阿魏酸钠对大鼠脑微血管内皮跨膜电阻的影响 被引量：12

1

作者 吴大正 樊懿 胡之璧 《华西药学杂志》 CAS CSCD 2001年第2期98-100,共3页

目的 :观察阿魏酸钠对组胺引起的脑软膜微血管通透性增加的抑制作用。方法 :脑软膜微血管通透性用跨脑软膜微血管内皮的电阻表示 ,跨脑软膜微血管内皮的电阻通过将微电极插入微血管腔内记录 ,并用电缆公式计算获得。结果 :脑软膜微血管... 目的 :观察阿魏酸钠对组胺引起的脑软膜微血管通透性增加的抑制作用。方法 :脑软膜微血管通透性用跨脑软膜微血管内皮的电阻表示 ,跨脑软膜微血管内皮的电阻通过将微电极插入微血管腔内记录 ,并用电缆公式计算获得。结果 :脑软膜微血管经灌流人工脑脊液 ,测得的跨内皮电阻大约为 2 5 0 0Ω·cm2 ,说明微血管内皮是具有较低通透性的致密屏障 ,在人工脑脊液中加入 10 4 mol·L 1组胺引起跨内皮电阻快速的和可逆性的下降。在配对实验中 ,10 4 mol·L 1组胺引起跨内皮电阻的下降能够被在人工脑脊液中加入 10 5mol·L 1阿魏酸钠所抑制。结论 :结果表明组胺能够引起脑微血管通透性增加 。 展开更多

关键词 阿魏酸钠 组胺 微血管通透性 跨膜电阻

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Caco-2细胞模型验证指标的选择与评判 被引量：30

2

作者 蔡润兰 王敏 +3 位作者 齐云 王翔岩 谢忱 罗秀珍 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第24期1871-1875,共5页

目的建立Caco-2细胞模型并探讨验证该模型指标的选择与评判。方法在所建立的Caco-2单层细胞模型上,通过测定跨上皮细胞膜电阻(TEER),比较膜两侧碱性磷酸酶(ALP)活性,计算几种公认的标记物在单层模型转运参数等对Caco-2细胞单层可靠性进... 目的建立Caco-2细胞模型并探讨验证该模型指标的选择与评判。方法在所建立的Caco-2单层细胞模型上,通过测定跨上皮细胞膜电阻(TEER),比较膜两侧碱性磷酸酶(ALP)活性,计算几种公认的标记物在单层模型转运参数等对Caco-2细胞单层可靠性进行评价。结果TEER在细胞单层形成过程中稳定增长,膜两侧培养液中ALP活性差异逐步加大,细胞旁及跨细胞转运标记物均呈现可预见的低或高表观渗透系数(Papp)值,P-gp标准底物非索非那定双侧转运流出率(ER)大于2。结论建立的Caco-2细胞模型在完整性、细胞极性、通透性以及P-gp表达等方面均符合胃肠吸收化合物机制研究的要求。 展开更多

关键词 CACO-2细胞 跨膜电阻 碱性磷酸酶 P-糖蛋白

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不同接种密度对Caco-2细胞吸收模型分化及去极化评价指标的影响 被引量：4

3

作者 唐家明 吕林 +4 位作者 张丽阳 邹亚学 王秋悦 罗绪刚 李素芬 《河北科技师范学院学报》 CAS 2016年第3期66-70,共5页

为确定不同接种密度对Caco-2细胞吸收模型分化及去极化评价指标的影响,以及细胞模型适用于吸收和转运试验的时间,采用Caco-2细胞高密度(1×105cells·cm-2)、中密度(5×104cells·cm-2)和低密度(3×104cells·c... 为确定不同接种密度对Caco-2细胞吸收模型分化及去极化评价指标的影响,以及细胞模型适用于吸收和转运试验的时间,采用Caco-2细胞高密度(1×105cells·cm-2)、中密度(5×104cells·cm-2)和低密度(3×104cells·cm-2)等3个接种密度,分别接种于带聚碳酸酯微孔滤膜插槽的Transwell 6孔板上,培养29 d,通过测定跨膜电阻值(TEER)、碱性磷酸酶活性(ALP)和酚红透过率,评价细胞单层的完整性、极化和透过性。结果表明,高、中、低密度接种分别于第12天、第15天和第18天TEER值超过600Ω·cm2,第27天、第29天和第29天TEER值开始下降。高、中、低密度接种分别于第15天、第18天和第21天上下侧碱性磷酸酶活性的比值都能达到10倍以上,第29天开始降低。高、中、低密度接种分别于第9天、第12天和第15天酚红透过率小于0.5%。综合以上3项指标,高密度接种细胞在第15天、中密度接种细胞在第18天、低密度接种细胞在第21天开始,可以用于吸收和转运试验,27 d以后细胞活力就开始下降,不适合做细胞模型。 展开更多

关键词 CACO-2细胞 跨膜电阻(teer) 碱性磷酸酶(ALP) 酚红

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Caco-2细胞单层模型的建立与验证 被引量：34

4

作者 孙敏捷 盛星 胡一桥 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第18期1431-1434,共4页

目的研究建立Caco-2细胞模型的方法,并确认Caco-2细胞模型的正常生长特性,以在日常培养中进行监控。方法常规培养条件下,Caco-2细胞以每1 mL含8×104个的接种密度接种于Millicell插入式培养皿中,培养21 d后用光镜、电镜、细胞密度... 目的研究建立Caco-2细胞模型的方法,并确认Caco-2细胞模型的正常生长特性,以在日常培养中进行监控。方法常规培养条件下,Caco-2细胞以每1 mL含8×104个的接种密度接种于Millicell插入式培养皿中,培养21 d后用光镜、电镜、细胞密度测定等方法检查细胞的形态学及生长特点,测定碱性磷酸酶活性、跨膜电阻、荧光素钠透过量以检验细胞单层的极化现象和致密程度。结果Caco-2细胞单层在生长10 d以后均匀、致密,21 d后微绒毛、碱性磷酸酶、紧密连接等呈不对称分布,跨膜电阻达到600Ω.cm2,荧光素钠透过量为4.16μg.h-1.cm-2,而同样条件下空白膜的透过量大于240μg.h-1.cm-2。结论本培养条件下,Caco-2细胞单层形态与小肠上皮细胞类似,跨膜电阻、标志物透过量均达到要求,可以作为研究小肠药物转运过程的体外模型。 展开更多

关键词 CACO-2细胞 转运 跨膜电阻 渗透性

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Caco-2细胞模型的建立及其在中药吸收研究中的应用探讨 被引量：23

5

作者 曾宝 王春玲 +3 位作者 吴安国 李生梅 江瑞荣 赖小平 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期570-573,共4页

目的建立Caco-2细胞模型并探讨其在中药吸收研究中的应用。方法通过显微镜观察细胞形态学特点、测定跨细胞膜电阻和荧光黄通透量等指标,对Caco-2细胞模型进行评价。结果各项指标的测定值符合要求,本实验建立的Caco-2细胞模型的完整性、... 目的建立Caco-2细胞模型并探讨其在中药吸收研究中的应用。方法通过显微镜观察细胞形态学特点、测定跨细胞膜电阻和荧光黄通透量等指标,对Caco-2细胞模型进行评价。结果各项指标的测定值符合要求,本实验建立的Caco-2细胞模型的完整性、紧密性和通透性良好。结论建立的Caco-2细胞模型可用于研究中药化学成分转运的吸收机制;高灵敏度分析仪器可以促进Caco-2细胞模型在中药化学成分吸收研究中最大限度的应用;通过两个或多个中药化学成分相互作用的研究,可以阐明中药配伍和中药复方应用的科学性。 展开更多

关键词 CACO-2细胞模型 跨膜电阻 中药吸收

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Caco-2细胞体外吸收模型的建立及评估 被引量：7

6

作者 查龙应 罗海吉 +1 位作者 邓红 楚心唯 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期548-550,共3页

目的建立Caco-2细胞体外吸收模型并对其进行评估。方法将细胞接种在Snapwell转运培养槽的微孔滤膜上,进行体外培养。采用细胞形态学、跨膜电阻值、甘露醇透过率和碱性磷酸酶活性等指标对细胞模型进行检测。结果培养21d后,细胞间形成紧... 目的建立Caco-2细胞体外吸收模型并对其进行评估。方法将细胞接种在Snapwell转运培养槽的微孔滤膜上,进行体外培养。采用细胞形态学、跨膜电阻值、甘露醇透过率和碱性磷酸酶活性等指标对细胞模型进行检测。结果培养21d后,细胞间形成紧密连接;跨膜电阻值达到恒定值,为(620±47)Ω·cm2;甘露醇透过率低于0.3%h-1·cm-2;肠腔侧碱性磷酸酶活性显著高于基底侧酶活性。结论在本实验室条件下构建的Caco-2细胞模型在形态上与小肠上皮细胞相似,细胞已产生极性,可作为小肠吸收的体外模型。 展开更多

关键词 CACO-2细胞 吸收 跨膜电阻 甘露醇透过率 碱性磷酸酶

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大鼠前列腺上皮细胞体外培养及其屏障功能的初步研究 被引量：8

7

作者 崔栋 尚永刚 +2 位作者 韩广玮 刘城城 易善红 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期133-137,共5页

目的:体外培养大鼠前列腺上皮细胞,并观察其屏障功能。方法:体外培养大鼠前列腺上皮细胞,采用免疫组化观察腺上皮细胞之间紧密连接蛋白claudin-1的表达,光镜以及电镜观察大鼠前列腺上皮细胞的结构组成。采用跨膜电阻测量仪检测前列腺上... 目的:体外培养大鼠前列腺上皮细胞,并观察其屏障功能。方法:体外培养大鼠前列腺上皮细胞,采用免疫组化观察腺上皮细胞之间紧密连接蛋白claudin-1的表达,光镜以及电镜观察大鼠前列腺上皮细胞的结构组成。采用跨膜电阻测量仪检测前列腺上皮细胞的跨膜电阻,采用酚红渗漏实验检测前列腺上皮细胞的通透性。结果:大鼠前列腺上皮细胞在体外培养可以形成紧密的单层细胞结构,紧密连接蛋白在相邻的腺上皮细胞之间表达,透射电镜结果显示相邻的单层腺上皮细胞之间存在紧密连接。体外培养的大鼠前列腺上皮细胞跨膜电阻在培养第8天可以达到(201.3±3.5)Ω/cm2,酚红渗漏实验显示随着细胞单层跨膜电阻的增加,基底侧的酚红浓度减低。结论:大鼠前列腺上皮细胞具有与脑毛细血管内皮细胞、肠上皮细胞等具有屏障功能的细胞相似的结构和功能,体外培养的大鼠前列腺上皮细胞具有屏障特性,可以作为血前列腺屏障研究的体外模型。 展开更多

关键词 血前列腺屏障 前列腺上皮细胞 跨膜电阻 大鼠

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前列腺毛细血管内皮细胞屏障功能研究 被引量：5

8

作者 崔栋 尚永刚 +3 位作者 韩广玮 刘城城 李龙坤 易善红 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期385-389,共5页

目的 分离培养大鼠前列腺毛细血管内皮细胞,体外研究大鼠前列腺毛细血管内皮细胞的屏障功能。方法 采用细胞生长特性选择法分离培养大鼠前列腺毛细血管内皮细胞,用第Ⅷ因子相关抗原抗体对分离培养的前列腺毛细血管内皮细胞进行免疫学鉴... 目的 分离培养大鼠前列腺毛细血管内皮细胞,体外研究大鼠前列腺毛细血管内皮细胞的屏障功能。方法 采用细胞生长特性选择法分离培养大鼠前列腺毛细血管内皮细胞,用第Ⅷ因子相关抗原抗体对分离培养的前列腺毛细血管内皮细胞进行免疫学鉴定。免疫组化观察毛细血管内皮细胞之间紧密连接蛋白claudin-1的表达,采用跨膜电阻测量仪检测毛细血管内皮细胞的跨膜电阻,用酚红渗漏实验检测其通透性,以大鼠肺毛细血管内皮细胞、脑毛细血管内皮细胞作为阴性与阳性对照。结果 成功分离大鼠前列腺毛细血管内皮细胞,体外培养可以形成紧密的单层细胞结构,呈铺路石样生长。第Ⅷ因子相关抗原抗体的免疫荧光结果显示：分离培养的大鼠前列腺毛细血管内皮细胞胞浆表达绿色荧光,提示分离的细胞为毛细血管内皮细胞;免疫组化结果显示紧密连接蛋白claudin-1在相邻的毛细血管内皮细胞之间表达;体外培养的大鼠前列腺毛细血管内皮细胞,阴性对照组肺毛细血管内皮细胞,阳性对照组脑毛细血管内皮细胞的跨膜电阻峰值分别可以达到（142.2±3.1）、（43.3±3.5）、（248.2±6.2）Ω/cm2,并稳定保持2-3 d,三者比较差异有统计学意义（P〈0.05）。酚红渗漏实验结果显示前列腺毛细血管内皮细胞、阳性对照组脑毛细血管内皮细胞随着细胞单层跨膜电阻的增加,基底侧的酚红浓度减低,阴性对照组肺毛细血管内皮细胞酚红渗透量随跨膜电阻的改变变化趋势不明显。结论 大鼠前列腺毛细血管内皮细胞与脑毛细血管内皮细胞等屏障内皮相比拥有相似的结构功能,体外培养的大鼠前列腺毛细血管内皮细胞具有屏障特性,可以作为血前列腺屏障研究的体外模型。 展开更多

关键词 前列腺 毛细血管内皮细胞 血前列腺屏障 跨膜电阻

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Caco-2细胞单层模型的建立及其评估 被引量：8

9

作者 孙旭 罗余萍 《药品评价》 CAS 2015年第14期33-35,39,共4页

目的:建立完整的Caco-2细胞单层模型,以利于药物转运的研究。方法:通过测量细胞生长过程中跨膜电阻(TEER)值和碱性磷酸酶活性,评估Caco-2细胞单层模型是否建立成功。结果:细胞接种到Transwell板后的第7天,TEER值就已达到209.75Ω·c... 目的:建立完整的Caco-2细胞单层模型,以利于药物转运的研究。方法:通过测量细胞生长过程中跨膜电阻(TEER)值和碱性磷酸酶活性,评估Caco-2细胞单层模型是否建立成功。结果:细胞接种到Transwell板后的第7天,TEER值就已达到209.75Ω·cm2,第10天后,几乎成线性上升,直到第22天到达一个稳定值627Ω·cm2;细胞生长的第3天,磷酸酶活性非常低,第15天时磷酸酶活性比较高。到了第22天时,磷酸酶活性进一步增加,AP/BL为第15天时的2倍。结论:建立的Caco-2细胞单层模型致密且完整,检测细胞生长过程中TEER值和碱性磷酸酶活性,可用于评估Caco-2细胞单层模型建立成功。 展开更多

关键词 CACO-2细胞单层模型 跨膜电阻(teer)值 碱性磷酸酶

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Caco-2细胞单层模型的建立和评估 被引量：11

10

作者 毛小琴 贾雄飞 《四川医学》 CAS 2013年第1期7-10,共4页

目的建立Caco-2细胞单层的培养和模型评价的方法,为后续研究普萘洛尔(propranolo)对映异构体转运动力学特征奠定基础。方法常规培养条件下,将Caco-2细胞分别以2.5×105、5.5×105cells/ml分别接种于Transwell的聚碳酸脂膜上(0.4... 目的建立Caco-2细胞单层的培养和模型评价的方法,为后续研究普萘洛尔(propranolo)对映异构体转运动力学特征奠定基础。方法常规培养条件下,将Caco-2细胞分别以2.5×105、5.5×105cells/ml分别接种于Transwell的聚碳酸脂膜上(0.4ml/well),在培养10d、15d和21d后,以细胞单层跨膜电阻(Transepithelial electrical resistance,TEER)、标志物的表观通透系数(The apparent permeability coefficients,Papp)初步评价Caco-2细胞单层模型的完整性,以扫描电镜和透射电镜验证模型的完整性,以期确定建模时的细胞接种密度和培养时间;检测细胞单层模型在HBSS液和不同浓度的普萘洛尔溶液中培养不同时间时的TEER值,以评价单层模型的稳定性。结果以5.5×105cells/ml接种21d后,TEER>200Ω*cm2、Papp<1.0×10-6cm/s,形态学观察可见细胞融合形成连续、完整的单细胞层,细胞表面覆盖一层刷状缘微绒毛;细胞单层模型在HBSS液和盐酸普萘洛尔药液(≤640mmol/L)中孵育8h后TEER>200Ω*cm2。结论以5.5×105cells/ml为细胞接种密度且培养至21d后,Caco-2细胞单层形态与小肠上皮细胞类似,跨膜电阻、标志物透过量均达到要求,具有良好的完整性,而且细胞单层的完整性在HBSS液和盐酸普萘洛尔药液(≤640mmol/L)中可稳定8h,表明该细胞模型建立成功,可用于后续普萘洛尔对映异构体药物吸收动力学研究。 展开更多

关键词 人结肠癌细胞 转运 跨膜电阻 渗透性

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肠上皮细胞紧密连接模型的建立与验证 被引量：1

11

作者 陈婷 张娇 +3 位作者 王晓鸽 康楠 王凤云 唐旭东 《山东医药》 CAS 2022年第35期1-4,共4页

目的 体外分化Caco-2细胞建立肠上皮细胞紧密连接模型,并对其进行综合评价。方法 将融合至90%的Caco-2细胞以8×104/孔接种于Transwell 24孔培养板上,每孔基底侧加入MEM培养基600μL,顶侧加入细胞悬液100μL;接种后第1周隔日更换培... 目的 体外分化Caco-2细胞建立肠上皮细胞紧密连接模型,并对其进行综合评价。方法 将融合至90%的Caco-2细胞以8×104/孔接种于Transwell 24孔培养板上,每孔基底侧加入MEM培养基600μL,顶侧加入细胞悬液100μL;接种后第1周隔日更换培养液,第2周起每日更换培养液,直至培养第21天。细胞培养第3、5、7、15、19、21天,使用细胞电阻仪测定跨膜电阻(TER);细胞培养第5、15、21天,取细胞单层顶侧与基底侧培养基并检测其碱性磷酸酶(ALP)活力,计算顶侧与基底侧ALP活力比;取体外分化培养21天的Caco-2细胞,使用多功能酶标仪检测大分子物质荧光黄(FD-4)通过单层细胞的百分率(即FD-4通透率)及跨膜转运表观渗透系数(Papp),透射电镜下观察细胞形态。结果 Caco-2细胞体外分化培养第3、5、7、15天的TER均明显低于第19、21天(P均<0.05),Caco-2细胞体外分化培养第19和21天TER比较无统计学差异(P>0.05)。Caco-2细胞体外分化培养第5、15、21天顶侧与基底侧ALP活力比分别为1.43±0.16、2.43±0.28、4.85±0.25,Caco-2细胞体外分化培养第5、15天顶侧与基底侧ALP活力比均明显低于第21天(P均<0.05)。体外分化培养第21天的Caco-2细胞FD-4通透率为2.31%±1.12%,Papp为(1.95±0.90)×10^(-7)cm/s。透射电镜观察结果显示,体外分化培养第21天的Caco-2细胞由微绒毛形成的刷状缘排列整齐致密;细胞顶侧面分化出完整的紧密连接结构,表现为连续的融合点,呈“焊接线”样围绕在细胞膜的顶部,相邻细胞膜被“焊接”在一起,形成绳索样结构。结论 Caco-2细胞在Transwell板体外分化21天后可形成肠上皮细胞紧密连接结构,证实成功构建肠上皮细胞紧密连接模型。 展开更多

关键词 细胞紧密连接 肠上皮细胞 跨膜电阻 碱性磷酸酶 荧光黄通透率

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肉鸡鸡胚十二指肠上皮细胞的体外分离、鉴定及其原代培养吸收模型的构建与评估 被引量：3

12

作者 张树敏 廖秀冬 +2 位作者 吕林 张丽阳 罗绪刚 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期3159-3167,共9页

本试验旨在评估十二指肠上皮细胞不同接种密度对细胞紧密连接性及细胞活力的影响,为建立肉鸡鸡胚体外原代培养十二指肠上皮细胞吸收模型选择最佳的细胞接种密度。试验采用单因子完全随机试验设计,共设3个组,Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组肉鸡鸡胚十... 本试验旨在评估十二指肠上皮细胞不同接种密度对细胞紧密连接性及细胞活力的影响,为建立肉鸡鸡胚体外原代培养十二指肠上皮细胞吸收模型选择最佳的细胞接种密度。试验采用单因子完全随机试验设计,共设3个组,Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组肉鸡鸡胚十二指肠上皮细胞接种密度分别为2.90×10~6、6.25×10~6、8.75×10~6个/m L,每个组6个重复,共培养4 d。结果表明:1)刚分离的十二指肠上皮细胞团呈球形,且细胞团的大小均一,悬浮于培养液中,贴壁后细胞团开始向外伸展,逐渐铺成片,细胞之间界限清晰、贴壁均匀,呈单层"铺路石样"生长。2)经碱性磷酸酶染色,阳性试验组的十二指肠上皮细胞胞浆被染成了蓝黑色,阴性对照组的十二指肠上皮细胞不着色。3)在细胞培养的48和72 h,Ⅰ组和Ⅱ组细胞的跨膜电阻(TEER)值均满足大于300Ω·cm2的试验要求,酚红透过率均满足小于5%的试验要求,并且Ⅰ组细胞的TEER值显著高于Ⅱ组(P<0.05),细胞酚红透过率显著低于Ⅱ组(P>0.05)。4)在细胞培养的24和48 h,Ⅰ组细胞培养液中的乳酸脱氢酶(LDH)活力均显著低于Ⅱ组和Ⅲ组(P<0.05)。以上结果表明,细胞接种密度为2.90×10~6个/m L,培养时间为48 h时,细胞间界限清晰、生长状态良好、紧密连接性强,细胞活力最佳,说明原代培养肉鸡鸡胚十二指肠上皮细胞物质吸收模型构建成功,可为后续十二指肠上皮细胞的吸收规律及其分子机制的研究提供了良好的试验模型。 展开更多

关键词 十二指肠上皮细胞 原代培养 细胞分离 跨膜电阻

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Caco-2细胞不同接种密度的模型评价 被引量：3

13

作者 贾晓燕 赵秀丽 魏敏吉 《中国医药导刊》 2010年第2期289-290,共2页

目的:观察不同的细胞接种量在不同时间对细胞模型评价指标的影响。方法:细胞采用的Transwell板接种培养21天并采用TEER(transepithelial electrical resistance)测定和酚红透过率来评价细胞模型完整性和通透性,考察不同细胞接种量在不... 目的:观察不同的细胞接种量在不同时间对细胞模型评价指标的影响。方法:细胞采用的Transwell板接种培养21天并采用TEER(transepithelial electrical resistance)测定和酚红透过率来评价细胞模型完整性和通透性,考察不同细胞接种量在不同时间对细胞单层完整性的影响。结果:不同细胞接种量在生长第16天酚红透过率均明显降低,21天透过率均小于0.5%,TEER在21天达到>300Ω/cm^2。结论:建立的细胞模型完整性,通透性符合药物吸收转运试验要求,培养条件应随细胞状态和接种密度做出调整。 展开更多

关键词 Caco2 细胞培养 跨膜电阻 酚红

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Caco-2细胞体外吸收模型的建立及评估 被引量：7

14

作者 帕丽达.阿不力孜 丛媛媛 +1 位作者 米仁沙.牙库甫 王勇 《亚太传统医药》 2011年第4期6-8,共3页

目的:建立Caco-2细胞体外吸收模型并对其进行评估。方法:将细胞接种在Transwel转运培养槽的微孔滤膜上,进行体外培养。采用细胞形态学、跨膜电阻值(TEER)和表观渗透系数(Papp)及碱性磷酸酶活性等指标对细胞模型进行检测。结果:培养21d后... 目的:建立Caco-2细胞体外吸收模型并对其进行评估。方法:将细胞接种在Transwel转运培养槽的微孔滤膜上,进行体外培养。采用细胞形态学、跨膜电阻值(TEER)和表观渗透系数(Papp)及碱性磷酸酶活性等指标对细胞模型进行检测。结果:培养21d后,细胞间形成紧密连接,跨膜电阻值达到恒定值,为500Ω/cm2,表观渗透系数低于0.5×10-6cm/s;肠腔侧碱性磷酸酶活性显著高于基底侧酶活性。结论:在本实验室条件下构建的Caco-2细胞模型在形态上与小肠上皮细胞相似,细胞已产生极性,可作为小肠吸收的体外模型。 展开更多

关键词 CACO-2细胞 吸收 跨膜电阻 表观渗透系数 碱性磷酸酶

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重组艰难梭状芽孢杆菌毒素TcdB对人体肠上皮细胞层功能的影响

15

作者 张雍容 李杉 +3 位作者 杨忠 王菊芳 冯汉平 王小宁 《华东理工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期161-166,共6页

利用Transwell小室体外建立人结肠细胞T84上皮细胞层,分析不同质量浓度重组艰难梭状芽孢杆菌毒素TcdB(1 000、100、10ng/mL)对上皮细胞层跨膜电阻(TER)的影响;通过免疫荧光染色分析TcdB对上皮细胞层结构的影响;运用荧光标记葡聚糖作为... 利用Transwell小室体外建立人结肠细胞T84上皮细胞层,分析不同质量浓度重组艰难梭状芽孢杆菌毒素TcdB(1 000、100、10ng/mL)对上皮细胞层跨膜电阻(TER)的影响;通过免疫荧光染色分析TcdB对上皮细胞层结构的影响;运用荧光标记葡聚糖作为指示剂,检测毒素作用后上皮细胞层的旁通路渗透情况;通过细胞毒性分析,检测上皮细胞层功能受损情况下,TcdB的跨膜渗透。结果发现:重组艰难梭状芽孢杆菌毒素TcdB能引起剂量依赖性单层上皮组织跨膜电阻降低和渗透性增加,在24h内质量浓度为1 000、100、10ng/mL的TcdB能导致上皮细胞层分别丧失100%、70%、50%电阻力,同时分别引起30%、20%、10%的葡聚糖渗透;上皮细胞层受损后,大分子毒素通过旁通路的非正常跨膜渗透也增加。共聚焦分析显示上皮细胞层的细胞间紧密连接结构受损。综上所述,艰难梭状芽孢杆菌毒素TcdB介导的体外培养人T84肠上皮细胞层功能损伤主要表现为电生理学功能异常,旁通路渗透性增加,细胞间紧密连接结构破坏。 展开更多

关键词 艰难梭状芽孢杆菌 毒素TcdB 上皮细胞层 跨膜电阻 渗透性

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Caco-2细胞体外吸收模型的建立及验证 被引量：17

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作者 吕晓君 曹易丹 何开勇 《医药导报》 CAS 北大核心 2018年第11期1311-1315,共5页

目的建立Caco-2细胞体外吸收模型并对其进行验证,以利于药物吸收转运的研究。方法 Caco-2细胞接种于Transwell 24孔微孔滤膜培养板上,培养3,6,9,12,15,18,21 d,通过观察细胞形态、绘制生长曲线、测定跨膜电阻值(TEER),比较低、中、高细... 目的建立Caco-2细胞体外吸收模型并对其进行验证,以利于药物吸收转运的研究。方法 Caco-2细胞接种于Transwell 24孔微孔滤膜培养板上,培养3,6,9,12,15,18,21 d,通过观察细胞形态、绘制生长曲线、测定跨膜电阻值(TEER),比较低、中、高细胞浓度(5×10~4,1×10~5,2×10~5·mL^(-1))对细胞单层完整性的影响,以确定细胞接种密度和培养时间;通过测定荧光黄的跨膜通透性、细胞膜顶侧(AP)、基底侧(BL)及细胞内的碱性磷酸酶活性验证细胞单层通透性和极性分化特征。结果低、中、高浓度细胞接种后分别在15,12,9 d形成单层膜结构,吸光度达高峰,但生长后期高、中浓度组细胞出现成团、死亡,且TEER值小于低浓度组。低浓度细胞接种15 d TEER值达到300Ω·cm^2,15～21 d基本稳定;选择低浓度(5×10~4·mL^(-1))为合适的浓度接种细胞,培养21 d后,荧光黄的表观渗透系数(Papp)为3.57×10^(-7)cm·s^(-1),低于通透实验规定的5.0×10^(-7)cm·s^(-1);细胞内碱性磷酸酶活性增加,膜两侧碱性磷酸酶活性比值(AP/BL)增高5倍多,细胞形成极性分化。结论所建立的Caco-2细胞模型完整性、通透性与极性分化特征通过验证,可作为模拟小肠药物转运过程的体外模型。 展开更多

关键词 CACO-2细胞 吸收 体外 跨膜电阻值 碱性磷酸酶 渗透性

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丁酸对哺乳期大鼠肠黏膜屏障发育的作用 被引量：1

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作者 王克 郭世坤 +4 位作者 张鹏杰 林丰 杨杨 李仲荣 朱利斌 《中华小儿外科杂志》 CSCD 北大核心 2019年第3期258-262,共5页

目的探讨丁酸对SD大鼠肠黏膜屏障的作用情况,为防治坏死性小肠结肠炎等肠道疾病提供实验依据。方法以生后7d(P7)的SD新生鼠为实验对象,采用随机数字表法,选取实验组(12只)、生理盐水对照组(8只)和空白对照组(8只)大鼠。实验组给予丁酸,... 目的探讨丁酸对SD大鼠肠黏膜屏障的作用情况,为防治坏死性小肠结肠炎等肠道疾病提供实验依据。方法以生后7d(P7)的SD新生鼠为实验对象,采用随机数字表法,选取实验组(12只)、生理盐水对照组(8只)和空白对照组(8只)大鼠。实验组给予丁酸,生理盐水对照组给予生理盐水,连续灌胃早晚各1次;空白对照组不做任何处理。10d后取幼鼠近端结肠组织,利用尤氏灌注系统(Ussing Chamber)检测肠黏膜跨上皮电阻(transepithelial electrical resistance,TER)值;WesternBlot检测紧密连接蛋白ZO-1、Occludin及Claudin-1的表达情况;免疫组织化学法检测近端结肠组织ZO-1和Occludin的表达及分布情况(OD值)。结果尤氏灌注系统发现丁酸组在0、30、60、90、120min的TER值分别为(70.65±5.03)Ω·cm^2、(72.40±5.58)Ω·cm^2、(68.84±5.02)Ω·cm^2、(64.64±4.64)Ω·cm^2和(58.95±6.23)Ω·cm^2,生理盐水对照组分别为(63.56±4.28)Ω·cm^2、(59.31±4.07)Ω·cm^2、(51.73±4.42)Ω·cm^2、(45.28±5.18)Ω·cm^2和(42.09±4.06)Ω·cm^2,空白对照组分别为(59.99±4.21)Ω·cm^2、(56.64±3.71)Ω·cm^2、(51.53±4.00)Ω·cm^2、(48.01±7.40)Ω·cm^2和(45.41±10.00)Ω·cm^2。丁酸组各时间点TER值与生理盐水对照组及空白对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.001);生理盐水对照组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。丁酸组紧密连接(TJ)蛋白Occludin及Claudin-1的表达(1.03±0.05、2.02±0.21)较生理盐水对照组(0.74±0.08、1.06±0.09)及空白对照组(0.73±0.05、1.04±0.06)增加,且组间比较,差异均有统计学意义(P<0.001);而生理盐水对照组与空白对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。组织学免疫组织化学检测发现丁酸组肠上皮细胞间ZO-1及Occludin的表达(0.22±0.04、0.26±0.04)较生理盐水对照组(0.16±0.02、0.21±0.02)及空白对照组明显增加(0.16±0.01、0.21±0.02),且组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05);而生理盐水对照组与空白对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论在哺乳期肠黏膜屏障模型中,丁酸增加紧密连接蛋白的表达,能较快促进肠黏膜组织结构与功能发育成熟。 展开更多

关键词 丁酸 肠黏膜屏障 紧密连接 尤氏灌注系统 跨膜电阻

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冰片对葛根素透过体外模拟血脑屏障的影响 被引量：11

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作者 杨乐 吴军勇 +1 位作者 胡雄彬 向大雄 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2017年第16期3408-3411,共4页

目的运用小鼠脑微血管内皮细胞(b End.3)制备血脑屏障(BBB)模型,探讨冰片对葛根素透过BBB的影响并初步探讨冰片促进BBB开放的主要途径。方法 MTT实验考察不同浓度冰片和葛根素对b End.3细胞的毒性作用,筛选实验药物浓度。应用BBB体外模... 目的运用小鼠脑微血管内皮细胞(b End.3)制备血脑屏障(BBB)模型,探讨冰片对葛根素透过BBB的影响并初步探讨冰片促进BBB开放的主要途径。方法 MTT实验考察不同浓度冰片和葛根素对b End.3细胞的毒性作用,筛选实验药物浓度。应用BBB体外模型,以跨内皮细胞间电阻作为紧密连接程度的主要反应指标,观察冰片对其紧密连接的开放有无直接影响以及冰片对葛根素跨BBB转运的影响。结果经MTT实验确定冰片和葛根素的实验药物浓度均为50μmol/L。各组给药前与给药24 h后跨膜电阻(TEER)未见明显改变,葛根素组、冰片+葛根素组透过率分别为(59.96±5.90)%和(106.80±2.73)%,差异显著(P<0.05)。结论冰片联合葛根素用药可以一定程度上促进葛根素透过BBB,但其开窍机制还需通过细胞的相关紧密连接蛋白水平和腺苷受体信号通路进一步探讨。 展开更多

关键词 冰片 葛根素 血脑屏障 透过率 跨膜电阻

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肠上皮细胞模型不同培养条件的优化及适应性研究 被引量：7

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作者 马博 孙桂波 +2 位作者 杨志宏 李明 孙晓波 《中国实验方剂学杂志》 CAS 北大核心 2011年第11期205-210,共6页

目的:建立肠上皮(Caco-2)细胞单层模型,探讨不同培养条件对细胞单层模型的影响,优化适宜的条件,提供稳定、重复性好的Caco-2细胞模型。方法:将细胞接种Transwell培养板上进行体外培养,并比较3种Transwell培养板及包被鼠尾胶原蛋白对细... 目的:建立肠上皮(Caco-2)细胞单层模型,探讨不同培养条件对细胞单层模型的影响,优化适宜的条件,提供稳定、重复性好的Caco-2细胞模型。方法:将细胞接种Transwell培养板上进行体外培养,并比较3种Transwell培养板及包被鼠尾胶原蛋白对细胞单层的影响,通过透射电镜和倒置显微镜观察细胞单层的形态学特征,通过测定细胞单层的电阻值、细胞两侧碱性磷酸酶含量、荧光素钠的透过量验证细胞单层的完整性、极性、通透性。结果:经过21 d培养,24孔Transwell培养的细胞单层的完整性、极性高于12孔Transwell培养的细胞单层,而透过性低于12孔Transwell培养的细胞单层;包被鼠尾胶原蛋白的Transwell于细胞单层生长前期跨上皮细胞电阻值(transepithelium electrical resistance,TEER)迅速升高,对细胞单层生长的中后期无显著性影响。结论:3种Transwell均可成功培养Caco-2细胞单层,24孔站立式Transwell适用于样品需求量少、检测灵敏度高的物质,可应用于大量样品的高通量筛选;12孔悬挂式Transwell提供检测的样品量和透过率较大,适于实验室的常规操作和常用仪器的样品需求。 展开更多

关键词 CACO-2细胞 跨膜电阻 碱性磷酸酶 表观渗透率

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鼠尾胶原对Caco-2细胞模型建立的影响 被引量：5

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作者 鄢良春 刘青春 +1 位作者 赵军宁 毕岳琦 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期155-157,共3页

目的:研究鼠尾胶原对Caco-2细胞模型建立的影响,探讨适宜于Caco-2细胞模型建立的鼠尾胶原浓度。方法:将培养皿铺以750,250,50μg/ml三个浓度鼠尾胶原,各组接种相同数量的Caco-2细胞,培养21天,观察各组的细胞形态、跨膜电阻值和荧光素钠... 目的:研究鼠尾胶原对Caco-2细胞模型建立的影响,探讨适宜于Caco-2细胞模型建立的鼠尾胶原浓度。方法:将培养皿铺以750,250,50μg/ml三个浓度鼠尾胶原,各组接种相同数量的Caco-2细胞,培养21天,观察各组的细胞形态、跨膜电阻值和荧光素钠透过率的差异。结果:各组细胞在形态上没有差异,低浓度的鼠尾胶原能提高Caco-2细胞单层的跨膜电阻值,降低荧光素钠透过率(P<0.05)。结论:低浓度的鼠尾胶原可以增加Caco-2细胞的贴壁性,提高Caco-2细胞模型建立的成功率。 展开更多

关键词 鼠尾胶原 CACO-2细胞 跨膜电阻

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