目的进一步明确转录信号转导子与激活子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)信号通路在调节乳腺癌多柔比星耐药中的作用,促进转录信号转导子与激活子3信号通路抑制剂在逆转肿瘤耐药方面的临床应用。方法首...目的进一步明确转录信号转导子与激活子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)信号通路在调节乳腺癌多柔比星耐药中的作用,促进转录信号转导子与激活子3信号通路抑制剂在逆转肿瘤耐药方面的临床应用。方法首先在临床乳腺癌组织标本水平,应用Western blotting检测转录信号转导子与激活子3与活化磷酸化转录信号转导子与激活子3(phosphorylated STAT3,p STAT3)的表达水平,同时应用RT-PCR及Western blotting检测转录信号转导子与激活子3/磷酸化转录信号转导子与激活子3在乳腺癌敏感及耐药细胞中的表达水平;再应用小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术阻断转录信号转导子与激活子3表达,通过Western blotting方法检测转录信号转导子与激活子3-小分子干扰RNA对转录信号转导子与激活子3表达的影响;最后分别应用细胞免疫荧光法和四甲基偶氮唑蓝法,检测阻断转录信号转导子与激活子3表达后,乳腺癌细胞的增殖活性及IC50值,从而观察转录信号转导子与激活子3-小分子干扰RNA是否能够抑制乳腺癌细胞增殖,以及能否增强乳腺癌细胞对多柔比星的敏感性。结果转录信号转导子与激活子3/磷酸化转录信号转导子与激活子3在肿瘤组织以及在多柔比星敏感及耐药的乳腺癌细胞中均呈现高水平表达,并且在多柔比星耐药乳腺癌细胞中的表达高于在相应敏感细胞中的表达水平。转录信号转导子与激活子3-小分子干扰RNA明显下调转录信号转导子与激活子3蛋白表达,并抑制了敏感乳腺癌细胞的生长。转录信号转导子与激活子3-小分子干扰RNA和多柔比星联合应用后,与单独应用多柔比星比较,使多柔比星耐药乳腺癌细胞的IC50降低了4倍,同时抑制了转录信号转导子与激活子3信号通路介导的抗凋亡蛋白的表达。结论转录信号转导子与激活子3信号通路活化与乳腺癌发生相关,在多柔比星耐药乳腺癌细胞中显著活化,阻断乳腺癌多柔比星耐药细胞中转录信号转导子与激活子3信号通路可提高其对多柔比星的敏感性,并促进细胞凋亡。本试验为探索阻断转录信号转导子与激活子3信号通路逆转肿瘤耐药的可行性,以及临床联合应用转录信号转导子与激活子3抑制剂与化疗药物克服肿瘤细胞多药耐药现象提供实验基础。展开更多
目的探讨白细胞介素9(IL-9)促进胰腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移的作用及机制。方法体外培养人胰腺癌PANC-1细胞,实验组予(5、10、20)ng/m L IL-9处理24 h,对照组不予处理。采用实时定量PCR检测PANC-1细胞白细胞介素9受体(IL-9R)的m RNA水...目的探讨白细胞介素9(IL-9)促进胰腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移的作用及机制。方法体外培养人胰腺癌PANC-1细胞,实验组予(5、10、20)ng/m L IL-9处理24 h,对照组不予处理。采用实时定量PCR检测PANC-1细胞白细胞介素9受体(IL-9R)的m RNA水平,CCK-8法检测肿瘤细胞的增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,TranswellTM实验检测细胞侵袭和迁移能力,Western blot法检测细胞中信号转导子与转录激活子3(STAT3)及磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白水平。STAT3抑制剂AG490预处理前后,进行IL-9处理,再采用以上方法检测细胞增殖情况以及细胞中STAT3和p-STAT3蛋白水平。结果 IL-9处理后,PANC-1细胞IL-9R m RNA水平增高、细胞增殖、侵袭和迁移能力增强,且这种促进作用随着IL-9剂量的升高而增强,但细胞凋亡率无明显改变。与对照组相比,IL-9处理后PANC-1细胞中的p-STAT3蛋白水平显著增加,但STAT3蛋白水平无明显改变。使用AG490预处理后,IL-9对PANC-1细胞增殖的促进作用减弱,且p-STAT3表达水平显著降低。结论 IL-9促进胰腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移与STAT3通路激活有关。展开更多
目的敲低宫颈癌HeLa细胞中信号转导与转录激活子3(signal transducers and activators of tran-scription 3,STAT3)的表达,观察肿瘤细胞超微结构变化,并检测化疗药物诱导肿瘤细胞凋亡的情况。方法利用在线设计软件小分子干扰核糖核酸(sm...目的敲低宫颈癌HeLa细胞中信号转导与转录激活子3(signal transducers and activators of tran-scription 3,STAT3)的表达,观察肿瘤细胞超微结构变化,并检测化疗药物诱导肿瘤细胞凋亡的情况。方法利用在线设计软件小分子干扰核糖核酸(small interfering RNA,siRNA)Target Finder设计一对STAT3短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)的上下游引物,在宫颈癌HeLa细胞中特异性敲低STAT3的表达,通过透射电子显微镜观察对照组及STAT3敲低组HeLa细胞内染色体分布情况,并利用流式细胞术检测化疗药物多柔比星诱导对照组及STAT3敲低组细胞凋亡情况的差异。结果免疫印记表明,STAT3特异性shRNA可在HeLa细胞中显著敲低STAT3的表达;电镜观察发现,在HeLa细胞中敲低STAT3表达可显著诱导染色体边集现象;流式细胞术检测表明,敲低STAT3表达可显著增强多柔比星诱导的细胞凋亡。结论敲低STAT3表达可诱导宫颈癌细胞发生超微结构的改变,并增强宫颈癌细胞对化疗药物的敏感性。展开更多
文摘目的探讨白细胞介素9(IL-9)促进胰腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移的作用及机制。方法体外培养人胰腺癌PANC-1细胞,实验组予(5、10、20)ng/m L IL-9处理24 h,对照组不予处理。采用实时定量PCR检测PANC-1细胞白细胞介素9受体(IL-9R)的m RNA水平,CCK-8法检测肿瘤细胞的增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,TranswellTM实验检测细胞侵袭和迁移能力,Western blot法检测细胞中信号转导子与转录激活子3(STAT3)及磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白水平。STAT3抑制剂AG490预处理前后,进行IL-9处理,再采用以上方法检测细胞增殖情况以及细胞中STAT3和p-STAT3蛋白水平。结果 IL-9处理后,PANC-1细胞IL-9R m RNA水平增高、细胞增殖、侵袭和迁移能力增强,且这种促进作用随着IL-9剂量的升高而增强,但细胞凋亡率无明显改变。与对照组相比,IL-9处理后PANC-1细胞中的p-STAT3蛋白水平显著增加,但STAT3蛋白水平无明显改变。使用AG490预处理后,IL-9对PANC-1细胞增殖的促进作用减弱,且p-STAT3表达水平显著降低。结论 IL-9促进胰腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移与STAT3通路激活有关。
