发酵30 h,LGOX酶活达6.12 U/mL;在7.5 L发酵罐中优化发酵放大和补料策略,发酵40 h后LGOX酶活达21.5 U/mL;在2 L发酵罐中转化L-谷氨酸生产α-KG,产量达92.0 g/L,摩尔转化率为92.6%,生产强度为9.2 g/(L·h). 展开更多

关键词 L-谷氨酸氧化酶 不透明红球菌 Α-酮戊二酸 酶法优化

原文传递

L-谷氨酸氧化酶高密度发酵及催化合成α-酮戊二酸 被引量：6

19

作者 樊祥臣 陈瑞东 +2 位作者 刘佳 徐继嗣 刘立明 《过程工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期292-297,共6页

以乳糖代替异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)作为诱导剂,优化补料策略提高菌体密度,优化诱导策略提高蛋白表达,以高密度发酵所得L-谷氨酸氧化酶(LGOX)全细胞转化L-谷氨酸生产?-酮戊二酸(?-KG).结果表明,摇瓶培养条件下LGOX酶活由IPTG诱导的3.12... 以乳糖代替异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)作为诱导剂,优化补料策略提高菌体密度,优化诱导策略提高蛋白表达,以高密度发酵所得L-谷氨酸氧化酶(LGOX)全细胞转化L-谷氨酸生产?-酮戊二酸(?-KG).结果表明,摇瓶培养条件下LGOX酶活由IPTG诱导的3.12 U/m L提高到4.78 U/m L;通过指数补料与DO-stat补料相结合的两阶段补料策略,5 L发酵罐中细胞浓度由IPTG诱导的2.49 g/L提高到41.6 g/L,LGOX酶活为59 U/m L.优化诱导策略后细胞浓度为48.4 g/L,LGOX酶活提高到156.1 U/m L,分别是优化前的19.4和50倍,?-KG产量达5160 g/L,提高48倍. 展开更多

关键词 L-谷氨酸氧化酶 Α-酮戊二酸 发酵 全细胞转化

原文传递

L-谷氨酸氧化酶与CBD的融合表达及其在微晶纤维素上固定化分析 被引量：5

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作者 宋辉 张文宇 +4 位作者 王鹏举 谭焕波 苏文成 赵树欣 邹培建 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1348-1361,共14页

酶的固定化作为一种重要的技术,已在生物催化领域得到了广泛的应用。现将来源于普拉特链霉菌3304(Streptomyces platensis NTU3304)产生的胞外L-谷氨酸氧化酶(L-glutamate oxidase,Gox)基因gox融合到来源于粪碱纤维单胞菌Cellulomonas f... 酶的固定化作为一种重要的技术,已在生物催化领域得到了广泛的应用。现将来源于普拉特链霉菌3304(Streptomyces platensis NTU3304)产生的胞外L-谷氨酸氧化酶(L-glutamate oxidase,Gox)基因gox融合到来源于粪碱纤维单胞菌Cellulomonas fimi的纤维素结合域(CBDcex)的基因上,构建表达载体p ETM10-Gox-CBD,并在大肠杆菌中表达。通过蛋白纯化获得融合蛋白,并命名为Gox-CBD。利用CBD对微晶纤维素特异性吸附的特性将其固定在微晶纤维素上,并对固定化酶的制备条件、结合量、酶学性质及其微晶纤维素结合稳定性等进行了研究。在4℃条件下结合约1 h,融合蛋白Gox-CBD结合在纤维素上的结合量即可达到9.0 mg/g。通过对重组型、融合表达游离的以及固定化在微晶纤维素上的谷氨酸氧化酶的酶学性质进行比较发现,固定化酶的比酶活有所降低;但固定化酶的热稳定性相对于游离酶有了很大的提高,在60℃孵育30 min后还保留有约70%的活性,而游离的重组Gox在相同条件下几乎完全失去活性。当固定化结合蛋白在p H<10或者盐浓度>5 mmol/L的Na Cl条件下可以牢固结合。并且可以通过一步纯化方法固定化融合蛋白Gox-CBD于微晶纤维素上。因此,L-谷氨酸氧化酶与纤维素结合域融合表达的研究为蛋白的纯化及酶的固定化提供了一种新策略。 展开更多

关键词 L-谷氨酸氧化酶 纤维素结合域 固定化

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