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融合标签谷胱甘肽S-转硫酶高亲和配体的设计与筛选 被引量:3
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作者 杨宪峰 张灵 +3 位作者 杨晓兰 龙高波 张奕 廖飞 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期791-795,共5页
目的:设计与筛选融合标签血吸虫谷胱甘肽S-转硫酶(Glutathione S-transferase,GST)的高亲和配体。方法:将原核融合表达载体pGST-MOLUC转入大肠杆菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷低温诱导GST标签表达,用Glutathione Sepharose 4B亲和纯化此... 目的:设计与筛选融合标签血吸虫谷胱甘肽S-转硫酶(Glutathione S-transferase,GST)的高亲和配体。方法:将原核融合表达载体pGST-MOLUC转入大肠杆菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷低温诱导GST标签表达,用Glutathione Sepharose 4B亲和纯化此标签GST。初速度法测定GST对底物1-氯-2,4-二硝基苯(1-chloro-2,4-dinitrobenzene,CDNB)和还原型谷胱甘肽(Glutathione,GSH)的Km;测定GST产物S-(2,4-二硝基苯基)-谷胱甘肽(GS-DNB)、3,5-二甲基苯甲酸、对丁基苯甲酸、依他尼酸及3者对应的对称双酰丁二胺对标签GST的抑制作用。结果:纯化标签GST对GSH和CDNB顺序结合且Km都高于0.10mmol/L;GS-DNB相对CDNB的竞争性抑制常数约5μmol/L,相对GSH的非竞争性抑制常数约33μmol/L。3,5-二甲基苯甲酸、对丁基苯甲酸、依他尼酸对此GST抑制常数都大于0.20 mmol/L;N,N’-双依他尼酰-1,4-丁二胺和N,N’-双对丁基苯甲酰-1,4-丁二胺都为GST相对GSH的强竞争性抑制,抑制常数分别为31 nmol/L和(0.61±0.43)μmol/L(n=3)。结论:将标签GST低亲和力芳香羧酸用柔性短链连成对称结构,可获得结合于单个活性中心的高亲和力标签GST抑制剂。 展开更多
关键词 谷胱甘肽s-转硫酶 亲和力 抑制剂 配体
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双依他尼酸乙醇胺对谷胱甘肽S-转硫酶mu的选择性抑制作用 被引量:1
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作者 同婷婷 段昌园 +2 位作者 李欣蓬 廖飞 杨晓兰 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期406-413,共8页
谷胱甘肽S-转移酶(GST)的同工酶mu (GSTM)高表达与卵巢癌顺铂耐药有关。以GST非选择性抑制剂依他尼酸设计二价潜抑制剂双依他尼酸乙醇胺(aminoethanol di-ethacrynic acid, ADEA),测定ADEA及其与还原型谷胱甘肽(glutathione, GSH)加合物... 谷胱甘肽S-转移酶(GST)的同工酶mu (GSTM)高表达与卵巢癌顺铂耐药有关。以GST非选择性抑制剂依他尼酸设计二价潜抑制剂双依他尼酸乙醇胺(aminoethanol di-ethacrynic acid, ADEA),测定ADEA及其与还原型谷胱甘肽(glutathione, GSH)加合物对GST同工酶亚型A1、P1、M2的半抑制浓度(IC50)、抑制类型、结合比和结合动力学。ADEA本身对GSTM2的IC50比GSTA1低300倍,比GSTP1低3 000倍;ADEA与GSH在酶催化下反应10 min所得产物,对上述3种同工酶的IC50分别降低5、57、200倍。ADEA本身和产物对GSTM2相对于底物CDNB是反竞争性抑制剂,ADEA本身对GSTM2相对于底物GSH是混合性抑制剂,ADEA与GSH产物对GSTM2相对于底物GSH是反竞争性抑制剂。分析ADEA对GSTM2荧光静态淬灭表明ADEA及其产物是二价结合;分析荧光和酶活性随时间变化表明酶与ADEA本身结合速度比其产物CDNB慢10倍。ADEA是有效的GSTM2选择性二价潜抑制剂。 展开更多
关键词 双依他尼酸乙醇胺 s-mu 二价潜抑制剂 依他尼酸
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细胞代谢解毒酶CYP1A1、GSTM1基因多态性与吸烟对男性肺鳞癌发病的影响 被引量:2
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作者 宋宝 刘杰 +4 位作者 黄海燕 王兴武 郑燕 韩金祥 王哲海 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2010年第11期1193-1196,共4页
目的探讨细胞代谢解毒酶细胞色素P450酶1A1(CYP1A1)、谷胱甘肽S-转硫酶M1(GSTM1)基因多态性和吸烟因素对男性肺鳞癌发病的影响。方法采用基因芯片技术对125例男性肺鳞癌患者和125例男性健康对照者CYP1A1、GSTM1基因多态性进行检测。结果... 目的探讨细胞代谢解毒酶细胞色素P450酶1A1(CYP1A1)、谷胱甘肽S-转硫酶M1(GSTM1)基因多态性和吸烟因素对男性肺鳞癌发病的影响。方法采用基因芯片技术对125例男性肺鳞癌患者和125例男性健康对照者CYP1A1、GSTM1基因多态性进行检测。结果 CYP1A1m2位点GG基因型和GSTM1缺失基因型在肺鳞癌组与健康对照者间存在显著性差异(P<0.05)。吸烟者携带CYP1A1m2位点至少一个变异G等位基因或携带GSTM1缺失型者患肺鳞癌的危险性进一步显著增加,OR值分别为4.50和3.81(P<0.01)。结论吸烟与CYP1A1、GSTM1基因多态性与男性肺鳞癌的发生有关。 展开更多
关键词 细胞色素P4501A1 谷胱甘肽s-转硫酶M1 基因多态性 肺鳞癌
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GSTT1基因与中国人群结直肠癌易感性的相关性Meta分析 被引量:1
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作者 杨天宁 赵达 +1 位作者 马守成 关泉林 《国际肿瘤学杂志》 CAS 2015年第10期743-746,共4页
目的探讨GSTT1基因与中国人群结直肠癌易感性的关系。方法计算机检索PubMed、EMBase、CochraneLibrary、中国生物医学文献数据库、维普中文科技期刊全文数据库、中国期刊全文数据库和万方医药期刊全文数据库,全面检索GSTT1基因与中国... 目的探讨GSTT1基因与中国人群结直肠癌易感性的关系。方法计算机检索PubMed、EMBase、CochraneLibrary、中国生物医学文献数据库、维普中文科技期刊全文数据库、中国期刊全文数据库和万方医药期刊全文数据库,全面检索GSTT1基因与中国人群结直肠癌易感性的临床对照研究。按纳入与排除标准筛选文献,对符合条件的研究由两位研究者独立进行资料提取和质量评价,采用RevMan5.1软件进行Meta分析。结果共检索出326篇文献,最终纳入10篇病例对照研究,其中结直肠癌患者2983例,对照组共纳入健康人4386例。Meta分析结果显示GSTT1基因是否缺失与结直肠癌易感性相关(RR=1.11,95%C,为1.06-1.17,Z=4.26,P〈0.0001)。结论在中国人群中GSTT1基因缺失增加了结直肠癌的患病风险。 展开更多
关键词 结直肠肿瘤 META分析 谷胱甘肽s-转硫酶T1
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