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含质粒复制起始区ori44的苏云金芽胞杆菌解离载体的构建 被引量：3
1
作者 吴岚 孙明 +2 位作者 朱晨光 张蕾 喻子牛 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期335-338,共4页
将苏云金芽胞杆菌转座子Tn44 30的解离酶识别位点res分别插入克隆载体pRSETB和pUC19得到质粒pBMB12 0 1和pBMB12 0 2。这两个质粒分别经BamHI HindⅢ和EcoRI HindⅢ双酶切回收含res位点的小DNA片段 ,与穿梭载体pHT310 1经EcoRI HindⅢ... 将苏云金芽胞杆菌转座子Tn44 30的解离酶识别位点res分别插入克隆载体pRSETB和pUC19得到质粒pBMB12 0 1和pBMB12 0 2。这两个质粒分别经BamHI HindⅢ和EcoRI HindⅢ双酶切回收含res位点的小DNA片段 ,与穿梭载体pHT310 1经EcoRI HindⅢ双酶切后回收的含大肠杆菌复制起始区、氨苄青霉素抗性基因和红霉素抗性基因的 3 3kb片段连接 ,获得重组质粒pBMB12 0 3。封闭pBMB12 0 3两res位点外的BamHI和EcoRI位点后 ,得到解离载体pBMB12 0 4。将来源于苏云金芽胞杆菌库斯塔克亚种YBT 15 2 0的质粒复制起始区ori44片段插入pBMB12 0 4的两res位点之间 ,得到解离穿梭载体pBMB12 0 5。该解离载体插入壮观霉素抗性基因后电转化无晶体突变株 ,在辅助质粒所提供的解离酶作用下可发生解离消除抗性基因 ,解离频率为 10 0 % ,解离后的质粒稳定性为 93%。利用解离穿梭载体pBMB12 0 展开更多
关键词 质粒复制起始区 ori44 苏云金芽胞杆菌 解离载体 构建
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