PTD-GFP融合蛋白的纯化及其转导效率测定 被引量：4

1

作者 徐艳玲 岳玉环 +6 位作者 张国利 吴广谋 田园 张培培 付玉和 赵鑫 侯天全 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第1期25-28,257,共5页

为了纯化PTD-GFP融合蛋白,测定融合蛋白转导效率,研究融合蛋白在He La细胞中的转导效率与浓度的关系,试验诱导表达军事兽医研究所六室保存的含有p ET-20b-PTD-GFP重组质粒的BL21表达菌,超声破碎,取上清液通过多个层析介质得到高纯度融... 为了纯化PTD-GFP融合蛋白,测定融合蛋白转导效率,研究融合蛋白在He La细胞中的转导效率与浓度的关系,试验诱导表达军事兽医研究所六室保存的含有p ET-20b-PTD-GFP重组质粒的BL21表达菌,超声破碎,取上清液通过多个层析介质得到高纯度融合蛋白,将纯化的蛋白加入到体外培养的He La细胞中,在荧光显微镜下观察PTD-GFP的转导情况,用InfiniteF500多功能酶标仪检测荧光强度,分析融合蛋白浓度对转导效率的影响。结果表明:纯化的重组蛋白纯度达到90%。原浓度蛋白和1/2原蛋白浓度24 h后转导效率都达到100%。通过统计学软件得到转导效率与PTD-GFP融合蛋白浓度之间的线性关系,回归系数为0.151 456,相关系数为0.954。说明融合蛋白纯度较高,其转导效率对蛋白浓度具有依赖性,在一定浓度范围内随着浓度增加转导效率增加。 展开更多

关键词 蛋白转导域(PTD) 绿色荧光蛋白(GFP) 融合蛋白 纯化 转导效率

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提高重组型腺相关病毒转导效率的研究现状 被引量：3

2

作者 殷子斐 王丽娜 +1 位作者 王园 凌晨 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期49-59,共11页

重组型腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,r AAV)载体是目前基因治疗研究中常用的、非常有前景的载体之一。欧洲第一个批准上市的基因治疗药物正是基于r AAV。然而,r AAV的转导效率相对有限,导致其治疗成本过高;且过高剂量... 重组型腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,r AAV)载体是目前基因治疗研究中常用的、非常有前景的载体之一。欧洲第一个批准上市的基因治疗药物正是基于r AAV。然而,r AAV的转导效率相对有限,导致其治疗成本过高;且过高剂量的r AAV可以激发人体的免疫反应,降低其疗效。因此,如何提高r AAV的转导效率一直是基因治疗领域研究的热点之一。目前常用的提高r AAV转导效率的方法有:使用组织特异性强的血清型/变体、应用蛋白酶体抑制剂、突变衣壳蛋白表面裸露氨基酸、增加单链DNA的第二链合成、构建自身互补型双链载体等。就这些方法各自的原理、应用现状及优劣势进行系统地综述。 展开更多

关键词 重组腺相关病毒载体 基因治疗 转导效率

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绿色荧光蛋白基因在白血病细胞K562中的转导效率

3

作者 白元松 孙延霞 +1 位作者 刁建东 卢振霞 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期135-137,F0003,共4页

目的:探讨慢病毒载体在白血病细胞中的基因转导效率,为白血病基因治疗提供关键依据。方法:应用1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)改造而成的第3代自身失活(SIN)慢病毒载体(lentiviral vector)系统,与鼠白血病病毒(MLV)SIN载体进行比较,通过荧... 目的:探讨慢病毒载体在白血病细胞中的基因转导效率,为白血病基因治疗提供关键依据。方法:应用1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)改造而成的第3代自身失活(SIN)慢病毒载体(lentiviral vector)系统,与鼠白血病病毒(MLV)SIN载体进行比较,通过荧光显微镜观察细胞内标记基因绿色荧光蛋白(GFP)的表达情况,应用流式细胞术检测基因导入细胞百分比,评价两种载体系统在人白血病细胞系K562中的基因转导效率。结果:通过荧光显微镜可定性观察GFP在K562细胞中的表达情况,在同样的基因转导条件下,HIV载体转导的白血病细胞中被转导的标记基因GFP的表达强度及GFP阳性细胞数明显高于MLV载体转导的细胞。流式细胞仪定量检测HIV载体的转导效率接近100%,而MLV低于40%,两组间转导效率比较差异有显著性(P<0.05)。结论:基于慢病毒载体基因转导的高效性,该载体系统可作为白血病细胞基因转导的极好工具。 展开更多

关键词 白血病 绿色荧光蛋白 慢病毒载体 基因转导效率

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提高造血干/祖细胞基因转导效率的研究进展

4

作者 谯建 唐良萏 《重庆医学》 CAS CSCD 2003年第1期119-121,共3页

关键词 造血干/祖细胞 基因转导效率 基因转导 研究进展 替换性基因转导

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1型及2型腺相关病毒对视网膜细胞转导效率的比较研究 被引量：4

5

作者 吴继红 张圣海 +4 位作者 刘焰 陈霞芳 徐萍 吴小兵 黄倩 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第40期2841-2846,共6页

目的探讨不同血清型的重组腺相关病毒(rAAV)对视网膜细胞的转导效率、基因表达水平以及感染细胞类型的差异,为眼底病基因治疗选择适当的载体提供实验依据。方法采用携带绿色荧光蛋白报告基因的血清型1型(rAAV2/1-EGFP)和2型(rAAV2-EGFP)... 目的探讨不同血清型的重组腺相关病毒(rAAV)对视网膜细胞的转导效率、基因表达水平以及感染细胞类型的差异,为眼底病基因治疗选择适当的载体提供实验依据。方法采用携带绿色荧光蛋白报告基因的血清型1型(rAAV2/1-EGFP)和2型(rAAV2-EGFP)rAAV感染体外培养的RPE细胞株、原代培养的SD大鼠视网膜神经细胞和原代培养的成人RPE细胞,通过荧光显微镜和流式细胞仪观察和检测EGFP荧光出现的时间、阳性率及荧光强度。分别将二种不同血清型的rAAV注射到SD大鼠视网膜下间隙,通过荧光体视镜观察眼底出现EGFP荧光的时间、范围、强度和分布特点等。最后通过眼组织切片和免疫组织化学染色观察被AAV感染的视网膜细胞的类型,以及是否有炎症反应和免疫反应。结果流式细胞仪检测rAAV2-EGFP转导体外培养的RPE细胞株后第7、14天时EGFP阳性率分别为13.5%±1.7%和15.6%±0.8%,平均亮度为2.75±0.12和3.80±0.72;rAAV2/1-EGFP转导RPE细胞株后第7和14天时EGFP阳性率分别为1.1%±0.5%和2.0%±0.4%,平均亮度为1.12±0.09和1.75±0.20。rAAV2-EGFP感染活体视网膜后7、14、28、75d和4个月时,视网膜内EGFP荧光面积分别为(5389±211)μm2、(9832±364)μm2、(14454±446)μm2、(20528±648)μm2和(20264±683)μm2;rAAV2/1-EGFP感染活体视网膜后在相同时间点测得EGFP荧光面积分别为(9666±348)μm2、(12160±439)μm2、(19794±621)μm2、(26172±923)μm2、(26022±965)μm2。每相同时间点的两组数据间差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论2型rAAV能有效转导体外培养的视网膜细胞和活体视网膜细胞;但在活体视网膜内1型rAAV是一种比2型AAV更为有效的基因传递载体。 展开更多

关键词 腺病毒科 视网膜 转导效率

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提高逆转录病毒介导的基因转导效率的研究

6

作者 朱明华 顾广玉 +1 位作者 戴益民 肖农 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 1999年第3期221-221,共1页

关键词 基因治疗 逆转录病毒 基因转导效率

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提高多药耐药基因导入人CD_(34)^+细胞转导效率的探讨

7

作者 童英 潘凌亚 +3 位作者 周生 吴英 毛宁 杨秀玉 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期234-236,共3页

目的　探讨逆转录病毒介导的多药耐药基因 (mdr1)导入人CD34+ 细胞的影响因素 ,以提高基因转导效率。方法　用流式细胞术 (FCM)检测不同组合细胞因子及人骨髓基质细胞 +细胞因子支持的基因转导效率 ;用造血祖细胞集落培养观察耐药性 ;用... 目的　探讨逆转录病毒介导的多药耐药基因 (mdr1)导入人CD34+ 细胞的影响因素 ,以提高基因转导效率。方法　用流式细胞术 (FCM)检测不同组合细胞因子及人骨髓基质细胞 +细胞因子支持的基因转导效率 ;用造血祖细胞集落培养观察耐药性 ;用FCM检测不同浓度紫杉醇素对基因转导细胞的作用。结果　细胞因子SCF +Flt配体 (FL) +IL 3组合支持的基因转导效率高于其它组合 (SCF+IL 6 +IL 3,SCF +IL 6 +IL 3+Tpo ,SCF +IL 3)。骨髓基质细胞 +细胞因子 (SCF +FL +IL 3)支持的基因转导效率 (2 0 .5 % )又高于单纯用该组细胞因子的转导效率 (15 .2 % ) ,并且前者形成的抗性集落形成细胞数多于后者。在 10ng ml紫杉醇作用下基因转导CD34+ 细胞的阳性率可达 38.5 %。结论　骨髓基质细胞 +细胞因子 (SCF +FL +IL 3)对基因转导有较强的促进作用 ; 展开更多

关键词 多药耐药基因导入 CD34^+ 细胞转导效率

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重组腺相关病毒对NK92细胞的转导条件优化

8

作者 沈晓丽 周群刚 +3 位作者 郑然 沈湘君 邱香 李泰明 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期115-121,共7页

为提高重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)对NK92细胞的转导效率,对转导细胞密度、培养基中IL-2浓度、rAAV血清型和用量进行优化;此外,用不同浓度的促进剂(ZnCl_(2)、氯喹、聚乙烯醇和金雀异黄酮)溶液处理细胞,... 为提高重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)对NK92细胞的转导效率,对转导细胞密度、培养基中IL-2浓度、rAAV血清型和用量进行优化;此外,用不同浓度的促进剂(ZnCl_(2)、氯喹、聚乙烯醇和金雀异黄酮)溶液处理细胞,以进一步提高病毒转导效率。结果表明,在细胞密度为5×10^(5)时,增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达效率相对较高;当培养基中IL-2的浓度为1000 IU/mL时,NK92的细胞生长状态最适合病毒转导;不同血清型rAAV对NK92细胞的转导效率由高到低依次为rAAV6、rAAV2和rAAV9;用金雀异黄酮预处理NK92细胞,能够显著提高病毒转导效率,而其他促进剂的添加对病毒转导效率无显著影响。通过上述条件的优化,显著提高了rAAV对NK92细胞的转导效率,为rAAV载体介导工程化NK92细胞奠定基础。 展开更多

关键词 NK92细胞 腺相关病毒 转导效率

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西多福韦促进2型重组腺相关病毒体外转导分析

9

作者 肖桂清 刁勇 +2 位作者 黄晓平 段训威 白如玉 《泉州师范学院学报》 2023年第2期35-40,共6页

为研究小分子药物西多福韦(CDV)对2型重组腺相关病毒(rAAV2)体外转导效率的影响,采用不同剂量CDV干预rAAV2-GFP和rAAV2-LacZ载体转导Hela细胞,从转基因表达量、阳性细胞数量、胞内病毒基因组数等方面研究CDV对rAAV2转导的影响.结果表明,... 为研究小分子药物西多福韦(CDV)对2型重组腺相关病毒(rAAV2)体外转导效率的影响,采用不同剂量CDV干预rAAV2-GFP和rAAV2-LacZ载体转导Hela细胞,从转基因表达量、阳性细胞数量、胞内病毒基因组数等方面研究CDV对rAAV2转导的影响.结果表明,CDV能促进rAAV2体外转导Hela细胞,转基因表达量、阳性细胞数、胞内病毒基因组数与对照组相比,差异具有统计学意义,且其促进作用呈现一定的剂量和时间依赖性. 展开更多

关键词 2型重组腺相关病毒 西多福韦 转导效率 增效剂

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不同重组病毒载体转染大鼠骨髓间充质干细胞的效率及其基因表达(英文)

10

作者 潘虹 刘新建 +6 位作者 吴继红 田毓华 谢匡成 陈霞芳 张圣海 黄倩 林志新 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2008年第34期6790-6794,共5页

背景:利用基因工程细胞进行替代治疗和基因治疗中合适的供体细胞、靶细胞以及相应载体是细胞和基因治疗最为困难的部分。目的:检测重组腺病毒Ad5和Ad5F35、腺相关病毒rAAV1/2和rAAV2、慢病毒LV对大鼠骨髓间充质干细胞的感染效率和外源... 背景:利用基因工程细胞进行替代治疗和基因治疗中合适的供体细胞、靶细胞以及相应载体是细胞和基因治疗最为困难的部分。目的:检测重组腺病毒Ad5和Ad5F35、腺相关病毒rAAV1/2和rAAV2、慢病毒LV对大鼠骨髓间充质干细胞的感染效率和外源基因表达水平,拟筛选能够高效转导骨髓间充质干细胞的载体。设计、时间及地点:细胞基因工程对照观察,于2006-10/2007-03在上海市第一人民医院中心实验室完成。材料:清洁级SD大鼠10只用于制备骨髓间充质干细胞。所有重组病毒均携带增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP)报告基因,Ad5由本实验室制备,Ad5F35由解放军第二军医大学钱其军教授惠赠,rAAV2及rAAV1/2为本元正阳基因技术有限公司产品,LV由中科院上海生化与细胞生物学研究所郭礼和教授惠赠。方法:采用淋巴细胞分离液密度梯度离心法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,传至第4代用于实验。按1×105/孔接种于24孔细胞培养板中,1d后细胞贴壁,设立5组:第1组向细胞培养液中加入10,100,1000MOIAd5-EGFP,第2组加入10,100,1000MOIAd5F35-EGFP,第3组加入1×104,1×105vgrAAV1/2-EGFP,第4组加入1×104,1×105vgrAAV2-EGFP,第5组加入30TULV-EGFP。Ad病毒感染2d,rAAV及LV病毒感染6d。主要观察指标:EGFP阳性表达及荧光强度。结果:Ad5-EGFP感染24h后镜下可见EGFP阳性细胞,随着病毒用量的增加EGFP阳性细胞数目增多,荧光亮度增强,12d后阳性细胞开始逐渐减少,荧光亮度减弱。Ad5F35-EGFP感染情况与Ad5-EGFP基本相似,但EGFP阳性细胞数和荧光亮度均增加。rAAV1/2-EGFP或rAAV2-EGFP感染6d后,EGFP阳性细胞数和荧光亮度均较弱。LV-EGFP感染第2天即可见少量EGFP阳性细胞,随着时间延长EGFP阳性细胞数目逐渐增多,至第6天表达EGFP荧光的细胞数量及亮度不再有明显变化。结论:腺病毒Ad5、Ad5F35与慢病毒LV能够有效感染体外培养的骨髓间充质干细胞,并表达外源基因,感染效率与病毒用量之间存在量效关系。腺相关病毒rAAV1/2和rAAV2体外感染效果不佳。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 细胞/基因治疗 重组病毒载体 转导效率

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融合IL2的慢病毒实现对T细胞的高效基因转导

11

作者 王依依 杜晓 +5 位作者 胡志嵩 刘欣禹 欧阳清 赵晶 杨安钢 阎博 《医学分子生物学杂志》 CAS 2022年第1期1-9,共9页

目的制备融合IL2的慢病毒以提高对人原代T淋巴细胞的转导效率。方法将白细胞介素-2(IL2)基因定向克隆至水疱性口炎病毒G蛋白(VSV-G)编码基因5′端,构建新型慢病毒包装辅助质粒pMD2.IL2-G。使用不同剂量pMD2.IL2-G进行慢病毒包装,应用免... 目的制备融合IL2的慢病毒以提高对人原代T淋巴细胞的转导效率。方法将白细胞介素-2(IL2)基因定向克隆至水疱性口炎病毒G蛋白(VSV-G)编码基因5′端,构建新型慢病毒包装辅助质粒pMD2.IL2-G。使用不同剂量pMD2.IL2-G进行慢病毒包装,应用免疫印迹和ELISA比较病毒滴度,流式细胞术检测病毒对T细胞的转导效率。结果单独使用pMD2.IL2-G显著降低病毒得率。与传统慢病毒相比,pMD2.IL2-G与原始辅助质粒pMD2.G以1∶4混合制备的慢病毒,能够显著提高EGFP基因导入T细胞的效率(89.2%vs.40.2%),且病毒得率相当。结论融合IL2的慢病毒能够对T细胞进行高效的基因转导,为基因修饰T细胞的临床应用提供有力支持。 展开更多

关键词 T细胞 包膜蛋白 融合白介素-2的慢病毒载体 转导效率 过继免疫疗法

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GFP在人脐血CD34^+细胞中的表达及意义 被引量：1

12

作者 卢振霞 白元松 林玉梅 《中国实验诊断学》 北大核心 2010年第6期831-832,共2页

目的探讨慢病毒载体在CD34+脐血细胞(CBCs)中的基因转导效率,为基因治疗的临床应用提供关键材料。方法应用1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)改造而成的第三代自身失活(self-inactivating,SIN)慢病毒载体(lentiviralvector)系统,通过流式细胞... 目的探讨慢病毒载体在CD34+脐血细胞(CBCs)中的基因转导效率,为基因治疗的临床应用提供关键材料。方法应用1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)改造而成的第三代自身失活(self-inactivating,SIN)慢病毒载体(lentiviralvector)系统,通过流式细胞术检测基因导入细胞百分比,评价该载体系统在人CBCs中的基因转导效率。结果 HIV载体的转导效率在95%以上。结论基于慢病毒载体基因转导的高效性,该载体系统可作为CD34+CBCs基因转导的极好工具。 展开更多

关键词 脐血 造血干/祖细胞 绿色荧光蛋白 慢病毒载体 基因转导效率

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重组腺病毒载体靶向性策略的研究进展 被引量：3

13

作者 薛淑雅 杨月峰 《中国医药生物技术》 2014年第2期129-132,共4页

近年来，研究者致力于突破基因治疗的瓶颈，极大推动了基因治疗的发展。载体系统是基因治疗的基础，截止2013年7月，在“Gene Therapy Clinical Trial Worldwide”网站登记注册的基因治疗方案中，重组腺病毒载体占476项（23.5%）。在6... 近年来，研究者致力于突破基因治疗的瓶颈，极大推动了基因治疗的发展。载体系统是基因治疗的基础，截止2013年7月，在“Gene Therapy Clinical Trial Worldwide”网站登记注册的基因治疗方案中，重组腺病毒载体占476项（23.5%）。在6个亚群（A-F）、50多种血清型的腺病毒载体中，5型腺病毒（adenovirus type 5，Ad5）可特异性识别并结合多种正常组织高表达的柯萨奇病毒-腺病毒受体（coxsackie-adenovirus receptor，CAR）从而进入细胞发挥作用，基因转导效率高，因此，Ad5是目前应用最广泛的腺病毒载体。 展开更多

关键词 重组腺病毒载体 靶向性策略 柯萨奇病毒-腺病毒受体 RECEPTOR 基因治疗 基因转导效率 特异性识别 载体系统

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聚乙烯亚胺促进腺病毒体外基因表达 被引量：1

14

作者 颜丹萍 张洪 马频 《医药导报》 CAS 2017年第8期862-864,共3页

目的筛选较合适相对分子质量的聚乙烯亚胺(PEI)用于提高腺病毒载体基因表达效率。方法首先以物理吸附法使PEI与腺病毒相吸附,用噻唑蓝(MTT)法考察PEI-600、PEI-1 800、PEI-25 000复合腺病毒对细胞的毒性;利用体外A549细胞转导实验确定PE... 目的筛选较合适相对分子质量的聚乙烯亚胺(PEI)用于提高腺病毒载体基因表达效率。方法首先以物理吸附法使PEI与腺病毒相吸附,用噻唑蓝(MTT)法考察PEI-600、PEI-1 800、PEI-25 000复合腺病毒对细胞的毒性;利用体外A549细胞转导实验确定PEI-600、PEI-1 800和PEI-25 000复合腺病毒的最佳剂量比,并对复合物的Zeta电位和粒径分布进行考察分析。结果 MTT实验证明PEI相对分子质量越大,细胞毒性越大,其中PEI-25 000毒性最大;细胞转导试验中,PEI-1 800相对于PEI-600和PEI-25 000更显著促进腺病毒基因在A549细胞中的表达;Zeta电位测定结果显示PEI可以将腺病毒的表面负电荷转变为表面正电荷的粒子。结论在3种聚合物/腺病毒的复合物中,细胞毒性与聚合物的相对分子质量和浓度呈正相关。相对分子质量越大,浓度越大则聚合物对细胞毒性越大。 展开更多

关键词 聚乙烯亚胺 分子质量 相对 腺病毒 转导效率

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AAV-DJ病毒对H9C2细胞感染效果的研究 被引量：1

15

作者 章晶晶 钟鹏 +1 位作者 孔彬 黄鹤 《医学研究杂志》 2021年第1期22-27,共6页

目的将AAV-DJ-EGFP转染至H9C2细胞中,探究AAV-DJ病毒对H9C2的感染能力,从而寻找出一种新型的安全的对H9C2细胞感染能力强的病毒载体。方法往H9C2细胞中分别加入一定量的AAV-DJ-EGFP病毒及AAV9-EGFP病毒,通过荧光显微镜观察荧光强度来评... 目的将AAV-DJ-EGFP转染至H9C2细胞中,探究AAV-DJ病毒对H9C2的感染能力,从而寻找出一种新型的安全的对H9C2细胞感染能力强的病毒载体。方法往H9C2细胞中分别加入一定量的AAV-DJ-EGFP病毒及AAV9-EGFP病毒,通过荧光显微镜观察荧光强度来评价两者对H9C2细胞的感染效率,并通过细胞明场照片及CCK-8(cell counting kit-8)试剂盒检测评价AAV-DJ病毒对H9C2细胞活性的影响。结果与AAV9病毒比较,AAV-DJ病毒对H9C2细胞具有更高的感染效率,以AAV-DJ病毒为载体的绿色荧光蛋白的表达以时间梯度和浓度梯度递增。且细胞明场照片及细胞毒性试验表明,与未转病毒组比较,感染AAV-DJ病毒后的H9C2细胞的活力无明显变化。结论AAV-DJ病毒能安全高效地感染H9C2细胞。 展开更多

关键词 AAV-DJ-EGFP病毒 H9C2细胞 感染 转导效率

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LHRH介导的TAT蛋白核心肽PTD的制备及跨膜研究 被引量：2

16

作者 马洪圆 岳玉环 +7 位作者 李泽鸿 张国利 田园 吴广谋 刘雨玲 余晓颖 杨雯棋 陈云雨 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第1期8-12,175,共6页

为了研究促黄体激素释放激素(LHRH)介导的TAT蛋白核心肽PTD的跨膜作用,测定目的蛋白的转导效率,试验以pET28a—PTD—GFP质粒为模板,设计含LHRH基因序列的特异性PER引物,经PCR扩增后双酶切,并克隆到原核表达载体pET28a中,构建重组质粒并... 为了研究促黄体激素释放激素(LHRH)介导的TAT蛋白核心肽PTD的跨膜作用,测定目的蛋白的转导效率,试验以pET28a—PTD—GFP质粒为模板,设计含LHRH基因序列的特异性PER引物,经PCR扩增后双酶切,并克隆到原核表达载体pET28a中,构建重组质粒并在E.coli BL21(DE3)感受态细胞中诱导表达,超声破碎后进行硫酸铵梯度沉淀,取上清液用Phenyl—HP疏水层析柱和Q阴离子交换层析柱纯化,将纯化后的目的蛋白加到体外培养的HeLa细胞中,观察转导情况,分析目的蛋白浓度对转导效率的影响。结果表明:PER扩增得到目的基因LHRH—PTD-GFP,并成功构建出重组质粒pET28a—LHRH—PTD-GFP,在E.coli BL21(DE3)感受态细胞中成功诱导表达出目的蛋白,经Phenyl—HP疏水层析柱和Q阴离子交换层析柱成功纯化出目的蛋白,在荧光显微镜下HeLa细胞内显现明显的绿色荧光,经分析转导效率与目的蛋白浓度之间呈正相关,回归系数为0.096 6,决定系数(R^2)为0.937 8。说明LHRH介导的TAT蛋白核心肽PTD具有很好的跨膜特性,转导效率对目的蛋白浓度具有依赖性,在一定浓度范围内随着目的蛋白浓度的增加转导效率增大。 展开更多

关键词 核心肽 转促黄体激素释放激素 目的蛋白 转导效率 绿色荧光 跨膜

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湖南大学国家重点实验室发现新的纳米尺度效应

17

《海峡科技与产业》 2003年第3期38-39,共2页

关键词 纳米尺度效应 金材料 熔点 基因转导效率

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10种血清型腺相关病毒在哺乳动物子宫原代细胞中的转导

18

作者 王梦媛 孙宇 +2 位作者 孟令帅 李世杰 马兴红 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期2569-2575,共7页

为探究10种血清型腺相关病毒(AVV)在哺乳动物子宫原代细胞中的转导情况并筛选出转导效率高的血清型,通过酶消化法获取哺乳动物子宫上皮和基质细胞、Real-Time PCR测定病毒滴度以及荧光显微镜观察和Western blot技术探究其转导效率。结... 为探究10种血清型腺相关病毒(AVV)在哺乳动物子宫原代细胞中的转导情况并筛选出转导效率高的血清型,通过酶消化法获取哺乳动物子宫上皮和基质细胞、Real-Time PCR测定病毒滴度以及荧光显微镜观察和Western blot技术探究其转导效率。结果显示,10种血清型在小鼠子宫上皮细胞中,AAV-DJ可转导;在小鼠子宫基质细胞中的转导效率为AAV-DJ>AAV1、AAV2、AAV5>AAV9。在兔子宫上皮细胞中的转导效率为AAV5、AAV-DJ>AAV2>AAV9;在兔子宫基质细胞中的转导效率为AAV-DJ>AAV1、AAV2、AAV5>AAV9。在猪子宫上皮和基质细胞中的转导效率为AAV-DJ>AAV2、AAV5>AAV1。在人子宫基质细胞系中的转导效率为AAV-DJ>AAV2、AAV9>AAV1、AAV3>AAV8。综上所述,在转导哺乳动物子宫上皮细胞时,AAV-DJ、AAV5和AAV2效果较好;在转导哺乳动物子宫基质细胞时,AAV-DJ、AAV2、AAV9、AAV5、AAV1效果较好。 展开更多

关键词 腺相关病毒 哺乳动物 子宫上皮细胞 子宫基质细胞 血清型 转导效率

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腺相关病毒载体介导造血干细胞基因转导的策略 被引量：1

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作者 赵卫红 吴剑卿 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期516-517,共2页

腺相关病毒（adeno-associated virus，AAV）已被广泛用作基因治疗的载体。本文就提高AAV载体在HSCs中的基因转导效率的策略综述如下。1自身互补的AAV载体由单链基因组向有转录活性的双链形式的转变障碍限制了AAV载体介导的基因转导。... 腺相关病毒（adeno-associated virus，AAV）已被广泛用作基因治疗的载体。本文就提高AAV载体在HSCs中的基因转导效率的策略综述如下。1自身互补的AAV载体由单链基因组向有转录活性的双链形式的转变障碍限制了AAV载体介导的基因转导。自身互补双链DNA的AAV载体（scAAV）不需进行病毒DNA第二链的合成，大大提高了 AAV的转导效率。 展开更多

关键词 基因转导效率 病毒载体介导 造血干细胞 AAV载体 双链DNA 腺相关病毒 病毒DNA 基因治疗

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基因治疗慢病毒载体的转导增强策略 被引量：1

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作者 赵晓煜 徐祺玲 +1 位作者 赵晓东 安云飞 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期52-58,共7页

基于慢病毒载体的体外基因治疗已在临床试验中取得良好的效果,有望治愈一些造血系统的单基因遗传病。通过提高靶细胞转导效率和减少转导中病毒载体量,基因治疗有效性、安全性和成本都可以得到改善。不同包膜糖蛋白伪型慢病毒载体通过与... 基于慢病毒载体的体外基因治疗已在临床试验中取得良好的效果,有望治愈一些造血系统的单基因遗传病。通过提高靶细胞转导效率和减少转导中病毒载体量,基因治疗有效性、安全性和成本都可以得到改善。不同包膜糖蛋白伪型慢病毒载体通过与细胞膜表面的不同受体结合,促进病毒黏附和入胞,增强不同靶细胞的病毒转导效率。此外病毒转导增强剂可以在病毒进入细胞过程或进入后发挥作用,在提高转导效率的同时使靶转导基因在体内长期稳定表达。通过对这两类方法的总结回顾,旨在为慢病毒载体的转导效率提供新的优化策略,使基因治疗得到更广泛的应用。 展开更多

关键词 基因治疗 转导效率 慢病毒载体 包膜糖蛋白 病毒转导增强剂

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